Вы находитесь на странице: 1из 42

Sox9: главный регулятор программы поджелудочной железы

Филипп Сеймур

Информация об авторе ► Примечания к материалам ► Информация об авторских правах и лицензиях ►Отказ от

ответственности

Эта статья была приведена в других статьях в PMC.

Абстрактные
Сокращения : ADPKD - аутосомно-доминантное поликистозное заболевание почек; BAC
- бактериальная искусственная хромосома; BCIP - 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат; bHLH
- базовая спиральная спираль; Bmp - костный морфогенетический белок; CAII -
карбоангидраза II; CD - кампомелиальная дисплазия; ChIP - иммунопреципитация
хроматина; ЦНС - центральная нервная система; Cpa1 - карбоксипептидаза A1; DAPT - N -
( N - (3,5-дифторфенацетил) -L-аланил) - трет- бутиловый эфир S- фенилглицина ; DCC -
N , N«дициклогексилкарбодиимид; Dll1 - дельтаподобный лиганд 1; E - эмбриональный
день; ER - эстрогеновый рецептор; Fgf10 - фактор роста фибробластов 10; Fgfr - рецептор
фактора роста фибробластов; Foxa2 - белок-бэк-бокс a2; GFP - зеленый флуоресцентный
белок; GSI-IX - ингибитор гамма-секретазы-IX; Hes1 - волосатый и энхансер раскола
1; hESC - эмбриональная стволовая клетка человека; HMG - группа высокой
мобильности; Hnf1beta - гепатоцитарный ядерный фактор 1beta (aka Tcf2); HPD -
гепатопанкреатическая протоковая система; IAPP - островковый амилоидный
полипептид; IF - иммунофлюоресценция; iPSC - индуцированная плюрипотентная
стволовая клетка; IRES - внутренний сайт входа рибосомы; ISH - in situгибридизация; Isl1
- ISL LIM homeobox 1; LacZ - ген, кодирующий β-галактозидазу; Mash1 - гомогенный
щитовидной железы млекопитающих 1; MODY - сахарный диабет молодости; MPC -
мультипотентная клетка-предшественник поджелудочной железы; мРНК - мессенджер
рибонуклеиновой кислоты; NBT - нитро-синий тетразолий хлорид; NeuroD - нейронная
дифференциация 1 (aka Beta2); Ngn3 - нейрогенин 3; NICD1 - внутриклеточный домен
Notch 1; Nkx6.1 - гомебоксный белок Nk6 1; Onecut1 - одно сокращение гомебокса 1 (aka
Hnf6); Панин - поджелудочная интраэпителиальная неоплазия; PC1 / 3 - пропротеин
конвертаза 1; PCFU - колониеобразующая единица поджелудочной железы; PDAC -
аденокарцинома протоков поджелудочной железы; PDL - частичное лигирование
каналов; Pdx1 - панкреатический и дуоденальный гомеобокс 1; PNS - периферическая
нервная система; PP - панкреатический полипептид; Ptf1a - субъединица транскрипции
поджелудочной железы 1; Rbpj - белок связывания с рекомбинационным сигналом для
области каппа J иммуноглобулина; RT-PCR - обратная транскрипционная полимеразная
цепная реакция; Sox9 - зона определения пола Y (Sry) box 9; СТЗ - стрептозотоцин; Tcf2 -
транскрипционный фактор 2 (aka Hnf1β); UTR - нетранслируемый регион; Вегф -
сосудистый эндотелиальный фактор роста; Wnt - семейство сайтов интеграции MMTV без
крыла; YFP - желтый флуоресцентный белок
Идти к:

1. Введение
За предыдущие 50 лет было затрачено много усилий на расшифровку механизмов,
регулирующих морфогенез поджелудочной железы млекопитающих и, в частности,
индуцирующую инсулин β-клетку, потерю или дисфункцию которой проявляется при
сахарном диабете. Приобретение механистического понимания эногенеза β-клеток во
время морфогенеза поджелудочной железы, очевидно, имеет потенциальную выгоду при
выработке клеточной терапии диабета. Во-первых, такие знания могут быть применены
при оптимизации протоколов in vitro для дифференциации функциональных,
чувствительных к глюкозе β-клеток из эмбриональных или индуцированных
плюрипотентных стволовых клеток человека. Во-вторых, понимание эногенеза β-клеток
может быть использовано для стимуляции этого процесса in situво взрослой
диабетической поджелудочной железе для восстановления функциональной массы β-
клеток. В связи с этой целью в последние годы наблюдается возрождение в изучении
традиционных моделей травм поджелудочной железы, таких как частичное лигирование
каналов (PDL) [ 1 , 2 ] или лечение церулеином [ 3 ], оба из которых индуцируют
панкреатит.
В соответствии с современными индуцибельными генетическими линиями,
отслеживающими различные популяции панкреатических клеток, эти модели были
использованы для изучения того, способны ли воспалительные стимулы индуцировать
дифференцировку новых β-клеток и идентифицировать источник этих новых β-клеток,
которые могут быть либо существующие не-β-клеточные типы поджелудочной железы
или предполагаемый факультативный взрослый предшественник. Усилия по
механистическому рассечению β-клеточного регенератора в значительной степени
выиграли бы от разработки молекулярных маркеров, позволяющих идентифицировать β-
клеточно-компетентные панкреатические предшественники на протяжении всего периода
развития поджелудочной железы и, потенциально, у взрослых.
С середины 1990-х годов исследования мышей с нокаутом и мутантами выявили
ключевые роли для множества факторов транскрипции при развитии поджелудочной
железы и β-клеток. Поразительно, что многие из этих факторов, включая Isl1, NeuroD,
Nkx2.2 и Nkx6.1, выражаются в развитии центральной нервной системы [ 4 ], выделяя
консервативные транскрипционные механизмы, регулирующие морфогенез в обеих
системах.
Сексуально-определяющие области Y (Sry) -box-содержащие (Sox) факторы являются
структурно связанным семейством регулируемых по степени транскрипции факторов,
относящихся к суперсемейству группы высокой подвижности (HMG); члены этого
семейства объединяет их высоко законсервированный HMG-бокс, кислоты ДНК-
связывающий домен 79-амин [ 5 - 7]. В настоящее время у млекопитающих
обнаружено 20 факторов Sox [ 8 ]. Эти 20 членов были назначены на одну из восьми
подгрупп AH на основе сходства между последовательностью HMG-box и структурой
белка; члены с более чем 80% идентичностью доменов HMG занимают одну и ту же
группу [ 9 ], и из-за биохимического сходства часто играют параллельные
функциональные роли [ 10 ].
Изучение генов Sox происходило в 1990 году с идентификации Sry , фактора,
определяющего яичко млекопитающих, и члена-основателя семейства
[ 5 , 6 ]. Впоследствии, решающие роли для Sox факторов были описаны в поддержании
ткане-специфических стволовых / прогениторных клеток в центральной и периферической
нервной системы [ 11 - 14 ]. Учитывая сохраняющиеся роли факторов транскрипции,
регулирующих программы развития нейронов и поджелудочной железы [ 4], вскоре в
начале 2000 года внимание было рассмотрено на рассмотрение предполагаемых
консервативных ролей факторов транскрипции Sox при развитии поджелудочной железы
и β-клеток. Эти усилия были подкреплены докладом о дисморфогенезе поджелудочной
железы у пациентов, страдающих летальным синдромом
гаплоузливости SOX9, камкомелиевой дисплазией [ 15 ]. Это исследование дало первое
дразнящее понимание роли SOX9 / Sox9 в управлении развитием поджелудочной железы
и указало на общее участие генов Sox в регулировании программы поджелудочной
железы.
Данные, приобретенные в первую очередь от изучения нокаута и трансгенные модели
мыши за последнее десятилетие, показало , что Sox9 служит маркером и критическим
фактором для обслуживания панкреатических клеток - предшественников [ 16 - 19 ]. Хотя
эта роль, по популярному восприятию, определяла функцию Sox9 при панкреатическом
органогенезе («панкреогенез»), растущие данные свидетельствуют о том, что этот фактор
выполняет дополнительные, не менее важные функции как в развивающейся, так и в
зрелой поджелудочной железе. Эти функции включают индукцию эндокринной
дифференциации [ 20 , 21 ] и поддержание эмбрионального и взрослого протокового
состояния [ 20 , 22 ].
В то время как в двух последних обзорах были рассмотрены роли Sox9 в регуляции
панкреатической, а также программ печени [ 23 ] или дуоденального [ 24 ], настоящий
обзор фокусируется исключительно на первом, чтобы позволить более всестороннее
рассмотрение множественных ролей Sox9 в поджелудочная железа. Этот обзор
предназначен для описания ролей Sox9 во время развития поджелудочной железы с
уделением особого внимания моделям мыши, которые делают основные выводы в
контексте биологии развития поджелудочной железы с исторической точки зрения. Во
второй части этого обзора, в котором основное внимание уделяется постнатальной
поджелудочной железе, недавние противоречивые данные по маркировке
импульсных следов Sox9 +клеток в здоровых и поврежденных состояниях. Наконец,
недавно раскрыты роли Sox9 в инициировании рака поджелудочной железы.
Идти к:

2. Морфогенез поджелудочной железы у мышей

2.1. Происхождение поджелудочной железы и ее дифференцированных типов


клеток
У мышей, поджелудочной железы возникает в двух противоположных дорсальной и
вентральной «почки» из энтодермы передней кишки ( рис Figure11 ). В то время как эти
почки становятся морфологически различимыми во время эмбрионального дня (E) 8,75-
9,0, судьба поджелудочной железы указывается в недифференцированной энтеродерме
переднего конца (придумал «первичный переход» [ 25 ]) за несколько часов до появления
явного появления бутонов [ 26 ]. Эту конечную эндодерму демаркируют экспрессией
транскрипционных факторов Pdx1 и Ptf1a вентрально от E8.5 (8-10 сомитов) и дорзально
от E8.5-8.75 (10 сомитов) [ 27 , 28]. Третий фактор транскрипции поджелудочной железы,
Nkx6.1, выражен в предполагаемой брюшной и дорсальной поджелудочной энтодерме от
E8.75 и E9.0 соответственно [ 27 ]. Pdx1, Ptf1a и Nkx6.1 продолжают отмечать
панкреатические энтодермы , который, до E12.5 , когда двух бутонов предохранитель
( рис Рисунок11 В ), состоящих в основном из ранних мультипотентных панкреатических
клеток - предшественников (ПДК) [ 29 , 30 ]. Pdx1-Cre - [ 29 ] или Ptf1a Cre - [ 30 ]
опосредованные линии показали, что на уровне популяции ПДК приводят к появлению
всех взрослых типов клеток во взрослом органе, включая:
Открыть в отдельном окне
Рисунок 1
Динамическая пространственно-временная модель экспрессии Sox9 у развивающейся и
взрослой мышей поджелудочной железы
A : В соответствии с E10.5, область экспрессии Sox9, охватывающая эндодерму позвоночных и
вентральных поджелудочной железы, а также антральный (задний) желудок, общий желчный
проток (CBD) и переднюю двенадцатиперстную кишку. В обоих почках поджелудочной железы
Sox9 ограничивается эпителием, который на E10.5 преимущественно состоит из мультипотентных
клеток-предшественников поджелудочной железы (ПДК). B : В E12.5 экспрессия Sox9 продолжает
разграничивать передний желудок, CBD, внепеченочные желчные протоки и переднюю
двенадцатиперстную кишку, а также слитые дорзальные и вентральные поджелудочные
железы. На этом этапе поджелудочная железа активно растет и явно покрывается
лозунгом; ремоделирование микролюминесцентов с образованием смежного трубчатого сплетения
также ведется. Эти процессы совпадают с паттернами ПДК в Ptf1a +acinar-fated дистальный
«наконечник», окружающий Nkx6.1 + бипотентный проточный / эндокринный проксимальный
«сундук». Экспрессия Sox9 на этом этапе очень динамична: в то время как мРНК Sox9 отходит от
кончиков на E12.5, белок Sox9 остается коэкспрессированным как с Ptf1a, так и с Nkx6.1 в
кончиках и туловище соответственно. C : по E15.5, средняя точка вторичного перехода,
выражение Sox9 определяет поляризованные эпителиальные связки Muc1 +проксимального ствола,
предшественника протокового дерева. Sox9 отмечает как Ptf1a - Hnf1β + клетки, содержащие
большую часть ствола, так и Ptf1a + Hnf1β -клетки на их крайних дистальных концах: Ptf1a + Hnf1β-
ацинарные клетки, «укупоривающие» шнуры, лишены экспрессии Sox9. Аналогично,
Ngn3 +эндокринные прародители, расслаивающиеся из туловища Sox9 +, редко коэкспрессируют
высокие уровни Sox9 и вместо этого интеркалируются среди клеток Sox9 + . D : К концу
беременности (E18.5) экспрессия Sox9 ограничивается субпопуляцией протоковых клеток и
центроацинарных клеток, которые также определяются их экспрессией Hnf1β. Sox9 исключается
из клеток Ptf1a + ацинара, а также всех эндокринных клеток островков Лангерганса.

1. Экзокринные клетки: пищеварительные клетки, продуцирующие фермент, и клетки


протоков, которые переносят эти ферменты в двенадцатиперстную кишку.
2. Эндокринные клетки островков Лангерганса ( рис Рисунок11 D ).
Примечательно, что трассировка линии показала, что в дополнение к Pdx1 и Ptf1a ПДК
могут быть точно определены по их экспрессии фактора транскрипции Hnf1β (Tcf2) [ 31 ],
эффекторного эффектора Notch Hes1 [ 32 ] и карбоксипептидазы A1 (Cpa1) [ 33 ]. Nkx6.1,
несомненно, отмечает это население, хотя это еще не продемонстрировано официально
из-за отсутствия подходящих генетических инструментов. Пять типов эндокринных
клеток, полученных из таких предшественников, включают β-клетки, α-клетки, δ-клетки,
PP-клетки и ε-клетки: соответственно, они продуцируют и секретируют инсулин,
глюкагон, соматостатин, панкреатический полипептид (PP) или грелин. Все эндокринные
клетки возникают, в свою очередь, от общего преходящего эндокринного
предшественника, отмеченного выражением транскрипционного фактора Ngn3 [ 29], что
является необходимым [ 34 ] и достаточным [ 35 - 38 ] для эндокринной
дифференциации. Экспрессия Ngn3 в ПДК приводит к появлению временных окон
компетенции, в течение которых возникают типы эндокринных клеток [ 39 ], начиная с
E9.5 с появлением глюкагона + клеток в дорзальной поджелудочной железе
[ 40 ]. Инсулин + β-клетки не обнаруживаются до E12.5; после этого из Е14.5 их числа
экспоненциально расширяются [ 40 ] через «вторичный переход» [ 25 ], основное окно
дифференциации поджелудочной железы. Соматостатин +клетки обнаруживаются далее, а
затем ПП-клетки в конце беременности [ 40 ]. Клетки, экспрессирующие грелин,
последний тип эндокринной клетки, который должен быть обнаружен, могут быть
обнаружены еще в E10.5 и максимальным числом во время вторичного перехода [ 41 ].
2.2 Расширение поджелудочной железы
После эвагинга поджелудочные почки быстро расширяются и разветвляются
одновременно с синхронным расширением и ремоделированием многолучевого
трубчатого сплетения в непрерывное протоковое дерево [ 42 , 43 ]. Расширение ПДК
приводится в движение обоих предшественниках-характеристическая сигналы и сигналы
от внешних обертывающей поджелудочной мезенхимы ( рис Figure11 ). Поскольку
окончательный размер поджелудочной железы диктуется первоначальным размером пула
MPC [ 44 ], отсутствие таких сигналов обычно влияет на пролиферацию
предшественников, снижая числа предшественников, проявляясь при гипоплазии
поджелудочной железы. Факторы транскрипции-предшественника-предшественника Pdx1
[ 45 , 46 ] и Ptf1a [30 , 47 ], а также лиганд Notch Dll1 и эффектор Hes1 [ 35 , 48 , 49 ] все
поддерживают номера MPC и, следовательно, крайне необходимы для расширения
эпителия поджелудочной железы: гипоплазия одного или обоих поджелудочной железы
возникает, когда ПДК лишены каких-либо этих факторов. Аналогичным образом,
недостаток некоторых сигнальных сигналов поджелудочной мезенхимы приводит к
гипоплазии эпителия поджелудочной железы: Wnt [ 50 , 51 ], Bmp [ 52 ] и, самое
главное, сигнализация Fgf10 [ 53 ], как было показано, стимулируют пролиферацию
эпителиальных MPCs.

2.3 Проксимодистальное паттернирование


Одновременно с их расширением от E10.5 и выше, первоначально мультипотентные
предшественники поджелудочной железы физически разделяются вторичным переходом с
точки зрения их компетентности в области развития. ПДК в области дистального
«наконечника», отмеченные Pdx1, Ptf1a и Cpa1 [ 33 ], постепенно становятся ацинарными,
тогда как эти предшественники оставляют их в проксимальном «стволе», выражая Pdx1,
Nkx6.1 (и его паралог, Nkx6.2) и Hnf1β [ 54 ], образуют оба дерева и эндокринные клетки
протоков и, таким образом , «бипотентными клетки - предшественники» [ 33 ]
( рис Figure11 в , C). Эта компартментализация устанавливается путем поперечного
антагонизма между Ptf1a и Nkx6.1 / Nkx6.2; в то время как первоначально ко-
экспрессируются в ранних предшественниках, на E14.5 они растворяются в различные
Ptf1a + дистальный кончик и Nkx6.1 + проксимальные магистральные домены
[ 55 ]. Совсем недавно критическое требование для сигнализации Notch было
продемонстрировано в паттернах магистральной области [ 56 , 57 ].

2.4. Вторичный переход и дифференцировка поджелудочной железы


Во время вторичного перехода Ngn3 + эндокринные предшественники появляются в
интеркалированном образце между клетками ствола, который содержит примитивный
протоковый эпителий, обозначенный Hnf1β [ 54 , 58 ], а также факторы транскрипции
Onecut1 (ранее Hnf6) [ 59 , 60 ] и Foxa2 (ранее Hnf3β) [ 61 ]. Уже давно предполагается,
что эндокринные предшественники происходят из вторичного переходного эпителия
протоков [ 54]. Однако относительная малочисленность исключительных маркеров этого
домена и, следовательно, подходящих генетических инструментов означала, что совсем
недавно, с их появлением, стало возможным проверить эту гипотезу формально. Строго
взаимоисключающие домены экспрессии Ngn3 и Hes1 внутри ствол привели к широко
распространенному понятию , что эндокринные клетки - предшественники указаны в
процессе Notch-опосредованная латерального торможение [ 35 , 62 ]
( рис Рисунок11 C ). Поскольку эндокринные предшественники дифференцируются в
пять типов эндокринных клеток, они сливаются с образованием поликлональных
островков [ 63]. У мышей, островки отображение высоко стереотипная цитоархитектуры
, содержащая центральный сердечник инсулина + -клеток и периферическая мантия
, состоящая преимущественно из глюкагона + альфа-клеток, а также три других типов
эндокринных скудных клеток ( рис Рисунок11 D ). Именно с началом постнатальной
жизни β-клетки становятся полностью функциональными, способными воспринимать
глюкозу и модулировать их секрецию инсулина соответственно [ 64 ]. Одновременно и в
течение предыдущего периода поджелудочная железа быстро растет, главным образом,
через пролиферацию ацинарных клеток [ 65 ].
Идти к:

3. Экспрессия факторов Sox в развивающейся и взрослой


поджелудочной железе
Первый всесторонний обзор экспрессии генов семейства Sox в поджелудочной железе
млекопитающих [ 66 ] показал, что транскрипты для дюжины генов Sox обнаруживаются
в развивающейся мышиной поджелудочной
железе: Sox11 , Sox4 , Sox13 , Sox5 , Sox9 , Sox8 , Sox10 , Sox7 , Sox17 , Sox18 , Sox15 и Sox30
, три из которых ( Sox4 , Sox9 и Sox13 ) были сообщены дополнительно обнаружен в
зрелых островках ( Таблица Таблица11 ). Несмотря на дополнительном
обнаруженииSox2иSox12в развитии поджелудочной железы мыши, результаты подобного
анализа находились в тесном согласовании с этим результатом [67]
(ТаблицаTable11 ). Показано, что из этих десятков генов Sox, выраженных во время
мышечного панкреогенеза, ортологи пяти (SOX4,SOX9,SOX10,SOX11иSOX12) обогащены
развивающейся поджелудочной железой человека по сравнению с взрослыми островками
[68], свидетельствующей о сохраняющейся природе панкреатические программы у мышей
и человека.
Таблица 1
Качественная относительная экспрессия факторов Sox при развитии поджелудочной
железы и взрослых островков мыши
Открыть в отдельном окне
Легенда: данные указывают на качественное представление относительного обилия выражения члена
семейства Sox в целом эмбриональной мышиной E12.5 и E15.5 панкреате и изолированных островках
взрослых, обследованных RT-PCR [ 66 , 67 ]. Символы : -: не обнаружено; +, ++, +++: обнаружены при
увеличении обилия, соответственно. Отсутствие символа означает, что выражение не исследовано
[ 66 , 67 ]. * +: Транскрипты Sox9,первоначально обнаруженные в изолированных взрослых островках [ 66 ],
но (-) не в последующем исследовании [ 16 ].

С помощью более глубокого исследования экспрессии in situ гибридизации (ISH) группой


Sox группа Sander [ 66 ] показала, что член группы C S1111экспрессируется
преимущественно в ранней мезенхиме поджелудочной железы, а затем исключительно в
некоторых эпителиальных клетках по E12.5, тогда как Экспрессия Sox4 (также группа C)
широко распространена в эпителии поджелудочной железы по E12.5; оба фактора
становятся локально локализованными по рождению, а Sox4 выражается во всех типах
зрелых островковых клеток [ 67 ]. В соответствии с про-эндокринной ролью Sox4 ,
эксплантированной E11.5 Sox4 - / - панкреата, наблюдается снижение
количества клеток инсулина + и глюкагона + [67 ]. Учитывая отсутствие количественной
оценки Ngn3 + эндокринных предшественников в Sox4- дефинитивных эксплантатах в
сочетании с отсутствием обнаруживаемого эффекта делеции Sox4при пролиферации или
выживании клеток инсулина + [ 67 ], основная причина эндокринной гипоплазии у мышей
Sox4 - / - остается неясной , Тем не менее исследования в области исследования данио дают
некоторую информацию. Sox4ортолог, sox4b , выражается в эндокринных
предшественников и глюкагона + клеток в развивающихся данио поджелудочной
железы; когда его выражение подавляется, глюкагон +клетки теряются, выявляя роль в α-
клеточной дифференцировке [ 69 ]. Хотя отсутствие влияния на количество
инсулина + клеток указывает на то, что их дифференциация не зависит от типа йоркшина
у рыбок данио, специфические эффекты на один тип эндокринных клеток предполагают,
что sox4b либо функционирует ниже по течению от общего эндокринного
предшественника, либо оказывает влияние на число эндокринных предшественников,
особенно во время окно α-клеточного неогенеза.
Из группы D факторов Sox13 выражается в E10.5 в некоторых, затем по E14.5, почти во
всех поджелудочковых эпителиальных клетках [ 66 ]. Аналогично, L- Sox5впервые
обнаруживается на E12.5 в некоторых эпителиальных клетках поджелудочной железы и в
целом эпителиально выражается вторичным переходом. После этого момента оба фактора
быстро снижаются, становясь необнаружимыми по рождению. Напротив, Sox8 и Sox10 ,
два из трех факторов группы E, экспрессируются в диспергированных отрицательных к
глюкагону клетках на эпителиальной периферии на E10.5 до E12.5, сравнивая
картину экспрессии Sox8во время панкреогенеза цыплят [ 70]. По рождению выражение
обоих факторов ограничено клетками, охватывающими островки [ 66 ]. Учитывая, что в
периферической нервной системе (ПНС) оба фактора Sox выражены в глиальных клетках
с необходимым Sox10 для их развития [ 71 , 72 ], а глии сообщалось [ 73 , 74], чтобы
зарубить островки поджелудочной железы, было установлено [ 66 ], что эти клетки
Sox8 + / Sox10 + являются островковыми глиальными клетками. Несмотря на уникальные
экспрессионные образцы пери-островков Sox8 и Sox10 , анализ панкреата из Sox8 - / -
илиМыши Sox10 - / - не выявили валового дисгенеза эндокринных или экзокринных
отделений, что указывает на то, что эти факторы не подлежат нормальному морфогенезу
поджелудочной железы [ 66 ]. В то время как точная функция пери-островковой глии
остается неизвестной, было предложено, чтобы они могли оказывать нейротропную
поддержку нервно-иннервирующим нервам и эндокринным клеткам, а также играть роль
в нейроэндокринной регуляции [ 75 ]. Хотя возможная функция Sox10 и peri-islet glia во
взрослой эндокринной функции требует более тщательного изучения, перинатальная
летальность мышей Sox10 - / - будет определять потребность в условной модели
абляции Sox10 .
Идти к:

4. Экспрессия Sox9 в развивающейся поджелудочной железе


Наряду с Sox8 и Sox10 , Sox9 завершает группу E Sox тройной выигрыш. Из семи факторов
Sox, чьи панкреатические образцы экспрессии были всесторонне оценены Lioubinski et
al . [ 66 ], Sox9 оказался самым интригующим. Было обнаружено, что Sox9 высоко
экспрессируется в обоих появляющихся поджелудочковых почках на E9.5, когда они
содержат почти исключительно мультипотентные предшественники, намекая на роль в
этой популяции [ 66 ]. В то время как сигнал Sox9 ISH остается повышенным во всем
эпителии поджелудочной железы E12.5, некоторое уменьшение проявляется на
периферии, обозначая Sox9вывод из дистальных кончиков: согласуется,
что Sox9 ограничивается эпителием ствола вторичным переходом. В соответствии с этим
проксимальным выражением, распределение сигнала Sox9 ISH при рождении
интерпретировалось как обозначение подмножества протоковых клеток, островков и
нескольких ацинарных клеток [ 66 ]. Во время публикации десять лет назад
проксимодистальное паттернирование и вторичные переходные бипотентные протоковые
/ эндокринные предшественники еще не были концептуализированы и, таким образом,
идентифицированы их маркеры. Несмотря на это, экспрессия эмбрионального
протокового Sox9 считалась значимой, учитывая предположение, что эндокринные
предшественники возникают из этого домена во время вторичного перехода [ 36 ].
Чтобы лучше характеризовать динамическую пространственно-
временную экспрессию Sox9 во время мышечного панкреогенеза и обходить
ограниченную разрешающую способность ISH, анализ совместной иммунофлуоресценции
(IF) проводили с хорошо охарактеризованной SSS9-специфической антисывороткой
[ 76]. В то время как colocalizing с MPC маркера Pdx1 в начале (по E9.0) дорсальной и
вентральной поджелудочной эндодермы ( рис Рисунок11 A ), Sox9 был исключен из
глюкагона + эндокринных клеток [ 16 , 77 ]. Поразительно, хотя в
E12.5 мРНК Sox9отступила от эпителиальных кончиков [ 66], Sox9 белок , сохраняется
в течение всего E12.5 поджелудочной железы эпителия ( за исключением эндокринных
клеток) [ 16 ], нахождение подтверждено более поздних работах [ 19 ]
( рис Рисунок11 B ). Несмотря на то, что Sox9 является новым маркером-
предшественником поджелудочной железы, эти анализы также указывают на то, что
одновременно с проксимодистатическим паттерном экспрессия Sox9 является очень
динамичной. Примечательно, что намекая на эволюционно-консервативные роли Sox9 в
морфогенезе позвоночных поджелудочной железы, эта картина экспрессии Sox9 в раннем
поджелудочном зачатке была повторена у лягушки Xenopus laevis , данио и
человека. Sox9 , в более широком Pdx1+ эндодермальный домен, в частности, демаркирует
дорсальную и брюшную предпанкреатическую энтодерму в X. laevisпо ее первоначальной
спецификации и продолжает определять почки поджелудочной железы через точку, в
которой они сливаются [ 78 ]. Аналогичным образом , в Sox9 Paralog sox9b выражается в
начале данио hepatopancreatic эндодермы, в передней Pdx1 + домен, маркировка как
основание спинного поджелудочной железы и потенциальным вентральной
поджелудочной железы [ 79]. Очень недавний анализ экспрессии на основе
иммуногистохимии [ 80] обеспечил беспрецедентное (и красивое) понимание моделей
экспрессии ряда факторов транскрипции поджелудочной железы (включая SOX9) на
ранних стадиях морфогенеза поджелудочной железы человека. Это исследование
показывает, что у людей SOX9 слабо коэкспрессируется с PDX1 в предполагаемой
эндодерме двенадцатиперстной кишки с помощью Carnegie Stage (CS) 12 (29-31 дней
после зачатия, dpc), что эквивалентно ~ E9-9,5 в эмбриогенезе мыши [ 80 ] , По CS13 (30-
33 dpc ≈E9,5-10 у мыши) SOX9 сильно экспрессируется в легко различимых дорзальных и
вентральных поджелудочковых почках и поддерживается через CS16 (37-40 dpc ≈E12.25-
12.75) в разветвленного поджелудочного эпителия [ 80 ], что согласуется с предыдущей
работой [ 15 ].
В соответствии с выводом Sox9 из мышиной поджелудочной области наконечника после
E12.5, ЕСЛИ показали Sox9 быть ограничено E15.5 к субпопуляции Pdx1 +клеток
, содержащих вторичный переход «панкреатические эпителиальные шнуры» [ 16 , 77 ]
( рис Figure11 C ). Такие корды, исторически созданные для возникновения всех
дифференцированных типов клеток, возникающих во время вторичного перехода [ 81 ],
теперь известны как проксимальная магистральная область. Примечательно, что процесс
сегрегации SOX9 в проксимальном стволе, по-видимому, происходит относительно
поздно во время программы поджелудочной железы человека, между 10-14 неделями
после зачатия (wpc) [ 80 ].
Поддерживая постоянную роль предшественника через вторичный переход, значительная
часть (~ 40%) клеток Sox9 + в поджелудочной железе мыши E15.5 являются как
пролиферативными, так и Notch-чувствительными (Hes1 + ) [ 16 ]. Напротив, наблюдается
небольшое перекрытие между сильно окрашенными Sox9 клетками Sox9 Hi и теми,
которые экспрессируют маркер эндокринного предшественника Ngn3; Ngn3 + клетка ,
как правило , вместо того, чтобы быть интеркалированными между клетками ствола
Sox9Hi [ 16 , 21 , 77 ] ( рис Figure11 C). Аналогично, в развивающейся человеческой
поджелудочной железе клетки, экспрессирующие высокие уровни ортолога Ngn3 Ngn3,
встречаются в сопоставлении с клетками SOX9 + , одновременно с эндокринной
дифференцировкой при 10 wpc [ 80 ]. Диссортация между сообщенной степенью
колокализации Sox9 / Ngn3 в поджелудочной железе эмбриональных мышей [ 16 , 77 ]
вызвала более всестороннее исследование. В этом исследовании было установлено, что,
хотя лишь небольшая часть (13,1%) клеток Ngn3 + является Sox9Hi, подавляющее
большинство (74,1%) слабо Sox9-иммунореактивны (Sox9 Lo), а остальные 12,8%
Ngn3 + являются Sox9 -, согласующиеся с клетками Sox9 +, инициирующие коэкспрессию
Ngn3, затем тушение Sox9 с последующей экспрессией Ngn3 до начала производства
эндокринного гормона [ 21 ]. В соответствии с Ngn3 + клетками , возникающих из Sox9 +
ствола , то выражения понижающей регуляции Sox9, Sox9 редко локализуется с
маркерами предшественников поздней эндокринными и исключается из всех
дифференцированных эндокринных и ацинарных клеток [ 16 ] ( рис Figure11 D). Это
согласуется с тем, что Sox9 обогащается поджелудочными предшественниками, в то
время как в основном исключается из эндокринных предшественников и
дифференцированных эндокринных и ацинарных клеток. Подтверждая это понятие,
экспрессия Sox9 поджелудочной железы не затрагивается у эмбрионов, лишенных
эндокринной дифференцировки / факторов созревания Ngn3 или Nkx6.1 ,
показывая Sox9 выше по течению от [ 16 ]. Цементируя свою характеристику в качестве
маркера предшественника поджелудочной железы, экспрессия Sox9 поддерживается во
всем панкреате от мышей Pdx1 - Fgf10, в которых митоген Fgf10 MPC принудительно
экспрессируется во всем эпителии поджелудочной железы под
управлением Pdx1промотор, останавливая клетки поджелудочной железы в состоянии
предшественника и отменяя дифференцировку [ 16 , 82 ].
Идти к:

5. Прослеживание линии Sox9 + клеток при развитии поджелудочной


железы

5.1 Sox9 отмечает ПДК во время первичного перехода


В то время как соэкспонирование Sox9 с известными маркерами MPC и регулирование,
согласующиеся с выражением фактора, являющегося прообразом, вызывают такую роль,
эти линии доказательств сами по себе недостаточны для доказательства этого. Такие
неопровержимые доказательства для Sox9, определяющие ПДК, могут быть
предоставлены только путем генетического отслеживания
линии популяции поджелудочной железы Sox9 + . Используя этот подход, группа де
Кромбрюгг [ 18 ] была первой , бесспорно , показывает , что экспрессия Sox9 определяет
мультипотентные предшественник не только для поджелудочной железы , но других
органов , а также. Авторы создали Sox9 IRES-Cre,вступающую в заблуждение, с помощью
гениальной хитрости вставки транс-трансгена в 3'-UTR мышиSox9 ; теоретически
выражение Cre точно отражаетэкспрессию эндогенного Sox9 , сохраняя целостность
дозы Sox9 [ 18 ]. Примечательно, что такая рекомбинация доменов экспрессии всего
организма имеет особое значение для Sox9 , поскольку показано , что три
отдельных дальнодействующих (251 kb 5 'до 95 kb 3') upstream и downstream-энхансеры
управляют отдельными специфическими для организма подмножествами комплексная
пространственно- временная область экспрессии Sox9 [ 83 ]. Анализ эмбрионов, несущих
как Sox9 IRES-Cre, так и репортерный аллель Rosa26R lacZ Cre [ 84] показали, что либо E17.0
[ 18 ], либо послеродовой день (P) 1 [ 17 ] весь панкреатический (экзокринный и
эндокринный) эпителий состоял из потомков клеток Sox9 +, как отмечено наследуемой
экспрессией β-gal, полученной из Sox9 IRES- Cre -опосредованной Rosa26R LacZ рекомбинации
( рис Figure22 A ). Это исследование генетического исследования линии показало, что
Sox9 отмечал предшественников не только поджелудочной железы, но и яичек,
кишечника и спинного мозга, которые были одинаково одинаково мечеными β-галлами в
E17.0 Rosa26R lacZ ; Sox9 IRES-Cre эмбрионы [18 ].
Открыть в отдельном окне
фигура 2
Эффективность развития клеток Sox9 + постепенно снижается при панкреогенезе
A : Генетическое отслеживание линий показало, что во время первичного перехода Sox9
определяет мультипотентные MPC (также обозначенные Pdx1 и Ptf1a ), содержащие эпителий
поджелудочной железы, которые приводят к возникновению всех трех поджелудочных клеток:
экзокринной ацинар (A), протоковой (D) и эндокринных (E) клеток
( через промежуточную Ngn3 + эндокринную клетку-предшественник). B : Одновременно с
разветвлением и проксимодистатическим рисунком эпителия поджелудочной железы между
приблизительно E11.5-12.5 Sox9продолжает отмечать ПДК с повышенной склонностью к
возникновению протоковых и эндокринных клеток за счет ацинарных клеток. C : Во время
вторичного перехода,Экспрессия Sox9 определяет бипотентные клетки-предшественники, которые
почти исключительно дают протоковые или эндокринные клетки; Однакоклетки Sox9 + на крайних
дистальных концах ствола могут вызывать клетки ацинара. D : К концу
беременности клетки Sox9 + преимущественно участвуют в отделении протоков; они могут,
однако, по-прежнему вызывать эндокринные клетки и, очень редко, ацинарные клетки. E : В
течение первых трех недель жизни клетки Sox9 +почти исключительно выводят протоковые
клетки; Однако эндокринный неогенез может, однако, редко возникать из отделения Sox9 + . F : В
отличие от этого, в более позднем возрасте, Sox9 +клетки являются унипотентными, что приводит
только к клеткам протоков. Толщина стрелок означает относительную склонность к выведению
клеток каждого из трех отделений поджелудочной железы.

5.2. Sox9 продолжает определять мультипотентные предшественники во всем


панкреогенезе
Так как в Rosa26R lacZ ; Зародыши Sox9 IRES-Cre , клетки Sox9 + (и их потомство) помечены от
начала экспрессии Sox9 поджелудочной железы , эта модель не может использоваться для
отслеживания потомков клеток Sox9 + в более поздние моменты времени. Чтобы обойти
эту проблему в отсутствие целенаправленных генетических инструментов (а
именно, линии Sox9-Creer ), «псевдо-кратковременное» отслеживание линий Sox9 + клеток
было выполнено с использованием эксплоита EGFP с промотором на основе Sox9 над
эндогенным Sox9 в трансгенной линии SAC9-eGFP BAC [ 85]. Вследствие ~ 26-часового
периода полувыведения eGFP [ 86] сохранение метки eGFP в течение 1-2 дней после
точки бездействия промотора Sox9 позволяет следить за потомками клеток Sox9 + через
это окно. В соответствии с Sox9 маркировки ранние клетки - предшественники
поджелудочной железы, Sox9-EGFP локализуется с Sox9 почти во всех клетках ранних
(E10.5) поджелудочной железы эпителия, в том числе Sox9 + глюкагона клеток-
предшественников , полученных + эндокринных клеток [ 21 ]. В соответствии с этим
недавно было продемонстрировано, что ex vivo , при разбавлении до плотности клона,
изолированный Sox9-eGFP +клетки из E11.5 панкреата способны обойтись с оценкой> 8-9
удвоений и, следовательно, расширяться для образования клональных эпителиальных
«панкреатических сфер», содержащих несколько типов эндокринных клеток, включая
клетки, секретирующие глюкозу, чувствительные к глюкозе [ 87 ]. Таким образом,
первичные клетки Sox9 + из ранних поджелудочных зачатков способны к самообновлению
и многоуровневой дифференциации, признакам мультипотентных клеток-
предшественников. Позднее в панкреогенезе, во время вторичного перехода (E15.5),
кратковременная трассировка линии показала, что Sox9-eGFP, отражающий Sox9,
ограничивается эпителиальными кордами / туловищем [ 21 ]. Поразительно, что до E17.5,
eGFP был также обнаружен в пропорции Sox9 - Ngn3 +эндокринных прародителей,
придавая дополнительное доверие понятию, что эндокринные прародители возникают
из клеток Sox9 + . В соответствии с этим и временным ~ 18-часовым существованием
Ngn3 + клеток [ 88 ] eGFP был обнаружен в некоторых клетках инсулина + и
глюкагона + при E15.5 и рождении. В совокупности эти данные означают , что
эндокринные клетки возникают из Sox9 + клеток - предшественников через ~ E14-18
( рис Figure22 C , D ). Подобно эндокринным клеткам, на E15.5 ацинарные клетки,
примыкающие к дистальным кончикам Sox9 +Ствол также носил ярлык EGFP, выводя
, что они также возникают из Sox9 + клеток ( рис Figure22 C ). Однако, так как нет
этикетки EGFP не была очевидна в ацинарных клетках при рождении, это говорит о
том, что ацинарный неогенезе прекращается в конце эмбриогенеза ( рис Figure22 D ) и
пролиферация становится преобладающим методом расширения ацинозного с этого
момента. В целом, результаты этого «псевдо-краткосрочного» исследования трассировки
линий подразумевают, что на уровне популяции Sox9 +клетки являются
мультипотентными во время вторичного перехода, что позволяет генерировать как
эндокринную, так и экзокринную клетки. Бесспорно, колокализация , на котором основан
этот подход не может заменить полностью для генетического отслеживания клонов, так
как личность маркировано и проследил или «гонялись» клетка не может быть полностью
определена и с этой целью (оправданно) вызывается критика [ 31 ]. Тем не менее,
несмотря на его оговорки, последующее индуцируемое тамоксифеном генетическое
происхождение линии Sox9 + клеток во время панкреогенеза с использованием BAC
трансгенных мышей Sox9-Creer T2 [ 19] изложили основные выводы этого более раннего
исследования, подтвердив эффективность этого подхода. У этих мышей введение
тамоксифена приводит к транслокации ядра промотора Creer T2 , промотор-промотор Sox9 ,
который остается активным и способен к рекомбинации через 12-36 часов после инъекции
тамоксифена [ 33 ]. Таким образом, у мышей, несущих как аллель Sox9-Creer T2,
так
и Rosa26R lacZ , однократное введение тамоксифена приведет к «импульсу» метки,
связанной с CreE T2- β-gal, всех клеток, в которых Sox9 активен во время этого 12-36- час
после инъекции, чтобы эти клетки и их потомство можно было проследить или
«преследовать».
Реплицирование результатов маркировки клеток Sox9 + с начала панкреогенеза [ 18],
введение тамоксифена в Sox9-Creer T2 ; Rosa26R LacZ эмбрионов на E8.5 привело к β-гал
маркировки всех трех отсеков панкреатических ацинарных-, протоков, а
также эндокринных-три - недельного возраста [ 19 ] ( рис Figure22 A ). Поразительно, и в
значительной степени соответствующий предыдущему анализу Sox9-eGFP , воздействие
тамоксифена между E12.5-18.5 аналогичным образом приводило
к клеткам Sox9 +, способствующим всем трем отделениям [ 19], Показывает , что
панкреатический Sox9 + популяция служит предшественниками, что приводит к протокам,
эндокринному и ацинарным клеткам, на протяжении эмбриогенеза ( рис Figure22 B -
D ). Количественная оценка относительных распределений меченых β-gal клеток между
протоками, островками и ацини показала, что с постепенным более поздним введением
тамоксифена относительный вклад в протоки увеличивался за счет ацини [ 19 ]. Однако,
как подчеркивал Копп и его коллеги [ 19], так как митотические индексы различаются
между эндокринными, протоковыми и ацинарными клетками, количественная оценка
такой генетической метки с импульсной цепью не может обеспечить прямой индекс их
относительных скоростей возникновения неогенеза. Несмотря на это предостережение,
снижение маркировки ацинозной с прогрессивно более поздних импульсов предполагает
, что компетентность Sox9 + клеток - предшественников , чтобы привести к ацинарных
клеток уменьшается по мере поступления pancreogenesis ( рис Figure22 А - Д ). Это
предостережение , возможно , также предположительно объяснить несоответствия в
маркировке в конце ацинозной клеток между псевдо краткосрочных и генетической линии
трассировки исследований ( рис Figure22 D): аналогичные показатели ацинарного
неогенеза из клеток Sox9 + во время позднего эмбриогенеза могут приводить к разным
результатам мечения в обоих. В то время как Sox9-eGFP в небольшой пропорции
ацинарных клеток, полученных из предшественников, может быть разведена путем
последующего деления клеток, степень наследуемой маркировки S-9-Creer T2- β-gal в той
же пропорции ацинарных клеток может быть усилена быстрым пролиферативным
расширение ацини в ближайший послеродовой период [ 65 ], включающий трехнедельную
погоню.
Выводы из дополнительной генетической линии трассировки исследовании [ 17 ], в то
время как правило , в соответствии с Sox9-EGFP - и Sox9-Creer T2опосредованной
трассировки, дополнительно подчеркнуть , как различные пролиферативные показатели
панкреатических отсеков посрамить интерпретации данных маркировки импульсно-
чейз. Используя аналогичный подход к их раннему поколению мышей Sox9 IRES-Cre ,
Furuyama и его коллеги [ 17 ] создали Sox9 IRES-CreerT2 , вставив Creer T2 в 3'-UTR мыши
Sox9. Анализ Sox9 IRES-CreerT2 ; Rosa26R lacZмышей в возрасте восьми недель показали, что
после введения тамоксифена на E16.5 в протоках и островках наблюдалась β-gal-
маркировка, хотя наибольшая доля всех β-гальцированных клеток (73%) была ацинарной
клеткой [ 17 ]. Хотя качественно это исследование подтвердило результаты исследования
Kopp et al . [ 19 ] показано, что в позднем эмбриогенезе клетки Sox9 + продолжают
вызывать эндокринную и ацинарную клетки, затяжной период погони смешивает
интерпретацию меток маркировки. После введения тамоксифена на E16.5 Sox9-Creer T2 -
медицированная маркировка (как доля от общего количества меченых клеток) протоков в
возрасте трех недель чуть более чем вдвое больше, чем ацини [ 19], в то время как
воздействие тамоксифена на той же стадии у эмбрионов, несущих Sox9 IRES-CreerT2, приводит
к тому, что маркировка протоков чуть более чем в три раза меньше, чем в ацинарных
клетках при анализе в возрасте восьми недель [ 17 ]. Учитывая несоблюдение дозы
тамоксифена при таких относительных количественных показателях и рекомбинации
одного и того же аллеля Rosa26R lacZ , другие факторы должны учитывать это большое
несоответствие в отношении проницаемости: ацинарная маркировка между двумя
исследованиями. Быстрое пролиферативное расширение ацини в ближайшем
послеродовом периоде [ 65 ] делает невозможным отличать относительные пропорции
ацинарных клеток, возникающие через: 1) неогенез из Sox9+ предшественников или 2)
пролиферации меченых ацинарных клеток. Следовательно, более длительный период
преследования в исследовании Furuyama и сотрудниками [ 17 ] мог бы, вероятно,
объяснить большую степень «амплификации» исходных чисел ацинарных клеток с β-
галлой через их пролиферацию, искажая отношение маркировки к таким клеткам. В то
время как правдоподобно, другие факторы могут в равной степени учитывать
несоответствие между данными трассировки линии, сгенерированными с использованием
двух линий Creer T2 , которые будут рассмотрены позже.
В то время как результаты этих анализов трассировки линий Sox9 + различаются по своим
деталям, их основные выводы унифицированы, показывая, что экспрессия Sox9 в
развивающейся поджелудочной железе определяет популяцию мультипотентных
предшественников, которая приводит к появлению протоковых, эндокринных и
ацинарных клеток в течение всего времени pancreogenesis ( рис Figure22 -
D ). Мультипотентность из Sox9 + клеток - предшественников уменьшается постепенно
, однако: в то время как на уровне популяции ранних ПДКп являются «tripotent»,
способными порождать эндокринный, ацинарный и протоковые клетки ( рис Figure22 A -
С ), перинатальной Sox9 + клетки - предшественники являются бипотентными, что
приводит к главным образом протоков, а некоторые эндокринные клетки
( рис Figure22 D ). По зрелому возрасту, Sox9 + клетки становятся «заперты» в
протоковую идентичность ( рис Figure22 F ). Следует отметить, что хотя такая
«тропотентность» вторичных переходных стволов Sox9 + сохраняется на уровне
популяции, она, скорее всего, не относится к отдельным клеткам. Несмотря на его
оговорки, краткосрочный Sox9-eGFPотслеживание дало представление о разрешении
одной ячейки в событиях линии, непосредственно предшествующих экзамену. Такой
анализ показал, что ацинарные клетки, маркированные Sox9-eGFP, возникают только из
(относительно редких) клеток на крайних дистальных кончиках соединительной линии
Sox9 + , в то время как оставшаяся часть клеток ствола Sox9 + приводит к появлению
клеток протокового дерева или эндокринной системы клеток
( через Ngn3 + промежуточное соединение) [ 21 ]. Остается неизвестным, зависит ли это
смещение ацинарно-эндокринной дифференциации проксимально-дистальным
распределением детерминант судьбы внутри ствола или вместо этого диктуется
относительной близостью к окружающей строме и связанным сигнальным
сигналам. Сравнение транскрипционных сигнатур проксимальногопо сравнению
с дистальными клетками клеток Sox9 + , поможет решить этот вопрос. Так как
большинство клеток, отмеченных Sox9 во вторичной поджелудочной железе, способны
приводить к образованию каналов или эндокринных клеток, на этой
стадии клетки Sox9 + обычно называют «бипотентными предшественниками». Несколько
групп в этой области в настоящее время работают над расшифровкой молекулярных
механизмов, лежащих в основе решения сущности эндокринной и суточной сущности на
уровне одной бипотентной клетки-предшественника.
Поразительно, что исследования трассировки параллельных линий с
использованием мышей Hnf1β-Creer T2 показали, что зеркальное
отображение домена Sox9 + , клетки Hnf1β + демонстрируют удивительно похожую
картину снижения эффективности во время панкреогенеза: Hnf1β отмечает ПДК во время
раннего органогенеза (E11.5-13.5), протока -эндокринные бипотентные предшественники
при вторичном переходе (E13.5-16.5), а затем в канале (включая терминальные каналы
или центроацинарные) клетки с позднего срока беременности (E16.5) и далее [ 31 ]. Это не
неожиданно, учитывая, что экспрессия Sox9 и Hnf1β почти идеально колокализуется в
развитии поджелудочной железы и за ее пределами во взрослом органе [ 19], возможное
функциональное значение которого заслуживает спекуляции. Однако интригующе,
однако, домены Sox9 + и Hnf1β + расходятся во время вторичного перехода: в то время как
экспрессия Sox9 расширяет всю длину эпителиального ствола Nkx6.1 + Pdx1 + до самых
дистальных ячеек внешней линии в интерфейсе соединительной линии, которые, кроме
того, , отмеченный Ptf1a, Hnf1β выражение потушен в этих дистальных-большинство
стволовых клеток [ 19 ] ( рис Рисунок11 C ). Таким образом, поскольку исключение Ptf1a
из бипотентных предшественников связано с их потерей ацинарной компетентности, а
ПДК отмечены выражением Sox9, Nkx6.1 и Ptf1a [ 55], сохранение Ptf1a в клетках
Nkx6.1 + Sox9 + дистальных стволов позволяет предположить, что они сохраняют
мультипотентность и способность вызывать ацинар, а также протонные и эндокринные
клетки. Это понятие подтверждается
недавним исследованием Ptf1aCreerTM, посвященным отслеживанию линии, показывающим, что
редкие мультипотентные предшественники сохраняются в конце вторичного перехода
[ 89]. Экспрессия Sox9, но не Hnf1β в редком дистальном стволе Ptf1a + Nkx6.1 +«поздние
ПДК» согласуется с наблюдением меченых Sox9-eGFP ацинарных клеток на самых
дистальных концах вторичного переходного ствола [ 21 ]. Этот вывод также объясняет,
почему трассировка линии показывает Sox9 +клеток, чтобы вызвать появление всех трех
типов клеток поджелудочной железы, включая ацинарные клетки, во всем панкреогенезе
[ 19 ], в то время как клетки Hnf1β + не способны вызывать клетки ацинара за пределами
E13.5 [ 31 ]: клетки Hnf1β +теряют свою мультипотентность до Sox9 + клеток во время
панкреогенеза. В связи с их высокоопределенной локализацией соединительной линии и
уникальной транскрипционной сигнатурой было предложено [ 90 ], что эти редкие клетки
Ptf1a + Sox9 + Hnf1β - дистальные наконечники представляют собой самые ранние
предшественники концевых протоков / центроацинарных клеток, которые находятся в
канале -acinus интерфейс (Рисунок Рисунок11 С , D ). Однако, из-за отсутствия
центроацинарных клеточных специфических маркеров, это еще предстоит официально
протестировать с помощью генетического отслеживания линий. Частично из-за их
сохранения мультипотентной транскрипционной сигнатуры (Sox9 + Hnf1β + Ptf1a + Hes1 + ),
такие центроацинарные клетки были предложены в качестве мультипотентных
предшественников во взрослой поджелудочной железе (см. [ 90 ]). Соответственно,
изолированные центроацинарные клетки способны функционировать в качестве
предшественников ex vivo , что приводит к самообновлению «панкреосфер», способных к
эндокринной и экзокринной дифференцировке [ 91]. Остается неизвестным, могут ли
центроацинарные клетки аналогичным образом функционировать как прародители in
vivo во взрослой поджелудочной железе.
Идти к:

6. Экспрессия Sox9 у взрослых поджелудочной железы


После вторичного перехода, экспрессия Sox9 в эмбриональной поджелудочной железы
мыши прогрессивно вниз регулируется, становясь ограничено субпопуляции клеток
протоков и centroacinar клеток у взрослых [ 16 ] ( рис Рисунок11 D ). Отражая это, SOX9
ограничен каналоподобными клетками на 14 wpc в развивающейся поджелудочной железе
человека и по рождению аналогично ограничивается только протоковыми и
центроацинарными клетками [ 15 , 16 , 80 ]. Это особенно остро, поскольку, как
упоминалось выше, широко было установлено, что подмножество протоковых клеток
поджелудочной железы, включая центроацинарные клетки, может функционировать как
факультативные клетки-предшественники во взрослую жизнь [ 90 ,92 ]. Это так же
интригует, так как он показывает Sox9, как и другие ранние маркеры MPC Pdx1 и Ptf1a,
чтобы быть ограниченным во взрослую жизнь до одного купе. В то время как Sox9
становится постнатально ограниченным каналами, Pdx1 ограничивается эндокринными
(β- и δ-) клетками [ 93 ], а Ptf1a ограничивается ацини [ 94 ]. Совершенно оправдано
предположение, почему эти три маркеры MPC ограничиваются только отдельными
отделениями поджелудочной железы.
Следует отметить, что в отличие от предыдущих докладов экспрессии Sox9 в островках
мышей (в обнаруженных ISH или RT-PCR), впоследствии оно было сообщено , что Sox9,
как и в эмбриональных клетках эндокринных, не immunodetectable во взрослом островка
[ 16 ] ( рис Рисунок1 1 D ). В связи с неспособностью амплифицировать мРНК Sox9 из
изолированных островков [ 16 ], это является явным доказательством того, что ни РНК, ни
Sox9, ни белок не экспрессируются в эндокринных клетках. Выщелачивание BCIP / NBT,
используемое для визуализации зонда Sox9 ISH из каналов в соседние островки, вероятно,
вызвало видимый сигнал мРНК Sox9 в островках E18.5 [ 66]. Аналогичным образом,
обнаружение транскриптов Sox9 во взрослых остриях в том же исследовании может быть
отнесено к остаточной геномной ДНК или заражению протонами / центроацинарными
клетками изолированных островковых препаратов. Фактор, который еще больше сбивает
IHC-детектирование Sox9 в эндокринных клетках, и тот, который мы испытали из первых
рук, представляет собой вариации окраски поджелудочной железы Sox9, полученные в
результате IHC, с использованием ряда антисывороток, специфичных для Sox9 (личное
общение). В дополнение к добросовестномупротоковое и центроацинарное клеточное
Sox9-специфическое окрашивание, обычно наблюдаемое у взрослых поджелудочной
железы у мыши, несколько обычно используемых антисекс-антисекс-препаратов дают
либо α-клеточное цитоплазматическое окрашивание, либо пан-эндокринную
перинуклеарную окраску. Такой неспецифический сигнал не следует путать с тем, что
может быть результатом перекрестной реактивности сыворотки с Sox8 и / или Sox10 в
периферической островковой глиальной оболочке вне самих островковых клеток. Однако
оба шаблона окрашивания согласуются с пресловутой иммуногенной природой островков
поджелудочной железы, в частности α-клеток [ 95]. Соответственно, преадсорбция такой
антисыворотки Sox9 с иммунизирующим пептидом обычно отменяет протоковый и
центроацинарный сигнал IHC, в то время как неспецифическое окрашивание островков
сохраняется (личное сообщение). Таким образом, хотя теперь ясно видно, что Sox9 не
экспрессируется в эндокринных клетках в развивающейся или взрослой поджелудочной
железе, это понятие продолжает сохраняться в литературе.
Идти к:

7. Функциональные роли Sox9 в развивающейся поджелудочной железе

7.1. Sox9 поддерживает поджелудочные предшественники через Notch-зависимые


и независимые механизмы
Хотя его выражение определяет панкреатических предшественников, не обязательно
следует, что Sox9 служит функциональной роли в этой популяции. Однако накопление
доказательств до 2007 года все больше намекает на то, что это, вероятно, дает требование
для Sox9 в поддержании прародителей в нервном гребне [ 13 ], эпителии кишечника [ 96 ]
и выпуклости волос [ 97 ] во время эмбриогенеза. Поскольку летальность
новорожденных Sox9 +/- мышей [ 98 ] не позволяет размножать Sox9 -небольшие
эмбрионы, Pdx1-Cre- обусловленный условный Sox9абляция в поджелудочной железе
была использована для проверки роли этого фактора в развитии поджелудочной
железы. Удаление Sox9 в Sox9 fl / fl ; Pdx1-Crepancreata, будучи быстрым и эффективным,
возникала только после того, как была завершена спецификация и рост поджелудочной
железы, что исключало необходимость тестирования Sox9 в этих процессах
[ 16 ]. Драматическая гипоплазия обоих поджелудочковых почек стала очевидной почти
сразу после удаления Sox9 из-за потери Pdx1 + MPC, что выявило потребность в Sox9 при
раннем развитии поджелудочной железы [ 16 ]. Этот сильный фенотип указывает на
очевидное отсутствие функциональной избыточности в панкреогенезе между Sox9и
дополнительные члены подгруппы SoxE Sox8 и Sox10 . Это согласуется с тем фактом, что,
хотя члены одной и той же подгруппы Sox часто играют параллельные функциональные
роли [ 10 ], домены поджелудочной железы Sox8 и Sox10 не пересекаются
с областями Sox9 [ 66 ]. Более того, учитывая такую важную роль Sox9 в поддержании
ранней панкреатической энтодермы, возникает соблазн предположить, требуется ли Sox9
для его первоначальной спецификации, и если да, то как это достигается. Это потребует
генерации и анализа мышей, в которых Sox9удаляется в энтодерме кишечника,
предшествующей инициации панкреогенеза.
В соответствии с окончательным размером поджелудочной железы, ограниченным
начальным числом ПДК, указанным между ~ E8.5-12.5 [ 44 ], поджелудочная железа
оставалась гипопластичной при рождении у мутантов Sox9 , вызывая перинатально-
летальную гипергликемию из-за почти отсутствия всех эндокринных клеток , Трассировка
линии при рождении выявила чрезмерное представление потомства несвязанных (Sox9 + )
предшественников, что указывает на то, что мутантная поджелудочная железа становится
повторно населенной нерекомбинированными ПДК. Таким образом, Sox9-
делетированные предшественники обладают ограниченной способностью вносить вклад в
растущий орган. Механическая диссекция объясняет это 50% -ным сокращением
пролиферации, увеличением апоптоза и ранней дифференцировкой Sox9-удаленных
предшественников. В частности, последующее рассмотрениеSox9 fl / + ; Зародыши Pdx1-
Cre выявили 25% -ное снижение пролиферации прародителя в Sox9 -гаплоинфекции
поджелудочной железы [ 21 ]. Таким образом, пролиферация MPC изящно чувствительна
к Sox9 с потерей каждого функционального аллеля Sox9,снижающего на 25% снижение
митотического индекса. Предыдущие сообщения о сходной гипоплазии поджелудочной
железы у мышей, лишенных эффектора Notch Hes1 из-за как преждевременной
дифференцировки предшественников [ 48 ], так и уменьшенной пролиферации MPC
[ 49 , 99 ], побудили анализ экспрессии Hes1 в Sox9-открытая панкреата. Это выявило
почти двукратное снижение Hes1 + -преобразователей на E10.5. Sox9 , таким образом
, играет решающую роль в стимулировании раннего роста поджелудочной железы,
поддерживая MPC размер пула путем содействия выживанию, пролиферации и
недифференцированное состояние клеток - предшественников ( рис рис.33 ). Учитывая
, что Hes1 дефицитные панкреатические клетки - предшественники демонстрируют
сниженную пролиферацию и дифференцировку преждевременной , но не снижение
выживаемости, весьма вероятно , что Sox9 поддерживает MPC бассейн через оба Notch-
зависимый и -независимые механизмы ( рис рис.33 ).
Открыть в отдельном окне
Рисунок 3
Sox9 выполняет несколько ключевых ролей в развивающейся и взрослой поджелудочной
железе
A : Fgf10 из мезенхимы поджелудочной железы трансдуцируется Fgfr2b для поддержания
экспрессии Sox9 в ранних (E9.5-12.5) ПДК, содержащих панкреатический эпителий. Sox9 в свою
очередь поддерживает их выражение Fgfr2b. Этот контур обратной связи Sox9 / Fgf10 / Fgfr2b
поддерживает как усиление, так и усиление панкреатической судьбы ПДК. Кроме того, Sox9
также необходим для поддержания выживаемости MPC и их недифференцированного
состояния. Sox9 действует как модулятор экспрессии Hes1 в ПДК и, возможно, регулирует статус
пролиферации и дифференцировки MPC зависимым от Hes1 образом. B : В протопланетарных /
эндокринных двудольных предшественниках, содержащих большую часть проксимального ствола
во вторичной поджелудочной железе, градуированная сигнальная передача Notch регулирует
проточную иэндокринной судьбы, контролируя клеточное равновесие между Sox9 и Hes1. Notch-
сигнализация способствует экспрессии Sox9, который клетка автономно активирует Ngn3,
который положительно авторегулирует себя, позволяя достичь состояния Ngn3 Hi . Однако
активность Notch на высоком уровне индуцирует экспрессию Sox9 и репрессора Ngn3 Hes1,
предотвращая индукцию Ngn3 и эндокринную дифференцировку. На промежуточных уровнях
сигнализации Notch индуцируется только Sox9, инициируя экспрессию Ngn3; эндокринная
дифференциация, тогда требуется клеточно-автономная репрессия Sox9 Ngn3 для подавления
протоковой программы. Бипотентные предшественники, оставшиеся
Sox9 + Hes1 +, принимают почечную судьбу по умолчанию, поскольку Sox9 позитивно регулирует
экспрессию протонных генов, включаяSpp1 и Pkd2 . Поэтому Pcd2 и Sox9 необходимы для
поддержания первичных ресничек. Продолжающаяся экспрессия Fgfr2b во вторичных переходах
Sox9 + повышает вероятность того, что петля обратной связи Sox9 / Fgf работает в бипотентных
предшественниках, как в ПДК. C : Аналогично своей роли в эмбриональных бипотентных
предшественниках Sox9 поддерживает идентичность протоков у взрослых, поддерживая
экспрессию как Spp1, так и Pkd2 в зрелых клетках протоков, и поэтому также требуется для
поддержания первичных ресничек на протоковых клетках. Является ли экспрессия Sox9
положительно регулируемой деятельностью Notch во взрослых клетках организма, как в
эмбрионе, еще предстоит выяснить. D: Генетическая трассировка линии после индукции
онкогенного конститутивно активных Красы G12D аллель показывает протоковые и centroacinar
клетки быть относительно невосприимчивыми к онкогенной трансформации в ККПР предраковых
называемого PanINs (пунктирные стрелки). В противоположность этому , ацинарные клетки легко
образуют канальные типа предраковых поражений следующие Крас G12D выражения; в то время как
внематочная индукция Sox9 для этого требуется перепрограммирования,
коэкспрессия Sox9 с Kras G12D ускоряет образование Панина (широкая, сплошная стрелка).

7.2 Sox9 взаимодействует с каналом Fgf для усиления приверженности судьбы


поджелудочной железы
Недавно генетические исследования мыши обеспечили более глубокое механистическое
понимание того, как Sox9 регулирует пролиферацию MPC, и тем самым выяснилось, что в
дополнение к Notch Sox9 взаимодействует с сигнальным путем Fgf, чтобы поддерживать
как расширение, так и идентификацию органов ранних ПДК [ 100 ]. Транскрипционное
профилирование ранних Sox9 fl / fl ; Pdx1-Cre pancreata обнаруживает повышенную
регуляцию печеночных маркеров, таких как AFP и альбумин, подтвержденные
исследованиями IF, подтверждающими их широкое распространение в Pdx1 + Sox9-
делетированных ПДК на E11.5 [ 100 ]. Когда лишены Sox9до ~ E12.5, поджелудочные
предшественники принимают альтернативную печеночную программу. В этом окне MPC
лабильны в своих действиях, требуя, чтобы Sox9 усиливал приверженность
поджелудочной железе [ 100 ]. Такая аберрантная дифференциация печени в ранней
поджелудочной железе отражает то, что у fgf10 мутант рыбок данио [ 101 ]. У таких
мутантов гепатопанкреатическая протоковая система (HPD), которая соединяет протоки
проксимальной поджелудочной железы и печени с кишечником, является
дисморфической, а некоторые клетки HPD аберрантно принимают панкреатические и
печеночные судьбы; аналогично, некоторые клетки в проксимальной поджелудочной
железе и печени неправильно дифференцируются в клетки печени и поджелудочной
железы, соответственно [ 101 ].
Как уже упоминалось, у мышей, Fgf10 из поджелудочной железы мезенхимы служит
решающую роль в митогенной вождения пролиферации клеток - предшественников
поджелудочной железы [ 53 ] ( рис рис.33 A ). Таким образом, остановка роста ПДК
приводит к мышам, у которых отсутствует либо Fgf10 [ 53 ], либо его
рецептор Fgfr2b [ 102 - 104 ], выраженный в раннем поджелудочном эпителии
[ 53 , 105 , 106 ], что приводит к отражению гипоплазии поджелудочной железы,
наблюдаемой в Sox9-предельных мышей. Fgfr2b и Sox9 почти идеально колокализуются
внутри ПДК между E9.0-12.5, одновременно с экспрессией Mesenchymal Fgf10 и аблацией
Sox9 приводит к почти немедленному тушению Fgfr2b только с
несоразмерными предшественниками Sox9 +, сохраняющими его экспрессию
[ 100 ]. Поэтому Sox9 клетки автономно поддерживает экспрессию Fgfr2b в ПДКп и
, следовательно , их Fgf10 восприимчивости ( рис рис.33 ). В то время как Pdx1 также
регулирует экспрессию Fgfr2b в MPC [ 107 ], синхронное подавление Sox9 и Fgfr2b в
Pdx1-дефицитной панкреате предполагает, что потеря Fgfr2b у мышей Pdx1 - / - Sox9-
зависимая [100 ]. Как предсказано их подавление Sox9, MPC в Pdx1 -небольшие эмбрионы
также претерпевают печеночную конверсию судьбы [ 100 ], выводя Sox9, чтобы
доминировать над Pdx1 в поддержании приверженности поджелудочной железы
MPC. Вместе с обнаружением того, что ингибирование Fgfr, опосредованное SU5402 в
E9.5, экспрессирует экспрессию Sox9 и индуцирует AFP в поджелудочной железе, эти
данные поддерживают модель, в которой Fgfr-трансдуцированная передача Fgf10
поддерживает Sox9 и, следовательно, экспрессию Fgfr2b в ПДК [ 100 ]. Завершая эту
модель, Sox9 и Fgfr2b синхронно подавляются в ПДК E9.5 Fgf10 - / - эмбрионов [ 100 ], что
согласуется с Fgf10, поддерживающим экспрессию Sox9 у прародителей, как видно
изPdx1-Fgf10 панкреата [ 16 , 82 ]. Как и предсказывали их потеряющие экспрессию Sox9
и Fgfr2b, Fgf10- дефицитные ПДК также подвергаются перепрограммированию печени
[ 100 ]. Это исследование , следовательно , поддерживает работу с / Fgfr2b / Sox9
прямоточной петли Fgf10 в ранних панкреатических клетках - предшественниках
, который поддерживает как их пролиферацию и панкреатическую приверженность
( рис рис.33 A ).
Мезенхимальный Fgf10 поддерживает экспрессию Sox9 у эпителиальных
предшественников, которые, в свою очередь, сохраняют свою экспрессию Fgfr2b и,
следовательно, их восприимчивость к митогенной передаче поджелудочной железы
Fgf10. Отмена любого компонента этого цикла проявляется в остановке роста ПДК и
гипоплазии поджелудочной железы, а также в случае потери приверженности
поджелудочной железе и принятии альтернативной печеночной программы. Этот
механизм объединяет гипоплазию поджелудочной железы, наблюдаемую у мышей, у
которых
отсутствуют Sox9 , Pdx1 , Fgf10 или Fgfr2b [ 16 , 45 , 46 , 53 , 103 , 104 , 108]. Примечатель
но, что Sox9 позитивно регулирует экспрессию Fgfr2 в других контекстах развития, таких
как семенники [ 109 ] и вентральная простата [ 110 ]. Является ли это регулирование
прямым, остается неизвестным и потребует изучения хромотаном иммунопреципитации
(ChIP) для выяснения. Аналогично, хотя передача сигналов Fgf10-Fgfr2 способствует
экспрессии Sox9 при развитии легкого [ 111], это исследование является первой
демонстрацией полного цикла Fgf10 / Fgfr2b / Sox9 в том же контексте. Весьма вероятно,
что такая петля поддерживает расширение и / или приверженность судьбы прародителей в
других контекстах развития и восстановления. В случае раннего панкреогенеза
потребуется дальнейшая работа для механического анализа того, как активность этой
петли поддерживает пролиферацию ПДК при подавлении программы дифференциации
печени. Такие исследования, несомненно, обеспечит понимание эффектов передачи
сигналов Fgf-Sox9 ниже по течению в других тканевых предшественниках.
Поразительно, что недавние генетические исследования указывают на то, что связь Sox9-
Fgf эволюционно сохраняется в гепатопанкреатическом моделировании рыбок данио, хотя
его проанкреатическое влияние распространяется только на поджелудочную железу. При
развитии рыбок данио параног sox9b экспрессируется в энтодерме гепатопанкреатической
области, а затем в развитии внутрипанкреатических и внутрипеченочных протоков, а
также в HPD, соединяющем их с кишечником [ 79 , 112 ]. У мутантов sox9b эти структуры
дисморфистны с эктопическими клетками печени и поджелудочной железы,
появляющимися внутри HPD, проксимальной поджелудочной железы (печеночной) и
печени (поджелудочной железы) [ 79 , 112 ], фенкопинговыми мутантами fgf10
даниоса [101 ]. В соответствии с этим ранняя экспрессия sox9b в энтодерме
гепатопанкреатической области теряется в составных мутантах, у которых отсутствуют
как fgf10, так и fgf24 , хотя и не в отдельных мутантах fgf10 [ 79 ], что согласуется
с fgf10, действующим избыточно с fgf24 в спецификации поджелудочной железы данио
[ 113 ]. Эти результаты предполагают, что sox9b функционирует ниже по потоку от
сигнализации Fgf, чтобы создать картину кишки данио. Интригующе, в том же
исследовании [ 79 ], потеря экспрессии sox9bнаблюдалась в гепатопанкреатической
энтодерме после морфолино-опосредованного bmp2aсбить. Таким образом,
множественные сигналы, несомненно, определяют индукцию и / или
поддержание экспрессии sox9b / Sox9 в энтодерме кишечника.
Хотя существуют параллели в Sox9 / Fgf-управлении картированием энтодермы
кишечника между мышью и рыбой, неясно, работает ли аналогичный цикл прямой подачи
в последнем. Хотя fgfr2 экспрессируется в передней эмбриональной энтодерме рыбок
данио, одновременно с гепатопанкреатическим рисунком [ 101 ], ее экспрессия не
изучалась при разрешении одного органа. Кроме того, выражение fgfr2 еще предстоит
проанализировать в мутантах sox9b . Таким образом, пока неясно, поддерживает ли sox9b
выражение fgfr2 в клетках энтодермы кишечника рыбок данио, завершая такой
регуляторный цикл.
Наконец, учитывая центральную роль Sox9 в начале ПДКпа в модуляции эффектор Notch
Hes1 и поддержании восприимчивости к Fgf10, Sox9 представляется, обеспечивает
взаимосвязь между путями Fgf и Notch во время раннего развития поджелудочной железы
( рис рис.33 A ). В нескольких исследованиях однозначно показано, что стойкая
экспрессия Fgf10 во время панкреогенеза увеличивает пролиферацию и задерживает
клетки поджелудочной железы в состоянии предшественника и связана с их
поддерживающей активацией Notch, о чем свидетельствуют
поддерживаемые экспрессии Notch1 , Notch2 и Hes1 [ 82 , 114]. Хотя это неопровержимо
доказано, два факта сильно влияют на эту задержку предшественника, происходящую в
предшественниках MPC-стадии: экспрессия Fgf10 является стимулятором Pdx1 (так
выражена MPC) и поддерживает совместное выражение Notch1 / Notch2 с лигандами
Notch Jagged1 и Jagged2 в поздней эктопической Fgf10-экспрессирующие клетки, как в
нормальных (E12.5) ПДК [ 82 ]. В согласии, аннулирование сигналов Notch в
эксплантированном эпителии поджелудочной железы E10.5 способно подавлять
пролиферативные и поддерживающие предшественники эффекты лечения Fgf10
[ 115]. Вместе эти исследования подразумевают, что сигнализация Notch является
обязательным нижестоящим эффектором передачи сигналов Fgf10 в ПДК. Однако именно
то, как Fgf10 модулирует активность Notch у прародителей, остается неясным. Как Sox9
служит как вниз по течению эффектор сигнализации Fgf10 и как выше по течению
модулятора Hes1 в ПДКп, можно предположить , что Sox9 действует в качестве канала
Fgf10-Hes1 / Notch ( Рис рис.33 ). Это предположение еще более правдоподобно из-за
недавнего вывода о том, что другой поддерживающий панкреатический фактор-
предшественник Ptf1a поддерживает экспрессию Hes1 в ПДК через лиганд Notch Dll1
[ 49]. Учитывая центральную роль , что модуляция Fgf и Notch сигнальных путей играет в
протоколах для дифференциации клеток чЭСКа / плюрипотентных в инсулине + клетки в
пробирке [ 116 ], устанавливая Sox9 , является ли точка Fgf10-Hes1 / Notch перекрестных
помех, скорее всего , чтобы обеспечить чтобы помочь их оптимизации. Рассечение этой
регулирующей сети должно стимулировать разработку протоколов, направленных на
конкретное расширение клеток, полученных из hESC / iPS, на стадии предшественника
поджелудочной железы.

7.3. Sox9 требуется в зависимости от дозировки для эндокринной


дифференцировки
При рождении гипопластическая поджелудочная железа в Sox9 fl / fl ; Мыши Pdx1-
Cre являются кистозными, в состав которых входят диспергированные ацини, плохо
разветвленное протоковое дерево и почти без эндокринных клеток [ 16 ]. Таким образом,
хотя Sox9 необходим для роста поджелудочной железы, большее возмущение
эндокринного, чем экзокринный морфогенез, показывает, что дифференциация
эндокринных клеток более чувствительна к Sox9, чем чувствительность экзокринных
клеток. Соответственно, островкоспецифические дефекты встречаются в Sox9 fl /
+
; Мыши Pdx1-Cre недостаточны для одной функциональной копии Sox9 в
поджелудочной железе [ 21]. Размер и общая морфология поджелудочной железы
невозмутимы такой гаплоинтенсивностьюподжелудочной железы Sox9 [ 21 ], что не
противоречит отсутствию заметного воздействия на морфогенез экзокринной ткани,
который содержит 98-99% взрослого мышиного поджелудочной железы [ 26 ]. Однако,
хотя экзокринный морфогенез нечувствителен к уменьшению дозы гена Sox9 , количество
эндокринных клеток (и как α-, так и β-клеточная масса) уменьшается вдвое при рождении,
причем все типы клеток островков одинаково влияют [ 21 ]. Поскольку
как пропорциональное содержание β-клеточного инсулина, так и экспрессия зрелых
маркеров β-клеток (таких как Glut2, PC1 / 3 и ацетил-амилоидный полипептид - IAPP)
невозмутимы в Sox9 fl / + ;Pdx1-Cre [ 21 ], это говорит о том, что терминальная
дифференциация β-клеток не нарушается гаплоинеальностью Sox9 . Эта эндокринная
гипоплазия является феноксиомией, о которой сообщается группой Хэнли [ 15 ] у
пациентов, страдающих летальным синдромом
гаплоинеустойчивости SOX9, камкомедиальной дисплазией (CD, OMIM 114290),
характеризующейся тяжелой скелетной дисплазией и переменным аутосомным
переломом XY-пола [ 117 , 118 ]. Примечательно, что это исследование было первым, кто
намекнул на потенциальную функциональную роль Sox9 / SOX9в морфогенезе
поджелудочной железы. Гистологическое обследование выявило два из трех
перинатальных панкреатов из суровых, перинатально-летальных CD-дисков, чтобы
отображать гипопластические островки с переменной гормональной экспрессией, а также
снижение экспрессии PC1 / 3 и IAPP [ 15 ]. Хотя это расхождение в маркерной экспрессии
между β-клетками Sox9- гаплоинтенсивной мышцы и панкреатики человека может
отражать незначительные отклонения в их программах поджелудочной железы, более
вероятно, что это связано с дивергентной фиксацией ткани, учитывая более сложную
природу сохранения тканей, полученных из аутопсии человека ,
Учитывая, что в Sox9- гаплоидеальных мышах эндокринная дифференциация
невозмутима, а гипоплазия островков одинаково влияет на все типы клеток, это говорит о
том, что такая гипоплазия возникает из-за дефекта восходящего потока, влияющего на
специфика эндокринного предшественника. Подтверждая это мнение, Ngn3 + число клеток
эндокринного предшественника уменьшено вдвое в Sox9 fl / + ; Зародыши Pdx1-Cre [ 21 ]. В
свете данных трассировки линии, которые поддерживают
один предшественник Ngn3 +, приводящий к возникновению одной эндокринной клетки
[ 119 ], эта половинка Ngn3 + клеток полностью согласуется с половиной чисел
островковых клеток. Таким образом, гипоплазия островков в Sox9- гаплоидные мыши и,
предположительно, люди, происходят через нарушение эндокринного неогенеза, выявляя
Sox9, чтобы непосредственно управлять инициацией эндокринной
дифференциации. Дальнейшая поддержка этой роли, в то время как индуцируемое
делеция Sox9 непосредственно перед вторичным переходом лишь пренебрежимо влияет
на рост поджелудочной железы и экзокринный морфогенез, Ngn3 + эндокринные
предшественники и, следовательно, эндокринные клетки почти полностью удалены
[ 20 ]. Трассировка линии показывает, что Sox9- делетированные предшественники
обладают сниженной способностью генерировать Ngn3 + прародители и эндокринные
клетки, но их вероятность выхода ацинарных или протонных клеток не изменяется
[ 20]. Таким образом, Sox9 требуется автономно для самостоятельной активации
эндокринной программы. Исследования ChIP обеспечили механическое понимание
молекулярной основы, лежащей в основе этой автономной роли. ChIP выполнялся как в
первичной эмбриональной (E15.5) мышечной панкреате [ 21 ], так и в клеточной линии
протока поджелудочной железы мыши mPAC L20 [ 77 , 120 ] выявил присутствие Sox9
на промоторе Ngn3 . Кроме того, было продемонстрировано, что Sox9 непосредственно
стимулирует активностьпромотора Ngn3 путем обнаружения того, что он может
связываться с промотором человеческого NEUROG3 и увеличивать его экспрессию
[ 77]. Было показано, что нокдаун экспрессии Sox9 в клетках mPAC L20 в этом же
исследовании отменяет экспрессию Ngn3, индуцированную аденовирусной экспрессией
белка bHLH Mash1 [ 77 ]. Вместе эти исследования показывают , что, в то время как
экзокринная дифференциация Sox9-независимая, Sox9 абсолютно необходимы для
инициации endocrinogenesis пути индукции Ngn3 выражения ( рис рис.33 В ) и , кроме
того, Sox9 регулирует этот процесс в лекарственном чувствительном, клеточно-
автономным образом ,

7.4. Несоответствия между сетями транскрипции in vitro и in vivo


Показано, что Sox9 регулирует экспрессию Ngn3 in vitro , Lynn et al . [ 77 ] стремился
понять, как Sox9 индуцирует экспрессию Ngn3 только в части клеток-
предшественников. Используя клетки протока mPac L20, они попытались
охарактеризовать положение Sox9 в сети транскрипции, регулирующей содержание
предшественников по сравнению с дифференцировкой. Было обнаружено, что Sox9
связывается с промоторами факторов транскрипции поджелудочной
железы Hnf1β , Onecut1 и Foxa2 [ 77 ], все ранее участвовавшие в
управлении Ngn3экспрессию и сосуществуют с Sox9 в ПДК и бипотентных
предшественниках [ 121 ]. Кроме того, было показано, что частичное (~ 50%) нокдаун
экспрессии Sox9 приводит к снижению экспрессии Onecut1 и Foxa2 на 20-30% и
увеличению экспрессии Hnf1β на 50% [ 77 ].
Параллельный подход видел нокдаун Hnf1β скромно уменьшал выражение Foxa2 без
влияния на Onecut1, в то время как нокдаун Foxa2 уменьшал выражение Sox9, не
затрагивая ни Hnf1β, ни Onecut1 [ 77 ]. Из этих результатов был сделан вывод, что Foxa2
необходим для поддержания экспрессии Sox9 в транскрипционной сети генов
эндокринной дифференцировки, включая Hnf1β, Onecut1 и Foxa2, что необходимо для
правильного морфогенеза поджелудочной железы. Однако, поскольку это исследование in
vitro основано на линии клеток протока mPAC L20, неясно, сохраняется ли предлагаемая
транскрипционная сеть у прародителей развивающейся поджелудочной железы in vivoи,
если это так, учитывая коэкспрессию этих факторов в ПДК и более поздних бипотентных
предшественниках, к которым применимо популяция (и) популяции. Чтобы решить эту
проблему, Дюбуа и его коллеги [ 121 ] оценили экспрессию тех же генов эндокринной
дифференцировки в Sox9- дефинитивной панкреате. Sox9 на E10.5 в Sox9 fl / fl ; Pdx1-Cre ,
или на E13 или E15 в Sox9 fl / fl ; Зародыши Rosa26-Creer,подвергшиеся воздействию
тамоксифена при E12.5 или E14.5, соответственно, не нарушали экспрессию
поджелудочной железы Hnf1β, Onecut1 или Foxa2 [ 121 ].
Таким образом, вопреки исследованиям in vitro , Sox9 является доступным для выражения
всех трех факторов во время органогенеза поджелудочной железы. Напротив, однако,
экспрессия Pdx1 была сильно снижена после абляции Sox9 [ 121], что выявило
потребность в Sox9 в поддержании экспрессии Pdx1 у предшественников поджелудочной
железы. Поскольку Pdx1 крайне необходим для эндокриногенеза и регулирует экспрессию
Ngn3 [ 122 ], это будет утверждать, что Sox9-зависимая регуляция экспрессии Pdx1 в
бипотентных предшественниках вторичного перехода необходима для основной волны β-
клеточного регенерации от вторичного перехода до рождения. Это согласуется с потерей
β-клеток, наблюдаемых после удаления Sox9 при E13 или E15 [121 ]. В то время как Sox9,
таким образом, индуцирует экспрессию Ngn3 как напрямую, так и косвенно через Pdx1,
возможно, это потеря первой, которая преимущественно объясняет эндокринную
гипоплазию в Sox9 - гаплоинозно мышей, поскольку их
уровни экспрессии Pdx1 поджелудочной железы остаются невозмутимыми. Дальнейшая
работа потребует разрешения того, будет ли Sox9
регулировать экспрессию Pdx1непосредственно у двухпотенциальных
предшественников. Тот факт, что экспрессия Pdx1 сохраняется в ПДК сразу после Pdx1-
Cre- опосредованной Sox9-абляции [ 16 ] и только подавляется в E12.5 [ 121 ],
предполагает, что Sox9 напрямую не регулирует Pdx1во время раннего панкреогенеза и /
или что Sox9 регулирует Pdx1 через различные механизмы в ПДК по сравнению
с бипотентными предшественниками. Учитывая, что у людей мутации
в Pdx1 проявляются в MODY (диагноз развития зрелости у молодых) 4 [ 123 ],
поддержание Pdx1 Sox9 во время основной волны β-клеточного неогенеза
подразумевает SOX9 потерю функциональных мутаций, являющуюся
предположительным причинный фактор диабета у людей. В то время как SOX9-
гаплоинеустойчивость связана с летальным CD, как упомянуто выше, мутации,
влияющие на дальний энхансер E1 , влияющий на экспрессию SOX9 поджелудочной
железы [ 83], возможно, проявляется в диабете человека. Хотя большинство генов-
продуктов MODY функционируют в β-клетках, Hnf1β / Tcf2-мутации, связанные с
MODY5 [ 124 ], исключены из таких клеток, только выраженные как Sox9 в ПДК и
бипотентные предшественники, из которых они возникают [ 31 , 54 ]. Это создает
прецедент для дисфункции генов-предшественников поджелудочной железы, которые
проявляются в диабете независимо от β-клеточной дисфункции, предположительно как
следствие эндокринного дисгенеза вместо этого. Таким образом, мутации,
снижающие дозу Sox9 / SOX9, могли бы проявиться в MODY, что согласуется с
непереносимостью глюкозы у Sox9- гаплоидных взрослых взрослых мышей [ 121 ], как
указано ниже. Будь тоМутации SOX9 связаны с диабетом человека, который еще
предстоит увидеть.

7.5. Нотч-активность управляет выбором проточной и эндокринной судьбы через


Sox9 и Hes1
В то время как Sox9 требуется , чтобы побудить про-эндокринную Ngn3 экспрессии во
вторичных переходных бипотентных клетках - предшественниках, это противоречит с
Sox9 + населениями , являющимся Паз-активным в это время, о чем свидетельствует
широким распространение Sox9 / Hes1 колокализация на E15.5 [ 16] ( рис Рисунок3
3 B ). Sox9, индуцирующий Ngn3, не согласуется с ним, также положительно регулируя
экспрессию Hes1 [ 16 ], так как для активации Ngn3предшественники Sox9 + должны уйти
от Ngn3- усиливающего влияния Hes1 [ 125]. Недавно была предложена привлекательная
модель для объяснения того, как может произойти такое «побег», примирив эти явно
противоречивые функции Sox9 [ 20 ]. Подтверждение вторичного перехода
Sox9 + бипотентные предшественники были Notch-активными [ 16 ], Ши и его коллеги
[ 20 ] показали субпопуляцию E15.5 Sox9 + предшественников для экспрессии высоких
уровней Notch-мишени Hes1 и Notch-рецептора Notch2, а также более низких уровней
Notch1. Одновременно эти клетки также выражали NICD1 и NICD2. Это подтверждалось
также выражением лигандов Notch Dll1 и Jag1 и медиатора Notch Rbpj
в стволе Sox9 + . Таким образом, Sox9 +прародители, по-видимому, регулируются Notch во
время панкреогенеза, поскольку они находятся в эмбриональной печени [ 112 , 126 ].
В подтверждение предыдущих выводов [ 16 , 21 , 127 ], в то время как повышенная
экспрессия Ngn3 был замечен в небольшом количестве Sox9 + клеток, он никогда не был
обнаружен в Hes1 + клеток ( рис рис.33 B ). В сочетании с предыдущими сообщениями о
подавлении NICD1 и Sox9 в клетках Ngn3 + [ 128 ] это указывает на то, что индукция Ngn3
и расслоение эндокринного предшественника связаны с уменьшенной сигнализацией
Notch [ 20 ]. Явное управление Notch в Sox9 +бипотентные предшественники в сочетании с
Hes1, выраженные только в одной пропорции, привели к гипотезе, что Sox9 и Hes1
чувствительны к Notch при разных пороговых значениях. Путем культивирования
эксплантатов поджелудочной железы в градуированных концентрациях ингибитора γ-
секретазы ингибитора Notch-IX (GSI-IX) Shih et al . [ 20 ] обнаружили, что при низких
концентрациях ингибитора (1 мкМ) экспрессия Hes1 снижается, а концентрация Sox9 не
изменяется, а при более высоких (5 или 10 мкМ) экспрессии обоих факторов
отменяется. Таким образом, Sox9, как и Hes1, является целью Notch: остается решить,
является ли это регулирование прямым, как при развитии печени, когда NICD1
непосредственно связывает промотор Sox9 [ 126]. Хотя оба являются задачами Notch, Hes1
и Sox9 реагируют на Notch при разных пороговых значениях: оба они выражены
в предшественниках Notch Hi , но «промежуточная» активность Notch приводит только к
выражению Sox9, учитывая тот факт, что только
подмножество предшественников Sox9 + является Hes1 + ( рис рис.33 В ). Результирующее
предсказание того, что Sox9 должно быть более чувствительным к повышенной
активности Notch, было доказано, показывая, что Misexpression Pdx1-Cre -driven NICD
индуцирует гораздо более высокую регуляцию Sox9, чем Hes1, в бипотентных
предшественниках [ 20 ]. Поскольку ингибирование Notch индуцирует экспрессию Ngn3 и
эндокринную дифференцировку [ 128 ,129 ], авторы опробовали, является ли эта индукция
Sox9-зависимой. Поскольку GSI-IX не индуцирует экспрессию Ngn3 в Sox9-
делетированных эксплантатах поджелудочной железы, это говорит о том, что Sox9
является обязательным индуктором Ngn3 [ 20 ]. Казалось бы, таким образом , что передача
сигналы Notch индуцирует как активаторы и ингибиторы эндокринной дифференцировки,
и конкуренция между ними поддерживает недифференцированный статус -
кво ( рис рис.33 B ).
Чтобы лучше исследовать взаимодействие между Sox9 и Ngn3, Ши и коллеги [ 20 ]
misexpressed Ngn3 на всех ПДК. В результате подавление Sox9 в предшественниках
показывает Sox9 и Ngn3 участвовать в клеточно-автономным петле отрицательной
обратной связи ( рис рис.33 B ). Потеря Sox9 в Notch-ингибированном Ngn3 -неверных
эксплантатах поджелудочной железы исключает подавление Ngn3 Sox9 с учетом потери
Sox9 после ингибирования Notch, это показывает, что через Sox9 сигнализация Notch
индуцирует экспрессию Ngn3, которая на высоких уровнях затем подавляет Sox9. Это
открытие согласуется с более ранней демонстрацией стойкой мРНК Sox9 [ 130] и белка
[ 128 ] в Ngn3-дефицитных клетках поджелудочной железы,
активирующих промотор Ngn3 . Противоречивые сообщения о подавлении Ngn3 [ 131 ],
Shih et al . [ 20 ] затем показали, что клетки Ngn3 + (eGFP + ) в панкреате эмбрионов Ngn3
eGFP / eGFP (функционально Ngn3-нуллизиготные) демонстрируют снижение
интенсивности eGFP по сравнению с таковыми в Ngn3e GFP / + ( Ngn3-небольше) братья и
сестры, результат, который сохраняется после ингибирования Notch эксплантированного
панкреата. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что во время
pancreogenesis, Ngn3положительно ауторегулируемой в моде с Notch-независимый , так
что , как только Sox9-индуцированной Ngn3 выражение инициируется, положительная
обратная связь дает возможность Ngn3 Hi состояние должно быть достигнуто, обеспечивая
эндокринную приверженность ( рис Рисунок3 3 B ). Если это состояние не достигается,
бипотентный предшественник принимает проточную судьбу, о чем свидетельствует
стойкая экспрессия бипотентных генов-предшественников / протоков (таких как Sox9,
Hes1 и Hnf1β) в eGFP + клетках Ngn3 eGFP / eGFPэмбрионов [ 20 ]. Хотя это говорит о том,
что Ngn3 подавляет программу протоков, Sox9 в противоречии непосредственно
требуется для дифференциации и поддержания протоков поджелудочной
железы. Индуцируемое удаление Sox9 непосредственно перед вторичным переходом
проявляется в дизгенных протоках с расширенным просветом на E15.5 и кистозным
фенотипом после рождения, которое отражается условной аблацией Sox9 во взрослом
возрасте [ 20 ]. Профилирование экспрессии показало, что протоковый дисгенезис связан
с понижением регуляции протоковых генов, включая Spp1 [ 132 ], известную мишень
Sox9 [ 133 ] и поликистин 2 ( Pkd2), мутации которых связаны с аутосомно-доминантным
поликистозным заболеванием почек (ADPKD), унаследованным системным
расстройством, характеризующимся развитием почечных, печеночных и панкреатических
кист [ 134 , 135 ]. Дальнейшее поддержание требования к Sox9 в поддержании экспрессии
протока Pkd2, первичные реснички, которые Pkd2 поддерживает [ 136 ], теряются из
апикальной мембраны клеток протоков в эмбриональной и взрослой поджелудочной
железе после абляции Sox9, показывая, что Sox9 требуется для образования первичных
ресничек в поджелудочная железа [ 20 ] ( рис рис.33 В ).
Наконец, Ши и др . более детально исследовали связь между Notch и Sox9 при
регулировании протоковой программы [ 20 ]. Обычно не экспрессируется у эндокринных
предшественников, Ngn3-Cre -driven экспрессия NICD в таких клетках индуцирует
экспрессию Sox9 и Hes1, а также протоковые маркеры, такие как Spp1 и Pkd2 и, как
показано [ 137 , 138 ], нарушают эндокринную дифференцировку [ 20 ]
, На фоне определения Sox9 экспрессия Hes1 поддерживалась в NICD-
экспрессирующих клетках Ngn3 + , подтверждая, что Sox9 служит в качестве модулятора
экспрессии Hes1 [ 20 ]. Зеркалирование Ngn3 +клетки, экспрессирующие как NICD, так и
Sox9, эндокринная дифференцировка все еще были отменены у Sox9- делетированных
мышей [ 20 ]. Этот провал высокой активности Notch для спасения эндокриногенеза в
отсутствие Sox9 согласуется с абсолютным требованием для Sox9 в этом
процессе. Аналогично, в состоянии Sx9-дефицита мицезия SIC9 была недостаточной для
индукции протоковой программы в бипотентных предшественниках, показывая, что Sox9
является обязательным эффектором индуцированной Notch протоковой дифференцировки
[ 20 ].
Вместе, результаты этого исследования сложной Shih и его коллеги указывают на судьбу
вторичного перехода бипотентными канала / эндокринных клеток - предшественников
будучи регулируется Notch-зависимой молекулярной сети [ 20 ] ( рис рис.33 B ). Согласно
их модели, учитывая, что экспрессия Hes1 в бипотентных предшественниках
репрессирует экспрессию Ngn3 и Sox9, индуцирует ее, промежуточные уровни активности
Notch благоприятствуют Sox9 над экспрессией Hes1,
способствуя индукции Ngn3 . Положительная авторегуляция Ngn3гарантирует, что когда-
то индуцированные, прародители смогут быстро достичь Ngn3 Hiгосударства, передавая их
эндокринной программе. Ngn3 затем клеточно-автономно подавляет Sox9 и,
следовательно, развитие протоков, что позволяет проводить эндокринную
дифференциацию. Таким образом, различные градации активности Notch способны
указывать различные эндокринные или протоковые судьбы в пределах одной и той же
популяции бипотентных предшественников.
Исследования у рыбок данио указывают на это взаимодействие Notch-Sox9,
сохраняющееся в середине панкреогенеза. Лечение поздних эмбрионов рыбок данио с
ингибитором γ-секретазы DAPT в течение трех-четырех дней после оплодотворения
приводит к как потере экспрессии sox9b, так и к избыточной эндокринной
дифференциации во внутрипанкреатических протоках [ 79 ], что указывает на активность
Notch, необходимую для поддержания экспрессии протокового sox9b как в
мыши. Примечательно, что этот эффект повторно продуцируется в
экстрапанкреатическом канале путем лечения ингибитором рецептора Fgf SU5402 в
течение двух-трех дней после оплодотворения [ 79 ]. Таким образом, Fgf, как
сигнализация Notch, требуется для поддержания протокового sox9bвыражение у рыбок
данио. Сохранение отношений между FGF, Notch и Sox9 во время мыши и данио
pancreogenesis приглашает предположение относительно того , является ли активностью в
бипотентных клетках - предшественниках в том же образом Sox9-FGF цикл , как в ПДКпе
( рис рис.33 B ). В подтверждение этого утверждения, а также выраженное в ПДК,
выражение Fgfr2b сохраняется в предшественниках Sox9 + бипотентных стволов во время
вторичного перехода [ 100], показывая, что эта популяция остается Fgf10-
восприимчивой . В то время как Fgf10 сглаживается в мезенхиме поджелудочной железы
мыши после E12.5 [ 53 ], она предположительно слабо выражена в протокальном дереве
вторичной поджелудочной железы [114 , 139 ]. Fgf10 также обнаруживается в
поджелудочной железе с помощью ОТ-ПЦР по всему эмбриогенезу [ 140 ].
Дополнительные исследования потребуются для определения того, выражены ли
физиологические уровни Fgf10 во вторичной поджелудочной железе, и если да, то будет
ли Fgf10 взаимодействовать с Fgfr2b и Sox9 для поддержания предшественников стволов
во время этого окна, так как он имеет ПДК в более раннем развитии. Если это так, это
немедленно вызывает вопрос о том, как взаимодействуют Notch и Fgf, чтобы управлять
принятием протоковых иэндокринных суждений в клетках-бипотентных
предшественниках. Как упоминалось выше, из-за интегральной роли модуляции Fgf и
Notch в клетке hESC / iPS к протоколам дифференцировки инсулина + клетки [ 116 ],
молекулярная диссекция такого предполагаемого перекрестного помеха Fgf-Notch,
вероятно, окажется полезным для руководства оптимизация таких протоколов.
Идти к:

8. Роль Sox9 в постнатальной поджелудочной железе


Как уже упоминалось выше, по происхождению, экспрессия Sox9 в обоих мыши и
поджелудочной железы человека ограничивается протоков и centroacinar клеток
[ 15, 16 , 80 ] ( рис Рисунок11 D ). В то время как Sox9 выражения требуется у взрослых, а
также в развитии клеток протоков для поддержания целостности и протоков
формирования первичной реснички [ 20 ] ( рис рис.33 С ), это требованием - в отличие
, что для эндокринной дифференцировки - не кажется, дозировка чувствительной , в виде
половинного дополнения поджелудочной железы Sox9доза гена не проявляется в
обнаруживаемом протоплазмозном дисморфогенезе [ 121 ]. На самом деле, несмотря на
двукратное уменьшение размера островков и массы β-клеток при рождении [ 21 ], в то
время как Sox9 - гаплоинтенсивные ( Sox9 fl / + ; Pdx1-Cre ) мыши - непереносимость
глюкозы, это не прогрессирует до явного диабета, большинство вероятно, вследствие
компенсаторного увеличения пролиферации β-клеток и, следовательно, массы в раннем
послеродовом периоде [ 121 ]. По-видимому, это, по-видимому, означает, что гомеостаз
взрослого поджелудочной железы относительно нечувствителен к изменениям
в Sox9дозировка. Тем не менее, исследования трассировки генетических линий показали,
что это не обязательно так, как будет показано ниже.
Учитывая роль Sox9 в качестве фактора поддержки для предшественников в
развивающейся поджелудочной железе [ 16 ] и общепринятой верой в то, что во взрослом
возрасте факультативные предшественники находятся в протоках поджелудочной железы
[ 92 ], дополнительная роль Sox9 в тканевом гомеостазе в здоровом и / или раненых
поджелудочной железы. Несколько исследований за последние несколько лет начали
освещать функции этого фактора в ряде патологических состояний, включая рост
новорожденных, регенерацию, вызванную панкреатитом, и рак поджелудочной железы.

8.1. Sox9 + клетки сохраняют некоторый бипотент в ближайшем послеродовом


периоде
Учитывая, что клетки Sox9 + сохраняют потенциал, вызывающий появление проточной,
ацинарной и эндокринных клеток еще в E18.5 в эмбриогенезе [ 19 ], трассировка
генетической линии проводилась неонатально, чтобы выяснить, сохраняют ли они такую
мультипотентность после рождения. В то время как введение тамоксифена для
пятидневных мышей, экспрессирующих Sox9-Creer T2 , не приводило к какой-либо
ацинарной маркировке, в небольших кластерах эндокринных клеток обнаруживалась
дефицитная маркировка, причем маркировка не-β-клеток чаще, чем инсулин + клетки
[ 19 ]. Хотя нецелесообразная активация трансгена не может быть полностью исключена,
такая маркировка подразумевает, что эндокринный неогенез продолжается, хотя и
незначительно, из Sox9 +область в непосредственной послеродовой период
( рис Figure22 Е ). Однако, несмотря на интенсивные схемы введения тамоксифена в три
недели, в этом анализе не было получено доказательств [ 19 ] для поддержки эндогенеза
(или ацинарного) неогенеза из клеток Sox9 + за пределами постнатальной стадии, что
подразумевает постепенное прогрессирование клеток Sox9 + блокированию»к протоковой
судьбе за рождение ( рис Figure22 F ).

8.2. Неогенный потенциал клеток Sox9 + в зрелой поджелудочной железе является


спорным
В суровом контрасте с зрелыми панкреатическими Sox9 + клеточными импульсными
наблюдениями Коппа и коллег [ 19 ], индуцированной тамоксифеном
маркировки протоков Sox9 + и центроацинарных клеток в двухмесячном Sox9 IRES-
CreerT2
; Мыши Rosa26R lacZ неожиданно привели к постепенному увеличению маркировки
ацинарного отделения в течение следующих месяцев, так что почти 12-месячная погоня
заклеивали почти все экзокринные (проточные, центроацинарные и ацинарные), но не
эндокринные клетки [ 17 ]. Эта выраженная ацинарная маркировка была повторена после
импульса тамоксифена до E16.5 Sox9 IRES-CreerT2; Rosa26R lacZэмбрионов [ 17 ], но не было
видно в Sox9-Creer T2 ; Мышей Rosa26R lacZ пульсировали на одной и той же стадии
[ 19 ]. Это драматическая, послеродовая ацинарная репопуляция потомков
меченого Sox9 + протоков и / или centroacinar клеток согласуются с непрерывным
пополнением ацинозного по SOX9 + клеткам - предшественникам во время нормального
гомеостаза. Пытаясь разрешить эти противоречивые исследования, вполне возможно, что
это несогласие с отслеживанием Sox9-Creer T2 связано с подспудным популяционным
центроасинарным ацинусом, которое по-разному маркируется двумя
разными Creer T2линий. Для проверки этой гипотезы потребуется боковое наблюдение
точных подгрупп популяции взрослых протоков, нацеленных на две линии.
Второе, альтернативное объяснение этих несогласованных выводов, однако, одинаково
правдоподобно. В то время как мыши Sox9-Creer T2 были получены через трансгенезис
BAC, линия Sox9 IRES-CreerT2 была создана путем вбивания IRES-Creer T2 в Sox9 3'-UTR. Такие
области модулируют экспрессию эукариотического гена путем управления трансляцией
мРНК, стабильностью и субклеточной локализацией [ 141 ] и, в соответствии с такими
важными ролями, включают некоторые из наиболее консервативных элементов в геноме
млекопитающих [ 142 ]. Поскольку 3-UTR-опосредованная посттранскрипционная
регуляция необходима для соответствующей пространственной и временной экспрессии
белка, кодируемого мРНК [143 ], иногда известно, что сбивание в 3'-UTR нарушает
уровни экспрессии целевого гена, часто совершенно непредсказуемым образом. Для
иллюстрации, стук-ин LacZ в 3'-UTR мышиного Vegf (кодирующий сосудистого
эндотелиального фактора роста А), как сообщается, приводит к увеличению либо [ 144 ]
или уменьшились [ 145 ] СЭФР уровней экспрессии, условных от точной вставки
сайт. Учитывая изящную дозозависимуючувствительность Sox9 к морфогенезу
поджелудочной железы, вполне вероятно, что даже незначительные возмущения в уровне
экспрессии Sox 9, вызванные нарушением Sox9 3'-UTR, могут влиять на Sox9 + cell
behavior. Indeed, lending credence to this notion, deletion of a recently-discovered enhancer
located 70 kb upstream of mouse Sox9, produces an 18-37% decrease in Sox9 expression levels
in a number of organs including pancreas, phenocopying (albeit to a lesser degree) islet
hypoplasia resulting from Sox9-haploinsufficiency [146]. This complex transcriptional regulation
of Sox9 is further compounded by its positive autoregulation as implied by a previous study [77]:
Sox9 dimers bind multiple recognition sites within the enhancer region and are both necessary
and sufficient for its activity [146]. Thus, together, even relatively minor reductions
in Sox9 уровни экспрессии достаточны, чтобы повлиять на неогенный
потенциал клеток Sox9 + поджелудочной железы.
Подтверждая представление о том, что введение IRES-Creer T2 в его 3'-UTR влияет
на дозировку Sox9 , тогда как уровень эндогенной экспрессии Sox9 поджелудочной
железы (и печеночной) не затрагивается новорожденными Sox9 IRES-CreERT2 , он снижается у
взрослых мышей [ 23 ], подразумевая расходящиеся транскрипционные механизмы,
регулирующие экспрессию Sox9 в развитии по сравнению со зрелостью. Такой
постнатальный гипоморфизм Sox9, вероятно, повлияет на неогенную
компетентность протоксальных (в том числе центроацинарных) клеток Sox9 + , делая их
более пластичными [ 23] и способно приводить к появлению ацинарных клеток, которые
заселяют ацинарное отделение посредством самодупликации [ 147 ]. Эта гипотеза может
быть легко протестирована клетками Sox9 + с пульсирующим импульсом у взрослых Sox9-
Creer T2 ; Мышей Rosa26R lacZ на Sox9 flox / + ( Sox9 -haploins недостаточно) по сравнению
с Sox9 + / + фонами. В то время как уменьшенный Sox9экспрессия в взрослых клетках
поджелудочной железы может, по-видимому, приводить к тому, что они приводят к
образованию ацинарных клеток, как такие меченые ацинарные клетки заполняют всю
ацинарную клетку, это вопрос разногласий. Это явление может быть вызвано мечеными
ацинарными клетками, имеющими некоторое избирательное преимущество и
«несогласованные» немеченые клетки в том же ацине. Однако это может также быть
результатом ранее недооцененных механизмов обновления клеток в гомеостазе
поджелудочной железы, так что ацинарные клетки, сопоставляющие терминальные
протоки / центроацинарные клетки, предрасположены к повторной заселенности всего
ацина с интервалами, что согласуется с клонированием отдельных поджелудочной железы
ацини [ 148 ]. В то время как непреднамеренное, это отслеживание Sox9- гипоморфных
клеток взрослого протока [ 17 ] ловко показало, что Sox9дозировка регулирует неогенный
потенциал клеток Sox9 + у взрослых, а также эмбриональную поджелудочную
железу. Понятно, что потребуется дальнейшая работа для определения того, насколько
точно дозировка Sox9 модулирует пластичность взрослых клеток и как этот вывод может
быть использован для терапевтического усиления.

8.3. Рак поджелудочной железы вызывает неполную эндокринную


дифференцировку клеток Sox9 +
Несмотря на их расхождения, вышеупомянутые исследования с импульсным погодом
[ 17 , 19 ] единодушны в отсутствии доказательств эндокринного новообразования
из клеток Sox9 + в зрелой поджелудочной железе во время нормального тканевого
гомеостаза. Однако повреждение взрослого органа может вызвать необходимые стимулы,
необходимые для индукции эндокринной дифференциации от предполагаемого
факультативного взрослого протокального предшественника [ 92]. За последнее
десятилетие исследование регенерации поджелудочной железы, начатое в девятнадцатом
веке, подверглось серьезному возрождению, что в значительной степени связано с
появлением современных молекулярных технологий и подходящих трансгенных
инструментов. Исторически сложилось так, что экспериментальный эксперимент по
индуцированию регенерации поджелудочной железы, в том числе частичной
панкреатектомии [ 149, 150 ], индуцированный церулеином панкреатит [ 3 , 151 ]
и антагонизм β-клеток - или фармакологически с использованием стрептозотоцина (STZ)
или аллоксана [ 152 ] или генетически в сочетании с дифтерийным токсином
[ 153 , 154 ]. Однако модель частичного лигирования каналов (PDL) [ 1 , 2] привлекли
наибольшее внимание в последние годы, в основном благодаря публикации
высокопрофильного исследования группой Хеймберга, демонстрирующего, что PDL
стимулирует Nogen3- зависимый β-клеточный регенез из взрослых панкреатических
протоков [ 155 ].
После лигирования канала, ведущего к «хвосту» (селезеночной части) поджелудочной
железы, панкреатит приводит к быстрому апинарному апоптозу в хвосте, а «голова»
(дуоденальная часть) поджелудочной железы остается незатронутой. Сообщалось, что
масса β-клеток в хвосте более чем на две недели после PDL, одновременно с сильной,
специфичной для хвоста регуляцией экспрессии Ngn3 [ 155 ]. Отмена этой Ngn3-
индукции через лентивирусный нокдаун значительно уменьшала индуцированное PDL
увеличение массы β-клеток, показывающее, что по меньшей мере часть этого увеличения
была Ngn3-зависимой. После PDL у мышей , экспрессирующих Ngn3 промотор
приводом LacZ, β-гал +клетки были обнаружены конкретно в лигированном хвосте,
многие из которых находятся внутри протоков. Подобно псевдо-краткосрочной
трассировке Sox9-eGFP , β-gal perdurance [ 156 ] позволило проследить клетки Ngn3 + и, в
соответствии с идентичностью эндокринного предшественника, третья часть β-gal +клеток
выражала гормоны островков через неделю после PDL , Помимо ультраструктурного
сходства с эмбриональными Ngn3 + эндокринными предшественниками, когда PDL-
индуцированные взрослые клетки Ngn3 + были привиты в Ngn3-неработанные
эмбриональные экспланты поджелудочной железы, их можно было бы индуцировать,
чтобы дифференцироваться в эндокринные клетки, включая глюкозо-реагирующие β-
клетки. В совокупности эти наблюдения вызывают активацию β-клеточного
новообразования от Ngn3 + эндокринных предшественников, индуцированных в протоках
с помощью PDL-опосредованного взрыва поджелудочной железы взрослых.
Это утверждение является одной из самых противоречивых тем в современной биологии
диабета. Несколько групп утверждают , что, в то время как PDL делаетиндуцирует
протоковую Ngn3 выражения, абсолютное β-клетки число в лигирован хвосте остается
неизменным, хотя β-клеточная масса (то есть вычисляется морфометрический , как
пропорциональная площадь инсулин-иммуно-положительная ткань поджелудочной
железа х поджелудочной железы сырого веса ) увеличилось как артефакт уменьшения на
70% общей площади поджелудочной железы, наблюдавшейся через неделю после PDL из-
за обширного ацинального апоптоза [ 19 , 32 , 157]. В то время как отек поджелудочной
железы, жировая дегенерация и фиброз, возникающие в результате панкреатита,
вызванного лигированием, вносят вклад в влажный вес, такие области ткани будут
исключены из измерений морфометрической области, искусственно раздувая расчетную
массу β-клеток в лигированной панкреате [ 19 ]. Однако в противоречии с этим и при
проверке их первоначальных результатов Хеймберг и его коллеги недавно
продемонстрировали удвоение после PDL суммарного объема β-клеток и число островков
в хвосте, причем последнее было особенно связано с увеличением малой β-клетки
кластеров [ 158 ].
Кроме того, импульсная маркировка Ngn3 + клеток в Ngn3 CreerT ; Rosa26R YFPмышей после
PDL показали этикетку YFP в воздуховоде-ассоциированных инсулина + кластеров клеток,
а также островков, что согласуется с индукцией протоковой Ngn3 + эндокринных клеток -
предшественников, β-клеток, регенерации и их вклад в существующих островками
[ 158 ]. Интерпретация трассировки линии Ngn3 + клеток, однако, смешивается с стойкой
низкоуровневой эндогенной экспрессией Ngn3 в зрелых эндокринных клетках взрослых,
включая те, которые связаны с протопланеальной панкреатой [ 19 , 159]. Таким образом,
трассировка генетических линий β-клеток из протоков поджелудочной железы после PDL
будет представлять собой самые неопровержимые доказательства для поддержки
регенерации β-клеток в этой модели повреждений. С этой целью маркировка канальцев с
импульсной цепью была проведена после PDL в нескольких трансгенных линиях, в
которых экспрессия CreER специфична для канала во взрослой поджелудочной железе,
включая CAII ( карбоангидраза II ) - Creer TM [ 160 ], Hnf1β-Creer T2 [ 31 ]
и Hes1 CreerT2 [ 32 ]. Результаты этих исследований, однако, противоречат друг другу,
поскольку только первое исследование показывает маркировку в клетках инсулина +
после лигирования [ 160]. Хотя такая β-клеточная маркировка согласуется с β-клеточным
неогенезом из протоков после PDL, возможно, это также может возникнуть из
нетекулярной экспрессии Creer, учитывая низкочастотную эндокринную и ацинальную
маркировку, наблюдаемую у контрольных животных [ 160 ]. Точно так же отсутствие
вклада меченых клеток в островки после PDL у мышей Hnf1β-
Creer T2 или Hes1 CreerT2 может отражать гетерогенность в маркировке протоковых
субпопуляций, так что редкая предполагаемая популяция взрослых предков
не выражает никакого трансгена. В отличие от Hnf1β-Creer T2 [ 31 ], CK (цитокератин)
19 CreerT [ 161 ] и Muc1 IRES-CreERT2[ 162 ], Sox9-Creer T2 называет популяцию протоков в течение
ближайшего постнатального периода, который вызывает эндокринные клетки
[ 19 ]. Таким образом, представляется правдоподобным, что эта линия, скорее всего,
нацелена на предполагаемую популяцию взрослых предшественников, чем другие
проточно выраженные CreER.
Чтобы проверить, индуцирован ли β-клеточный неогенез из клеток Sox9 + после
повреждения лигированием, Kopp et al . выполненная PDL или ложная операция на
семинедельном Sox9-Creer T2 ; Мышей Rosa26R YFP через четыре недели после того, как они
были помечены импульсом через высокодозовый режим тамоксифена, в результате чего
две трети клеток Sox9 + были помечены YFP [ 19 ]. Несмотря на 40-кратное усиление
активности Ngn3 экспрессии в лигирован хвосте, который согласуется с обнаружением
Ngn3 + гормон - клетки в Sox9 +меченные линией каналы лигированного панкреата,
маркировка была замечена практически без (менее 1 из 1000) инсулинов + клеток в
течение одной или восьми недель после PDL [ 19 ]. Соответственно, не наблюдалось
увеличения количества небольших кластеров β-клеток, связанных с протоком, через семь
дней после операции [ 19 ]. Отражая эти данные, PDL Sox9 IRES-CreerT2 ; Мышей
Rosa26R lacZ, пульсирующих высокодозной схемой тамоксифена в возрасте 4 или 8 недель,
также не удалось выявить заметную β-клеточную маркировку [ 17 ]. Независимо от
возможного отказа обоих Sox9-Creer T2 и Sox9 IRES-CreerT, чтобы
отметить скудный Sox9+Популяция предшественников, оказывается , что PDL-
индуцированной травмы не индуцирует регенерацию добросовестных бета-клеток
из Sox9 + воздуховода отсека. Действительно, учитывая репликацию этого результата в
трансгенных линиях, в которых CreER экспрессируется в других субпопуляциях протоков
[ 31 , 32 ], становится невероятным, что неогенез зрелых клеток инсулина + из протоков в
какой-либо значительной степени проявляется в модели PDL. Это, однако, не исключает
повреждения PDL, стимулирующего, по крайней мере, частичную программу
эндокринной дифференциации в поврежденных клетках взрослого организма, как это
было предложено путем активации протока Ngn3выражение post-
PDL. Предположительно, однако, связанная с протоком поджелудочная железа
поджелудочной железы не содержит жизненно важных сигналов, необходимых для
дальнейшей дифференциации эндокринных предшественников в гормон +эндокринные
клетки. Это согласуется с клетками Ngn3 + в лигированной взрослой панкреате,
способной генерировать клетки инсулина + в эмбриональных эксплантах поджелудочной
железы [ 155 ]. В зависимости от осуществимости определение молекулярных сигналов,
необходимых для терминальной дифференцировки β-клеток из протонных Ngn3 + клеток в
модели PDL, будет способствовать разработке новых методов лечения для регенерации β-
клеток in situв диабетической поджелудочной железе.
Примечательно, что подтверждение неспособности клеток Sox9 + приводить к β-клеткам
после повреждения, вызванного PDL, альтернативные модели повреждения
поджелудочной железы, включая частичную панкреатектомию, индуцированный
церулеином панкреатит или индуцированную STZ β-клеточную абляцию, все равно не
маркировали β-клетки в Sox9 IRES-CreerT2 ; Мышей Rosa26R lacZ [ 17 ]. Вместе эти наблюдения
единогласно утверждают, что клетки Sox9 + во взрослой мышиной поджелудочной железе
не служат факультативными β-клеточными предшественниками после травмы. Очевидно,
что регенерация β-клеток после их специфической абляции в конце эмбриогенеза
скомпрометирована у личинокмутантов sox9b [79 ]. Хотя этот результат якобы
подразумевал бы требование sox9b в регенерации β-клеток у рыбок данио, важно
рассмотреть проблемы, возникающие при попытке идентифицировать сопоставимые
этапы в программах поджелудочной железы мыши и данио. Таким образом, хотя
возможно, что регенерация β-клеток происходит через различные механизмы у зрелого
грызуна по сравнению споджелудочной железой данио, более правдоподобно, что β-
клеточный регенез на ранней стадии после эмбриогенеза у рыбок данио соответствует
вторичному переходу мыши. Таким образом, у рыбок данио, sox9b , по-видимому,
требуется для клеток поджелудочной железы, чтобы генерировать вторичные переходные
эндокринные клетки. Учитывая, что рыбка данио sox9bмутанты способны выживать до
совершеннолетия [ 79 , 112 ], возникает соблазн предположить, что регенерация β-клеток
после абляции также будет скомпрометирована у взрослых мутантов sox9b взрослых.

8.4 Взрослые клетки поджелудочной железы Sox9 + могут быть индуцированы для
образования инсулина + клеток ex vivo
В то время как клетки Sox9 + в интактной взрослой мышиной поджелудочной железе
могут быть стимулированы только для частичной дифференциации в отношении
эндокринной судьбы, они, по-видимому, могут быть индуцированы для образования
эндокринных клеток при культивировании ex vivo . В тех случаях, когда исследования in
vivo в импульсных исследованиях потерпели неудачу,
недавнее исследование экспрессии ex vivo гематопоэтических колоний [ 163 ] определило
предполагаемую клетку-предшественник поджелудочной железы взрослого человека,
экспрессирующую Sox9-eGFP [ 85 ], а также протонный маркер CD133 [ 164]. Составляя ~
1% от общей численности взрослых поджелудочной железы, такие так называемые
«колониеобразующие единицы поджелудочной железы» (PCFU) образуют
протокоподобные колонии в Matrigel-содержащих полутвердых культуральных средах,
которые способны> 100 000-кратное расширение после лечения Wnt агонист R-спондин 1
[ 163 ]. Более того, при переносе на полутвердую среду на основе ламинина, не
содержащую Matrigel, некоторые клетки вызывают эндокринные / ацинарные колонии,
содержащие глюкозочувствительные β-клеточноподобные клетки [ 163 ]. Этот результат,
по-видимому, подтверждает мнение о том, что зрелые клетки поджелудочной
железы Sox9 + могутиндуцировать образование β-ячеек при наличии необходимой
сигнальной среды. Это также особенно бросается в глаза, когда считается, что один и тот
же BAC-клон использовался для генерации мышей Sox9-eGFP и Sox9-
Creer T2[ 19 , 85 ]. Таким образом, та же самая популяция поджелудочной
железы Sox9 +должна теоретически быть нацелена на исследования с использованием
мыши, независимо от эффектов, связанных с сайтом. Учитывая относительно молодой
возраст (2-4 месяца) мышей, из которых выделены такие PCFU, только через несколько
недель после того, как клетки Sox9 + остаются протоком / эндокринно-бипотентными [ 19],
будет интересно исследовать, могут ли быть выделены одинаковые мультипотентные
PCFU из более зрелых животных. Кроме того, интересно спрогнозировать, вызывает ли
сам процесс диссоциации регенеративный стимул, провоцирующий факультативный
ответ предшественника на повреждение. Так как популяция Sox9-
eGFP + CD133 + составляет от 2 до 6% от общего количества клеток поджелудочной
железы, тогда как только ~ 1% таких клеток обладают колониеобразующей способностью,
дальнейшие усилия следует потратить на характеристики популяции протоков взрослого
человека, чтобы получить представление об этом гетерогенность. Несомненно,
это исследование ex vivo удвоит текущие усилия, направленные на выявление взрослых
клеток поджелудочной железы поджелудочной железы, соответствующих PCFU in situ .

8.5. Sox9 + клетки в печени взрослых компетентны инициировать программу


поджелудочной железы
Интересно, что в то время как в естественных условиях , Sox9 + протоки клеток в зрелой
взрослой поджелудочной железе , по- видимому , не может быть уговорили что приводят
к инсулину + клеткам, те , в банке печени. В недавнем исследовании, проведенном Slack и
коллегами, индуцированным STZ диабетом у мышей NOD-SCID, было спасено
аденовирусное введение коктейля с транскрипционным фактором, включающим Pdx1,
Ngn3, и фактор созревания β-клеток MafA [ 165 , 166]. Это было связано с 25-кратным
увеличением содержания печеночного инсулина, согласующимся с наличием
глюкозочувствительных инсулин-иммуноположительных
CK19 + внематочных каналоподобных структур в печени инфицированных мышей. Хотя
инсулин +, такие клетки кажутся полигормональными, дополнительно экспрессирующими
глюкагон и соматостатин, что согласуется с выражением пан-эндокринных маркеров Isl1
и Rfx6 [ 165 , 167 , 168 ]. Используя Sox9-Creer T2 -опосредованную трассировку линии,
такие клетки инсулина +, как было продемонстрировано, возникли из Sox9 + печеночных
клеток, предложенных авторами, чтобы составить:
1. Маленькие желчные протоки,
2. Предполагаемые гепатобласт-предшественники находятся в прилегающей
перипортальной зоне или
3. Перибилитальные железы, связанные с более крупными желчными протоками.
Поддерживая вторую гипотезу, группа Чан убедительно показала, что вспомогательная
аденовирусная доставка Ngn3 и фактор роста бетацеллюлина у обработанных STZ
диабетических мышей индуцировала появление перипортальных «неоостров»,
включающих четыре основных типа эндокринных клеток, включая функциональный
инсулин -иммуноположительные β-клеточные клетки, способные восстанавливать
эугликемию у инфицированных мышей [ 169 ].
Несколько нитей доказательств, включая маркерную экспрессию, местоположение,
морфологию и трассировку линии, подтвердили, что клетка происхождения представляет
собой печеночные овальные клетки, бипотентные печеночные предшественники,
способные вызвать гепатоциты или желчные клетки [ 170 ]. Таким образом, вполне
вероятно, что в обоих исследованиях инсулин + клетки во взрослой печенке возникают из
той же популяции предшественников, в которой экспрессия Sox9 дает эндокринную
компетентность. Поддерживая это утверждение, как у здоровых взрослых мышей, так и у
здоровых взрослых мышей, вызывающих овальную клеточную травму (лечение
химическим DCC), Sox9 обозначает популяцию предшественников
клональной пестициды, проживающих в желчных протоках, способных к in vitro билинезу
(гепатоцитарный и желчный протоки клеточной) колонии [ 171]. Этот
дифференцирующий потенциал клеток Sox9 + в печени взрослого человека сохраняется in
vivo : генетическая маркировка импульсных цепей с использованием либо Sox9 IRES-
CreERT2
[ 17 ], либо Sox9-Creer T2 [ 171 ] показывает, что клетки Sox9 + способствуют как
гепатоцитарному, так и желчному протоку отделений в неповрежденной взрослой печени
во время нормального тканевого гомеостаза. Печеночная травма путем лечения либо ДКК
[ 171 ], либо диета с добавлением метионина и холина с дефицитом / этионином [ 17] для
индукции ответа овальной клетки резко увеличивала вклад в обе линии
от Sox9 +предшественников, а также острую острую интоксикацию печени посредством
введения четыреххлористого углерода или лигирование желчных протоков [ 17 ].
Таким образом, эти исследования показывают, что Sox9 обозначает бипотенциальный
взрослый печеночный предшественник, который вызывает как гепатоциты, так и клетки
желчных протоков даже в отсутствие регенеративного стимула. Поэтому, хотя протокс-
клетки Sox9 + во взрослой поджелудочной железе, по-видимому, не служат очевидной
роли предшественника, по крайней мере во время нормального гомеостаза органов, они,
очевидно, делают это в зрелой печени. Способность перепрограммировать взрослых
печеночных Sox9 + -преобразователей в клетки инсулина + при наличии соответствующих
сигналов указывает на то, что транскрипционные программы по меньшей мере частично
сохраняются между Sox9 +предшественников в печени взрослых и в эмбриональной
поджелудочной железе. В дополнение к этому, будет интересно проверить, является ли их
экспрессия Sox9предоставлением печеночных предшественников компетенции
генерировать клетки инсулина + . Это может быть проверено путем проверки того, могут
ли аденовирусы, упомянутые выше, все же индуцировать экспрессию печеночного
инсулина после условной абляции в печени Sox9 .

8.6 Sox9 является ключевым игроком в инициировании аденокарциномы протоков


поджелудочной железы
В свете многих опухолей, происходящих из стволовых клеток взрослых органов [ 172 ],
было почти неизбежно, что потенциальная роль Sox9 в патогенезе рака поджелудочной
железы будет рассмотрена. Недавние исследования показали, что Sox9 действительно
играет решающую роль в инициировании аденокарциномы протоков поджелудочной
железы (PDAC). В США PDAC является четвертой ведущей причиной смертности от
рака, при этом пятилетняя выживаемость составляет менее 5%, что в значительной
степени обусловлено передовым и / или метастатическим состоянием неопластических
поражений во время диагноз [ 173 , 174]]. Разработка как ранних анализов, так и новых
методов лечения потребует понимания механизмов, лежащих в основе инициации
PDAC. PDAC - злокачественное новообразование, которое возникает из нормальной ткани
поджелудочной железы посредством серии гистологически четко определенных
преинвазивных протоковых поражений (называемых поджелудочной интраэпителиальной
неоплазией или PanINs) для инвазивной карциномы [ 175 , 176]. PDAC широко
рассматривается как «генетическое заболевание» с генетическими мутациями,
накапливающимися при поражениях во время прогрессирования PDAC, причем первая из
них активирует мутации KRAS [ 177 , 178 ]. Семенные исследования в области рака
поджелудочной железы биологии показали , что экспрессию конститутивного
активных Крас G12Dу мышей вызывает ККПР несколько месяцев после того, как Панин
индукции [ 179 ], примерно в то время , когда Cinar-to - д uctal м etaplasia (ADM) имеет
место [ 180 , 181 ]. Несмотря на то, что прогрессирование PDAC было гистологически
хорошо охарактеризовано, клеточное происхождение PDAC остается недоказанным:
гистология опухолей часто может быть обманчивой с точки зрения определения
происхождения опухоли. В то время как центроацинарные клетки широко участвовали в
нескольких исследованиях [ 182 , 183 ], отсутствие трансгенных линий, экспрессирующих
CreER исключительно в центроацинарных и протонных клетках, до недавнего времени
препятствовало тестированию этой гипотезы. Активация онкогенных красныхв клетках
крупных протоков показали низкую склонность к Паниным индукциям от протоковых
клеток [ 184 , 185 ], в то время как его активация в ацинарных клетках была показана
, чтобы превратить их в воздуховодах-подобные клетки и PanINs [ 180 , 186 - 189 ],
подразумевая ADM как предполагаемую причину образования PanIN.
В попытке вскрыть механизмы , индуцирующие Панины и образование ККПРА, Коппы и
его коллеги показали , что активация онкогенного Kras G12D в ацинарных клетках
с использованием Ptf1a CreERTM линии легко индуцирует PanINs в то время как Sox9-
Creer T2 управляемого общества Крас G12D активация в протоковых / centroacinar клеток
делает нет ( рис рис.33 D ) [ 22 , 89 ]. В соответствии с этим, острым церулеином-
индуцированного панкреатит, как было показано ранее обострить Красы G12D -
опосредованного Панина и ККПР образования [ 180 , 188 ,190 , 191 ],
потенцируют Красы G12D -опосредованного образования Панина из ацинарных, но не
протоковая клетки [ 22 ]. Таким образом, метаплазия ацинара в протоковые клетки,
связанные с индукцией PanIN, служила красной селедкой, препятствуя идентификации
ацинарной клетки как истинной клетки происхождения рака поджелудочной
железы. Kopp et al . продолжал , чтобы показать , что аберрантная индукция экспрессии
Sox9 в Красах G12D -expressing ацинарные клеток предшествует ADM и Панину инициацию
[ 22 ]. Другое недавнее исследование предполагает, что это событие сохраняется в
этиологии человека PDAC: Sox9 и второй протоковый фактор поджелудочной железы,
Onecut1 [ 59 , 60], эктопически экспрессируются в метапластических ацинарных клетках в
непосредственной близости от поражений PDAC в срезах резецированной поджелудочной
железы человека [ 192 ]. Если эта индукция Sox9 предотвращается у мышей с помощью
одновременной ацинарноспецифической экспрессии Kras G12D и делеции Sox9 , формирование PanIN
блокируется, что указывает на индукцию Sox9 в крас-активных ацинарных клетках, что
необходимо для инициации PanIN [ 22 ]. В подтверждение этого результата Prévot et
al . показали, что ADM, индуцированный PDL-опосредованным панкреатитом,
притупляется ацинарной специфической делецией Sox9 , показывая, что Sox9 требуется в
ацинарных клетках для их метаплазии [ 192 ]. Обратное также верно в том, что
вынужденное выражениеSox9 в Красах G12D -expressing ацинарных клеток ускоряет как
ADM и формирование Панина [ 22 ] ( рис рис.33 D ). Экспрессия маркеров протоков
в Sox9- экспрессирующих ацинарных клетках в отсутствие онкогенного красного
предполагает, что это связано с «дестабилизацией» ацинальной идентичности,
увеличивающей потенциал ADM с учетом соответствующих воспалительных сигналов
[ 22 , 192 ]. В соответствии с этим вынужденная экспрессия аксинара Sox9 , отражающая
онкогенный крас, способствует ADM после вызванного церулеином панкреатита [ 22 ].
Наконец, Коппы и его коллеги показали , что, в то время как ацинарные
конкретные Sox9 абляция способна блокировать Kras G12D опосредованной ADM и
инициирование Панина, недостаточно , чтобы предотвратить ADM следующих церулеин-
индуцированный панкреатит [ 22 ], который предположил , что Sox9 является
необязательным для ADM в этой модели повреждения поджелудочной железы. В то время
как это имеет место, экспрессия Sox9 является обязательной для дальнейшего
прогрессирования ADM в PanINs, так как мыши, обработанные с помощью селеулина,
подвергнутые ацинарной специфической экспрессии Kras G12Dи делеции Sox9, практически не
развивают PanINs [ 22 ]. Вместе эти исследования показывают, что Sox9крайне важно для
превращения ацинарных клеток в PanINs, передавая им характеристики протоков
[ 22 , 192 ], что согласуется с вышеупомянутой ролью Sox9 в регуляции специфичных для
канала генов [ 20 , 79 ]. Коппы и его коллеги показали , что, в то время как зрелые
ацинарные клетки легко Панин-компетентный
следующие Крас G12D индуцированного Sox9 активации, Sox9 -expressing протокового и
centroacinar клетки остаются весьма резистентны к Паниной инициации [ 22 ]
( рис рис.33 D ). Относительно низкая эффективность Sox9-Creer T2(в ~
12% клеток Sox9 + ), однако, не исключает существования дефицита
(либо Sox9 +, либо Sox9 -) PanIN-инициирующие клетки в протокальном дереве, которые не
были рекомбинированы в этом анализе. Несмотря на это предостережение, в то время как
гистология опухолей уже давно связана с протокальными / центроацинарными клетками в
качестве инициатора PDAC, они парадоксальным образом представляют собой
единственную линию поджелудочной железы, которая до сих пор изучалась, которая не
может легко претерпеть неопластическую трансформацию. В соответствии с этими
патофизиологическими выводами мыши, переводящими на этиологию PDAC человека,
они предполагают, что: 1) Sox9 (и Onecut1) представляют собой новые биомаркеры ADM
и 2) профилактические терапевтические стратегии для PDAC должны быть направлены на
предотвращение инициирования PanIN из ацинарного отделения путем предотвращения
ацинара Sox9индукция. Таким образом, подобрав интимные отношения между сигналами
Sox9 и Notch в поджелудочной железе, Sox9 теперь присоединяется к пути Notch в
качестве терапевтической цели в профилактике рака поджелудочной железы.
Идти к:

9. Краткие и будущие перспективы


Впоследствии, как и для поддержания предшественников в развивающемся нервном
гребне [ 13 ], кишечный эпителий [ 96 ], волчанка / фолликул [ 97 , 193 ] и поджелудочная
железа [ 16 ], Sox9, как было показано, поддерживают нервные стволовые клетки из ЦНС
[ 194 ] и стволовых клеток молочной железы [ 195 ] и маркировать предшественников
развивающегося легкого [ 196 , 197 ] и сетчатки [ 198 ] и взрослой печени [ 17 , 171 ] и
кишечника [ 17]. Несомненно, этот список специфических для органа стволовых клеток /
клеток-предшественников, обозначенных и / или поддерживаемых Sox9, будет добавлен к
будущим исследованиям. Хотя этот маркер предшественника и функция обслуживания,
по-видимому, определили его роль в программе поджелудочной железы, многочисленные
незаменимые задачи, выполняемые Sox9 в развивающейся и взрослой поджелудочной
железе, изложенные здесь, показывают, что Sox9 является гораздо более
многофункциональным, чем обычно воспринимается. В общем, во время морфогенеза и
постнатального обслуживания поджелудочной железы:
1. Sox9 маркирует и поддерживает мультипотентные предшественники
поджелудочной железы , способствуя их выживанию и распространению, а также
сохранению их недифференцированного статуса. Sox9 + клетки сохраняют свою
мультипотентность на протяжении всей беременности, включая вторичный переход, но
постепенно «запираются» на проточную судьбу, когда приближаются к
рождению. Поддержка пула MPC, вероятно, будет достигнута частично за счет модуляции
сигнализации Hes1 / Notch. Кроме того, поддерживая экспрессию MPC Fgfr2b и
восприимчивость к митогенному мезенхимальному Fgf10, Sox9 участвует в петле Fgf10 /
Fgfr2b / Sox9 с подачей вперед для поддержания пролиферации MPC и приверженности
поджелудочной железы. Следовательно, поджелудочная специфическая абляция Sox9
вызывает гипоплазию поджелудочной железы и переключатель судьбы поджелудочной
железы.
2. Sox9 обозначает вторичные переходные проточно-эндокринные бипотентные
предшественники поджелудочной железы и абсолютно необходимы для их
эндокринной дифференциации. Как и Hes1, Sox9 является мишенью Notch в
бипотентных предшественниках, которые закладывают основы предполагаемого
протокового дерева. Хотя про-эндокринная Ngn3 ингибируется Hes1, она непосредственно
активируется Sox9. Вследствие того, что Sox9 является более чувствительным, чем Hes1, к
повышенной активности Notch: 1) бипотентные предшественники с высокой активностью
Notch экспрессируют как Hes1, так и Sox9 и остаются недифференцированными, в то
время как 2) с промежуточной активностью Notch индуцируют только Sox9. Из-за
положительного авторегуляторного цикла обратной связи, после того, как начато
выражение Ngn3, Ngn3 Hiгосударство быстро достигается, обеспечивая эндокринную
приверженность. Затем для эндокринной дифференциации требуется клеточная
автономная репрессия Sox9 Ngn3. Sox9 + бипотентные предшественники, которые не
могут инициировать эндокринную программу, вместо этого принимают альтернативную
проточную судьбу. В соответствии с Sox9, являющимся обязательным
эффектором индукции Ngn3 и эндокринной приверженности, морфогенез эндокринного
отделения более восприимчив к дозе Sox9, чем к экзокринной ткани, так что Sox9-
гаплоинтенсивность проявляется в остеоспецифической гипоплазии, феноксипируя
дефекты островков, наблюдаемые у человека Компакт-дисков.
3. Sox9 непосредственно требуется для дифференциации и поддержания протоков
поджелудочной железы и их ресничек , частично путем поддержания экспрессии
протоковых генов, включая Spp1 и Pkd2 , который поддерживает первичные
реснички. Соответственно, абляция Sox9 либо до вторичного перехода, либо во взрослой
жизни приводит к дисгенезированию протоков и кистам, а также к потере первичных
ресничек.
4. Sox9 отмечает проток и центроацинарные клетки в постнатальной поджелудочной
железе, которые сохраняют некоторый неогенный потенциал. In
vivo отделение Sox9 + поджелудочной железы способно генерировать небольшое
количество эндокринных клеток в немедленном неонатальном периоде, но не
дальше. Однако, учитывая требуемые условия культивирования,
изолированные протоковые клетки Sox9 + взрослые могут расширяться и вызывать
развитие ацинарных и эндокринных клеток, включая β-клеточноподобные клетки ex
vivo . Хотя панкреатическая травма, такая как PDL, якобы способна инициировать
эндокринную программу (как указано индукцией Ngn3) у взрослых поджелудочной
железы Sox9 +клеток, эндокринная дифференциация является неполной, по-видимому, из-
за отсутствия необходимых сигналов. Снижение дозы Sox9 во взрослой поджелудочной
железе, по-видимому, вызывает их ацинарную (но не эндокринную) дифференциацию,
выявляя пластичность зрелых клеток Sox9 + / центроацинарных клеток.
5. Эктопическая активация экспрессии Sox9 в ацинарных клетках является
неотъемлемой частью их метаплазии к клеткам протоков и последующей
прогрессией PanIN / PDAC, открывая Sox9 в качестве ключевого игрока в начале
рака поджелудочной железы.
Эти расходящиеся роли явно зависят от взаимодействия Sox9 с различными факторами
транскрипции и сигнальными путями, прежде всего Fgf и Notch. Весьма вероятно, что эта
среда взаимодействующих партнеров является пространственно-динамически
динамической в процессе панкреатического органогенеза, изменяясь как с точки зрения
развития, так и сотового контекста. Предполагается, что характеристика Sox9-
взаимодействия во всем органогенезе поджелудочной железы и как в здоровой, так и
поврежденной поджелудочной железе обеспечит глубокое понимание механизмов,
посредством которых Sox9 регулирует панкреогенез и гомеостаз взрослого
поджелудочной железы. Для этого потребуется ChIP-Seq различных Sox9 +популяции
поджелудочной железы для идентификации поджелудочной железы Sox9 в масштабе
всего генома. Такие анализы, конечно, зависят от будущего развития необходимых
реагентов класса ХИП. Препарирование Sox9- опосредованного управления программой
поджелудочной железы, несомненно, обеспечит беспрецедентное понимание механизмов
транскрипции, регулирующих дифференцировку эндодермы поджелудочной железы в β-
клетки. Такие знания будут очень полезны для оптимизации текущих протоколов для
дифференциации клеток hESC / iPS в функционально зрелый инсулин +клетки. Выяснение
изменяющегося поджелудочного Sox9-взаимодействия в свою очередь, вероятно,
приведет к идентификации дальнейших ролей Sox9 в поджелудочной железе, обеспечив
его положение в качестве многозадачного мастер-регулятора панкреатической программы
во время развития поджелудочной железы и за ее пределами.
Раскрытие информации : автор не сообщает о конфликте интересов.
Идти к:

Подтверждения
Я хотел бы поблагодарить доктора. Mette C. Jørgensen и Palle Serup за их конструктивные
комментарии к рукописи. Я также обязан благодарностью Palle Serup за предоставленную
мне широту, чтобы подготовить эту работу. Извинения заранее предлагаются коллегам,
чья работа не может быть приведена здесь из-за редакционных ограничений.
Идти к:

Рекомендации
1. Goss RJ. Физиология роста. Академическая пресса; 1978. главы 13 и 19.
2. Хьюз Х. Экспериментальное исследование регенерации в островках Лангерганса со
ссылкой на теорию баланса. Acta Anat (Базель) 1956; 27 (1-2): 1-61. [ PubMed ]
3. Адлер G, Hupp T, Kern HF. Курс и спонтанная регрессия острого панкреатита у
крысы. Virchows Arch A Pathol Anat Histol. 1979; 382 (1): 31-47. [ PubMed ]
4. Органогенез Эдлунда H. Панкреатический - механизмы развития и последствия для
терапии. Nat Rev Genet. 2002; 3 (7): 524-532. [ PubMed ]
5. Gubbay J, Collignon J, Koopman P, Capel B, Economou A, Munsterberg A, Vivian N,
Goodfellow P, Lovell-Badge R. Отображение генов в определяющую пол секцию мышиную
Y-хромосому является членом новое семейство эмбрионально выраженных
генов. Природа. 1990; 346 (6281): 245-250. [ PubMed ]
6. Синклер А.Х., Берта П., Палмер М.С., Хокинс Р.Р., Гриффитс Б.Л., Смит М.Ю., Фостер
Дж. В., Фришауф А.М., Ловелл-Бадж Р., Гудфеллоу П.Н. Ген из определяющей человека
области кодирует белок с гомологией консервативному ДНК-связывающему
мотиву. Природа. 1990; 346 (6281): 240-244. [ PubMed ]
7. Soullier S, Jay P, Poulat F, Vanacker JM, Berta P, Laudet V. Схема диверсификации членов
семьи HMG и SOX во время эволюции. J Mol Evol. 1999; 48 (5): 517-527. [ PubMed ]
8. Schepers GE, Teasdale RD, Koopman P. Двадцать пар sox: степень, гомология и
номенклатура семейств генов транскрипционного фактора мыши и человека. Dev
Cell. 2002; 3 (2): 167-170. [ PubMed ]
9. Sarkar A, Hochedlinger K. Семейство транкриптов sox: универсальные регуляторы
судьбы стеблей и предшественников. Cell Stem Cell. 2013; 12 (1): 15-30. [ Бесплатная
статья PMC ] [ PubMed ]
10. Wegner M. All purpose Sox: Многочисленные роли белков Sox в экспрессии генов. Int J
Biochem Cell Biol. 2010; 42 (3): 381-390. [ PubMed ]
11. Bylund M, Andersson E, Novitch BG, Muhr J. Нейрогенез позвоночных
противодействует активности Sox1-3. Nat Neurosci. 2003; 6 (11): 1162-1168. [ PubMed ]
12. Грэм В., Худяков Дж., Эллис П., Певны Л. SOX2 функционируют для поддержания
идентичности нейронных предшественников. Neuron. 2003; 39 (5): 749-765. [ PubMed ]
13. Cheung M, Briscoe J. Развитие нервного гребня регулируется транскрипционным
фактором Sox9. Развитие. 2003; 130 (23): 5681-5693. [ PubMed ]
14. Kim J, Lo L, Dormand E, Anderson DJ. SOX10 поддерживает мультипотентность и
ингибирует нейронную дифференциацию стволовых клеток нервного
гребня. Neuron. 2003; 38 (1): 17-31. [ PubMed ]
15. Piper K, Ball SG, Keeling JW, Mansoor S, Wilson DI, Hanley NA. Новая экспрессия
SOX9 при развитии поджелудочной железы человека коррелирует с аномалиями при
дисплазии кампомеликов. Мех Дев. 2002; 116 (1-2): 223-226. [ PubMed ]
16. Seymour PA, Freude KK, Tran MN, Mayes EE, Jensen J, Kist R, Scherer G, Sander M.
SOX9 требуется для поддержания пула клеток поджелудочной железы поджелудочной
железы. Proc Natl Acad Sci US A. 2007; 104 (6): 1865-1870. [ Бесплатная статья
PMC ] [ PubMed ]
17. Furuyama K, Kawaguchi Y, Akiyama H, Horiguchi M, Kodama S, Kuhara T, Hosokawa S,
Elbahrawy A, Soeda T, Koizumi M. et al. Непрерывная поставка клеток из Sox9-
экспрессирующей зоны-предшественника во взрослой печени, экзокринной
поджелудочной железе и кишечнике. Nat Genet. 2011; 43 (1): 34-41. [ PubMed ]
18. Akiyama H, Kim JE, Nakashima K, Balmes G, Iwai N, Deng JM, Zhang Z, Martin JF,
Behringer RR, Nakamura T, de Crombrugghe B. Остеохондропрогениторные клетки
получены из экспрессирующих предшественников Sox9.