BIOSCIENCE Preparación del Reactivo

El reactivo viene listo para usarse.

ALT (GPT) LIQUIDO Almacenaje del Reactivo

1. Almacenar el reactivo a temperatura de 2-8°C
(refrigeración).
Uso
2. El reactivo es estable hasta la fecha de expiración si es
Esta prueba es utilizada para la determinación cuantitativa in
mantenido refrigerado (2-8°C).
vitro de Alanine Aminotransferase (ALT) en suero.

Significado Clínico Deterioro del Reactivo

ALT es distribuido ampliamente en tejidos con las El reactivo no debe utilizarse si tiene una absorbancia incial
concentraciones más altas encontradas en el hígado y los menor de 1.0 a 340nm.
riñones. Aun así ALT es considerado mas especifico para El reactivo falla en obtener los parámetros de desempeño
hígado que el AST. Niveles elevados de ALT son
comúnmente observados solo en enfermedades del hígado Colección y almacenaje de la muestra
1.
tales como cirrosis, hepatitis, o carcinoma metastico. Por lo Muestras hemolizadas no pueden ser usadas, debido a
tanto, pueden haber niveles elevados de ALT con que células rojas contienen ALT.7
momonucleosis infecciosas, distrofia muscular y 2. ALT en suero es estable por 3 días a temperatura
dermatomiositis. 1 ambiente (15-30°C), 7 días refrigerada (2-8°C) y 30
días congelada. (-20°C)7
Método
El método UV para la determinación de ALT fue descrita Interferencia
por Henley2 en 1955 y por Wroblewski y La Due3 en 1956.
El procedimiento fue mejorado por Henry et al4 en 1960. En 1. Un numero de drogas y substancias afectan la actividad
1974 la Sociedad de Química Clínica Scandinava5 de ALT. Ver Young, et al 8
recomendó condiciones de reacción optimizadas. La 2. Bilirrubina hasta por lo menos 15mg/dL y hemoglobina
Federación Internacional de Química Clínica ( hasta por lo menos 500 mg/dL han sido encontradas no
IFCC)6publico una propuesta recomendando un método en afectan el procedimiento.
1980, el cual utiliza el ensayo de LDH-NADH. El
procedimiento descrito es basado en este método. Equipo adicional requerido pero no incluido
1. Analizador de química clínica capaz de mantener
Principio: temperatura de 37°C constante y medir absorbancia a
L-Alanine + 2-Oxoglutarate ALT Pyruvate + L-Glutamate 340nm.
2. Agua deionizada y equipo relacionado,ej. Pipetas
Pyruvate + NADH LDH L-Lactate + NAD 3. Consumibles específicos para el analizador ej. Copas de
Muestras
4. Material control como los suplidos por Bioscience.
ALT cataliza la transferencia thel grupo amino de L-alanine
a 2-Oxoglutarate resultando en la formacion de pyruvate y Procedimiento del ensayo
L-glutamate. Lactate dehydrogenase cataliza la reducción de Estas instrucciones son para ser utilizadas como una guía
pyruvate y la oxidación simultanea del NADH a NAD. El general para la adaptación al instrumento automatizado
ratio resultante de la reducción en absorbancia es seleccionado por el usuario.
directamente proporcional a la actividad de ALT
Composición del Reactivo:
Parámetros
Ingredientes Activos Concentración ALT
2-Oxoglutarate 13mM Temperatura: 37°C
L-Alanine 440mM Largo de Onda 340nm
NADH 0.12mM Tipo de Ensayo: Ratio/Kinetico
LDH (microbial) >2000 U/L Dirección: Decreciente
Tris Buffer 97 mM Ratio: Muestra/Reactivo 1:10
PH 7.6 + 0.2 a 25°C
Volumen de Muestra 0.10mL (100L)
Volumen de Reactivo 1.0 mL
Tiempo de retardo: 30 seg.
Tiempo de Lectura: 1-3 minutos
Precauciones
Este reactivo es solo para uso de diagnostico in vitro.
 Desempeño:
Notas del Procedimiento: Linealidad:
1. Muestras con valores mayores de 450 U/L deben ser Cuando es evaluado como recomendado el ensayo es linear
diluidas 1:1 con salina, re-ensayadas y los resultados hasta 450 U/L.
multiplicados por 2. Comparación del Método:
2. Una lectura final muy baja, en conjunto con un cambio Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios
pequeño de absorbancia entre lecturas puede ser realizados entre este procedimiento y uno similar :
indicador de un nivel de ALT muy alto. Diluir y re- Coeficiente de Correlation 0.999
ensayar como anteriormente indicado en la nota #1. Pendiente 0.95
3. Turbidez o muestras altamente ictericas pueden dar Intercepto 0.0 (U/L)
lecturas las cuales la absorbancia inicial excede la
capacidad del espectrofotometro. Resultados mas Precisión:
precisos pueden ser obtenidos usando 0.05mL (50ul) de Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2
muestra y multiplicando el resultado final por 2. Promedio (U/L) 35 121
S.D. (U/L) 0.7 0.8
Cálculos: C.V.(%) 2.0 0.7
Una unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzyma
que cataliza la transformacion de un micromole del substrato Entre Series: Nivel 1 Nivel 2
por minuto bajo las condiciones especificadas. Por ejemplo: Promedio (U/L) 35 121
S.D. (U/L) 0.8 1.2
AST (U/L)= Abs./min x 1.10 x 1000 = Abs./min x 1768 C.V.(%) 2.3 1.0
6.22 x 0.10 x 1.0
Referencias:
Donde: 1. Tietz N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saudenrs Con.
Phila., p674-675 (1982)
Abs./min = Cambio de absorbancia promedio por minuto 2. Henley, K.S. Pollard, H.M., J. Lab. Clin. Med.
1.10 = Volumen total de reacción (ml) 46:785 (1955).
1000 = Conversión de U/mL a U/L 3. Wroblewski, F., La Due, J.S., Proc. Soc. Exp.
6.22 = La absorción milimolar de NADH Bio. Med. 91:569 (1956)
4. Henry, R.J. et al, Am. J. Clin. Path. 34:381
0.10 = Volumen de muestras (mL) (1960).
1.0 = Pazo de luz en cm 5. Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical
Chemistry and Clinical Physiology, Scand. Clin. Lab. Invest. 32:291
Ejemplo: (1974).
6. Clinica Chimica Acta 105:145F-172F (1980)
Si el promedio del cambio de absorbancia por minuto = 0.12 7. Henry, R.J., Clinical Chemistry: Principles and Technics, Harper and
entonces 0.12 x 1768 = 212 U/L Row, New York, p522 (1968)
8. Young, D.S. et al, Clin. Chem. 21:1D (1975)
Notas: 9. Henry, J.B., Clinical Diagnostics & Management by Laboratory
Methods, W.B. Saunders Con. ,
1. Para convertir a nkat/L multiplicar U/L por 16.67. Philadelphia, p. 1437 (1984)
2. Si alguno de los parámetros de la prueba son alterados,
un nuevo factor debe ser calculado usando la formula
anterior.

Calibración
El procedimiento es standarizado por promedios de la
absorción milimolar de NADH tomada como 6.22 a 340nm
bajo las condiciones de la prueba descritas.

Control de Calidad
La integridad de la reacción debe ser monitoriada con el uso
de dos niveles de control con valores de ALT conocidos

Valores esperados
Hasta 36 U/L a 37°C
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango normal.