OBSERVACIÓN MICROSCOPICA Y TÉCNICAS DE COLORACIÓN

Pre informe de Laboratorio-segunda práctica

Angie Katherin Lache Peñaranda

1016112411

Universidad Central

2019
 OBJETIVOS

 Utilizar correctamente el microscopio.

 Observar macroscópicamente bacterias, levaduras y hongos filamentosos.

 Observar y determinar estructuras microscópicas.

MARCO TEÓRICO

Se define la microscopía como la observación de objetos muy pequeños bajo grandes

aumentos. Los aparato que se usan para ello se denominan microscopios

El estudio detallado de los componentes de células y tejidos animales o vegetales, por el

tamaño que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar muchas veces más

la imagen de las estructuras que los constituyen. El instrumento que fue empleado por los

primeros biólogos para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. Es decir el

microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas.

Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar

imágenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar:

a) Microscopio fotónico simple o lupa(instrumento de amplificación de imágenes que

consiste en la utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico.

Dependiendo de la curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas pueden ampliar las

imágenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces. Forman una imagen de mayor

tamaño, derecha y virtual)

b) Microscopio fotónico compuesto. Se emplea actualmente y tiene sus antecesores en los

instrumentos ópticos desarrollados. El microscopio es el instrumento más utilizado en el

estudio de células y tejidos. Se fue perfeccionando, tanto en su parte óptica como en su parte
mecánica, gracias a los adelantos tecnológicos aplicados a los componentes antes

mencionados. Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización

de tres sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y

divergentes. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares. En la

actualidad, el microscopio fotónico es un instrumento de uso cotidiano en los laboratorios de

investigación y de diagnóstico así como en las aulas de enseñanza de Biología, Embriología,

Histología, Microbiología y Patología

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO.

a) COMPONENTES MECÁNICOS: Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y

sujeción de los sistemas ópticos y de iluminación así como de los objetos que se van a

observar.

b) Base o pié. Es un soporte metálico, amplio y sólido en donde se apoyan y sostienen

los otros componentes del microscopio.

c)  Brazo, estativo o columna. Permite la sujeción y traslado del microscopio. Soporta

al tubo óptico, a la platina y el revolver.

d)  Platina. Superficie plana de posición horizontal que posee una perforación circular

central.
 e)  Tubo óptico. Es un componente que gira alrededor de un eje con la finalidad que

los objetivos que sostiene coincidan de manera perpendicular con la perforación

central de la platina. En su superficie inferior posee varios agujeros donde se

atornillan los objetivos.

f)  Tornillos macrométrico y micrométrico. Generalmente están situados en la parte

inferior del brazo o columna. Pueden estar separados (en los 2 microscopios antiguos)

o el tornillo micrométrico está incorporado en la circunferencia del tornillo

macrométrico (microscopios actuales). Ambos tornillos permiten el desplazamiento

de la platina hacia arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la

preparación hacia los objetivos y así conseguir un enfoque óptimo de la imagen.

g) El macrométrico produce desplazamientos evidentes y rápidos de la platina, en

cambio el tornillo micrométrico produce movimientos imperceptibles de la platina y

sirve para efectuar el enfoque fino y definitivo de la imagen.

 Engranajes y cremallera. Constituyen mecanismos de desplazamientos de las

diferentes partes del microscopio.

 Cabezal. Es un componente situado en relación con el tubo del microscopio que

alberga principalmente prismas o espejos que sirven para acondicionar en él dos o

más oculares, o sistemas mecánicos que soportan cámaras fotográficas, de vídeo o

sistemas de proyección de la imagen.

b) COMPONENTES ÓPTICOS: Son los objetivos, los oculares, el condensador y los

prismas. Los tres primeros están constituidos por sistemas de lentes positivos y negativos.

 Condensador: Es el componente óptico que tiene como función principal concentrar y

regular los rayos luminosos que provienen de la fuente luminosa

 Objetivos. Los objetivos están considerados los elementos más importantes en la

formación de la imagen microscópica, ya que estos sistemas de lentes establecen la

 calidad de la imagen en cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los

detalles de la misma (poder de resolución).

 Ocular. Es otro componente óptico del microscopio, debe su nombre porque la imagen

final se observa a través de él acercando el ojo a la lente “ocular” del componente. Es el

encargado de formar una segunda imagen a partir de la imagen primaria que forma el

objetivo. La imagen del ocular es de mayor tamaño, virtual y derecho. Esta imagen

únicamente amplía un número determinado de veces (5x, 8x, 10x, 12x) a la imagen

formada por el objetivo. No añade, por más aumentos propios que posea, ningún detalle a

los generados por el objetivo.

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio

para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado

a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han

ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos en los que se

incluyen bacterias, parásitos y hongos. La tinción de Gram se considera básica en la

valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright

se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la

parasitología. (Luis Esaú López, Hernández, & Durán, 2013)

Figura 2. Fotomicrografía donde se observan bacterias Gram negativas en cultivo directo

(izquierda) y Gram positivas en hemocultivo (derecha) (aumento 100x).

 Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl Neelsen, que se

utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis,

o la tinción de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de

los hongos. (Luis Esaú López, Hernández, & Durán, 2013)

Figura 3. Fotomicrografía detrofozoitos jóvenes de Plasmodium vivax observados mediante

la tinción de Wright (aumento 100x). (Luis Esaú López, Hernández, & Durán, 2013)

METODOLOGÍA

PREPARACIÓN Y
OBSERVACIÓN DE
MUESTRAS DE YOGURT

Limpiar el portaobjetos Colocar una laminilla y Para el mayor aumento

observar al mayor aumento. colocar aceite de
V inmersión sobre laminilla

Colocar una gota de agua Dejar secar, flameando el

destilada en el portaobjeto portaobjetos o al aire libre Limpiar muy bien el
objetivo con papel de
V arroz.

Esterilizar el asa bacteriológica

con el mechero hasta el rojo vivo Fijar la muestra al portaobjetos
Fin
V

Con el asa estéril y fría tomar Extenderla sobre la gota de

una pequeña cantidad de yogur agua destilada
 OBSERVACIÓN
DE BACTERIAS
DEL AIRE

Realizar observación macroscópica sin

abrir la caja

Para la observación microscópica Fin

encender dos mecheros entre la caja

Flamear un asa hasta el rojo vivo para Tomar fotos y realizar las
esterilizarla descripciones

Abrir la caja con la bacteria Dejar secar la lámina y determinar la

forma, tinción de Gram que presenta

Enfriar el asa colocándola por ambos

lados en el medio de la caja donde no se
vea microorganismos para enfriarla y
luego cerrarla

Tomar una gota de agua estéril con el

asa y colocar en la lámina Realizar la coloración de Gram

Dejar secar la muestra al aire libre

Flamear el asa y dejarla enfriar o levemente con el mechero

Extender con el asa la muestra sobre la

lámina que contiene el agua Flamear el asa
 OBSERVACIÓN
DE PROTISTOS

Limpiar el portaobjetos

Tome una gota de solución

de protozoos

Colocar en el portaobjetos

Observar en 10X y 40x

Fin
 Observación de hongos
filamentosos

Realizar observación macroscópica

Para realizar la observación microscópica

encender dos mecheros

Colocar los mecheros entre la caja de hongos y

la persona

Seleccionar colonias para hacer las improntas

Cortar segmentos de cinta de 1 𝑐𝑚2

Pegar los segmentos de cinta en un asa

micológica

Poner una gota de azul de algodón en el

portaobjetos

Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la parte

superior de hongo.

Colocar la cinta sobre la gota de azul de

algodón y poner otra gota de azul de algodón.

Colocar un cubreobjetos sobre la preparación.

Observar en 40x.
 Observación de
levaduras

Realizar observación
macroscópica

Realizar una solución acuosa de levadura.

En un tubo de ensayo agregar azúcar, levadura y agua,

agitándolo hasta que quede lechoso

Colocar uno a 37°c

Repartir la solución en dos por 24 horas
tubos de ensayo

Colocar una gota de la solución en

el portaobjetos

Poner un cubreobjetos sobre la

preparación.

Secar la cara inferior del

portaobjetos con papel secante

Observar en 10X y 40x