Вы находитесь на странице: 1из 8

Глава 3.

Селекция и семеноводство

УДК 582.573.76:581.3

ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ
МУЖСКОЙ И ЖЕНСКОЙ ГЕНЕРАТИВНЫХ СФЕР
И МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ГАМЕТОФИТОВ
У НЕКОТОРЫХ СОРТОВ HEMEROCALLIS HYBRIDA HORT.
(HEMEROCALLIDACEAE)

Т. Н. Кузьмина

Никитский ботанический сад – Национальный научный центр,


г. Ялта, Россия, e-mail: tnkuzmina@rambler.ru

Представлены результаты изучения генезиса пыльников и семязачат-


ков некоторых сортов Hemerocallis hybrida. Дана цитоморфологическая
характеристика мужского и женского гаметофитов диплоидных и тетра-
плодных сортов. Показано, что у ‘Wally Nance’, ‘Anna Warner’, ‘Cherry
Eyed Pumpkin’ преобладают морфологически нормальные пыльцевые
зерна (65–61 %). У ‘Pandora’s Box’ большая часть пыльцевых зерен сте-
рильные или с морфологическими аномалиями (более 80 %). Семязачатки
с морфологически нормальными зародышевыми мешками у ‘Wally Nance’
и ‘Cherry Eyed Pumpkin’ составляют 90,35 % и 80,98 %, соответственно.
Аномалиями развития женского гаметофита являются гибель спорогенной

219
Актуальные вопросы плодоводства и декоративного садоводства в ХХI веке
клетки или мегаспоры, нарушение развития зародышевого мешка на ранних
стадиях формирования, нарушение дифференциации структур зародышевого
мешка и его дегенерация. Учитывая показатели цитоморфологической оцен-
ки гаметофитов, сорта Wally Nance, Cherry Eyed Pumpkin целесообразно ис-
пользовать в качестве родительских форм при гибридизации.
Ключевые слова: пыльник, пыльцевые зерна, семязачаток, зародышевый
мешок, Hemerocallis hybrida, Hemerocallidaceae.

Лилейник гибридный (Hemerocallis hybrida hort.) благодаря вариациям


окраски, формы и размеров цветков, высоты цветоноса, продолжительно-
сти и сроков его цветения сортов, насчитывающих на сегодняшний более
30 тыс., является одной из наиболее популярных культур, используемых
в ландшафтном дизайне и цветоводстве [5, 6, 7]. При этом селекционная
работа по выведению новых сортов лилейника, наиболее приспособлен-
ных к климатическим условиям Крыма, сохраняет свою актуальность,
что требует данных особенностей формирования генеративных структур,
а также оценки состояния гаметофитов предполагаемых для селекцион-
ной работы родительских форм. В связи с этим целью исследования было
описание формирования и развития пыльников и семязачатков некоторых
сортов H. hybridа, а также оценка морфо-физиологического состояния
мужского и женского гаметофитов исследуемых сортов.
Для исследования были использованы диплоидные (Pandora’s Box,
Wally Nance) и тетраплоидные (Anna Warner, Cherry Eyed Pumpkin) со-
рта H. hybrida, представленные в генофондовой коллекции Никитского
ботанического сада (г. Ялта, Крым). В качестве фиксатора для бутонов и
завязей использовали раствор Карнуа (этиловый спирт – хлороформ – ук-
сусная кислота в соотношении 6 : 3 : 1). Для оценки морфо-физиологиче-
ского состояния семязачатков и зародышевых мешков, а также для под-
счета количества семязачатков в завязи применяли метод просветления
семязачатков с помощью этилсалицилата [11]. Окрашивание временных
препаратов осуществляли 1%-ным раствором ацетоорсеина. Постоянные
цитоэмбриологические препараты готовили по общепринятой методике
[3]. Парафиновые срезы делали толщиной 10–12 мкм на ротационном
микротоме марки МРТУ. Окрашивание проводили гематоксилином с под-
краской алциановым синим [1] или метилгрюнпиронином с алциановым
синим [10]. Препараты средних образцов пыльцы сортов готовили соглас-
но методике, предложенной С. В. Шевченко с соавторами [9]. Для каждого
сорта было проанализировано по 10 препаратов пыльцы в 10 полях зре-
ния. Анализировали материал с помощью микроскопов “Jenaval” (Zeiss)
и AxioScope A. 1 (Zeiss) методом светлого поля. Цитоморфометрические
измерения произведены с помощью программы AxioVision Rel. 4.8.2. Ста-

220
Глава 3. Селекция и семеноводство

тистическую обработку данных производили с помощью модуля «Основ-


ные статистики» пакета прикладных программ «Statistica 6.0».
Цветки у лилейников обоеполые. Андроцей представлен 6 тычинка-
ми, имеющими четырехгнезные пыльники. Стенка микроспорангия у H.
hybrida развивается центростремительно, что типично для однодольных
растений, при этом в результате деления клеток первичного париеталь-
ного слоя образуются эндотеций и вторичный париетальный слой. По-
следний слой в свою очередь дает начало среднему слою и тапетуму.
Таким образом, в сформированном пыльнике стенка представлена че-
тырьмя слоями клеток: эпидермисом, эндотецием, средним слоем и та-
петумом. Тапетум у H. hybridа секреторного типа, его клетки одно- и
двуядерные. По мере созревания пыльника он облитерирует с образова-
нием тапетальной плетки с орбикулами, которая отмечается и в зрелом
пыльнике. В мейотический период развития микроспорангия средний
слой его стенки лизирует, а в эндотеции начинают формироваться фи-
брозные утолщения клеточных стенок. Стенка зрелого пыльника у H.
hybridа представлена клетками эпидермиса, покрытыми кутикулой и
изодиаметрическими клетками эндотеция с фиброзными утолщениями.
Микроспогенез протекает по сукцессивному или промежуточному
типам. Микроспоры в тетрадах расположены изобилатерально. У ‘Pan-
dora’s Box’ были отмечены случаи образования пентад и гексад, что
связано с нарушением прохождения мейоза. Зрелые пыльцевые зерна
у H. hybrida двуклеточные, одноборозные, сплющено-сфероидальной
формы, в очертании эллипсоидальные.
Морфологическая оценка мужского гаметофита исследованных
сортов показала, что у сортов ‘Wally Nance’, ’Cherry Eyed Pumpkin’,
‘Anna Warner’ преобладают морфологические нормальные пыльцевые
зерна, доля которых составляет 61–65 %. У ‘Pandora’s Box’ количество
морфологически нормальных пыльцевых зерен не превышает 19 %.
Основными аномалиями строения пыльцы у сортов H. hybrida явля-
ются изменение апертуры и наличие спаренных пыльцевых зерен, что
связано с нарушением цитокинеза (табл. 1).
Женская генеративная сфера цветка H. hybrid представлена трех-
гнездной завязью. Морфометрические данные завязей и количества се-
мязачатков ряда сортов H. hybrida представлены в таблице 2. Количество
семязачатков в завязях у сортов варьирует в пределах от 26 до 57, в сред-
нем составляет 33–41. Установлено, что количество закладывающихся
семязачатков не зависит от плоидности сорта и морфометрических пара-
метров бутона и завязи. В то же время выявлена тесная корреляционная
зависимость ширины завязи от степени плоидности сорта (r = 0,89).

221
Актуальные вопросы плодоводства и декоративного садоводства в ХХI веке
Таблица 1

Цитоморфологический анализ
пыльцевых зерен сортов Hemerocallis hybrida L.
Пыльцевые зерна

Морфологически
плодиности
Аномальные, %

нормальные,

Стерильные,
Степень
Сорт

Спаренные
Изменения
апертуры
%

%
Всего

Pandora’s Box 2х 19,11 7,01 2,22 9,23 71,66


Wally Nance 2х 61,66 3,07 3,37 6,44 31,90
Cherry Eyed Pumpkin 4х 61,92 0,39 – 0,39 37,69
Anna Warner 4х 65,29 12,10 0,64 12,74 21,97

Таблица 2
Морфометрические параметры бутонов и завязей
на стадии рыхлого бутона некоторых сортов Hemerocallis hybrida L.
плоидности

Параметры завязи
Степень

Высота
Сорт бутона, Количество
см Высота, Ширина, семязачатков,
см см шт.
Pandora’s Box 2х 6,76 ±0,24 0,36 ±0,04 0,29 ±0,01 33,40 ±0,60
Wally Nance 2х 8,98 ±0,20 0,62 ±0,04 0,33 ±0,02 40,00 ±1,30
Anna Warner 4х 9,58 ±0,19 0,64 ±0,04 0,44 ±0,02 34,00 ±3,27
Cherry Eyed Pumpkin 4х 9,34 ±0,35 0,64 ±0,04 0,50 ±0,01 41,80 ±4,24

Начало формирования семязачатков отмечается в завязях бутонов вы-


сотой 0,3 см. На этой стадии в примордии семязачатка дифференцируют-
ся эпидермальный слой или периферическая зона, а также апикальная,
латеральная и базальная зоны. Апикальная зона у H. hybridа представ-
лена одной клеткой, преобразующейся в дальнейшем в мегаспороцит.
Латеральная и базальные зоны в ходе развития семязачатка трансформи-
руются в соответствующие области нуцеллуса, формирующие постамен-
то-подиум. Эпидермальный слой нуцеллуса сохраняется до созревания
зародышевого мешка. Учитывая особенности организации нуцеллуса,
семязачаток H. hybridа, согласно классификации И. И. Шамрова [8], мож-
но охарактеризовать как медионуцеллятный. В семязачатке H. hybridа
формируются два интегумента, при этом внутренний интегумент опере-
жает развитие наружного и развивается из инициалей, расположенных

222
Глава 3. Селекция и семеноводство

в дермальном слое. Инициали наружного интегумента имеют дермаль-


но-субэпидермальное происхождение. В зрелом семязачатке внутренний
интегумент образован 4–6 слоями клеток. Клетки его наружного эпидер-
мального слоя приобретают радиальную направленность и имеют плот-
ную цитоплазму с одним или двумя ядрами, что свидетельствует об их
дифференциации. Для исследуемых сортов H. hybridа, как и для ряда
видов рода Hemerocallis [3, 4], отмечается слияние внутреннего интегу-
мента с клетками эпидермального слоя нуцелуса. Наружный интегумент
зрелого семязачатка представлен 10–12 слоями паренхимных клеток. В
процессе развития семязачатка и формирования его изгиба наружный
интегумент срастается с фунукулусом, образуя рафе. Халаза в зрелом
семязачатке занимает незначительную часть семязачатка и классифици-
руется как мезохалаза. В целом зрелый семязачаток у H. hybrida можно
охарактеризовать как анатропный, медионуцеллятный, битегмальный и
выделить следующие его цитоэмбриологические особенности: слияние
внутреннего интегумента и нуцеллуса; отсутствие эпидермы нуцеллуса
в микропилярной области; наличие постаменто-подиума; морфологиче-
ски слабо выраженную гипостазу, образование рафе; хорошо развитый
проводящий пучок, достигающий наружного интегумента; дифференци-
ацию клеток наружного эпидермиса внутреннего интегумента.
В апикальной зоне нуцеллуса закладывается археспориальна клет-
ка, преобразующаяся с мегаспороцит. В результате мейоза формиру-
ется линейная тетрада мегаспор, из которых развитие получает лишь
халазальная мегаспора, дающая начало зародышевому мешку. Его фор-
мирование проходит по Polygonum-типу. В зрелом состоянии зароды-
шевый мешок дифференцирован на яйцевой и антиподальный аппара-
ты и полярные ядра. Яйцеклетка превышает по размерам синергиды.
Антиподы крупные с двумя ядрами, которые сливаются до оплодотво-
рения, в результате чего клетки становятся диплоидными.
Среди аномалий развития семязачатков и зародышевых мешков у
исследуемых сортов отмечались случаи отмирания спорогенной клет-
ки, мегаспоры и недоразвитие зародышевого мешка, когда нуцеллус
с дегенерирующими структурами находился на стадии 2–4-ядерного
зародышевого мешка. Кроме того, были отмечены семязачатки, у ко-
торых дифференциация клеточных структур прошла с нарушениями,
в результате чего отсутствовали клеточные оболочки у элементов яй-
цевого аппарата или антипод. В некоторых случаях зародышевый ме-
шок имел явные признаки дегенерации структур. Установлено, что у
‘Wally Nance’ и ‘Cherry Eyed Pumpkin’ преобладают морфологически
нормальные семязачатки, с дифференцированными зародышевыми
мешками (90,35 % и 80,98 %, соответственно), что свидетельствует

223
Актуальные вопросы плодоводства и декоративного садоводства в ХХI веке
о высокой потенциальной активности женской генеративной сферы
данных сортов. Сорт Pandora’s Box можно характеризовать как стериль-
ный, поскольку доля аномальных семязачатков у него составляет более
90 %. Доминирующей аномалией у данного сорта является недоразви-
тие зародышевого мешка (89,31 %). У ‘Anna Warner’ доля аномальных
семязачатков составляет около 46 %, большая часть аномалий связана
также с недоразвитием зародышевого мешка – около 36 % (табл. 3).
В целом по данным цитоморфологической характеристики мужского
и женского гаметофитов, исследованные сорта можно распределить от
фертильного к стерильному в следующем порядке: Cherry Eyed Pump-
kin – Wally Nance – Anna Warner – Pandora’s Box, что следует учитывать
при планировании работ по гибридизации.
Таблица 3

Цитоморфологический анализ семязачатков


некоторых сортов Hemerocallis hybrida на стадии рыхлого бутона
Семязачатки, %
Аномальные
Морфологически

В том числе:
зародышевые
нормальные

Нарушения
мешки

Сорт
Недораз- Дегенерация дифферен-
Всего витие за- зародыше- циации
родышево- вого структур
го мешка мешка зародышевого
мешка
Pandora’s Box 8,95 ±2,74 91,05 ±2,85 89,31 ±3,21 0 1,74 ±0,08
Wally Nance 90,35 ±3,16 9,65 ±3,16 9,48 ±2,63 0 0,17 ±0,03
Anna Warner 54,16 ±7,96 45,84 ±7,96 35,98 ±6,79 8,39 ±4,20 1,47 ±0,07
Cherry Eyed 80,98 ±6,45 19,02 ±6,45 12,94 ±4,41 3,31 ±1,47 2,77 ±0,09
Pumpkin

Установлено, что стенка микроспорангия у H. hybrida развивается


центростремительно (тип однодольных) и образована четырьмя слоями
клеток. Тапетум секреторного типа. В зрелом пыльнике стенка образована
двумя-тремя слоями клеток. Микроспорогенез протекает по сукцессивно-
му или промежуточному типу. Зрелые пыльцевые зерна двуклеточные.
У изучаемых сортов, за исключением Pandora’s Box, преобладают
морфологически нормальные пыльцевые зерна. Доля морфологически
нормальных пыльцевых зерен у сортов Wally Nance, Cherry Eyed Pump-
kin, Anna Warner составляет 61–65 %. Сорт Pandora’s Box имеет низкое
количество морфологически нормальных пыльцевых зерен, которые
224
Глава 3. Селекция и семеноводство

составляют 19,11 %. Основными аномалиями строения пыльцы у со-


ртов H. hybrida являются изменение апертуры и наличие спаренных
пыльцевых зерен.
Семязачаток у H. hybrida анатропный, медионуцеллятный, битег-
мальный. Цитоэмбриологическими особенностями зрелого семязачат-
ка H. hybrida являются слияние внутреннего интегумента и нуцеллуса;
отсутствие эпидермы нуцеллуса в микропилярной области; наличие
постаменто-подиума; морфологически слабо выраженная гипостаза,
образование рафе; хорошо развитый проводящий пучок, достигающий
наружного интегумента; дифференциация клеток наружного эпидер-
миса внутреннего интегумента. Зародышевый мешок развивается по
Polygonum-типу. Зрелый зародышевый мешок у H. hybrida семиклеточ-
ный, с диплоидными антиподами.
Показано, что у Wally Nance и Cherry Eyed Pumpkin преобладают
морфологически нормальные семязачатки, с дифференцированными
зародышевыми мешками (90,35 % и 80,98 %, соответственно). Среди
аномалий развития семязачатков у сортов H. hybrida, приводящих к их
стерильности, выявлены случаи недоразвития зародышевого мешка,
нарушение дифференциации его структур, а также его дегенерации.
Сорта ‘Wally Nance’ и ‘Cherry Eyed Pumpkin’ наиболее целесообразно
использовать в качестве родительских форм в ходе селекционной работы.
Автор выражает глубокую благодарность куратору коллекции ли-
лейника гибридного Никитского ботанического сада И. В. Улановской
за оказанную помощь в подборе сортов для исследования.

Библиографический список
1. Жинкина, Н.А. О методике окраски эмбриологических препаратов / Н.А. Жинкина,
О.В. Воронова // Бот. журнал. – 2000 – Т. 85, № 6. – С. 168-171.
2. Комар, Г.А. О типе семяпочки некоторых представителей подсемейства Asphodeloi-
deae (Liliaceae) / Г.А. Комар // Бот. журнал. – 1982. – Т. 67, № 6. – С. 800-805.
3. Паушева, З.П. Практикум по цитологии растений / З.П. Паушева. – М.: Колос,
1970. – 255 с.
4. Савченко, М. И. Морфология семяпочек некоторых однодольных / М.И. Савчен-
ко, Г.А. Комар // Морфология цветка и репродуктивных процесс у покрытосеменных
растений. – М.–Л.: Наука, 1965. – С. 74-113.
5. Улановская, И. В. Перспективные сорта лилиейника гибридного (Hemerocallis hy-
brid hort.) для использования в озеленении Южного берега Крыма / И.В. Улановская
// Бюл. Никит. бот. сада. – 2011. – Вып. 102. – С. 102-105.
6. Улановская, И. В. Селекция лилейника гибридного в Никитском ботаническом саду
/ И.В. Улановская // Дендрология, цветоводство и садово-парковое строительство: ма-
териалы международной научной конференции, посвященной 200-летию Никитского
ботанического сада. – 2012. – С. 135.
7. Химина, Н.И. Лилейники / Н.И. Химина. – М.: Издательский дом МСП, 2002. – 208 с.
8. Шамров, И.И. Семязачаток как основа воспроизведения цветковых растений: клас-
сификация структур / И.И. Шамров // Бот. журнал. – 1999. – 84. – № 10. – C. 1-35.

225
Актуальные вопросы плодоводства и декоративного садоводства в ХХI веке
9. Шевченко, С.В. Методика окраски постоянных препаратов метиловым зеленым и
пиронином / С.В. Шевченко, И.А. Ругузов, Л.М. Ефремова // Бюл. Гос. Никит. бот.
сада. – 1986. – Вып. 60. – С. 99-101.
10. Шевченко, С. В. Особенности эмбриологии маслины европейской (Olea europaea L.) /
С.В. Шевченко, А.А. Чеботарь // Труды Гос. Никитского бот. сада. – 1992. – Т. 113. – С. 52-61.
11. Экспресс-методы определения фертильности зародышевых мешков люцерны:
методические указания / сост.: Л.И. Орёл, Л.Н. Константинова, Н.И. Дзюбенко, Е.Б.
Казачковская. – Л.: Изд-во ВИР, 1988. – 28 с.

SOME FEATURES OF MALE AND FEMALE GENERATIVE


SPHERES FORMATION AND A MORPHOLOGICAL ESTIMATION
OF GAMETOPHYTES IN SOME CULTIVARS OF HEMEROCALLIS
HYBRIDA HORT. (HEMEROCALLIDACEAE)
T. N. Kuzmina

Nikitsky Botanical Garden – National Research Centre,


c. Yalta, Russia, e-mail: tnkuzmina@rambler.ru

The paper presents study results on the anthers and ovules genesis in some cultivars
of Hemerocallis hybrida hort. Cytomorphological characteristic of male and female
gametophytes in diploid and tetraploid cultivars of H. hybrid is given. It is shown, that
morphologically normal pollen grains (65–61%) prevail in cvs ‘Wally Nance’, ‘Anna
Warner’, and ‘Cherry Eyed Pumpkin’. At ‘Pandora’s Box’ cv, most of pollen grains are
sterile or with morphological anomalies (more than 80 %). Ovules with morphologically
normal embryo sacs in ‘Wally Nance’ and ‘Cherry Eyed Pumpkin’ cvs make 90,35
% and 80,98 %, respectively. Anomalies of female gametophytes development are
the following: death of sporogenous cells or megaspore, cessation of the embryo sac
development at the early development stages, infringement of the embryo sac structures
differentiation and their degeneration. Cultivars Wally Nance and Cherry Eyed
Pumpkin are expedient to be used as parental forms at hybridization, considering the
cytomorphological estimation of their male and female gametophytes.
Key works: anther, pollen grains, ovule, embryo sac, Hemerocallis hybrida,
Hemerocallidaceae.

226