Universidad Rafaél Landivar José Fernando Moreno Camey

Facultad de Ingeniería Carné: 1198814

Microbiología Fecha: 25/08/2018
Licda. Sandra Patricia Lima Sábado de 07:30am-09:00am

Práctica No.1 Microscopio y microscopía

Índice
Abstract ................................................................................................................... 2
Objetivo ................................................................................................................... 2
Marco Teórico ......................................................................................................... 3
Microscopio .......................................................................................................... 3
Microscopio óptico ............................................................................................... 3
Microscopio electrónico ........................................................................................ 4
La célula............................................................................................................... 4
Metodología............................................................................................................. 5
Diagrama de flujo: Utilización del microscopio óptico .......................................... 6
............................................................................................................................. 6
Resultados .............................................................................................................. 7
Discusión de Resultados ......................................................................................... 8
Conclusiones ......................................................................................................... 10
Bibliografía ............................................................................................................ 10

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 Abstract
El sábado 25 de agosto se llevó a cabo la práctica número uno del laboratorio de
microbiología de la Universidad Rafael Landívar titulada “Microscopía” el cual tuvo
como objetivo primordial el determinar las partes del microscopio óptico, su
funcionamiento, y aprender a enfocar por medio de la observación de células
epiteliales presente en la boca humana en preparación húmeda usando azul de
metileno y células vegetales de una cebolla morada en preparación húmeda usando
lugol.

Por lo que primero se explicaron las partes del microscopio óptico, y el

procedimiento para enfocar muestras. Luego se observaron en el microscopio una
muestra de células epiteliales preparadas con azul de metileno y una muestra de
una lámina fina de una cebolla morada preparada con lugol, para observar células
vegetales. Ambas muestras fueron buscadas con el objetivo 4X y fueron enfocadas
en los objetivos 10X y 40X, siendo este último el que tuvo un resultado más definido
al tener mayor acercamiento. Por último, fue fotografiado las muestras en el objetivo
40X.

Se obtuvo como resultado las fotografías de células epiteliales de origen animal y

las células vegetales de una cebolla morada. Demostrando que el microscopio
óptico es un instrumento muy útil para la observación de células tanto de origen
animal como vegetal y que utilizar un pigmento en las muestras a observar permite
una mejor visualización.

Objetivo

Determinar las partes del microscopio óptico, su funcionamiento.

Aprender a enfocar por medio de la observación de células epiteliales presente en
la boca humana en preparación húmeda usando azul de metileno y células
vegetales de una cebolla morada en preparación húmeda usando lugol.
Aprender el método correcto para colocar muestras a analizar mediante
microscopio, colocando en un porta objetos y cubre objetos.

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 Marco Teórico

Microscopio
Con base en Gama Fuertes, M. d. (2004) en su libro Biología biogénesis y
microorganismos, el microscopio es un instrumento que permite observar objetos
que no pueden ser observados a simple vista. El primer tipo de microscopio
inventado fue el microscopio óptico el cual es un instrumento que contiene dos o
más lentes que permiten tener una imagen aumentada del objeto y que funciona por
refracción. Luego se inventó un segundo tipo de microscopio el cual es el
microscopio electrónico. La ciencia que estudia estos pequeños objetos utilizando
microscopios se denomina microscopía.

Microscopio óptico
Con base en Gama Fuertes (2004) El término “microscopía óptica” se refiere al
empleo de cualquier clase de microscopio que utilice luz visible para observar las
muestras. Las partes del microscopio óptico compuesto son las siguientes:

 Base: Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte para todas las
partes del microscopio.
 Portaobjetos: Es una placa fina de cristal sobre el cual se disponen objetos para
su examen en el microscopio, con dimensiones típicas de 75mm x 25 mm.
 Brazo: Es la parte donde se debe sujetar, las pinzas del carro el tubo del
microscopio y el revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar
a otro.
 Bisagra de inclinación: permite la inclinación del tubo para mejorar la captación
de la imagen.
 Tornillo macrométrico: Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o abajo
del tubo o la platina y se utiliza para localizar el objeto a observar.
 Tubo: Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares yo objetivos.
 Revolver: Contiene los sistemas de lentes objetivos, permite girar y cambiar los
objetivos.
 Condensador: Enfoca la luz a través de la muestra.
 Diafragma: regula la cantidad de luz que atraviesa la muestra.
 Espejo: Pequeño espejo móvil el cual refleja la luz natural hacia la muestra.
 Platina: Mantiene el portaobjetos en posición

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Microscopio electrónico
Con base en Gama Fuertes (2004) los objetos de menos de 0,2 µm, como los virus
o las estructuras celulares internas, deben observarse con un microscopio
electrónico en el que se utiliza un haz de electrón en un lugar de luz; los electrones
libres viajan en forma de ondas. El poder de resolución del microscopio electrónico
es mucho mayor que el de los otros microscopios debido a que la longitud de onda
de los electrones es alrededor de 100,000 veces menor que el de la luz visible. Por
lo que este tipo de microscopios se utilizan para examinar estructuras demasiado
pequeñas para ser determinadas con la resolución de un microscopio óptico. Las
imágenes producidas por los microscopios electrónicos siempre son negras y
blancas, si bien pueden colorearse de forma artificial posteriormente. Este
microscopio en lugar de lentes de vidrio posee lentes electromagnéticas para
enfocar el haz de electrones sobre una muestra. Existen dos tipos de microscopio
electrónico: El microscopio electrónico de transmisión y el microscopio electrónico
de barrido.

La célula
Con base en (Navarro.J., 2005) la célula es la unidad básica de la vida. Existen
diferentes tipos de células, entre estás podemos encontrar a las células procariotas,
que son aquellas que no poseen un núcleo definido, en las que podemos encontrar
las bacterias; y también las células eucariotas, que son las células que poseen un
núcleo definido y entre estás encontramos más comúnmente la célula vegetal y la
célula animal. A continuación se hace un cuadro comparativo entre las células
eucariotas y procariotas:

Diferencias entre las células procariotas y eucariotas

Procariotas
Su rasgo distintivo es la carencia de núcleo
en su interior. Es por esta razón que el ADN
se encuentra disperso en distintas regiones
nucleares llamadas nucleoides. Estos no
poseen membrana y están rodeados del
citoplasma, también carecen de
mitocondrias, lisosomas, vacuolas y
centriolos. Entre estas células podemos
encontrar a las bacterias. Estás contienen
los nucleoides en la región que contienen el
ADN en el citoplasma de los procariotas.
Eucariotas
En este tipo de células, el ADN se halla
contenido dentro del núcleo. El núcleo es
la parte fundamental de las células
eucariotas, tiene forma esférica y está
limitado por la membrana nuclear
o carioteca. En el interior de ellas cuentan
con numerosos compartimientos tales
como mitocondrias, los cloroplastos, el
aparato de Golgi, el retículo
endoplasmático.
Fuente: (Navarro.J., 2005)

Con base en (Bernal.g., 2009) a pesar de que las células animales y vegetales son
células eucariotas, poseen similitudes y diferencias las cuales se mencionan a
continuación:

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Similitudes entre la célula vegetal y animal
Núcleo Esta es la parte fundamental de las células eucariotas y se encuentra
presente tanto en las células animales como en las células vegetales.
Estas tienen forma esférica, se localiza en el seno del citoplasma y está
limitada por la membrana nuclear o carioteca. El interior contiene los
ácidos nucleicos y el jugo nuclear o carioplasma, donde yacen uno o
más cuerpecillos esféricos llamados nucléolos. En él se encuentra el
ADN, este determina las características del organismo.
Mitocondrias Organelos comunes en las células eucariotas, están uniformemente
repartidas en toda la célula. Se originan por división de las
preexistentes porque poseen su propio ADN y tiene cierta autonomía,
en ellas se lleva a cabo el proceso de respiración celular.
Retículo Es un sistema membranoso que puede extenderse por toda la célula,
Endoplasmático como se observa en las células que intervienen activamente en la
síntesis de las proteínas, por medio del uso de unos organelos más
pequeños llamados, ribosomas, quienes están adheridos o asociados
al retículo endoplasmático rugoso, también existe el retículo
endoplasmático liso que no tiene ribosomas adheridas a su ellas.
Fuente: (Bernal.g., 2009)

Diferencias entre la célula Vegetal y la célula animal

Célula Vegetal
Pared Celular Es la capa que se localiza por encima de la membrana celular de muchos
tipos de células, gruesa y rígida formada principalmente por celulosa. La
pared celular impide que la célula vegetal “explote” y le da firmeza a la
planta. No se encuentra presente en las células animales ni en los
protozoarios.
Cloroplastos Contienen pigmentos que captan la energía lumínica y convierten en
energía química durante la fotosíntesis.
Vacuolas Las vacuolas en las células vegetales son diferentes que en las células
animales, ya que en la célula vegetal una vacuola es única llena de líquido
que abarca la mayoría de la célula vegetal, mientras en en la célula
animal, tiene muchas vacuolas pero diminutas.
Célula Animal
Centriolos Organelos muy importantes en la reproducción celular, anatómicamente
se pueden describir como dos cilindros huecos y alargados colocados
muy cerca del núcleo. Su acción está en la división celular donde se
ubican perpendicularmente entre sí en los polos opuestos. Estos cuando
se les encuentra en grupo se les conocen como diplosoma. Luego cuando
se ubican en los polos de ellos emerge unos filamentos que van de polo
al polo opuesto, está es su principal función.
Fuente: (Bernal.g., 2009)

Metodología
Material:

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  Cebolla
Reactivos

 Azul de metileno
 Lugol
Aparatos e instrumentos utilizados en la práctica

 Microscopio Óptico
 Porta Objetos
 Cubre Objetos
 Bisturí
 Hisopo
Diagrama de flujo: Utilización del microscopio óptico

Inicio

Determinar cada una de las partes del microscopio óptico compuesto del laboratorio, mientras
que se explicaba cada una de sus funciones, cuidados y manejo.

Utilizando un hisopo se raspo las paredes de la boca de el mismo estudiante y colocaron la

muestra en un porta objetos utilizando azul de metileno como pigmento para mejorar la
visibilidad y colocarle un cubre objetos.

La muestra se colocó en el microscopio y se observó con los diferentes objetivos de 4X, 10X y
S40X observando células epiteliales.

Se procedió a cortar una pequeña lámina de la cabeza de una cebolla con un bisturí y utilizando
un porta objetos agregar dos gotas de lugol para mejorar su visibilidad, colocar la lámina y
taparla con el cubre objetos.

Se utilizó el microscopio óptico y los objetivos 4X, 10X y S40X para enfocar la muestra del
cebolla y observar las células vegetales.

Se procedió a tomar fotografía de las imágenes captadas en el microscopio.

Fin

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 Resultados

Muestra de células epiteliales

Objetivo: S40X

Ocular: 10X

40Xx10X=400X

Obtención de la muestra: La muestra fue

tomada de la pared interna de la mejilla de la
boca humana

Observación: Se observaron células epiteliales

de origen animal las cuales tenían color azul
debido al pigmento utilizado el cual fue azul de
metileno. Su forma era irregular y su agrupación era
desordenada, se logró observar el núcleo y pequeños
rasgos parecidos a orgánulos.

Muestra de cebolla morada

Objetivo: S40X

Ocular: 10X

40Xx10X=400X

Obtención de la muestra: La muestra fue

tomada de una capa fina de una cebolla
morada.

Observación: Células vegetales de forma

rectangular las cuales tenían el color del lugol,
que fue el pigmento utilizado en las paredes
celulares. Se lograban ver el nucleo celular, la
pared celular y algunos organelos.

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 Discusión de Resultados
Con base en (Prescott, Harley, & Klein, 2004) el microscopio óptico compuesto tiene
una serie de lentes y utiliza luz visible como fuente de iluminación. Con este
microscopio es posible examinar muestras muy pequeñas, además de algunos de
sus detalles más finos. Un conjunto de lentes finamente talladas forma una imagen
focal definida cuyo tamaño es muchas veces mayor que el de la muestra en sí. Este
aumento se logra cuando los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz pasan
a través de un condensador que tiene lentes que dirigen los rayos a través de la
muestra. Desde aquí los rayos pasan al interior de la lente objetivo, la lente más
próxima a la muestra hasta que la imagen de la muestra vuelve a ser ampliada por
el ocular.

Con base en este mismo autor, el aumento total de la imagen se calcula mediante
la multiplicación del aumento del objetivo por el aumento del ocular. En resultados
se puede observar la imagen capturada del microscopio utilizando objetivo 40X,
antes conocido como seco fuerte el cual es el objetivo de mayor acercamiento entre
los objetivos secos, ya que el siguiente objetivo de mayor acercamiento es el
objetivo 100X el cual es el objetivo de inmersión. Entonces al utilizar el objetivo 40X
y al tener los oculares un acercamiento de 10X, se obtiene un acercamiento total de
400X. Lo cual significa que las muestras son acercadas 400 veces de su tamaño
original. La resolución es la capacidad de las lentes de distinguir detalles finos o la
capacidad de distinguir una distancia separada determinada entre dos puntos. El
poder de resolución de un microscopio, depende de dos conceptos principales:
Apertura numérica del objetivo y condensador; este es la relación apertura y
resolución y es directamente proporcional eso quiere decir, es una ley física donde
a menor apertura, menor resolución y viceversa. Y la longitud de onda de la
radiación electromagnética utilizada, está es la relación de la longitud de la
resolución y onda, que es inversamente proporcional, a mayor resolución, menor
longitud de onda.

Con base en Tortora B., Funke L y Case L. (2007) en su libro Introducción a la

microbiología. En el caso del microscopio óptico compuesto las muestras deben
teñirse para que contrarresten nítidamente con el medio que las rodea, es decir con
la sustancia en la que se encuentran suspendidas, para lo cual se necesita cambiar
el índice de refracción de la muestra con respecto al medio. El índice de refracción
es una medida de la capacidad de un medio de producir deflexión de la luz, esto
puede ser modificado al teñir las muestras. Si se quiere lograr un aumento /1000x
con buena resolución, el objetivo debe ser pequeño, aunque es deseable que la luz
que atraviese la muestra y el medio se refracte de forma diferente ya que no deben
perderse rayos de luz que hayan atravesado la muestra teñida.

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Con base en (Prescott, Harley, & Klein, 2004) Los numerosos tipos de colorantes
empleados para teñir microorganismos poseen dos características en común. El
cual el primero corresponde a que todos poseen grupos cromóforos grupos con
dobles enlaces conjugados que dan el color al colorante. Y su segunda
característica es que pueden unirse a las células mediante enlaces iónicos,
covalentes o hidrófobo. En el caso de la muestra de células epiteliales de la boca
humana este fue teñido con azul de metileno y las muestras de las células vegetales
de la cebolla morada fue teñido con lugol. En ambos casos ambos colorantes
pertenecen al grupo de colorantes básicos debido a que estos tipos de colorantes
se unen a moléculas cargadas negativamente, como ácidos nucleicos y muchas
proteínas. Como las superficies de las células.

Fue posible observar las diferencias entre las células animales y vegetales a través
del objetivo 40X como se muestra en los resultados. Fue posible observar los
núcleos de ambas células las cuales se identifican al ser una esfera
proporcionalmente vistosa dentro de la célula y de un color más oscuro. También
se pudo observar algunos tipos de orgánulos los cuales no fueron posible de
identificar debido a que se observaron cómo pequeños esferas o cilindros dentro de
cada célula de un color más oscuro, pero por ser poca la resolución, no se pudo
definir exactamente que orgánulos eran. Lo que sí se pudo diferenciar fue la pared
celular representativa de las células vegetales, y la membrana celular de las células
animales. Con base en (M, Becker, & Lewis, 2011) en su libro “El mundo de la
célula”, expone que la pared celular es un rasgo representativo de las células
vegetales, por lo que las hace más rígidas, y que por eso como se pudo observar
en los resultados se presentan de manera más ordenada y estructurada. Pero que
a la ves también poseen una membrana plasmática el cual rodea al citoplasma.
Mientras que las células animales únicamente poseen membrana plasmática la cual
tiene la función de delimitar los organelos de la célula eucariota (animal o vegetal)
manteniendo el equilibrio entre el interior y el exterior de la célula comportándose
como una membrana semipermeable ya que permite el paso únicamente de
determinadas moléculas o iones por difusión. Esto debido a que la membrana
plasmática es una estructura laminar formada por fosfolípidos, lo que forma una
cabeza hidrofílica y cola hidrofóbica, y proteínas especializadas que se utilizan como
medio de transporte entre el interior y exterior de la célula. Estás vías de complejos
de proteína transmembranal tales como poros y caminos, permiten el paso de
glucosa e iones específicos como el sodio y el potasio.

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 Conclusiones

 El microscopio óptico es un instrumento muy útil para la observación de

células tanto de origen animal como vegetal.
 Utilizar algún tipo de pigmento en las muestras a observar permite una
mejor visualización, esto funciona en varios tipos de microscopio.
 Cada objetivo provee un diferente aumento y claridad de la muestra a
observar.
 Los objetivos 4X, 10X y 40X son secos, mientras que el S100X de
inmersión se considera como húmedo y provee el mejor aumento de la
muestra.

Bibliografía

1. Bernal.g. (2009). Ambientes Ciencias Naturales (tercera ed.). Perú: Santillana,

S.A.

2. Fuertes, M. d. (2004). Biología biogénesis y microorganismos (Segunda ed.).

México: Pearson Pretice Hall. Obtenido de
https://books.google.com.gt/books?id=1R9FQ1xF3iEC&pg=PA33&dq=micro
scopio&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjL5svggvjVAhVC7yYKHRXWB-
QQ6AEINTAD#v=onepage&q=microscopio&f=false

3. M, W., Becker, & Lewis. (2011). El mundo de la célula. México : Pearson .

4. Navarro.J. (2005). Enciclopedia Autodidáctica Interactiva Océano (Tercera ed.).

España: Océano grupo editorial, S.A.

5. Prescott, L., Harley, J., & Klein, D. (2004). Microbiología. España: McGrawHill.

6. Tortora, Funke, & Case. (2007). Introducción a la microbiología (Novena ed.).

España: Médica Panamericana.

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