Uso de la inseminación artificial (IA) como método para la obtención de animales transgénicos

por SMGT

usar el SMGT con la IA supone grandes ventajas, ya que se reduce a la mínima expresión el coste
y la complejidad técnica para la obtención de animales transgénicos.

Se ha utilizado en porcinos, bovinos, conejo, cabras, ratas. El rendimiento es diverso entre

autores y especies, varía de un 0% hasta cerca de un 80% (lechones).

Inseminaciones convencionales

Tecnica individual importante para la mejora genética de animales de producción, control de

enfermedades de transmisión sexual, mejora del rendimiento del macho, uso de semen
congelado. Éxito en Inseminacion artificial porcina para ( hDAF) factor importante en la primera
barrera de rechazo en modelos de transplantes de cerdo a primate. Se generaron alrededor de
100 cerdos transgénicos para investigaciones de xenotransplantes.

Inseminaciones quirúrgicas

Inseminacion intrauterina. Resulta ser estresante para la cerda, puede provocar adhesiones
post-operatorias en el genital de la cerda que complican la posterior recolección de embriones.
S e deposita el semen cerca del lugar de fecundación.

Obtención de animales transgénicos por SMGT mediante transferencia de embriones

En el cerdo, desde hace varias décadas se ha estado realizando la transferencia de embriones

por vía quirúrgica. Sin embargo, en el campo relacionado con las aplicaciones comerciales sólo
se ha utilizado de manera limitada debido a la necesidad de equipamiento, instalaciones
adecuadas y anestesia

Hasta el momento, se han utilizado 3 tipos de técnicas: 1) la transferencia quirúrgica clásica

mediante laparotomía e introducción de los embriones en el oviducto o en el extremo del cuerno
uterino dependiendo del estado de desarrollo, con porcentajes de gestación entre el 17 y el
100% y tamaños de camada entre 2.4 y 10.8 lechones (Cameron et al. 1990); 2) la técnica de
laparoscopía, con porcentajes de éxito del 14 al 90% y tamaños de camada de 7 a 9 lechones
(Besenfelder et al. 1998), y 3) los procedimientos no quirúrgicos, basados en el abordaje
transcervical y la introducción de los embriones en el útero a través de sondas especiales, que
tienen la ventaja de no precisar sedación en los animales, no ser invasivos y ser repetibles
indefinidamente en el mismo animal

La edad del embrión es un dato muy importante a la hora de realizar las transferencias;
dependiendo del estadío en que se encuentre se dispondrán en oviducto o útero receptor en las
mismas condiciones que las que tendrá el útero de la hembra donante. Los mayores éxitos se
han conseguido con la transferencia de embriones de 2-4 células en el oviducto o de blastocistos
en el cuerno uterino

Otros factores a tener en cuenta son las condiciones higiénicas. El uso de antibióticos y material
estéril para prevenir contaminaciones aporta mayor probabilidad de éxito al procedimiento

edad de las hembras, normalmente se utilizan hembras primíparas porque son más fáciles de
manejar y toleran mejor la anestesia y los procedimientos quirúrgicos que las cerdas adultas.
3 lechones vivos, incluido uno transgénico que mostró una fuerte fluorescencia verde en los
globos oculares, mucosas orales y tejidos subcutáneos. Expresión de GFP

Ventajas en el uso de SMGT

La SMGT ha demostrado ser de gran aplicabilidad en numerosas especies animales incluyendo

mamíferos, aves, peces e insectos. Es notorio que el éxito es mayor en las especies acuáticas,
pudiendo convertirse en un futuro no muy lejano la técnica de elección de transgénesis en este
tipo de especies. La transgénesis mediante SMGT es una técnica de muy bajo coste, sobre todo,
al combinarla con técnicas como la inseminación artificial (IA) o en medios naturales en el caso
de especies acuáticas.

1) La frecuencia de producción de animales transgénicos mediante SMGT se encuentra

alrededor de 50-60%, contrastando con la eficiencia de 0.5-4% usando la microinyección
(Niemann & Kues 2000). 2) Los espermatozoides incubados con ADN pueden ser usados
para inseminaciones artificiales que se practican comúnmente en las granjas, mientras
que la microinyección requiere de un equipamiento costoso (superovulación,
recolección e inyección de cigotos) con el posterior sacrificio de las donadoras y de los
embriones porcinos. 3) Se puede reducir notablemente el coste de un animal
transgénico obtenido por microinyección (25.000$), mientras que usando SMGT los
costes serían de unos 1000$ (Wall 1996). 4) La microinyección en porcino da lugar a 2-3
descendientes mientras que la SMGT entre 6-14.

Controversias

podría producirse el mayor caos evolutivo si resulta que las células espermáticas son capaces de
actuar como vectores de secuencias genéticas exógenas. Los tractos reproductivos contienen
moléculas de ADN “libres” (procedentes de la muerte celular natural), y es razonable esperar
que las células espermáticas sean altamente resistentes a la hora de capturar determinadas
moléculas.

Recientes avances en SMGT

Un interesante y reciente desarrollo en la SMGT ha sido la introducción de transgenes dentro

de células indiferenciadas del testículo in vivo (TMGT). Esta técnica combina las ventajas de crear
“espermatozoides transgénicos” e investigar la función de los genes que intervienen en la
espermatogénesis.
La inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) se presenta como una técnica que
permitiría incrementar la eficiencia de la SMGT mediante la inyección de espermatozoides
unidos con ADN. Mediante este método de fecundación in vitro se soluciona el problema
asociado a la muerte espermática, que resulta de los diferentes tratamientos espermáticos que
ayudan al ADN exógeno a cruzar la barrera natural del espermatozoide.

Shen et al. (2006) producen de una forma simple y eficiente ratones y conejos transgénicos
usando dimetil-sulfóxido (DMSO) como medio para transferir células espermáticas con ADN
lineal y circular, mediante la inyección directa en el testículo del animal