Desarrollo de metodología analítica para la determinación

de plaguicidas organofosforados y organoclorados en

muestras biológicas humanas

La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes

de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil. En cromatografía
líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija.

La fase móvil puede ser un solvente puro o una mezcla de solventes. Cuando se trata de una
mezcla, puede programarse la bomba para que tome solventes de diferentes botellas en una
proporción determinada y realice la mezcla en una cámara de mezclado.
Dependiendo de la forma en que se usa el solvente tenemos dos métodos:

Método Isocrático: Cuando, durante toda la separación, se utiliza siempre el mismo solvente, se
denomina isocrática, sin embargo es normal realizar un gradiente de composición del solvente a lo
largo de la cromatografía para mejorar la eficiencia y acortar la duración del proceso. Estos
gradientes de solvente también son realizados en forma automática por las bombas.

Método de Gradiente de Elución: Es un término que se utiliza para describir el proceso mendiante
el cual se cambia la composición de la fase móvil. Pueden efectuarse de dos maneras:

A baja presión

A alta presión

Cuando se desarrolla un análisis usando el método de gradiente se debe tener presente dos
objetivos:

Obtener la mejor resolución de los componentes de la muestra en el menor tiempo posible.

Asegurar alta precisión y exactitud.

Para obtener buenos resultados con el método de gradiente debemos seguir cinco pasos
fundamentales:

Determinar la composición inicial y final del solvente.

Ajustar el tiempo del gradiente.

Determinar la forma del gradiente (lineal, cóncava o convexa).

Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolución.

Regresar a las condiciones iniciales la columna.

La bomba envía el solvente a través de caños de diámetro pequeño, generalmente de acero

inoxidable, hacia la válvula inyectora. Esta consiste en una válvula de varias vías que permite
introducir en el flujo de solvente, la muestra contenida en un aro o loop de volumen calibrado.

Luego de que se produzca la separación en la columna, los componentes de la mezcla pasan por el
detector. Este produce una señal eléctrica proporcional a la cantidad de materia y esa señal es
enviada al registrador que realiza un gráfico de intensidad en función del tiempo (cromatograma).
Idealmente, se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a un componente de la muestra
original. El integrador calcula además el àrea correspondiente a cada pico, la cual es proporcional a
la cantidad de sustancia.

Dado que los detectores de HPLC son no destructivos, es posible recuperar los productos que salen
de él. De esta manera, dependiendo del tamaño del loop de inyección, de la columna, y del tipo de
bomba, es posible realizar además de separaciones analíticas, cromatografías preparativas.

Criterios para la elección del solvente:

Disponible comercialmente

Precio

Pureza y Estabilidad. En la actualidad contamos con productos de calidad de pureza

cromatográfica. Bajo contenido de impurezas.

Disolver la muestra

Misible con otros solventes para formar mezclas útiles

No degradar o disolver la fase estacionaria

Tener baja viscosidad para reducir las caídas de presión

Ser compatible con el detector utilizado. Transparencia óptica (cuando se usan detectores UV)

Filtración y Desgasificación de solventes

El sistema de datos
cromatográficos AZUR
El sistema de datos cromatográficos AZUR ha sido diseñado para satisfacer
los requerimientos de los laboratorios de cromatografía; provee al usuario
de un interfaz gráfico común, útil para cualquier instrumento sin importar el
fabricante.

AZUR es un novedoso sistema de datos cromatográficos de la más moderna

tecnología de software, muy fácil de utilizar y a un precio alcanzable. Puede
adquirir y procesar cromatogramas sin importar la marca del instrumento.
Incluye un juego de herramientas, AzurBar, que lo hacen utilizable en
cualquier cromatógrafo; todas las tareas son accesibles con un solo click, o
mediante el ayudante AZURWizard que lo guía paso a paso para lograr una
fácil configuración de todo el sistema.

Dos interfases de 24 bits de alta calidad (tarjeta PCI interna o interfaz USB
externa) permiten al laboratorista la adquisición de hasta 6 canales de
cualquier LC, GC, SFC o aún IC. Dentro de las amplias capacidades de
proceso de cromatogramas están: integración gráfica, calibración
multinivel, e importación y exportación de archivos.

PROTEC DR, S.A. – MEXICO ofrece software de cromatografía para facilitar

la interpretación los resultados.

Tipo Fase estacionaria Fase movil

Líquido-sólido sólido inerte como gel de sílice o alúmina disolventes

Intercambio iónico resina cambiadora soluciones acuosas

Líquido-líquido líquido adsorbido en un soporte sólido líquido

Gas-líquido película de líquido adsorbida sobre un soporte sólido gas

El sistema OSIRIS
Asistente interactivo para HPLC Osiris es una novedosa herramienta para la
transferencia y validación de métodos HPLC. Permite crear nuevos métodos
robustos (tanto en modo isocrático como de gradiente) a partir de pocos
análisis preliminares y optimiza las condiciones de la elusión. La función
Wizard guía paso a paso durante el proceso. El analista puede modificar las
condiciones de funcionamiento y definir sus propios criterios de
optimización.

Si desea más información del Software AZUR para interpretación de datos

cromatográficos haga clic aquí

Si desea más información del Software OSIRIS para interpretación de datos

cromatográficos haga clic aquí

Si desea saber más de PROTEC DR, sus equipos y servicios haga clic aquí