UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRICOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE

ECAPMA

PROTOCOLO DE PRÁCTICAS PARA LA ESCUELA

Nombre del Curso: Citogenética Aplicada al Mejoramiento

Código: 203023

Luz Mery Bernal Parra

2016
 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

I – ACTIVIDADES PARA EL ESTUDIANTE

PRACTICA 1

1. IDENTIFICACION DE LA PRÁCTICA

Nombre de curso Citogenética aplicada al mejoramiento

Código de curso 203023

Valor de esta 75 puntos

actividad práctica

Nombre del director Luz Mery Bernal Parra

de curso

CEAD al que Sede Nacional JCM

pertenece

Contacto del director Luz Mery Bernal Parra 3003172760

de curso

Espacio donde se Laboratorios de Genética y Morfofisiología - Sede Nacional José

debe desarrollar la Celestino Mutis, Bogotá.
práctica

Objetivos de la Identificar los diferentes tipos de cromosomas.

práctica
Reconocer diferencias morfológicas entre los cromosomas de
una especie determinada, mediante el análisis por bandas G.

Identificar las características de la técnica de análisis

cromosómico por coloración Giemsa y bandeo G.

Justificación de la La citogenética es una herramienta muy útil para la detección de

práctica problemas genéticos a nivel macro, es decir a nivel de
cromosomas.

En este sentido, es importante mencionar que para el caso

del curso Citogenética Aplicada al Mejoramiento tiene
especial importancia, conocer la técnica de obtención de
cromosomas a partir de células metafásicas y reconocer los
tipos y clasificación de cromosomas en especies de interés
agropecuario en general como potencial herramienta
diagnóstica para la detección de problemas de origen genético
en las mismas.

De acuerdo con lo anterior, resulta un aspecto clave, señalar a

 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

los estudiantes las posibilidades de reconocer directamente, los

métodos relativos a la obtención y análisis de cromosomas.
Competencias a Realización de cultivos celulares, obtención de cromosomas,
desarrollar visualización e identificación de cromosomas a partir de
diferentes tejidos.

Observación de diferencias estructurales de los cromosomas.

Reconocimiento de diferentes tipos de cromosomas

Duración de la 8 horas de trabajo continuo con los estudiantes y dos horas

práctica. correspondientes al cultivo celular que se realiza por parte del
docente 48 horas antes.

Mecanismo mediante Presentación del informe de la práctica

el cual se evaluará la
práctica:

1. METODOLOGIA

A. Actividades a desarrollar antes de la práctica

Linfocitos a partir de Sangre:

a. Tener 3 – 4 mL de muestra de sangre periférica anti-coagulada con Heparina de

Sodio (tubo tapa verde oscura)
b. En cámara de flujo laminar, servir 4 mL de medio RPMI 1640 suplementado con
10% de Suero Fetal Bovino y fitohemaglutinina en un frasco estéril de vidrio.
c. Agregar al frasco con medio 23 gotas de muestra de sangre y tapar bien el
frasco con la tapa de corcho estéril.
d. Se incuba por 36 – 72 horas a 37ºC

Fibroblastos a partir de Piel:

a. Disponer de un fragmento de piel limpio en solución salina estéril para

evitar contaminación
b. En una caja de petri, se coloca el tejido en medio RPMI 1640 y se disocia con
agujas de disección y cuchilla de bisturí estéril hasta tener fragmentos de1 -3
mm, los cuales se toman junto con el medio y se pasan a la caja plástica de cultivo.
c. Se agregan los 4 mL de medio RPMI 1640 suplementado con 10% de
Suero Fetal Bovino y se coloca la tapa bien ajustada.
d. Al ingresar la caja a la incubadora con ambiente de CO2 se afloja un
poco la tapa y se permite incubación por 5 días o más.
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

B. Actividades a desarrollar en la práctica

Cosecha

a. Añadir 50uL de colchicina a una concentración de 10 ug/mL e incubar por 30

minutos a 37ºC
b. Pasar a tubo de centrífuga cónico graduado de 10 mL y centrifugar a 1000 rpm
durante 10 minutos. Eliminar sobrenadante con pipeta Pasteur
c. Añadir 10 mL de Solución hipotónica (solución de KCl 75 mM)
homogeneizar por inversión.
d. Incubar a 37ºC por 7.5 minutos
e. Añadir 1 mL de mezcla metanol - ácido acético 3:1 homogeneizar por inversión e
Incubar a 4 ºC por 25 minutos.
f. Centrifugar a 1000 rpm por 10 minutos y decantar sobrenadante.
g. Repetir otras dos veces el proceso de fijación (pasos 10 al 12).
h. Añadir 1 mL de mezcla metanol-ácido acético 3:1 y resuspender con pipeteo.
i. Extender en lámina portaobjeto y evaluar índice mitótico
j. Incubar a 37ºC por 72 horas

Coloración bandas G

Con ese tiempo de maduración, incubar a temperatura ambiente las láminas

de 3 a 5 segundos en solución de Hanks para luego colorear con Giemsa.

Visualización

Se observa al microscopio primero con menor aumento para luego realizar el

análisis con 100X.

Igualmente se observará al microscopio con aumento de 100X, láminas preparadas

que previamente se les ha realizado coloración por bandeo G y fotografías de
metafases de diferentes especies incluyendo cariotipos humanos con algunas
aberraciones cromosómicas, con el objetivo que el estudiante haga un análisis
comparativo.

C. Elementos necesarios para la práctica

Los estudiantes deben presentarse al laboratorio el día de la práctica, con bata de

laboratorio, guantes, tapa bocas y con la guía y las indicaciones revisadas. Es
importante portar el carnet de la universidad o en su defecto el recibo de pago para
poder ingresar.

D. Productos a entregar

Una semana después de realizada la práctica, los estudiantes enviarán al curso el

informe detallado explicando cada una de las actividades y sustentando los
resultados obtenidos, es esencial enviar las fotografías que se obtuvieron de cada
uno de los procedimientos realizados.
 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

2. EVALUACION

RÚBRICA

Ítem Valoración Valoración Valoración Máximo

evaluado baja Media Alta Puntaje
Participación en El estudiante no El estudiante tuvo una El estudiante
el desarrollo de la participó en el baja participación en la participó
práctica desarrollo de la práctica activamente en la
práctica (Puntos =10) práctica 20
(Puntos =0) (Puntos =20)

Desarrollo de El estudiante no El estudiante logró El estudiante

competencias logró desarrollar desarrollar logró desarrollar
las competencias parcialmente las satisfactoriamente
planteadas para competencias las competencias 20
la actividad planteadas para la planteadas para
(Puntos = 0) actividad la actividad
(Puntos = 10) (Puntos = 20)
Presentación del El estudiante no El informe no aborda El informe cumple
informe entregó el informe totalmente los temas con lo solicitado
de la actividad solicitados (Puntos = 35) 35
planteada (Puntos = 18)
(Puntos = 0)
Total de puntos posibles 75

Descripción de las actividades de evaluación.

Asistencia a las actividades de práctica. Inicialmente es obligación presentarse

a la práctica salvo que se tenga una justificación para no asistir, la cual deberá ser
comunicada al director del curso.

Informe de Práctica. Este documento contendrá las siguientes partes:

Portada: Con todos los datos del estudiante que desarrolla la actividad.

Introducción: Una sección de no más de dos páginas que contenga un texto que
ilustre los contenidos a desarrollar en la práctica y su importancia en el contexto
de la especialización.

Procedimiento: La simple descripción de los procedimientos que se han llevado a

cabo para conseguir los montajes y aquellos que se desarrollaron durante la
práctica.
 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

Observaciones: En esta sección del documento se registran las observaciones

relevantes para el análisis de los resultados obtenidos, de manera que es
importante que se tengan a la mano todos los datos que se consideren
importantes (no hay un instructivo para los datos que se deben registrar, es criterio
del estudiante el registro de la información como parte de su proceso de síntesis).

Resultados y análisis: Mención a los datos obtenidos luego de la práctica y su

análisis para obtener las conclusiones.

Conclusiones: Registro de las conclusiones obtenidas a partir de la práctica.

Formato 1: Datos generales de la práctica

CONTROL Y SEGUIMIENTO AL DESARROLLO

DEL COMPONENTE PRÁCTICO
Nombre del tutor Luz Mery Bernal Parra
CEAD donde se Sede Nacional JCM
encuentra el tutor
Curso Citogenética aplicada al mejoramiento
Título de la práctica Obtención y análisis de metafases provenientes de cultivos
cromosómicos
Lugar donde se Lugar: Laboratorios JCM
desarrolló la práctica Municipio: Bogotá; Departamento: Cundinamarca
Temas abordados en Realización de cultivos celulares, obtención de cromosomas,
la práctica visualización e identificación de cromosomas a partir de
diferentes tejidos.

Observación de diferencias estructurales de los cromosomas.

Reconocimiento de diferentes tipos de cromosoma

Materiales y equipos Cabina de flujo laminar
empleados en la
práctica Reactivos para cultivo y cosecha de linfocitos de sangre periférica
Reactivos para coloración de láminas
 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Protocolo de prácticas de Citogenética Aplicada al Mejoramiento 203023

Formato 2: registro de asistencia de los estudiantes a las actividades prácticas

REGISTRO DE ASISTENCIA DE ESTUDIANTES

A LAS ACTIVIDADES PRÁCTICAS
No NOMBRES APELLIDOS CODIGO FIRMA
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Nombre: _________________________________________

Cédula: ____________ Firma: ________________________

Datos del tutor Correo___________________________________________
Teléfonos _______________ Celular __________________

Formato 3: Reporte de calificaciones obtenidas por los estudiantes

REPORTE DE CALIFICACIONES
Curso: _______________________________ CEAD:_______________________________
Código:_______________________________ Fecha:_______________________________
Título de la práctica: ____________________ Tutor: _______________________________
_____________________________________ Firma:_______________ Cédula:_________

No Apellidos y Nombres Código Participación Competencias Informe Total

(máx. x desarrolladas (máx. x 40% en
puntos) puntos) puntos
1
2
3
4