SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA

RESUMEN
Los diferentes métodos de cuantificación de proteínas nos permiten diferenciar la sensibilidad y
exactitud de cada uno de ellos, en esta práctica se utilizaron cinco métodos de cuantificación los
cuales fueron: Biuret, Lowry, Bradford, Kjeldahl y Espectrofotométrico para cada método se
realizaron curva de calibración permitiéndonos generar análisis de efectividad en cuanto a las
concentraciones de cada proteína, teóricamente se esperaba que el método con mayor exactitud y
efectividad fuese el de Kjeldahl esto debido a la determinación de nitrógeno orgánico el cual hace
eficiente este método ya que es aplicable para la cuantificación de proteínas, en cada uno de los
método se observó la curva de calibración y los porcentajes teóricos y experimentales de las proteínas
logrando con esto evidencia y discutir que el método más exacto en la práctica fue el de
espectrofotometría debido principalmente a su curva de calibración y a que sus valores de error
menores a comparación con los demás métodos utilizados
PALABRAS CLAVE

 Proteínas, cuantificación, estandarización, métodos

ABSTRACT
The different methods of protein quantification allow us to differentiate the sensitivity and accuracy
of each of them, in this practice we used five quantification methods which were: Biuret, Lowry,
Bradford, Kjeldahl and Spectrophotometric for each method were performed calibration curve
allowing us to generate analysis of effectiveness in terms of the concentrations of each protein,
theoretically it was expected that the method with greater accuracy and effectiveness was that of
Kjeldahl this due to the determination of organic nitrogen which makes this method efficient since it
is applicable for quantification of proteins, in each of the methods the calibration curve and the
theoretical and experimental percentages of the proteins were observed, thus obtaining evidence and
arguing that the most accurate method in practice was spectrophotometry, mainly due to its calibration
curve and that its lower error values it is compared to the other methods used.
KEYWORDS

 Proteins, quantification, standardization, methods

INTRODUCCION y nitrógeno. Pueden además contener azufre y

en algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro,
PROTEINAS magnesio y cobre entre otros elementos.
Las proteínas son biomoléculas formadas Pueden considerarse polímeros de unas
básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno pequeñas moléculas que reciben el nombre de

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
aminoácidos y serían, por tanto, los
monómeros unidad. Los aminoácidos están
unidos mediante enlaces peptídicos. La unión
de un bajo número de aminoácidos da lugar a
un péptido; si el número de aminoácidos que
forma la molécula no es mayor de 10, se
denomina oligopéptido, si es superior a 10 se
llama polipéptido y si el número es superior a
50 aminoácidos se habla ya de proteína. Por
tanto, las proteínas son cadenas de
aminoácidos que se pliegan adquiriendo una
estructura tridimensional que les permite
llevar a cabo miles de funciones. Las proteínas
están codificadas en el material genético de
cada organismo, donde se especifica su
secuencia de aminoácidos, y luego son
sintetizadas por los ribosomas. [1]
ESPECTOFROTOMETRIA
El estudio a nivel bioquímico de cualquier
biomolécula requiere la utilización de técnicas
analíticas que permitan su determinación
cualitativa y cuantitativa, así como su
caracterización físico-química y biológica.
Uno de los métodos más sencillos, accesibles,
útiles y utilizados es la espectrofotometría, en
general, y la espectrofotometría ultravioleta-
visible, en particular. Se pueden identificar y
cuantificar biomoléculas en solución y en
muestras biológicas, con el empleo de
reactivos específicos que reaccionan con el
compuesto a analizar y forman un producto
coloreado que permite detectarlo en muestras
complejas. El fundamento de la
espectrofotometría se debe a la capacidad de
las moléculas para absorber radiaciones, entre
ellas las radiaciones dentro del espectro UV
visible. Las longitudes de onda de las
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radiaciones que una molécula puede absorber
y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura,
fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que
dicha técnica constituye un valioso
instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas. [2]
Figura 1. Espectrofotómetro
Las moléculas pueden absorber energía
luminosa y almacenarla en forma de energía
interna.
CURVA DE CALIBRACION
Se trata de una curva de referencia construida
con cantidades conocidas de una sustancia
(por ejemplo, la albúmina sérica bovina) que
se utiliza para determinar la cantidad de esta
sustancia (proteínas) presente en una muestra
incógnita.
En muchas determinaciones se cumple una
relación proporcional entre la magnitud o
intensidad de color que da una reacción y la
cantidad del reactivo que la provoca. Por
ejemplo: si la presencia de 10 µg de proteínas
en una solución genera la aparición de un color
azul pálido cuando es agregada a una mezcla
reactiva, la presencia de 20 µg de proteína dará
lugar a que la solución se torne azul más
oscuro y así sucesivamente. [3]

METODOS DE CUANTIFICACION DE
PROTEINAS
METODO ESPECTOFOTOMETRICO
La mayor parte de las proteínas poseen un pico
de absorción máxima a 280 nm. Los grupos
responsables de tal característica son los
aminoácidos aromáticos (Tirosina
Triptófano). Las proteínas poseen coeficientes
de extinción molar (𝐸280𝑛𝑚 ) que puede variar
de acuerdo a su composición aminoacídica
entre 0,4-1,5. Como aproximación se puede
considerar que una unidad de absorbancia se
corresponde con una concentración (C) de
1mg/ml de proteínas:
Abs280nm. E280nm = C, si E280nm se
considera = 1 Abs280nm ≡ 1 mg/ml
Si la solución de proteínas contiene DNA y/o
RNA se introduce un error en la medición,
dado que estos absorben a 280 nm.
Absorbancia a 205-210 nm A dicha longitud
de onda absorbe la unión peptídica, por lo
tanto, es un método más sensible y no
dependiente de los aminoácidos que
componen la proteína en estudio. La
limitación de esta técnica está dada porque la
mayoría de los buffers utilizados también
absorben a esa longitud de onda. [4]
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METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
METODO LOWRY
Tiene la ventaja de ser extremadamente
sensible, capaz de detectar cantidades del
orden de 10 microgramos de proteína; su
inconveniente principal es que al evaluar los
fenoles presentes en la proteína
(esencialmente residuos de tiroxina), la
y
intensidad del color resultante varía entre las
distintas proteínas. Pero cuando se trata con
mezclas biológicas complejas, podemos
perfectamente calibrar el método con alguna
proteína comercial, como es la seroalbúmina
bovina. La reacción que tiene lugar en el
método de Lowry es bastante compleja y no
del todo conocida. Se desarrolla en las
siguientes fases: 1.-Reacción previa de la
proteína en medio alcalino con iones Cu2+, en
presencia de tartrato para evitar la
precipitación. Es esencialmente idéntica a la
reacción del Biuret, formándose un complejo
de coordinación entre el cobre y el nitrógeno
peptídico. 2.-Reacción con el reactivo de
Folin-Ciocalteau para fenoles (ácido
fosfomolibdotungstico), que se reduce por
medio de los grupos fenol (y en menor medida
imidazol e indol) presentes en la proteína a un
complejo de color azul oscuro, que se mide
colorimétricamente. El complejo coloreado,
cuya composición es desconocida, presenta
dos máximos de absorción a las longitudes de
onda de 560 y 680 nm. La elección de una u
otra depende de la concentración proteica de la
muestra estudiada. [5]

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
METODO BIURET
Es un método más rápido y menos engorroso
que el de Lowry. La reacción debe su nombre
al Biuret, una molécula formada a partir de dos
de urea (H2N-CO-NH-CONH2), que es la más
sencilla que da positiva la reacción. Bajo
condiciones alcalinas, sustancias conteniendo
dos o más uniones peptídicas forman un
complejo púrpura con sales de cobre, al igual
que en la primera etapa del método de Lowry.
Tiene muy pocos agentes interferentes (uno de
ellos es el sulfato de amonio). Es un método
menos sensible que el de Lowry por lo que
requiere mayor cantidad de muestra. El rango
adecuado usando 1 ml final es de 0,1 a 1 mg
de proteínas. [6]
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METODO BRADFORD
Se basa en la unión de un colorante, Comassie
Blue G-250 (también Serva Blue) a las
proteínas. El colorante, en solución ácida,
existe en dos formas una azul y otra naranja.
Las proteínas se unen a la forma azul para
formar un complejo proteína-colorante con un
coeficiente de extinción mayor que el
colorante libre. Este método es sensible (1-15
µg), simple, rápido, barato y pocas sustancias
interfieren en su determinación. Entre las
sustancias que interfieren están los detergentes
y las soluciones básicas. [7]
METODO MICROKJELDAHL
Hoy por hoy es el método más usado para el
análisis de proteínas y se efectúa mediante la
determinación de nitrógeno orgánico. Esto es
así porque los diferentes tipos de proteínas
coinciden todas ellas en una proporción
similar de dicho nitrógeno orgánico. En la
mayoría de los casos de utiliza el factor de
cálculo siguiente:
Contenido de proteínas = Contenido de
nitrógeno orgánico x 6.25

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
En esta técnica se digieren las proteínas y otros
compuestos orgánicos de los alimentos en una
mezcla con ácido sulfúrico en presencia de
catalizadores. El nitrógeno orgánico total se
convierte en sulfato de amonio mediante la
digestión. La mezcla resultante se neutraliza
con una base y se destila. El destilado se
recoge en una solución de ácido bórico. Los
aniones de borato así formado se titulan con
HCL estandarizado para determinar el
nitrógeno contenido en la muestra. En general,
el método Kjeldahl tiene la ventaja de poderse
ejecutar mediante equipos no muy sofisticados
y puede ser realizado por técnicos poco
experimentados. [8]
Para el análisis de proteínas se hace referencia
siete distintos tipos de harinas vegetales,
donde es necesario resaltar el contenido
proteico de las mismas, a continuación, se
presentan los datos basados en la literatura
sobre estos valores:
 Girasol: Los productos de girasol son
altamente palatables. Su contenido en
factores antinutritivos es muy bajo. La
principal limitación para el uso de girasol
corresponde a su alto contenido en fibra y
en lignina. La composición química de los
productos de girasol es muy variable en
función del método de extracción utilizado
y de diferencias en la calidad de origen de
la semilla. Para la harina suelen
establecerse categorías de acuerdo con el
contenido en proteína resultante: 28
(harina integral), 30, 32, 34 y 36%. De
manera general se tiene en cuenta como
referencia el valor de 34% de contenido
proteico. [9]
 Lenteja: La lenteja (Lens culinaris) es una
leguminosa de alto valor nutritivo debido
a su contenido de proteínas (28%), además
de ser baja en grasas. [10]
 Frijol: El frijol aporta mayores cantidades
de proteína que los cereales y con una
mejor calidad en sus aminoácidos. El
porcentaje de proteínas en cultivos de
frijol común comercial común comercial
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con un intervalo de valores de 21 a 30%
están reportados en diversas variedades de
frijol. Posibles factores ambientales, tales
como la localización geográfica y el
cambio de estación pueden
substancialmente influir en el contenido
proteico de los frijoles. [11]
 Haba: Las habas son legumbres, el grupo
de alimentos del mundo vegetal con
mayor contenido en proteínas. De hecho,
se considera una fuente proteica de bajo
coste biológico. Concretamente las habas
son una buena fuente de energía, debido a
su contenido en almidón (45%) y
contienen un porcentaje proteico similar al
de las carnes (20%). Desde el punto de
vista proteico tiene una única pega, es
escaso en metionina (aminoácido
esencial). [12]
 Garbanzo: Las tendencias apoyan el
consumo de alimentos de aporte
nutricional con beneficios para la salud.
De esa manera se ha impulsado a la
búsqueda de alternativas para la
producción de alimentos funcionales, por
lo que se ha propuesto el aprovechamiento
del garbanzo, siendo una leguminosa rica
en proteínas (18-25%) de alto valor
biológico. La harina presenta capacidad de
hidratación, capacidad emulsionante y
formación de espuma. [13]
 Soya: El haba de soja es una excelente
fuente de energía y proteína, en particular
lisina, conteniendo además cantidades
importantes de otros nutrientes esenciales,
tales como ácido linoleico y colina, cuya
disponibilidad es además alta. En el
mercado se encuentra disponible la harina
de soja micronizada que se obtiene al
moler finamente la harina de soja
previamente descascarillada, seguido de
clasificación por aireación para concentrar
más la fracción proteica. Este tipo de
harinas contienen más de un 50% de
proteína y encuentran su mercado en lacto
reemplazantes y piensos para peces y
lechones de primera edad. [14]

METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
 Arveja: Las proteínas en las arvejas
poseen un alto contenido en proteínas,
puesto que poseen aminoácidos esenciales
de alto valor biológico, poseen un bajo
contenido en metionina sin embargo alta
concentración en sus demás aminoácidos.
En la concentración porcentual de la
cantidad de proteína presente en la harina
de arveja se obtuvo en laboratorio un valor
de 14.44%. [15]
MATERIALES Y MÉTODOS
 Esta práctica fue realizada en dos
secciones las cuales se dividieron para
elaborar diferentes métodos por
sección, inicialmente se realiza el
método de espectrofotometría y
Kjeldahl
PARTE I
 Espectrofotometría
Inicialmente se llevó a cabo el método
de espectrofotometría uv-vis en donde
utilizamos la celda de cuarzo para
lograr la lectura espectrofotométrica
de los líquidos y mezclas realizadas,
se empezó con el BSA (albumino de
suero de bobina) a una concentración
de 2mg/mL adicionando NaCl al 1% a
diferente volúmenes dependiendo las
indicaciones de la tablas generadas en
la guía, llevando una secuencia de el
mismo proceso en muestras
problemas y harinas reconocidas,
después de ello se realizó la medición
de absorbancia a una longitud de onda
a 280mm
 Kjeldahl
En este método se realizaron cuatro
etapas, con ocho muestras las cuales
se dividieron en dos grupos debido a
la cantidad de muestras a evaluar,
inicialmente las muestras problemas,
el blanco y el triptófano se mezclaron
con catalizadores añadiendo de 1,5-
2,0 mL de ácido sulfúrico, se llevaron
los tubos a digestión, después al tubo
de destilación automático con 15 mL
de ácido bórico al 4% durante un
tiempo de cinco minutos hasta que se
nos permitió observar una coloración
verde, retiramos del destilador y se
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inició la titulación con HCI 0,0100M
hasta lograr nuevamente la coloración
que tenía antes del proceso de
destilado
PARTE II
En la segunda sección de la práctica se
llevó a cabo el método de Biuret,
Bradford y Lowry
 Biuret
Este método se realizó con una
adición de volúmenes de NaCl al 1%
y BSA a una concentración de
3,0mg/mL a diferentes volúmenes, en
este método se agregaron 4,0
mililitros de reactivo biuret en cada
mezcla dejando reposar por 30
minutos logrando calibrar el
espectrofotómetro a una longitud de
onda de 540nm.
 Bradford
En este método fue utilizado el BSA a
concentración 0,2 mg/ml añadiendo
nuevamente los reactivos establecidos
en la guía y un 1ml de reactivo
Bradford después de añadir los
reactivos se inició la mezcla con el
Vortex logrando así, después de diez
minutos evidenciar un cambio de
color al pasar los diez minutos se
inició la lectura espectrofotómetro a
una longitud de onda de 595 nm.
 Lowry
La adición de volúmenes nuevamente
en los tubos simplemente cambió en la
concentración de reactivos en los
cuales se adiciono diferentes
volúmenes de NaCl al 1% y
volúmenes variados de BSA a
concentración de 2mg/mL
adicionando NaOH 2M llevando esta
mezcla a baño maría durante unos
minutos. Se separa una disolución en
80 ml de Na2CO3 al 2% 800 ml de
CuSO4 la lb y 800nL de CuSO4 a la 1
lb tratamiento de sodio y potasio al 2%
al estar todo a temperatura se añaden
5ml de disolución dejando en reposo y
agregando 500 mL de reactivo.
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RESULTADOS
METODO ESPECTROFOTOMETRICO
Tabla 1. Absorbancia medida experimentalmente

Muestra Absorbancia Medida (280 nm)

B 0,424
1 0,435
2 0,433
3 0,492
4 0,536
5 0,536
6 0,628
7 0,723
8 0,907
9 0,85
10 0,945
11 0,978
12 1,057
Girasol 1,001
Lenteja 0,760
Frijol 0,882
Haba 0,763
Garbanzo 0,703
Soja 0,926
Arveja 1,092

Tabla 2. Porcentaje de error en las proteínas por el método espectrofotométrico.

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 22,4 34,0
Lenteja 28,0 13,5 51,9
Frijol 25,5 18,0 29,4
Haba 20,0 13,6 32,2
Garbanzo 21,5 11,3 47,3
Soya 50,0 19,6 60,7
Arveja 14,4 26,0 80,3
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METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

Grafica 1. Absorbancia corregida vs [BSA] 2mg/mL para el método espectrofotométrico

METODO DE BIURET
Tabla 3. Absorbancia medida experimentalmente

Muestra Absorbancia medida (540nm)

B 0,348
1 0,370
2 0,398
3 0,413
4 0,437
5 0,480
6 0,508
7 0,608
8 0,610
9 0,629
10 0,660
11 0,682
Girasol 0,484
Lenteja 0,478
Frijol 0,484
Haba 0,487
Garbanzo 0,459
Soya 0,505
Arveja 0,516
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METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

Tabla 4. Porcentaje de error en las proteínas por el método Biuret

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 12,8 62,4
Lenteja 28,0 12,3 56,1
Frijol 25,5 12,8 49,8
Haba 20,0 13,1 34,7
Garbanzo 21,5 10,7 50,5
Soya 50,0 14,6 70,8
Arveja 14,4 15,5 7,6

Grafica 2. Absorbancia corregida vs [BSA] 3mg/mL para el método de Biuret

METODO DE BRADFORD
Tabla 5. Absorbancia medida experimentalmente

Muestra Absorbancia medida (595 nm)

B 0,221
1 0,255
2 0,321
3 0,356
4 0,553
5 0,652
6 0,672
7 0,735
8 0,710
Girasol 0,554
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METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

Lenteja 0,583
Frijol 0,628
Haba 0,913
Garbanzo 0,610
Soya 0,542
Arveja 0,727

Tabla 6. Porcentaje de error en las proteínas por el método Bradford.

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 6,31x10^-05 100
Lenteja 28,0 6,92x10^-05 100
Frijol 25,5 7,85x10^-05 100
Haba 20,0 1,38x10^-04 100
Garbanzo 21,5 7,48x10^-05 100
Soya 50,0 6,06x10^-05 100
Arveja 14,4 9,92x10^-05 100

Grafica 3. Absorbancia corregida vs [BSA] 0,00002 mg/mL para el método de Bradford

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METODO DE LOWRY
Tabla 7. Absorbancia medida experimentalmente

Muestra Absorbancia medida (750nm)

B 0,385
1 0,463
2 0,465
3 0,458
4 0,474
5 0,485
6 0,484
7 0,072
8 0,129
Girasol 0,450
Lenteja 0,439
Frijol 0,452
Haba 0,459
Garbanzo 0,449
Soya 0,444
Arveja 0,727

Tabla 8. Porcentaje de error en las proteínas por el método Lowry.

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 0,0000631 100
Lenteja 28,0 0,0000692 100
Frijol 25,5 0,0000785 100
Haba 20,0 0,0001379 100
Garbanzo 21,5 0,0000748 100
Soya 50,0 0,0000606 100
Arveja 14,4 0,0000992 100
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Grafica 4. Absorbancia corregida vs [BSA] 2mg/mL para el método de Lowry correspondiente al

grupo de laboratorio

METODO DE LOWRY Grupo B

Tabla 9. Porcentaje de error en las proteínas por el método Lowry

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 29,1 14,3
Lenteja 28,0 28,0 0,00
Frijol 25,5 29,3 17,4
Haba 20,0 30,1 50,3
Garbanzo 21,5 29,0 35,0
Soya 50,0 28,5 43,0
Arveja 14,4 29,8 106,6
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Grafica 5. Absorbancia corregida vs [BSA] mg/mL para el método de Lowry correspondiente a

otro grupo de laboratorio
METODO DE KJHEDHAJL
Tabla 10. Porcentaje de Nitrógeno

Volumen mg de
Muestra Volumen(mL) %N
Real muestra
Girasol 6,5 6,5 33,9 2,68
Lenteja 2,0 2,0 38,0 0,74
Frijol 7,3 7,3 37,6 2,72
Triptófano 8,0 8,0 10,0 11,20
Haba 11,0 11 40,6 3,79
Garbanzo 7,3 7,3 37,5 2,73
Soya 10,75 10,75 33,0 4,56

Tabla 11 Porcentaje de error en las proteínas por el método Kjhedhajl.

Valor en % de
Valor en % de Porcentaje de error
Muestra proteína
proteína teórico relativo
experimental
Girasol 34,0 16,8 50,6
Lenteja 28,0 4,6 83,5
Frijol 25,5 17,0 33,4
Haba 20,0 23,7 18,6
Garbanzo 21,5 17,0 20,8
Soya 50,0 28,5 43,0
Triptófano 11,2 13,7 22,3
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METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS

De modo comparativo a lo anterior se puede

DISCUSION observar los resultados obtenidos por el
método Bradford donde la absorbancia de
Respecto al método espectrofotométrico se
igual manera se obtuvo con datos que crecían
obtuvo la tabla 1, la cual enseña la absorbancia
a medida que se analizaban los datos de
medida a la longitud determinada, mostrando
manera creciente; pero la gráfica 3, la cual
un crecimiento de valores de absorbancia a
corresponde a este método reflejando la
partir del tubo blanco al tubo 12 y a partir de
absorbancia medida vs la concentración de
esos valores obtenidos de absorbancia se
BSA determinada muestra resultados
generó la gráfica 1 la cual muestra una gráfica
negativos ya que no es lo esperado y además
de tipo lineal lo cual era lo esperado para esta
se tuvo que modificar la gráfica para que
práctica, agregando así que se muestran
enseñara una especie de tendencia lineal, lo
valores que están fuera de la tendencia lineal,
cual se logró pero se dejaron varios datos por
estos valores se deben a un error posiblemente
fuera de la gráfica. Respecto al calculó del
en el pipeteo y la cantidad de sustancias
porcentaje de proteína encontrado por este
agregadas a la muestra puesto que quizá no se
método se encontró que los resultados
agregó en las medidas correctas.
estuvieron fuera del rango de lo esperado ya
Posteriormente se logró calcular por medio de
que todos los errores relativos porcentuales
la, el volumen y las concentración de BSA y
fueron del 100 % como se observa en la tabla
tras procesar esta información un valor de
número 6, todo esto se atribuye a la poca
porcentaje de la proteína que se encuentra en
cantidad de tiempo en la práctica y la poca
distintas harinas vegetales, donde para este
experiencia en la técnica del micropipeteo.
método específicamente se encontró un error
porcentual menor al 81% por parte de la arveja Al analizar simultáneamente los valores
y el error mínimo fue del 29,4% el cual obtenidos por los resultados del método
pertenece al frijol. Lowry, se encuentra una absorbancia que tiene
decadencias ya que los valores no crecen con
Por otro lado al analizar los resultados de la
continuidad y a partir de ese punto los cálculos
absorbancia obtenidos por las muestras
para obtener la absorbancia corregida la cual
analizadas del método Biuret se determinó que
fue necesaria para la gráfica 4. Se encontraron
la absorbancia se encontraba en un aumento
valores disfuncionales lo que género que la
progresivo respecto a cada tubo a partir del
gráfica resultara en términos inesperados y que
blanco hasta el tubo 11, de igual manera la
reflejan una mala práctica, su R² es un valor de
graficar los valores de absorbancia corregida y
baja fiabilidad y pierde cualquier tendencia
el valor de la concentración indicada de BSA
lineal, de igual manera los cálculos de
para este método se observó que igualmente
porcentaje de error relativo son del 100% lo
este parte de la práctica se brindó bajos los
que continua demostrando que no fue el
parámetros esperados donde se encontró una
método y tampoco la manera de realizarlo fue
gráfica con tendencia lineal y un valor R² de
correcto. Dada esta situación y con
significativo, además en comparación al
autorización del docente encargado del
método espectrofotométrico el error
laboratorio fue posible la obtención de los
porcentual más bajo corresponde a la arveja
datos experimentales de otro grupo de
con un valor de 7,3% lo que indica que esta
laboratorio los cuales reflejan una mejor
vez sí se obtuvieron los resultados y el
practica para este método y como se observa
procedimiento para obtenerlo se realizó de la
en la gráfica 5. Si se mantienen la tendencia
manera más acertada. Sin embargo aun así se
lineal esperada, el valor de R² de esta es ed 0,9
conservan errores por encima del 45%, todo
aproximadamente, lo cual es un valor de alta
esto se observa en la tabla número 4.
fiabilidad y resaltando así que los valores

hallados de proteína experimentalmente por
parte de este grupo poseen errores de hasta el
0,0%; sin embargo hay errores porcentuales
altos pero a comparación de los datos
obtenidos por el grupo de trabajo son mucho
mejores y reflejan una buena toma de datos y
un mejor manejo de los instrumentos.
Finalmente cuando se trabajó con el método de
Kjhedahjl se obtuvo por esencia los valores de
nitrógeno hallados con la siguiente ecuación:
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 ∗ 𝑁𝐻𝐶𝐼 ∗ 14 ∗ 100
%𝑁𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 =
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑚𝑔)
Ecuación 1.
De esa manera se pudo comparar con los
demás métodos teniendo en cuenta que este es
uno de los métodos más efectivos ya que es el
encargado de calcular los porcentajes de
proteína bruta mediante los porcentajes de
nitrógeno previamente calculados
%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑏𝑟𝑢𝑡𝑎 = %𝑁𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 ∗ 6.25
Ecuación 2.
De esa manera se pudo lograr compara el valor
teórico con el experimental de las proteínas
halladas en las respectivas harinas vegetales,
que tuvieron en general errores por debajo del
promedia en su mayoría. Esto se debe a que el
grupo de laboratorio dividió este método y se
encargó de ciertas harinas en particular
mientras que simultáneamente otro grupo
distinto se ocupó de otras harinas de fuente
vegetal.
CONCLUSIONES
 Se observó una falta de técnica al
momento de usar los instrumentos y
materiales de laboratorio (como
pipetas y micropipetas) lo cual
impidió generar un correcto análisis
sobre cual método de los usados fue el
más efectivo. Se recomienda mejorar
las técnicas para así lograr desempeño
SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA
METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
amplio y por consecuencia determinar
lo esperado.
 Se determinó que el valor de la
longitud de onda es un factor
fundamental para conocer la
absorbancia justa de una muestra a
determinar y requerida para la
práctica, ya que si no es precisa se
podría obtener resultados erróneos.
 Se comprendió que las curvas de
calibración cumple un papel
importante al momento de
estandarizar y cuantificar una proteína
ya que si se maneja una tendencia
lineal fundamente en un valor de R²
muy cercano a 1 se puede observar
que los resultados experimentales
cumplen con lo esperado.
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 SANCHEZ NICOLAS – VILLAMIZAR TATIANA
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