Mendoza Medina, Luis Hernan y Ramírez Lecca, Joe Luis

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y

PARASITOLOGÍA
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
Efecto de la concentración de un consorcio microbiano nativo

en la degradación de materia orgánica de las aguas residuales
FO
IN
del canal de regadío “Santa Rosa” – Distrito de Santa Rosa,

DE
provincia de Chepén, 2015.

AS
EM
TESIS
ST
PARA OBTENER EL TÍTULO DE

SI
DE
BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO
N
IO
CC
AUTOR: Br. Luis Hernan Mendoza Medina

RE
Br. Joe Luis Ramírez Lecca

DI
ASESOR: Ms. C. Jaime Enrique Agreda Gaitán.

TRUJILLO – PERU
2016
2016
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO
N
IÓ
AC
IC
UN
Dr. ORLANDO GONZÁLES NIEVES
M
RECTOR
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ

EM
VICE-RECTOR ACADÉMICO
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
Dr. STEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA
PROFESOR SECRETARIO GENERAL
ii
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
N
IÓ
AC
Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO
IC
UN
DECANO (e)
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
Dr. ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI

IN
DE
PROFESOR SECRETARIO
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
Dra. EVA VILLANUEVA TARAZONA

DI
DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
iii
DEL ASESOR
El que suscribe, Asesor de la presente Tesis titulada:
Efecto de la concentración de un consorcio microbiano nativo en la degradación de materia
N
IÓ
orgánica de las aguas residuales del canal de regadío “Santa Rosa” – Distrito de Santa
AC
Rosa, provincia de Chepén, 2015.
IC
UN
CERTIFICA
M
CO
Que la investigación ha sido ejecutada de conformidad con su correspondiente proyecto y
Y
con las debidas orientaciones brindadas a los tesistas.
A
IC
ÁT
Respecto al informe, éste ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias
RM
pertinentes, por lo que autorizo a Br. Luis Hernan Mendoza Medina y a Br. Joe Luis
FO
Ramírez Lecca continuar con los trámites correspondientes.

IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
____________________________________
IO
CC
Ms. C. Jaime Enrique Agreda Gaitán

RE
ASESOR
DI
iv
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:
En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y
N
IÓ
Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, ponemos a vuestra consideración y criterio
AC
el trabajo de investigación titulado: Efecto de la concentración de un consorcio microbiano
IC
UN
nativo en la degradación de materia orgánica de las aguas residuales del canal de regadío
M
“Santa Rosa” – Distrito de Santa Rosa, provincia de Chepén, 2015. Con el propósito de
CO
obtener el Título Profesional de Biólogo – Microbiólogo.
Y
A
Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones
IC
ÁT
cometidos en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen.
RM
FO
IN
DE
Trujillo, Mayo 2016

AS
EM
ST
SI
DE
_______________________________ _______________________________
N
IO
Luis Hernan Mendoza Medina Joe Luis Ramírez Lecca

CC
Bachiller en Ciencias Biológicas Bachiller en Ciencias Biológicas

RE
DI
MIEMBROS DEL JURADO
N
IÓ
AC
________________________________________
IC
Dr. JUAN GUEVARA GONZÁLES
UN
PRESIDENTE
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
_______________________________________
IN
Dr. ANIBAL QUINTANA DÍAZ

DE
SECRETARIO
AS
EM
ST
SI
DE
N
____________________________________
IO
CC
Ms. C. JAIME ENRIQUE AGREDA GAITÁN

RE
VOCAL
DI
vi
APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente
informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo
N
IÓ
APROBADO por UNANIMIDAD.
AC
IC
UN
M
CO
________________________________________
Y
Dr. JUAN GUEVARA GONZÁLES
A
PRESIDENTE
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
_______________________________________
EM
Dr. ANIBAL QUINTANA DÍAZ

ST
SECRETARIO
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
____________________________________
Ms. C. JAIME ENRIQUE AGREDA GAITÁN
VOCAL
vii
DEDICATORIA
Autor 1.
Al creador de los cielos y la tierra, rey de reyes y señor de señores, por ser mi
N
IÓ
mayor motivación, mi sustento, el que me ha dado la capacidad y fortaleza para que este
AC
sueño se haga realidad y porque todos mis logros son el resultado de su ayuda.
IC
UN
M
CO
A mis padres Ana Bertha Medina Quispe y Eleazar Mendoza Ventura, por su
Y
A
gran apoyo, su infinito amor y comprensión para seguir adelante cumpliendo mis metas,
IC
ÁT
porque son ellos quienes me impulsan a seguir adelante. Este triunfo es de ellos también.
RM
FO
IN
A mis abuelos, por darme la fuerza para continuar y ver la vida con optimismo, y
DE
aunque ya no estén conmigo me enseñaron que confiando en Dios todo es posible .Olga
AS
Quispe Días, María ventura Facho, Juan Pablo Medina Zambrano y Pedro Gabriel
EM
Mendoza Barrionuevo. Gracias por ese amor hasta el último de sus días.
ST
SI
DE
Gracias a todas aquellas personas que están y estuvieron a mi lado, y quienes

N
IO
fueron importantes para la realización de esta tesis. Con todo mi cariño este logro se lo
CC
dedico a ustedes.
RE
DI
viii
AGRADECIMIENTOS.
Autor 1.
N
IÓ
AC
Un agradecimiento especial a mi Asesor de tesis Ms. C. Jaime Enrique Agreda
IC
UN
Gaitán, por ser una gran ayuda en la realización de esta investigación, por ser más que un
M
maestro, un gran amigo y guía, por sus consejos, críticas y enseñanzas; y porque supo
CO
encaminarme para la realización de esta investigación.
Y
A
IC
ÁT
RM
A Mis grandes amigos Juan Diego Vidal Campos, Miguel Ramírez Soto, Julio
FO
Cesar Agustín Junior Padilla Mozo, HeLí Alonso Novoa García, Joe Luis Ramírez Lecca,
IN
Walter Andrés Rojas Villacorta, Miguel Muñoz Ríos y a mi primo Roberto Germán Pérez
DE
Medina por estar a mi ladro todo este tiempo, brindándome su apoyo y amistad sincera.
AS
EM
ST
A los señores trabajadores de la sección técnica del departamento de

SI
Microbiología y Parasitología. Al señor Carlos Alberto Guzmán Delgado y al señor

DE
Victor Manuel Acosta Cadenillas. Por colaborar para la realización de esta tesis.
N
IO
CC
RE
A mi hermano Juan. Quien es un ejemplo a seguir para mí. Gracias por tu apoyo y
DI
sinceridad
ix
DEDICATORIA
Autor 2.
Esta tesis la dedico a mi Dios y a nuestra Madre Santísima por darme la fuerza
N
IÓ
para seguir adelante y no desmayar ante los problemas presentados, enseñándome a
AC
encarar las adversidades sin perder nunca la dignidad ni desfallecer en el intento.
IC
UN
M
CO
A mis amados padres Silvia Juana Lecca Bocanegra y José Luis Ramírez Zelada
Y
A
que me han dado la existencia; y en ella la capacidad por superarme y desear lo mejor en
IC
ÁT
cada paso por este camino difícil y arduo de la vida. Gracias por ser como son, porque su
RM
presencia y persona han ayudado a construir y forjar la persona que ahora soy.
FO
IN
DE
A mi preciosa hija Lucía Valentina Ramírez Trujillo a quien amo demasiado, por
AS
quien ningún sacrificio es suficiente, ya que con su luz ha iluminado mi vida y hace mi
EM
camino más claro. Por ser mi fuente de motivación e inspiración para poder superarme
ST
SI
cada día más y así poder luchar para que la vida nos depare un futuro mejor.
DE
N
IO
A mi amada esposa Diana Patricia Trujillo Alayo por creer en mi capacidad, porque
CC
RE
siempre ha estado brindándome su comprensión, cariño y amor incondicional. No fue

DI
sencillo culminar con éxito este proyecto, sin embargo siempre fuiste muy motivadora y
esperanzadora, me decías que lo lograría perfectamente. Me ayudaste hasta donde te era
posible, incluso más que eso.
AGRADECIMIENTOS.
Autor 2.
N
IÓ
AC
Mi agradecimiento y estima especial a mi Asesor de tesis Ms. C. Jaime Enrique
IC
UN
Agreda Gaitán, por haberme brindado la oportunidad de recurrir a su capacidad y
M
conocimiento científico, así como también haberme tenido la paciencia necesaria para
CO
guiarme durante todo el desarrollo de la tesis.
Y
A
IC
ÁT
RM
A Mis hermanos Michael y Kevin, que más que mis hermanos somos mis
FO
verdaderos amigos y sé que siempre contare con ellos.

IN
DE
AS
A mi amiga incondicional que sin pedir nada dio todo cuanto pudo, aunque ahora
EM
no te tenga conmigo siempre estarás en mi corazón y en mi mente.

ST
SI
DE
A mi amigo, compañero y socio Luis Hernan Mendoza Medina que a pesar de nuestras
N
IO
diferencias en ideas aprendimos a comprender cuál era nuestro objetivo en este camino
CC
arduo. Mis mejores deseos para ti ahora y en tu futuro.

RE
DI
xi
ÍNDICE
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……...….……..ii
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS…………...…….iii
N
IÓ
DEL ASESOR……………………………………………………………………………..iv
AC
IC
PRESENTACIÓN……………………………………………………………………........v
UN
M
MIEMBROS DEL JURADO…………………………………………………………….vi
CO
Y
APROBACIÓN………………………………………………………………................vii
A
IC
DEDICATORIA AUTOR 1………………………………………………………...……viii ÁT
RM
AGRADECIMIENTO AUTOR 1…………………………………………………………ix

FO
DEDICATORIA AUTOR 2……………………………………………………………….x

IN
DE
AGRADECIMIENTO AUTOR 2………………………………………………………..xi

AS
EM
ÍNDICE……………………..…………………………………………………………..…xii
ST
RESUMEN…………………………………………………………………….............xvii
SI
DE
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………….1
N
IO
MATERIAL Y MÉTODO………………………………………...……………….……13
CC
RE
1. MATERIAL DE ESTUDIO ……………………………………………...............13

DI
1.1 Material………………………………………………………………………..13
2. MÉTODO……………………...………………………….....................................13
2.1 Recolección De La Muestra……………………..…………………………….13
2.2 Preparación y prueba de los biorreactores…………………………………….14
xii
2.3 Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del
inóculo……………………………………………………………………....15
A. Aislamiento del consorcio microbiano nativo a partir del sedimento
de las aguas residuales colectadas del canal de regadío “Santa
N
IÓ
Rosa”………………………………………………………………15
AC
B. Preparación de los inóculos………………………………………..16
IC
UN
2.4 Degradación de la materia orgánica del agua residual en los biorreactores tipo
M
Airlift de aireación interna…………………………………………………....16
CO
2.5 Monitoreo y control de la degradación. ………………………………………17
Y
A
A. Recuento total de bacterias Aerobias Mesófilas Viables
IC
ÁT
(RTBAMV)…………………………………………………….….17
RM
B. Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno

FO
(D.B.O.)…………………………………………………………....17
IN
C. Determinación de la Materia Orgánica Consumida

DE
(M.O.C.)………………………………………………………...…17
AS
EM
D. Determinación de Coliformes Totales……………………………..18

ST
E. Medición de pH y Temperatura…………………………………..18
SI
2.6 Análisis Estadístico…………………………………………………………....18

DE
RESULTADOS……………………………………………………………………............19
N
IO
DISCUSIÓN………………………………………………………………………………25
CC
CONCLUSIÓN……………………………………………………………………………31
RE
RECOMENDACIONES………………………………………………………………..…32
DI
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………………………………….33
ANEXOS………………………………………………………………………….............39
xiii
Anexo 01. Ubicación geográfica y localización satelital de la provincia de Chepén en el
departamento de la libertad………………………………………………..….40
Anexo 02. Plano del recorrido del caudal de la acequia “Santa Rosa”……………….....41
Anexo 03. Plano de ubicación de los puntos de toma de muestra para la
N
IÓ
investigación………………………………………………………………….42
AC
Anexo 04. Características físicas preliminares del agua residual proveniente del efluente
IC
formado por el canal de regadío “Santa Rosa” del centro poblado “Santa
UN
M
Rosa”, antes del tratamiento……………………………………………..……43
CO
Anexo 05. Vista de los biorreactores Airlift de 3L de capacidad con 2.5L de volumen de
Y
trabajo, usado para la determinación de la capacidad degradativa del Consorcio
A
Microbiano Nativo…………………………………………………………....44
IC
ÁT
RM
Anexo 06. Vista de los biorreactores Airlift de 3L de capacidad con 2.5L de volumen de
FO
trabajo, usado para la determinación de la capacidad degradativa del Consorcio

IN
Microbiano Nativo………………………………………………………….45
DE
Anexo 07. Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del

AS
inóculo………………………………………………………………………46
EM
Anexo 08. Determinación de oxígeno disuelto y la demanda bioquímica de

ST
SI
oxigeno……………………………………………………………………..…47
DE
Anexo 09. Variación de los parámetros evaluados (DBO5, MOC, BAMV, CT) durante el
N
tratamiento de las muestras residual proveniente del efluente del canal de

IO
CC
regadío “Santa Rosa”…………………………………………………………49

RE
Anexo 10. Promedio de la variación en mg 02/L de la Demanda Bioquímica de Oxígeno

DI
(DBO5), a partir de diferentes concentraciones de consorcio microbiano
nativo , durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7……………...50
xiv
Anexo 11. Promedio en mg/L de materia Orgánica Consumida (MOC), a partir de
diferentes concentraciones de consorcio microbiano nativo, durante 12 días de
tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7……………………………………….…51
Anexo 12. Porcentaje de Materia Orgánica Consumida (MOC), a parir de diferentes
N
IÓ
concentraciones de consorcio microbiano nativo, durante 12 días de
AC
tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH7……………………………………………....52
IC
Anexo 13. Variación del porcentaje de materia Orgánica Consumida (MOC), a partir de
UN
M
CO
tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7…………………………………………53
Y
Anexo 14. Promedio del recuento microbiano en UFC/mL, a partir de diferentes
A
IC
concentraciones de consorcio microbiano nativo, durante 12 días de
ÁT
RM
tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7…………………………………….……54

FO
Anexo 15. Promedio del Número de Coliformes Totales en col/100mL, a partir de

IN

DE
tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7………………………………………….55

AS
Anexo 16. Se muestran las características culturales y microscópicas de las bacterias

EM
aisladas a partir del sedimento del agua residual proveniente del canal de
ST
SI
regadío “Santa Rosa” e identificadas mediante el Sistema Automatizado Micro

DE
Scan………………………………………………………………………….56
N
Anexo 17. Observaciones macroscópicas microscópicas de las bacterias aisladas a partir

IO
CC
de sedimento del agua residual proveniente del canal de regadío “Santa Rosa”
RE
e identificadas mediante el Sistema Automatizado Micro Scan…………….57

DI
Anexo 18. Resultados de la identificación bacteriana mediante el Sistema Automatizado
Micro Scan, realizado en el laboratorio de Microbiología del Hospital Belén de
Trujillo en Agosto del 2015…………………………………………….……58.
xv
Anexo 19. Promedio de datos experimentales de cuatro variables durante el tratamiento de
agua residual utilizando un Consorcio Microbiano Nativo…………………..61
Anexo 20. Análisis de varianza para cada una de las variables respuesta en función del
factor Consorcio Microbiano Nativo…………………………………...…….62
N
IÓ
Anexo 21. Análisis de varianza para cada una de las variables respuesta en función del
AC
factor Consorcio Microbiano Nativo………………………………………....63
IC
Anexo 22. PRUEBA DUNCAN para la comparación de tratamientos en cada una de las
UN
M
variables respuestas en función del factor Consorcio Microbiano
CO
Nativo…………………………………………………………………………64
Y
Anexo 23. Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para la DBO5 y MOC en función del factor
A
Consorcio Microbiano Nativo……………………………………………..….65
IC
ÁT
RM
Anexo 24 Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para las BAMV y Coliformes Totales

FO
(NMP) en función del factor Consorcio Microbiano Nativo……………......66

IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
xvi
RESUMEN
Se determinó cuál es el efecto del inóculo de un consorcio microbiano nativo en la
degradación de materia orgánica de las aguas residuales colectadas del canal de
N
regadío “Santa Rosa” –Distrito Santa rosa, Provincia de Chepén 2015. Para
IÓ
AC
llevar a cabo el procesamiento de las muestras de agua residual, se utilizaron
IC
cuatro biorreactores tipo Airlift de aireación interna, cada uno de los cuales
UN
M
contenía agua a tratar, además se le agrego una concentración especifica de
CO
consorcio microbiano nativo (5%, 10%, 15%), proveniente del sedimento de estas
Y
A
mismas aguas y constituidos por 5 diferentes cultivos bacterianos, y un testigo
IC
ÁT
solo con agua residual. El proceso fue monitoreado cada 48horas durante 12
RM
días; a una temperatura de 30° C y un pH de 7 y se evaluaron parámetros tales

FO
IN
como Demanda Bioquímica De Oxigeno, Recuento De Bacterias Aerobias

DE
Mesófilas Viables Y Coliformes Totales. Al realizar el análisis estadístico se llegó

AS
a la conclusión que una mayor concentración de inoculo del consorcio microbiano

EM
ST
nativo aislado (15%), se obtiene una mayor degradación de la materia orgánica

SI
contenida en las aguas residuales del canal de regadío “Santa Rosa” –Distrito
DE
Santa rosa, Provincia de Chepén.

N
IO
CC
RE
DI
xvii
I. INTRODUCCIÓN
Chepén (proviene del nombre del Cacique Francisco Chepén, de la cultura
Mochica) es una ciudad peruana, que pertenece a la Región La Libertad, y es capital de
la Provincia de Chepén, la ciudad es más conocida como “La Bendita perla del Norte”,
N
IÓ
y también se le denomina Perla del Norte, porque en su territorio se cosecha arroz,
AC
principalmente. Está ubicada al costado de la Panamericana norte a unos 130 km de la
IC
UN
ciudad de Trujillo. A sus habitantes se les conoce por el gentilicio Chepenanos1, 2.
M
CO
Tiene cuatro estaciones. Gracias al reservorio Gallito Ciego, es un lugar productivo
Y
de arroz y caña de azúcar y plantas frutales, especialmente con una variedad de mango3.
A
IC
Sin embargo con el aumento de la población y las necesidades creadas se fueron
ÁT
multiplicando también los problemas tales como el que ocasionan las aguas residuales 4,
RM
5
FO
, las cuales están íntimamente relacionadas con la contaminación ambiental, ya que son
IN
fuente rica en materiales orgánicos que sirven como nutrimentos para la gran cantidad
DE
de microorganismos causantes de enfermedades6,7.

AS
EM
ST
Bajo la terminología de aguas residuales se agrupan habitualmente aguas de

SI
orígenes muy diversos. Se encuentran, pues, en esta categoría las aguas de origen
DE
urbano formadas por las aguas domésticas (lavado corporal y de la ropa, lavado de
N
IO
locales, aguas de cocina, etc.) y las aguas residuales cargadas de heces y orina; toda esta
CC
masa de efluentes está más o menos diluida por las aguas de lavado de los servicios
RE
públicos y las aguas pluviales8, 9, 13.

DI
Pueden añadirse según los casos las aguas de origen industrial y agrícola. El agua,
así colectada en una red de alcantarillado, aparece como un líquido turbio, generalmente
grisáceo, que contiene materias en suspensión de origen mineral y orgánico en
cantidades extremadamente variables. A esta carga se asocian casi siempre materias
grasas y coloidales9, 10.
N
IÓ
La descomposición de esta materia orgánica puede conducir a la generación de
AC
grandes cantidades de gases malolientes debido a la acción de numerosos
IC
microorganismos presentes en las aguas residuales. A ello se suma cantidades elevadas
UN
M
de principios nutritivos orgánicos e inorgánicos que provocan el desarrollo exuberante y
CO
acelerado de diversas especies de bacterias y hongos como respuesta a los suministros
Y
ricos en nutrientes presentes en las aguas residuales11, 12.
A
IC
ÁT
RM
Durante el periodo de rápida asimilación de nutrientes, la reproducción bacteriana

FO
alcanza lo óptimo y la utilización de oxígeno disuelto es aproximadamente proporcional

IN
a la cantidad de materia orgánica o de alimento utilizado9, 20, 21, 22, 23. Así mismo, suelen
DE
contener compuestos tóxicos que son altamente contaminantes para un determinado

AS
ecosistema ya que inhiben el desarrollo de la microflora o incluso la aniquilan en gran

EM
parte13, 14,15.
ST
SI
Aunque la contaminación es un problema serio, es por supuesto deseable que el

DE
ciudadano sea consciente de ello y corrija el deterioro del medio ambiente antes de que
N
sea demasiado tarde16, 17.

IO
CC
RE
El tratamiento de aguas residuales se inició en Inglaterra a finales del siglo XIX y

DI
principios del XX para controlar los brotes infecciosos en las ciudades. Históricamente,
el primer objetivo del tratamiento de aguas era reducir el contenido de materia orgánica
en suspensión17. El tratamiento de aguas residuales es un área en la que se fusionan dos
especialidades, la ingeniería y la biología (Bioingeniería)18. Por mucho tiempo, se ha
echado mano de la ingeniería como único medio de solución a los problemas de
limpieza de aguas residuales obteniendo soluciones limitadas debido a que se ha dejado
de lado el aspecto biológico del tratamiento de aguas19,20.
N
IÓ
Hoy por hoy, se ha cambiado la manera de concebir el tratamiento de aguas,
AC
tomando mucho más en cuenta el papel que juegan las bacterias que habitan
IC
naturalmente en las aguas residuales21. Evaluando aspectos vitales como el ambiente en
UN
M
el que se desarrollan, nutrientes disponibles, oxigeno disponible, temperatura, pH, etc.;
CO
demostrando que los microorganismos biorremediadores actúan de modo más eficiente,
Y
trabajando en conjunto, es decir, formando consorcios debido a que así desempeñan
A
funciones sinérgicas que complementan mutuamente su metabolismo22, 23.
IC
ÁT
RM
FO
Los consorcios microbianos logran degradar la materia orgánica a mayores

IN
velocidades que las tecnologías de biorremediación y por su bajo costo frente a los
DE
métodos físicos y químicos han sido históricamente las tecnologías de tratamiento más
AS
utilizadas24. Estas tecnologías son menos costosas porque las reacciones de degradación
EM
mediadas por la actividad biocatalítica natural, se producen a velocidades rápidas a

ST
SI
temperatura ambiente, por lo que, los costos energéticos de tratamiento son

DE
relativamente bajos25.
N
IO
CC
Las aguas residuales poseen una microflora característica que está compuesta
RE
principalmente de bacterias de la putrefacción como los géneros Pseudomonas, Proteus,

DI
Bacillus, Aerobacter y Zooglea; además de microorganismos sacarolíticos y los que
degradan el almidón, las grasas, la úrea y la celulosa. La proporción de coliformes en
aguas residuales es relativamente alta, constituyendo Escherichia coli un indicador
importante de la impurificación del agua con materias fecales26, 27.
Las cargas contaminantes a veces rebasan el poder autodepurador de los cauces
N
IÓ
receptores. Los pretratamientos e incluso un tratamiento primario no son suficientes
AC
para poder realizar el vertido sin problema. Por lo que se hace necesario recurrir a un
IC
tratamiento integrado de tales vertimientos usando tecnologías que empleen tanto
UN
M
microorganismos naturales como biorreactores28, 29.
CO
El biorreactor, es sin duda, uno de los equipos fundamentales de los bioprocesos
Y
industriales. Es el recipiente donde se realiza el cultivo, y su diseño debe ser tal que
A
IC
asegure un ambiente uniforme y adecuado para los microorganismos; debe proveer
ÁT
RM
todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como mezclado,
FO
termostatización, suministro de oxígeno, entradas para adición de nutrientes y control

IN
del pH4. Todos estos beneficios permiten reducir la concentración de contaminantes

DE
presentes en las aguas residuales hasta conseguir niveles aceptables30, 31.

AS
EM
En el ámbito de laboratorio existen dos tipos o diseños básicos de biorreactores con

ST
SI
aireación; ambos, de uso muy difundido: el primero es tanque agitado con línea de
DE
aireación y el segundo es el de levantamiento por aire o "Airlift"4. De este último existe

N
también dos modelos: el "Airlift" de aireación interna y el "Airlift" de aireación

IO
CC
externa32.
RE
Para la degradación de materia orgánica presente en aguas residuales, se ha

DI
demostrado que el biorreactor "Airlift" de aireación interna es más eficiente, ya que en
este biorreactor es el mismo aire inyectado al cultivo lo que promueve la agitación
generando de este modo una circulación de líquido ascendente en el compartimento
interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado. Este proceso resulta
más económico ya que requiere menos energía que la agitación mecánica; y también se
superan los inconvenientes de la cizalladura de los microorganismos y de catalizadores
inmovilizados, que ocurren por estrés mecánico en los bioprocesos provistos de un
N
IÓ
agitador rotativo35, 36.
AC
IC
A nivel mundial se están llevando a cabo muchos estudios sobre el tratamiento de
UN
M
aguas residuales; la O.N.G. Izunome, actualmente está realizando estudios de
CO
factibilidad y eficacia de un consorcio de Microorganismos Eficaces (EM), este
Y
consorcio contiene varios tipos de microorganismos con funciones diferentes, los cuales
A
IC
a través de mecanismos especiales coexisten en medio líquido28. Las principales
ÁT
RM
especies de microorganismos del consorcio EM incluyen: Bacterias Ácido Lácticas:

FO
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Streptococcus lactis; Bacterias

IN
Fotosintéticas: Rhodopseudomonas palustrus, Rhodobacter spaeroides; Levaduras:

DE
Saccharomyces cerevisiae, Candida utilis; Actinomycetes: Streptomyces albus,

AS
Streptomyces griseus; y Hongos Fermentativos: Aspergillus oryzae, Mucor hiemalis37.

EM
ST
SI
Estos microorganismos están siendo utilizados con muy buenos resultados en

DE
Japón y Brasil para mejorar las condiciones físicas, químicas y biológicas del suelo para
N
la obtención de productos agrícolas de bajo costo, más saludables para el consumidor y

IO
CC
que no afectan el medio ambiente, también son utilizados para tratamiento de aguas
RE
residuales por su capacidad de reducir compuestos tóxicos, dando excelentes resultados

DI
en la efectividad y eficiencia del proceso de lodos activados; e incluso se ha demostrado
experimentalmente que incorporan el Cs 137 de suelos de Chernobyl, reduciendo
considerablemente el nivel de contaminación radioactiva, de estos suelos33, 34.
Por otro lado, existen empresas como Alianza con la Biosfera (AliBio) que
emplean microorganismos para elaborar sus productos; los cuales han resultado
altamente eficientes en la degradación de compuestos contaminantes. Este laboratorio
ha conseguido cultivar estas bacterias “benéficas” por medio de la Biotecnología.
N
IÓ
Gracias a esta herramienta, han creado el producto AliBio WA, producto
AC
específicamente diseñado para las plantas de tratamiento de aguas residuales, el cual ha
IC
probado ser muy efectivo en la disminución de materia orgánica, disminución en
UN
M
niveles de DBO, DQO y malos olores, además de promover la nitrificación y
CO
desnitrificación (remoción de nitrógeno)40. Este producto, es una mezcla sinérgica de
Y
bacterias del género Bacillus destacando las siguientes especies Bacillus subtilis,
A
IC
Bacillus polimyxa, Bacillus licheniformis, Bacillus stearothermophilus, Bacillus sp.,
ÁT
RM
Bacillus megaterium; y bacterias de género Pseudomonas destacando Pseudomonas

FO
fluorescens. Estas bacterias han sido seleccionadas naturalmente por su capacidad para
IN
degradar, de manera eficiente, la materia orgánica soluble contenida en las aguas

DE
residuales. Gracias al consumo de la materia orgánica lograron alcanzar gran estabilidad

AS
en los reactores biológicos aerobios e incluso un incremento en eficiencia en cuanto a

EM
remoción de materia orgánica, DBO5, DQO y disminución de olores; mejorando así la

ST
SI
sedimentabilidad de la biomasa, incluso en sistemas de tratamiento como los diseñados

DE
para aguas industriales, los cuales se caracterizan por tener alta carga orgánica y por la
N
presencia de compuestos xenobióticos. Los investigadores de esta empresa

IO
CC
determinaron que las bacterias contenidas en este producto pueden actuar en dos fases o
RE
etapas: una con oxígeno y otra sin oxígeno (aerobias y anaerobias) pero para que la
DI
degradación de materia orgánica se lleve a cabo, es necesario tener cierta cantidad de
oxígeno disuelto en el agua residual (4.0 mg/L) 40.
Así mismo, SOLUCIONES AMBIENTALES S.A actualmente fabrica y distribuye
la fórmula ENZICLEAN, biodegradador de materia orgánica presente en aguas
residuales. ENZICLEAN Industrial es una mezcla de bacterias aeróbicas, anaeróbicas y
facultativas, por lo que igualmente aceleran la degradación tanto en condiciones
N
IÓ
aeróbicas en Plantas de Tratamiento Aerobia, como en condiciones anaerobias en
AC
Plantas de Tratamiento Anaerobias y Lagunas de Oxidación. Su uso permanente
IC
permite ahorros de energía en las plantas de tratamiento aeróbicas debido a que se
UN
M
reducen los ciclos de aireación, dado que el grupo de bacterias de este producto es
CO
mucho más agresivo para degradar la materia orgánica que la flora natural. De esta
Y
manera, no solo se ahorra energía eléctrica sino que se reducen los tiempos de
A
IC
permanencia y la planta es capaz de procesar mayores cantidades de agua residual.
ÁT
RM
Igualmente, en las plantas de tratamiento anaeróbicas el beneficio de su uso permanente

FO
es la reducción de los tiempos de permanencia, permitiendo aumentar la velocidad de

IN
proceso y por consiguiente aumentando la capacidad de tratamiento de la planta;

DE
eliminando los malos olores asociados a la descomposición anaeróbica, ya que las

AS
bacterias sustituyen a la flora natural que produce los gases sulfurosos que causan mal
EM
olor produciendo solo CO2 como subproducto resultante de la digestión. De igual modo
ST
SI
este producto es claramente una solución para lagunas de oxidación saturadas o

DE
colapsadas y para plantas de tratamiento cuya cantidad de efluente recibido excede a su

N
capacidad de proceso. Todo se logra a través de un proceso costo-efectivo,

IO
CC
completamente natural y seguro para el medio ambiente41.

RE
DI
En Trabajos realizados en la Facultad de Ingeniería Ambiental de la Universidad
Nacional Autónoma de México (UNAM) se evaluó la capacidad de transformar los
contaminantes contenidos en las aguas residuales municipales, utilizando procesos
fermentativos con microorganismos facultativos bajo condiciones anaerobias y buscó la
solubilización del material orgánico contenido en el agua residual para producir ácidos
grasos volátiles (como el ácido acético) en un reactor anaerobio a nivel industrial. Las
reacciones desde este tipo son una forma económica de degradar tóxicos y otras
N
IÓ
sustancias de difícil degradación, contenidos en agua residual, y de reducir el contenido
AC
de material orgánico en suspensión. Para cumplir con sus objetivos llevaron a cabo el
IC
trabajo experimental en un reactor piloto discontinuo con microorganismos en
UN
M
suspensión. El reactor tuvo un volumen de 1800 litros y estuvo ubicado en la planta
CO
para tratamiento de aguas residuales de la Ciudad Universitaria de la UNAM. El reactor
Y
trabajó durante 154 días con ciclos de 8 horas bajo condiciones anaerobias. En la
A
IC
primera etapa experimental determinaron la mejor eficiencia del proceso con respecto a
ÁT
RM
la cantidad de contaminantes contenidos en el agua residual y suministrada a los

FO
microorganismos en un día (carga orgánica). En la segunda etapa aplicaron el intervalo

IN
seleccionado de carga orgánica para evaluar la eficiencia de la fermentación

DE
dependiendo de la temperatura y el pH. Cuando la aportación de contaminantes

AS
orgánicos (carga orgánica) fue baja, más del 75% de la materia orgánica disuelta en el
EM
agua residual fue transformada a ácidos grasos volátiles; el resto fue consumido por los
ST
SI
microorganismos en el proceso. Al reducir el pH de 7.0 a 5.5 el grado de acidificación

DE
se incrementó de 50 a 60%, pero quedó un 15% del material orgánico soluble sin
N
transformar. Con el aumento de temperatura de 22 a 31 °C se logró duplicar la

IO
CC
eficiencia de los procesos de fermentación de 33 a 66%, al no quedar material orgánico

RE
contaminante soluble sin transformar. Los ciclos fermentativos con mayor producción
DI
de ácidos grasos volátiles corresponden a una carga orgánica relativamente baja
(0.27kgDQO/kgSST•d), a un valor de pH de 6.5 y a una temperatura de 24 °C. La
forma más práctica y económica de aumentar la eficiencia de la fermentación anaerobia
de agua residual cruda resultó ser a través del control de la carga orgánica. La máxima
transformación del material orgánico en ácidos grasos volátiles (AGV) se obtuvo con la
carga orgánica media a alta (0.72 kgDQO/kgSST•d) al obtenerse 200 mg/L de AGV,
correspondiente al mayor grado de acidificación (55%) y las menores remociones de
N
IÓ
material orgánico de 20 a 25%. No existe diferencia significativa en cuanto a la
AC
cantidad total producida de AGV para el intervalo de pH experimentado. En cambio, la
IC
mayor remoción de DQO total (45%) y DQO soluble (40%) se presentó para valores de
UN
M
pH de 6.5 y 7.0, respectivamente. El material orgánico en suspensión se elimina sin una
CO
dependencia evidente de la temperatura. Sin embargo, la transformación de
Y
contaminantes orgánicos solubles se duplica de 33 a 66% al aumentar la temperatura en
A
9 °C42.
IC
ÁT
RM
FO
En Trujillo, también se han realizado algunos estudios relacionados con el

IN
tratamiento de aguas residuales tales como el realizado por Ortiz en el 2002, quien llevó
DE
a cabo el tratamiento de estas aguas residuales utilizando tres biorreactores Airlift, uno
AS
conteniendo el consorcio microbiano de Microorganismo Eficaces(EM), otro con el

EM
Consorcio Microbiano Lodo Activado (CMLA) y otro sin consorcio microbiano. El

ST
SI
agua residual fue diluida a la décima parte con agua residual estéril. Los consorcios
DE
microbianos (EM y CMLA) fueron agregados al sistema en un volumen de 125 mL

N
para cada biorreactor a una concentración de 107 cel/mL; obteniendo la mayor

IO
CC
eficiencia de degradación de la materia orgánica en el biorreactor con EM (56.51%),

RE
seguido en eficiencia por el biorreactor CMLA (32.39%), siendo menos eficiente el

DI
biorreactor Testigo (26.04%), no presentando diferencia significativa en la eficiencia de
la degradación de la materia orgánica43.
Cuenca en el 2004, determinó el efecto de la dilución del agua residual del camal
Yugo frío sobre su velocidad de degradación en un biorreactor Airlift suplementado con
enzimas inmovilizadas. El agua residual del camal fue diluida al 1/5, 1/10 y 1/20
utilizando agua destilada estéril, y la inmovilización de enzimas se realizó por el
N
IÓ
método de atrapamiento en gel de agarosa. Los biorreactores fueron cargados con las
AC
muestras diluidas y con las enzimas inmovilizadas, siendo la degradación del agua
IC
residual de camal controlada al inicio, intermedio y final del proceso que duró 6 días.
UN
M
Los parámetros que se evaluaron fueron: Recuento Total de Bacterias Aerobias
CO
Mesófilas Viables (RTBAMV), Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5), Materia
Y
Orgánica Consumida (MOC), Coliformes totales, pH y temperatura. Sin encontrar
A
IC
diferencia significativa entre las diluciones usadas; es decir, que cualquiera que sea la
ÁT
RM
dilución empleada en la degradación el consumo de materia orgánica es elevado, lo que

FO
significa que influye favorablemente en su degradación44.

IN
DE
Las fábricas de harina de pescado son las que producen contaminación del
AS
ambiente ya que presentan un sistema de tratamiento de sus desechos no satisfactorios;

EM
ante la inquietud de este grave problema, Jácobo en el 2000, evaluó el efecto de la

ST
SI
aireación en biorreactores Airlift de 4.5 litros con aireación interna y externa para el
DE
tratamiento de “Sanguaza”. La muestra fue diluida al 1/10 y fueron cargados cada uno
N
de ellos con 3.5 litros, en los que se evaluó paralelamente los siguientes parámetros:
IO
CC
Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5), Materia Orgánica Consumida (MOC),

RE
Recuento Total de Bacterias Aerobias Mesófilas Viables (RTBAMV), Coliformes

DI
totales, pH y temperatura. La carga orgánica presente, en el desecho pesquero
“Sanguaza”, fue monitoreada al inicio, intermedio y final del proceso por un periodo
entre 10 y 12 días. Se usaron muestras diluidas 10-12 para el RTBAMV y 0.1% para el
10
DBO5, así mismo se usó diluciones 10-6, 10-7, 10-8, para el recuento de coliformes
totales. Se encontró que el biorreactor de aireación interna tuvo mayor eficiencia de
degradación de la “Sanguaza” llegando a consumir 670.37 mg O2/L de materia
orgánica, siendo este consumo mayor al del biorreactor de aireación externa que llegó a
N
IÓ
consumir 533.06 mg O2/L, así mismo se presentó mayor velocidad de crecimiento de
AC
los microorganismos (RTBAMV). Determinando que no hubo diferencia significativa
IC
entre los tratamientos empleados; pero sí diferencia significativa en cuanto al tiempo
UN
M
empleado en el tratamiento del desecho pesquero “Sanguaza” 44, 46.
CO
Y
Díaz en el 2001, estableció el efecto de la dilución de la “Sanguaza” sobre su
A
IC
velocidad de degradación en biorreactor Airlift de aireación interna suplementado con
ÁT
RM
enzimas inmovilizadas. La “Sanguaza” fue diluida al 1/5, 1/10 y 1/20 utilizando agua
FO
destilada estéril, y la inmovilización de enzimas se realizó por el método de

IN
atrapamiento en gel de agarosa. Los biorreactores fueron cargados con las diluciones y
DE
con las enzimas inmovilizadas, siendo la degradación de la “Sanguaza” controlada al

AS
inicio, intermedio y final del proceso que duró 4 días. Los parámetros que se evaluaron
EM
fueron: Recuento Total de Bacterias Aerobias Mesófilas Viables (RTBAMV), Demanda

ST
SI
Bioquímica de Oxígeno (DBO5), Materia Orgánica Consumida (MOC), Coliformes

DE
totales, pH y temperatura. Los datos obtenidos fueron tratados mediante el Análisis de

N
Varianza, y mediante el Análisis de la Mínima Diferencia Significativa (MDS). Este

IO
CC
último indicó que es lo mismo utilizar la dilución 1/5 que la dilución 1/10, debido a que
RE
éstas presentaron igual velocidad de degradación de la “Sanguaza”; así como el mayor

DI
consumo de materia orgánica, lo que significa que “influyeron favorablemente” en su
degradación47.
11
Sin embargo, no se han encontrado reportes de investigaciones sobre el tratamiento de
las aguas residuales en la Provincia de Chepén.
El impacto que viene ocasionando la contaminación por aguas residuales afecta la
N
IÓ
producción de sus sembríos. Los habitantes buscan una mejora con el fin de devolver la
AC
calidad de las aguas anteriormente utilizadas tanto para el riego de sus cultivos como
IC
para su consumo.
UN
M
CO
Este canal de regadío alimenta una laguna, la cual contaba con una rica biodiversidad
Y
de especies animales que servían de alimento para los pobladores, pero que ahora se ve
A
IC
afectada en su totalidad por los altos índices de contaminación. Es por eso que el
ÁT
RM
presente trabajo estuvo orientado a determinar el efecto de un consorcio microbiano

FO
nativo en la degradación de materia orgánica de las aguas colectadas del canal de

IN
regadío “Santa Rosa”.

DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
12
II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1 Material de Estudio.
N
2.1.1 Material:
IÓ
AC
- Agua residual proveniente de aguas residuales colectadas del canal
IC
de regadío “Santa Rosa” –Distrito Santa rosa, Provincia de Chepén.
UN
M
CO
Y
2.2 Método.
A
IC
2.2.1 Recolección de la muestra. ÁT
A. Criterio de selección de la muestra.
RM
Para la elección de la zona de muestreo se consideró necesario

FO
IN
que la muestra proceda del tramo del efluente formado por los
DE
desagües de las casas alrededor de la acequia del centro poblado

AS
“Santa Rosa”, a fin de obtener muestras representativas del

EM
vertido.
ST
SI
DE
B. Recolección y conservación de la muestra.

N
Se recolectaron 12 litros de aguas residuales colectadas del canal

IO
CC
de regadío “Santa Rosa”, en baldes de plástico con capacidad de

RE
4 litros cada uno; previo al muestreo se tomó nota de las

DI
características físicas principales de cada muestra y se rotularon
cada una de ellas con la fecha, hora de recolección, temperatura
y zona de muestreo correspondiente. Posteriormente se conservó
13
las muestras en refrigeración para ser trasladadas hasta el
laboratorio de Biotecnología (Trujillo).
N
IÓ
2.2.2 Preparación y prueba de los biorreactores.
AC
Se acondicionaron cinco biorreactores de 3 Litros de capacidad del tipo
IC
UN
Airlift de aireación interna, para 2500 mL de volumen de trabajo; los cuales
M
fueron desinfectados con Hipoclorito de sodio al 5% y luz ultravioleta.
CO
Y
Para verificar el funcionamiento se hizo circular agua a través de cada
A
IC
biorreactor con el propósito de observar si la circulación es homogénea y
ÁT
descartar posibles filtraciones o fugas de líquido. El aire insuflado fue
RM
esterilizado por burbujeo en solución de cloruro de sodio al 15%. Los

FO
IN
biorreactores presentan dispositivos de toma de muestra y de salida de CO2

DE
respectivamente.
AS
Es importante mencionar que los biorreactores utilizados trabajaron a una

EM
ST
temperatura de 30ºC ± 5 ºC y un pH de 6.
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
14
2.2.3 Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del
inóculo.
A. Aislamiento del consorcio microbiano nativo a partir del
sedimento de las aguas residuales colectadas del canal de
N
IÓ
regadío “Santa Rosa”.
AC
Se colectaron 500 mL de sedimento, se homogenizó y
IC
UN
posteriormente se sometió a aireación por un periodo de 5 días, para
M
lo cual se utilizó un biorreactor del tipo Airlift fin de aumentar la
CO
concentración de microorganismos aerobios.
Y
A
IC
Finalmente se extrajo una muestra de 0.5 mL del contenido del
ÁT
biorreactor, partir de la cual que se realizó diluciones hasta 10-5. De
RM
las 3 últimas diluciones se sembró por superficie, en placas

FO
IN
conteniendo Agar Soya Tripticasa y se incubó a 37°C43. A partir de

DE
las colonias que desarrollen se llevará a cabo lo siguiente:

AS
 Recuento Total de Bacterias Aerófilas Mesófitas Viables

EM
ST
(RTBAMV).
SI
 Tinción Gram de las colonias con morfología similar.

DE
 Determinación de la población microbiana del sedimento de

N
IO
las aguas residuales (en base a los recuentos anteriores en

CC
ufc/g).
RE
 Obtención de cultivo puro de cada una de las bacterias que

DI
componen el consorcio microbiano, para identificarlos43, 44.
15
B. PREPARACIÓN DE LOS INÓCULOS.
Estandarización del inóculo.
Para estandarizar el inóculo del consorcio microbiano aislado; los
cultivos puros de las bacterias que componen el consorcio fueron
N
IÓ
replicados en frascos de vidrio conteniendo Agar Soya Tripticasa,
AC
los que luego de 24 horas de incubados se procedió a estandarizar
IC
comparándolo con el tubo N°3 del nefelómetro de Mc Farland; se
UN
M
preparó las concentraciones deseadas: 5% (125 mL de inóculo en
CO
2500 mL de agua residual), 10% (250 mL de inóculo en 2500 mL de
Y
agua residual) y 15% (375 mL de inóculo en 2500 mL de agua
A
residual) de inóculo9.
IC
ÁT
RM
FO
2.2.4 Degradación de la materia orgánica del agua residual en los

IN
DE
biorreactores tipo Airlift de aireación interna.

AS
Para la degradación de materia orgánica del agua residual en estudio,

EM
se procedió a instalar cada biorreactor con los volúmenes de 125

ST
mL, 250 mL y 375 mL de inóculo cada uno para luego aforarlos con
SI
DE
agua residual hasta alcanzar un volumen de 2500 mL en cada

N
biorreactor; luego se inició el funcionamiento a una temperatura de:

IO
CC
30ºC ± 5 ºC y un pH de: 6. Así mismo se preparó un sistema testigo,

RE
conteniendo solo agua residual (muestra original). Cada uno de los

DI
ensayos se realizó por triplicado.
16
2.2.5 Monitoreo y control de la degradación.
El monitoreo se realizó desde las 0 horas de iniciado hasta el 12avo
día en intervalos de 48 horas (6 mediciones) y se evaluó lo siguiente:
N
IÓ
A. Recuento total de bacterias Aerobias Mesófilas Viables
AC
(RTBAMV)
IC
UN
El Recuento total de bacterias aerobias mesófilas viables se llevó a
M
cabo utilizando la Técnica de Recuento en Placa, para ello de cada
CO
muestra extraída de los sistemas se realizaron diluciones hasta 10-10,
Y
A
de las tres últimas diluciones se sembró por incorporación en placas
IC
ÁT
conteniendo Agar PCA y se incubaron a 37 ºC; posteriormente se
RM
hizo el recuento de las placas incubadas. El procedimiento a

FO
desarrollar se realizó por triplicado.

IN
DE
AS
B. Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (D.B.O.)

EM
Se determinó por el Método de Winkler modificado por Alsterberg.

ST
(Ver anexo 08)

SI
DE
N
C. Determinación de la Materia Orgánica Consumida (M.O.C.)

IO
CC
Para determinar la Materia Orgánica Consumida, se tuvo en cuenta

RE
la Demanda Bioquímica de Oxígeno: inicial a las 0 horas y

DI
posteriores cada 48 horas.
17
OD1 - OD2
M.O.C.(mg/L )= × 100
ò
N
IÓ
AC
D. Determinación de Coliformes Totales.
IC
Para la determinación de coliformes totales se utilizó la Técnica del
UN
Número Más Probable (N.M.P), para ello se hicieron diluciones 10-
M
CO
5
, 10-6, 10-7 y a partir de estas diluciones se desarrolló la técnica.
Y
A
E. Medición de pH y Temperatura.
IC
ÁT
RM
Estas mediciones se realizaron cada 48 horas hasta el final de cada

FO
proceso, para ello se utilizarán cintas de pH y termómetro

IN
respectivamente.
DE
AS
EM
2.2.6 Análisis Estadístico.

ST
SI
Los valores de la Demanda Bioquímica de Oxígeno y Degradación

DE
de Materia Orgánica obtenidos, en cada una de las mediciones

N
IO
realizadas, fueron analizados utilizando el programa estadístico

CC
SPSS 20 además de la prueba estadística ANAVA (Análisis de

RE
Varianza); con la finalidad de determinar la diferencia significativa

DI
existente entre las magnitudes de degradación.
18
III. RESULTADOS
En la Figura No 1, se muestra la variación que hay en la Demanda Bioquímica de
Oxigeno (DBO5), expresada en mg O2/L, durante los 12 días de monitoreo en los tres
biorreactores con diferentes concentraciones de inóculo (5%, 10% y 15%) y en el
N
IÓ
biorreactor Testigo (agua residual). Donde se aprecia una disminución de la DBO 5
AC
inicial respecto a la DBO5 inicial equivalente a 423.67; 385,14; 359,72 y 556,85 para el
IC
UN
testigo, CMN del 5%, CMN 10% y CMN 15%; respectivamente hasta 149,95; 107,63;
M
83,5; 45,45 para cada uno de ellos en el orden mencionado anteriormente.
CO
Y
En la Figura No 2, se muestra la variación del porcentaje de Materia Orgánica
A
IC
Consumida, durante los 12 días de monitoreo en los tres biorreactores con sus diferentes
ÁT
concentraciones de inóculo (5%,10% y 15%) y en el biorreactor testigo (agua residual).
RM
Donde se aprecia claramente que al 15% de inóculo se obtuvo mayor degradación de

FO
IN
Materia Orgánica.
DE
En la Figura No 3, se muestra la variación de los recuentos microbianos en

AS
UFC/mL durante los 12 días de monitoreo en los tres biorreactores con diferentes
EM
ST
concentraciones de inóculos (5%, 10% y 15%) y en el biorreactor testigo (agua

SI
residual); pudiéndose observar que todos a excepción del testigo muestran un periodo
DE
de adaptación de dos días y empezando para todos a partir del quinto día el máximo
N
IO
crecimiento para luego continuar el crecimiento, mantenerse o bajar dependiendo de la

CC
concentración de inóculo.
RE
En la Figura No 4, se muestra la variación en Número de Coliformes Totales (NMP),

DI
que esta expresado en col/100mL que se obtuvieron durante los 12 días de monitoreo en
los tres biorreactores con diferentes concentraciones de inóculo (5%, 10% y 15%) y en
el biorreactor testigo con agua residual, pudiéndose determinar que a medida que
19
transcurre el tiempo en cada sistema el NMP va disminuyendo llegando a alcanzar el
valor más bajo de 25.05 para este parámetro, en el que se utilizó 15% de inóculo.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
20
N
IÓ
540.00
AC
Demanda Bioquímica de Oxígeno
IC
UN
440.00 Testigo
(mg mg O2/L)
M
CNM(%)
CO
340.00
5
Y
A
240.00
IC
10
ÁT
RM
140.00
15
FO
40.00
IN
0 2 4 6 8 10 12
DE
Tiempo (días)
AS
EM
ST
Figura 1. Variación en mg O2/L de la Demanda Bioquímica de Oxigeno (DBO5), a partir de diferentes concentraciones de
SI
DE
consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30º C ± 5º C y pH de 7.

N
O
*CMN: Consorcio Microbiano Nativo.

I
CC
RE
DI
21
N
600.00
IÓ
Materia Orgánica Consumida (mg/L)
AC
500.00
IC
UN
400.00 TESTIGO
M
CO
CNM(%)
300.00
5
Y
A
IC
200.00
ÁT
10
RM
100.00
FO
0.00 15
IN
0 2 4 6 8 10 12
DE
Tiempo (días)
AS
EM
ST
Figura 2. Variación en mg/L de Materia Orgánica Consumida (MOC), a partir de diferentes concentraciones de consorcio
SI
microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7.

DE
N

IO
CC
RE
DI
22
N
IÓ
1.00E+14
AC
Bacterias Aerobias Mesófilas Viables
1.00E+13
IC
TESTIGO
UN
1.00E+12
CNM(%)
M
CO
1.00E+11
(UFC/mL)
Y
1.00E+10
A
IC
1.00E+09 10
ÁT
RM
1.00E+08
FO
1.00E+07 15
IN
1.00E+06
DE
0 2 4 6 8 10 12
AS
Tiempo (días)
EM
ST
SI
Figura 3. Variación en UFC/mL del Recuento Microbiano, a partir de diferentes concentraciones de consorcio microbiano
DE
nativo, durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7.

N
O
I
CC

RE
DI
23
N
IÓ
AC
1200.00
IC
UN
1000.00
TESTIGO
M
CO
Coliformes Totales
800.00
CNM(%)
(col/100mL)
Y
600.00 5
A
IC
ÁT
400.00
RM
10
FO
200.00
IN
15
0.00
DE
0 2 4 6 8 10 12
AS
EM Tiempo (Días)
ST
SI
Figura 4. Variación en col/100mL del Número de Coliformes Totales, a partir de diferentes concentraciones de consorcio
DE
microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH 7.

N
IO
CC

RE
DI
24
IV. DISCUSIÓN
Las aguas residuales que son eliminadas al medio ambiente sin un tratamiento previo
alguno producen una elevada contaminación de este, por lo que es importante que se lleve
a cabo un tratamiento previo antes de ser eliminadas al medio ambiente. Principalmente
N
IÓ
este tratamiento lo realizan sistemas biológicos en los cuales se involucran procesos
AC
aerobios y anaerobios siendo el primer proceso en conjunto con los sistemas biológicos los
IC
que utilizamos en el presente trabajo de investigación, 38.
UN
M
Al finalizar la investigación y según los resultados obtenidos, se observó que el agua
CO
residual sometida a diferentes concentraciones de inoculo (consorcio microbiano nativo),
Y
al igual que el agua residual sin inoculo (testigo) presentaron una disminución de la
A
IC
Demanda Bioquímica de Oxigeno conforme el tiempo transcurría, el consumo de materia
ÁT
RM
orgánica aumento, debido al crecimiento de una población heterogénea de

FO
microorganismos (Consorcio Microbiano Nativo), los cuales cambian constantemente de

IN
acuerdo a las variaciones de la composiciones de las aguas residuales y de las condiciones

DE
ambientales. De estos microorganismos, las bacterias Aerobios Mesófilas Viables

AS
(BAMV) constituyen el grupo más importante en el tratamiento de aguas residuales, las

EM
cuales aumentaron en u determinado tiempo para luego disminuir; el incremento de las

ST
SI
BAMV dio lugar a la disminución del número de coliformes totales. Es importante

DE
mencionar que estos sucesos no ocurrieron a las mismas velocidades si no que dependió
N
mucho de la concentración de inoculo a la que fue sometida la muestra39, 40(ver Anexo 09).
IO
CC
Una medida cuantitativa de la contaminación del agua por materia orgánica (sirve
RE
como nutriente y requiere oxígeno para su descomposición) es la determinación de la

DI
rapidez con que la materia orgánica nutritiva consume oxigeno por la descomposición
bacteriana y se le denomina Demanda Bioquímica de Oxigeno (DBO). La demanda
bioquímica de oxigeno es un parámetro que mide la cantidad de materia orgánica
25
susceptible de ser consumida u oxidada por medios biológicos que contiene una muestra
líquida, disuelta o en suspensión. Se utiliza para medir el grado de contaminación,
normalmente se mide transcurridos cinco días de reacción (DBO5) y se expresa en
miligramos de oxigeno diatómico por litro (mg O2/L).
N
IÓ
La curva de consumo de oxigeno suele ser al principio débil y después se eleva
AC
rápidamente hasta un máximo sostenido, bajo la acción de la fase logarítmica del
IC
crecimiento de los microorganismos. Por lo que una DBO grande indica que se requiere
UN
M
una gran cantidad de oxígeno para descomponer la materia orgánica contenida en el
CO
agua.41, 42
Y
A
Las bacterias descomponen rápidamente la materia orgánica en presencia de oxígeno,
IC
ÁT
consumiéndolo y aumentando con ello la demanda bioquímica de oxígeno, en cambio
RM
cuando la materia orgánica se acaba, la cantidad de oxígeno disuelto es mayor y en

FO
consecuencia la demanda bioquímica de oxigeno disminuye, lo cual indica un bajo

IN
DE
contenido de materia orgánica, produciendo metabolitos finales no toxico como dióxido de

AS
carbono y agua; mientras que en ausencia de oxígeno, la materia orgánica es

EM
descompuesta anaeróbicamente produciendo productos tóxicos tales como sulfuro de

ST
hidrogeno, nitrito y metano. Siendo la descomposición mayor cuando la temperatura se

SI
incrementa hasta niveles de 35oC.43

DE
N
Dentro de la materia orgánica, destacan las proteínas, carbohidratos, aceites y grasas.

IO
Las proteínas son junto a la urea, las principales fuentes de nitrógeno en las aguas. Los
CC
hidratos de carbono pueden encontrarse en forma de azucares, almidones, celulosa y fibra

RE
de madera son fácilmente degradables por determinadas bacterias produciéndose por la

DI
fermentación de alcoholes y dióxido de carbono; los almidones se degradan a azucares por

la actividad microbiana y por la acción de ácidos minerales disueltos. La celulosa
constituye el carbohidrato más difícilmente degradable. En las grasa se incluyen los
aceites, grasas y otros compuestos análogos. Todos estos producen en las aguas
dificultades en la degradación, puesto que dicho material flota o se emulsiona en la
26
superficie, impidiendo la transferencia de oxigeno entre el aire y el agua, interfiriendo de

esta manera en la depuración biológica.44
Como se aprecia en la figura No 1, a medida que transcurre el tiempo de tratamiento
de las muestras de agua residual, la DBO5 va disminuyendo con respecto a la DBO5
N
inicial. La DBO5 inicial para el testigo fue de 423.67 llegando hasta 149.95 para el
IÓ
AC
Consorcio Microbiano Nativo al 5% (CMN 5%) fue de 385.14 llegando hasta 107,63; para
IC
el Consorcio Microbiano Nativo al 10% (CMN 10%) fue de 359,72 llegando hasta 83,51
UN
y finalmente para el Consorcio Microbiano Nativo al 15% (CMN 15%) fue de 556.85
M
CO
llegando hasta 45.45 (Ver anexo 10); esta disminución obtenida conlleva a un aumento del
Y
consumo de materia orgánica, el cual se encuentra plasmada en la figura N o 2, pudiéndose
A
IC
apreciar que partir del segundo día de tratamiento ya se da este consumo. Estos resultados
ÁT
RM
nos permiten deducir que entre DBO5 y materia orgánica existe una relación inversa, pues
FO
hubo un descenso paulatino de DBO5 y un incremento en consumo de materia orgánica

IN
con respecto al tiempo; esto debido a la acción metabólica y fisiológica microbiana, que
DE
tiene lugar en el agua residual, debido a la utilización de dicha materia orgánica para la
AS
obtención de energía y crecimiento, o como receptores durante la respiración, siendo esta

EM
la etapa inicial del proceso de oxidación biológica de la materia orgánica. 19, 29, 35 En base a
ST
SI
esto se obtuvo que el consumo de materia orgánica para el testigo fue de 343.72; para el
DE
CMN5% fue de 426,21; para el CMN10% 477.51 y finalmente para el CMN15% fue de
N
521,40 (ver Anexo 11); produciéndose el mayor consumo de materia orgánica en el

IO
CC
biorreactor con 15% de inoculo (ver anexo 12).

RE
La biodegradación de la materia orgánica se llevó a cabo en 3 fases como se muestra

DI
en la curva de crecimiento de los microorganismos de la figura No3. En la primera fase, la
materia hidrocarbonada se trasforma fundamentalmente en anhídrido carbónico, agua y
humus, la sustancia nitrogenada también se descompone, y el nitrógeno que no se utiliza
27
para el crecimiento microbiano se transforma en amoniaco, interviniendo una gran
variedad de microorganismos, y observándose una disminución progresiva de la DBO5
que se ejerce por una unidad de tiempo.56, 57

En todos los sistemas el crecimiento se
percibe desde la segunda medición alcanzando los picos más altos de crecimiento, de la
N
IÓ
siguiente manera para el testigo fue al 6to día con 5,60X109 UFC/mL; para el CMN5% fue
AC
al 4to día con 3,07x1010 UFC/mL; para el CMN10% fue al 8vo día con 6,50x1012 UFC/mL
IC
y para el CMN15% fue al 8vo día con 7,40x1013 UFC/mL (ver Anexo 13 y 14).
UN
M
La segunda fase se da después del crecimiento logarítmico o exponencial de los
CO
microorganismos ya que se sabe que, las poblaciones microbianas raramente mantienen un
Y
A
crecimiento exponencial a altas velocidades durante largo tiempo, porque el crecimiento
IC
ÁT
está limitado normalmente o bien por el agotamiento de los nutrientes disponibles o bien
RM
por la acumulación de productos tóxicos del metabolismo. Como consecuencia de esto, la

FO
velocidad de crecimiento disminuyo y el crecimiento llego a detenerse. En este punto se

IN
DE
dijo q el cultivo estaba en la (fase estacionaria). La transición entre la fase exponencial y la

AS
estacionaria implico un periodo de crecimiento desequilibrado, durante el cual los diversos

EM
componentes celulares fueron sintetizados a diferentes velocidades.39, 45, 47

ST
La tercera fase se observó a los 8 y 10 días respectivamente. El crecimiento celular

SI
DE
empieza a disminuir debido a que la concentración de materia orgánica es escasa, es decir

N
no hubo la cantidad suficiente de alimento para mantener el crecimiento de los

IO
CC
microorganismos, por lo que el número de BAMV descendió ya que el número de celular

RE
que murieron fue mayor al de las células nuevas que se sintetizaron (muchos autores
DI
sugieren que las células se mantienen en estado de animación suspendida). 34 Esto
correspondió a la fase endógena, en la que al igual que la fase estacionaria, existen células
que ni se producen ni mueren, simplemente existen gracias a la utilización de sus reservas
alimenticias internas en un proceso conocido como respiración endógena. La respiración
28
endógena supone la oxidación de material celular con objeto de proporcionar energía para
el mantenimiento de microorganismos cuando la cantidad de alimento presente en el
sistema (materia orgánica) ha sido consumida; y, por tanto, es insuficiente para mantener
el crecimiento de microorganismos. Sin embargo son muchos los factores que contribuyen
N
IÓ
a la muerte microbiana como son: el agotamiento de los nutrientes, la existencia de una
AC
densidad máxima de población, el número de células nuevas es menor al número de
IC
células que mueren, la edad y el estado fisiológico de las bacterias y la acumulación de
UN
M
productos tóxicos de la bio-oxidación presentes en el sistema.27, 29, 30 En todos los sistemas
CO
la disminución de BAMV se da de la siguiente manera: para el testigo disminuye hasta
Y
6,20X108 UFC/mL; para el CMN5% 5,40x106 UFC/mL; para el CMN10% disminuye
A
hasta 4,80x107 UFC/mL y para el CMN15% disminuye hasta 5,00x108 UFC/mL.
IC
ÁT
RM
El consorcio microbiano nativo utilizado en la degradación de la materia orgánica de

FO
las aguas residuales colectadas de las viviendas del Centro Poblado Santa Rosa – Chepén
IN
DE
está conformado por micrococcus sp, Pseudomonas stutzerin, Acinetobacter iwoffi,

AS
tatumella ptyseo (ver Anexos 16, 17, 18); y fue inoculado en cada sistema, a una
EM
concentración similar al tubo No 3 del Nefelómetro de Mc Farland (9x10 Ufc/mL). Es

ST
importante mencionar que el consorcio microbiano utilizado fue aislado del sedimento del
SI
agua residual lo que le permite una rápida adaptación al medio. Cuando se trabaja con
DE
consorcios microbianos, las enzimas que estos producen degradan o rompen algún enlace
N
IO
molecular de los compuestos y los utilizan como fuentes de carbono. En este caso, la
CC
sustancia contaminante es un alimento para el microorganismo o también puede ocurrir

RE
DI
que la actividad propia de dicho microorganismo en el ambiente tiene la capacidad
colateral de actuar sobre la molécula indeseable a pesar de que no pueda utilizarla, pero
contribuyendo que está en el mismo medio la utilice, pudiendo así acondicionar el medio
29
para que actúen los demás microorganismos y emplear los productos o subproductos para
beneficio mutuo.23
Con relación al número de Coliformes Totales (figura No 4) los cuales también

influyen en la degradación de la materia orgánica; se observó una disminución paulatina
N
durante todo el tiempo que duro el proceso (ver Anexo 15). Esto se debió a que existe un
IÓ
AC
crecimiento rápido de las BAMV, predominando en la competencia del consumo de la
materia orgánica sobre los coliformes. Este incremento en la competencia está dada por las
IC
UN
condiciones de temperatura, que favorece a las BAMV ya que las mayorías son
microorganismos ambientales, lo que no sucede con los coliformes, ya que necesitan de
M
CO
otras condiciones de temperatura para su mejor desarrollo. Debemos indicar que la
temperatura es un factor importante en las reacciones biológicas del sistema y tiene que
Y
A
ver en el desarrollo y reproducción de los microorganismos. Otro factor es la producción y
IC
la acumulación de sustancias toxicas, generadas por la actividad microbiana.29, 38, 39
ÁT
RM
Al realizar el análisis estadístico (ver Anexos 19, 20, 21 y 22), se observó que con
FO
respecto a la DBO5 entre el testigo, el CMN 5% y CMN 10% no existe diferencia

IN
significativa pero si comparamos el testigo con el CMN 15% encontramos que si existe
DE
diferencia significativa, siendo este último el más efectivo ya que presenta la cantidad
AS
menor del parámetro evaluado. Para la MOC entre el testigo, el CMN 5%, CMN 10% y
EM
CMN 15% observamos que existe diferencia significativa, siendo este último el más
ST
SI
efectivo ya que presenta la cantidad mayor del parámetro evaluado. Para las BAMV entre
DE
el testigo y el CMN 5% no existe diferencia significativa pero si comparamos el testigo

N
con el CMN 10% y CMN 15% encontramos que si existe diferencia significativa, siendo
IO
CC
este último el más efectivo ya que presenta la cantidad mayor del parámetro evaluado. Por
RE
ultimo para los Coliformes Totales entre el testigo, el CMN 5%, CMN 10% y CMN 15%
DI
observamos que existe diferencia significativa, siendo este último el más efectivo ya que
presenta la cantidad menor del parámetro evaluado.
30
V. CONCLUSIÓN
Del trabajo realizado se concluye que:
N
 La degradación de materia orgánica en estadísticamente diferente entre
IÓ
AC
las concentraciones de 15% con los de 5% y 10% citando el anexo 22.
IC
 A una mayor concentración de inóculo de consorcio microbiano nativo
UN
M
aislado (15%), se obtiene una mayor degradación de la materia orgánica
CO
contenida de las aguas del canal de regadío “Santa Rosa”.
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
31
VI. RECOMENDACIONES
 Trabajar “insitu” para poder obtener datos más certeros y así poder utilizar esta
información para beneficio de la población ya que se estaría disminuyendo la
N
IÓ
contaminación de las aguas del canal de regadío “Santa Rosa”, las mismas que
AC
sirven de fuente de agua para las poblaciones que se alojan cerca de su rivera,
IC
además de ser utilizada como agua de riego para sus cultivos.
UN
M
CO
 Estandarizar cada inóculo haciendo recuento en placa para obtener el número
Y
exacto de UF/mL.
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
32
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EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
38
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ANEXOS
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
39
Anexo 01.
N
Departamento
IÓ
de La libertad
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
Cetro poblado
santa Rosa
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
Fig. 5. Ubicación geográfica y localización satelital de la

provincia de Chepén en el departamento de la
libertad. 40
Anexo 02.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
I O
CC
RE
DI
Fig. 6. Plano del recorrido del caudal de la acequia “Santa Rosa”.
41
Anexo 03. .
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
I O
CC
RE
DI
Fig. 7. Plano de ubicación de los puntos de toma de

42
muestra para la investigación.
Anexo 04. Características físicas preliminares del agua residual proveniente del efluente
formado por el canal de regadío “Santa Rosa” del centro poblado “Santa
Rosa”, antes del tratamiento.
N
IÓ
MUESTRA CARACTERISTICAS DE LA MUESTRA
AC
IC
UN
ASPECTO
M
CO
: Turbio
Y
A
IC
ÁT
RM
Color:
FO
Agua Residual del canal de Verde oscuro

regadío “Santa Rosa” FÍSICA
IN
DE
AS
EM
ST
SI
Temperatu
DE
ra:
27oC
N
IO
CC
RE
pH de la
muestra:
DI
QUÍMICA 7.0
43
Anexo 05. .
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
Fig. 8. Plano de dimensiones geométricas del birreactor Airlift de 3L de

RE
capacidad con 2500mL de volumen de trabajo, usado para la

DI
determinación de la capacidad degradativa del Consorcio Microbiano

Nativo.
44
Anexo 06.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
Fig. 9. Vista de los biorreactores Airlift de 3L de capacidad con

IN
2.5L de volumen de trabajo, usado para la determinación

DE
de la capacidad degradativa del Consorcio Microbiano

AS
Nativo.
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
45
Anexo 07.
N
IÓ
AC
Recuento en placa
IC
Aislamiento
UN
Coloración Gram
Colonias
M
Se colectaron 0.5L Siembra en
CO
de sedimento superficie aisladas Determinó la población microbiana
Incubó a 37oC
Agar pca
Y
por 24h Obtuvo cultivos puros
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
Homogenizó
AS
EM
ST
SI
DE
N
O
Biorreactor “Airlift”
I
CC
RE
Fig. 10. Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del inóculo.
DI
46
Anexo 08. Determinación de oxígeno disuelto y la demanda bioquímica de oxigeno
Llenar dos botellas DBO con el agua residual a

tratar, tapar las botellas evitando formar
burbujas de aire en el interior.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
MUESTRA:
Y
Agua residual Botella 1 Botella 2
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
La botella de DBO usada fue de 70mil

DE
de capacidad, por lo que cada reactivo

AS
usado se agregó al décimo.

EM
ST
SI
DE
Incubar la botella
N
Reposar por
IO
2 a temperatura
CC
13 segundos. ambiente por 5.

RE
OD1 días en oscuridad OD2

DI
Método Winkler : Determinación del oxígeno disuelto.
47
Método de Winkler: Determinación de Oxígeno disuelto
Destapar cuidadosamente la botella y

agregar 0.23mL de sol. MnSo4 y 0.23mL
de sol. Ioduro-Alcalino_Azida.
N
IÓ
Tapar el frasco y mezclar bien
AC
hasta que el precipitado se
IC
disperse completamente.
UN
Dejar en reposo 10 min.
M
Destapar el frasco y
CO
adicionar 0.23mL de
Y
H2SO4
A
IC
ÁT
Mezclar enérgicamente y dejar en
RM
reposo por 30 min.

FO
IN
Adicionar 0.23 mL de sol.

DE
indicadora de almidón hasta

AS
la aparición de un color azul

EM
ST
SI
Seguir titulando con sol. de

DE
tiosulfato de sodio hasta la

Colocar 11.7 mL del liquido de botella de
N
desaparición completa de la
DBO en un rasco y adicionarle y adicionarle
IO
coloración azul.
CC
la sol. de tiosulfato de sodio hasta la

Sumar los gastos de sol. de
aparición de un color amarillo pálido.
RE
tiosulfato de sodio y
DI
remplazarlo en la formula
Donde:
x 8 1000
OD (mg O₂ L) = a: es el gasto de tiosulfato
−2 N: la normalidad del tiosulfato (1/40)
V: volumen de muestra titulada y
v: volumen del frasco DBO usado
48DBO5 = OD1 – OD2
Anexo 09.
N
IÓ
AC
IC
T R A T A M I E N T O S
UN
TIEMPO TESTIGO CONS. MICROB. NATIV. AL 5% CONS. MICROB. NATIV. AL 10% CONS. MICROB. NATIV. AL 15%
(días) BAMV DBO5 MOC CT BAMV DBO5 MOC CT BAMV DBO5 MOC CT BAMV DBO5 MOC CT
M
0 1,30X107 423,67 0 > 1100 4,40x10 7
385,14 0 > 1100 8
7,60x10 359,72 0 > 1100 8
8,40x10 556,85 0 > 1100
CO
2 6,20X108 390,53 33,14 906,17 5,30x109 330,29 58,68 752,75 5,90x1010 301,04 74,85 663,71 9,90x1011 311,21 255,64 533,20
Y
4 7,80X108 358,48 65,19 820,75 3,07x1010 276,72 115,55 681,15 4,81x1011 244,17 158,42 571,46 2,90x1013 127,93 438,92 336,25
A
6 5,60X109 292,14 131,53 723,43 4,60x109 229,58 160,44 478,25 4,96x1012 199,28 255,56 358,25 4,50x1013 123,10 443,75 125,20
IC
8 4,40X108 227,20 196,47 629,92 7,10x109 183,05 204,95 345,75 6,50x1012 154,77 302,09 231,75 7,40x1013 71,26 495,59 81,25
ÁT
10 6,20X108 188,31 235,36 486,05 8,70x10 6
150,11 286,43 192,05 6,30x109 118,96 390,37 167,05 6,70x10 13
52,57 514,40 48,75
12 6,20X108 149,95 343,72 434,05 5,40x106 107,63 426,21 150,01 4,80x107 83,51 477.51 133,35 5,00x108 45,45 521,40 25,05
RM
FO
IN
CMN 5% : Consorcio Microbiano Nativo al 5% DBO5 : Demanda Bioquímica de Oxígeno a los 5 días (mg O2/L)
DE
CMN 10% : Consorcio Microbiano Nativo al 10% MOC : Materia Orgánica Consumida (mg/L)
AS
EM
CMN15% : Consorcio Microbiano Nativo al 15% CT : Coliformes Totales
ST
BAMV : Bacterias Aerobias Mesófitas Viables (UFC/mL)

SI
DE
Tabla Nº 1. Variación de los parámetros evaluados (DBO5, MOC, BAMV, CT) durante el tratamiento de las muestras
N
O
residual proveniente del efluente del canal de regadío “Santa Rosa”.

I
CC
RE
DI
49
Anexo 10.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Concentración Demanda Bioquímica de Oxigeno (DBO5)
Y
de Consorcio Tiempo de monitoreo (días)
A
Microbiano
IC
0 2 4 6 8 10 12
ÁT
(CMN)
RM
FO
Testigo 423,67 390,53 358,48 292,14 227,20 188,31 149,95
IN
DE
5% 385,14 330,29 276,72 229,58 183,05 150,11 107,63
AS
EM
10% 359,72 301,04 244,17 199,28 154,77 118,96 83,51
ST
SI
DE
15% 556,85 311,21 127,93 123,10 71,26 52,57 45,45

N
I O
CC
Tabla Nº 2.. Promedio de la variación en mg 02/L de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5), a partir de diferentes
RE
concentraciones de consorcio microbiano nativo , durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7.

DI
50
Anexo 11.
N
IÓ
AC
IC
Concentración Materia orgánica Consumida (MOC)
UN
de Consorcio
M
Tiempo de monitoreo (días)
CO
Microbiano 0 2 4 6 8 10 12
Y
(CMN)
A
IC
ÁT
Testigo 0 33,14 65,19 131,53 196,47 235,36 343,72
RM
FO
5% 0 58,68 115,55 160,44 204,95 286,43 426,21
IN
DE
10% 0 74,85 158,42 255,56 302,09 390,76 477,51
AS
EM
ST
15% 0 255,64 438,92 443,75 495,59 514,40 521,40

SI
DE
N
O
Tabla Nº 3. Promedio en mg/L de materia Orgánica Consumida (MOC), a partir de diferentes concentraciones
I
CC
de consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7.

RE
DI
51
Anexo 12.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Concentración Materia Orgánica Consumida (MOC)
Y
A
Microbiano
IC
0 2 4 6 8 10 12
ÁT
(CMN)
RM
FO
Testigo 0 33,14 65,19 131,53 196,47 235,36 343,72
IN
DE
5% 0 58,68 115,55 160,44 204,95 286,43 426,21
AS
EM
10% 0 74,85 158,42 255,56 302,09 390,37 477,51
ST
SI
DE
15% 0 255,64 438,92 443,75 495,59 514,4 521,4

N
I O
CC
Tabla Nº 4. Porcentaje de Materia Orgánica Consumida (MOC), a parir de diferentes concentraciones de

RE
DI
consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH7.

52
Anexo 13.
N
IÓ
AC
600.00
IC
UN
500.00
M
Materia Orgánica Consumida (%)
CO
400.00
Y
A
IC
Testigo
ÁT
300.00
CNM (%)
RM
5%
200.00
FO
10%
IN
100.00
DE
15%
AS
0.00 EM
0 2 4 6 8 10 12
ST
Tiempo (días)
SI
DE

N
OI
CC
Tabla Nº 5. Variación del porcentaje de materia Orgánica Consumida (MOC), a partir de diferentes concentraciones de
RE
consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30ºC ± 5ºC y pH de 7.

DI
53
Anexo 14.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Concentración Bacterias Aerobias Mesófitas Viables (BAMV)
Y
A
Microbiano
IC
0 2 4 6 8 10 12
ÁT
(CMN)
RM
FO
Testigo 1,30x1707 6,20x108 7,80x108 5,60x109 4,40x108 6,20x108 6,20x108
IN
DE
5% 4,40x107 5,30x109 3,07x1010 4,60x109 7,10x109 8,70x106 5,40x106
AS
EM
10% 7,60x108 5,90x1010 4,81x1011 4,96x1012 6,50x1012 6,30x109 4,80x107
ST
SI
DE
15% 8,40x108 9,90x1011 2,90x1013 4,50x1013 7,40x1013 6,70x1013 5,00x108

N
I O
CC
RE
Tabla N º6. Promedio del recuento microbiano en UFC/mL, a partir de diferentes concentraciones de
DI
consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7.

54
Anexo 15.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Concentración Número de Coliformes Totales
Y
A
Microbiano
IC
0 2 4 6 8 10 12
ÁT
(CMN)
RM
FO
Testigo >1100 906.17 820.75 723.43 629.92 486.05 434.05
IN
DE
5% >1100 752.75 681.15 478.25 345.75 192.05 150.01
AS
EM
10% >1100 663.71 571.46 358.25 231.75 167.05 133.35
ST
SI
DE
15% >1100 533.20 336.25 125.20 81.25 48.75 25.05

N
I O
CC
Tabla Nº 7. Promedio del Número de Coliformes Totales en col/100mL, a partir de diferentes concentraciones de
RE
consorcio microbiano nativo, durante 12 días de tratamiento a 30°C ± 5°C y pH de 7.

DI
55
ANEXO 16. Se muestran las características culturales y microscópicas de las bacterias

aisladas a partir del sedimento del agua residual proveniente del canal de
regadío “Santa Rosa” e identificadas mediante el Sistema Automatizado
Micro Scan.
N
IÓ
AC
Características Características
Bacteria identificada
IC
Macroscópicas Microscópicas
UN
M
CO
Colonia grande de color Cocos Gram positivos
Y
Micrococcus sp
crema, lisa, brillosa, de Dispuestos en racimo
A
IC
bordes regulares ÁT
RM
Colonia pequeña de color Acinetobacter iwoffii

FO
Bacilos Gram negativos

amarilla, lisa, brillosa, de
IN
bordes regulares
DE
AS
Colonia pequeña de color

EM
Bacilos Gram negativos Pseudomonas stutzeri

amarilla, lisa, brillosa, de
ST
bordes regulares
SI
DE
Colonia grande de color

N
Bacilos Gram negativos Tatumella ptyseos

IO
crema, lisa, brillosa, de

CC
bordes regulares
RE
DI
56
Anexo 17. Observaciones macroscópicas microscópicas de las bacterias aisladas a partir de
sedimento del agua residual proveniente del canal de regadío “Santa Rosa” e
identificadas mediante el Sistema Automatizado Micro Scan.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
Bacteria identificada Observación Observación
CO
Macroscópica Microscópica
Y
A
IC
ÁT
RM
Micrococcus sp.
FO
IN
DE
Acinetobacter Iwoffi
AS
EM
ST
SI
Pseudomona stutzeri
DE
N
IO
CC
Tatumella pctyseos
RE
DI
57
Anexo 18. Resultados de la identificación bacteriana mediante el Sistema Automatizado
Micro Scan, realizado en el laboratorio de Microbiología del Hospital Belén de
Trujillo en Agosto del 2015.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
58
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
59
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
60
Anexo 19.
N
IÓ
FUENTE: SPSS Ver. 20
AC
VARIABLE TRAT. REP TASA DE D.E Intervalo de confianza Mín. Máx.
IC
CRECIMIENTO Límite inf. Límite sup.
UN
PROMEDIO
TESTIGO 3 290,0400 105,33022 192,6258 387,4542 149,95 423,67
M
Y1: DBO5
CMN5% 3 237,5029 99,56281 145,4226 329,5831 107,63 385,14
CO
CMN10% 3 208,7786 99,42734 116,8236 300,7335 83,51 359,72
CMN15% 3 185,4643 190,96508 8,8510 362,0775 45,45 566,85
Y
Total 12 230,4464 128,64285 180,5639 280,3289 45,45 566,85
A
Y2: MOC TESTIGO 3 143,6300 122,73232 46,38845 30,1215 257,1385 343,72
CMN 5% 3 210,4943 162,45589
IC
61,40255 60,2476 360,7409 477,51
ÁT
CMN 10% 3 178,0843 151,58039 57,29200 37,8958 318,2728 466,21
RM
CMN 15% 3 381,3857 190,96508 72,17801 204,7725 557,9990 521,40

Total 12 228,3986 176,33056 33,32334 160,0247 296,7724 521,40
FO
TESTIGO 3 3,47182E+009 1,31223E+009 1,4542E+009 4,9676E+009 1,30E+007 9,60E+009

Y3: BAMV
CMN 5% 3 3,03660E+009 1,14773E+009 2,8008E+008 5,3367E+009 5,40E+006 7,10E+009
IN
CMN 10% 3 3,15359E+012 1,19195E+012 1,0697E+012 4,7635E+012 4,80E+007 7,30E+012

DE
CMN 15% 3 3,20608E+013 1,21178E+013 1,2046E+012 6,0507E+013 5,00E+008 7,40E+013

Total 12 2,02242E+013 3,82201E+012 3,3465E+011 1,6019E+013 5,40E+006 7,40E+013
AS
TESTIGO 3 269,75589 101,95814 318,1888 817,1540 334,05 1100,00

Y4: NMP
CMN 5% 3 334,11579 126,28390 182,8944 800,9056 123,35 1100,00
EM
CMN 10% 3 329,00110 124,35073 176,9976 785,5481 133,35 1100,00

ST
CMN 15% 3 400,11661 151,22986 -34,3747 705,7176 25,05 1100,00

Total 12 328,50573 62,08175 341,7477 596,5102 25,05 1100,00
SI
DE
Tabla Nº 7. Promedio de datos experimentales de cuatro variables durante el tratamiento de

N
agua residual utilizando un Consorcio Microbiano Nativo.

IO
CC
RE
DI
61
Anexo 20.
N
IÓ
F.V Suma de G.L Media F Sig.
AC
cuadrados cuadrática
IC
Y1: DBO5 Trat. 42658,533 3 14219,511 0,844 0,483
Error 404163,991 24 16840,166
UN
Total 446822,524 27
M
Y2: MOC Trat. 234100,072 3 78033,357 3,094 0,046
CO
Error. 605396,477 24 25224,853
Total 839496,548 27
Y
A
Y3: BAMV Trat. 48164190745 3 16054730248 6,188 0,003
IC
Error 62270426036 24 25946010848
ÁT
Total 11043461678 27
RM
Y4: NMP Trat. 197312,677 3 65770,892 0,581 0,633

FO
Error 2716419,757 24 113184,157

IN
Total 2913732,434 27
DE
Tabla Nº 8. Análisis de varianza para cada una de las variables respuesta en

AS
función del factor Consorcio Microbiano Nativo.

EM
ST
Aquí apreciamos que las pruebas ANAVAS resultaron ser altamente significativas (p<0.05)
SI
DE
por lo que se puede concluir que existen diferencias significativas en cada una de las
N
pendientes de los crecimientos de las variables (Y1: DBO5, Y2, MOC, Y3).
IO
CC
RE
DI
62
Anexo 21.
N
VARIABLE (I) (J) Diferencia de Error típico Sig. Intervalo de confianza al 95%
IÓ
DEPENDIENTE FACTOR FACTOR medias (I-J) Límite Inf. Límite Sup.
AC
YI: DBO5 CMN 5% TESTIGO 104,57571 69,36480 0,323 -69,2990 278,4504
IC
CMN 10% TESTIGO 52,03857 69,36480 0,795 -121,8362 225,9133
UN
CMN 15% TESTIGO 23,31429 69,36480 0,974 -150,5604 197,1890
Y2: MOC CNM 5% TESTIGO -237,75571* 84,89465 0,026 -450,5586 -24,9528
M
CO
CMN 10% TESTIGO -170,89143 84,89465 0,135 -383,6944 41,9115
CMN 15% TESTIGO -203,30143 84,89465 0,063 -416,1044 9,5015
Y
Y3: BAMV CNM 5% TESTIGO 3,08541E+013 8,60996E+012 0,004 -5,2436E+013 -9,2718E+012
A
CMN 10% TESTIGO 3,08534E+013 8,60996E+012 0,004 -5,2436E+013 -9,2710E+012
IC
CMN 15% TESTIGO 2,90090E+013 8,60996E+012
ÁT 0,007 -5,0591E+013 -7,4267E+012
Y4: NMP CNM 5% TESTIGO 232,00000 179,82861 0,443 -218,7711 682,7711

RM
CMN 10% TESTIGO 156,22857 179,82861 0,720 -294,5426 606,9997
CMN 15% TESTIGO 145,60143 179,82861 0,758 -305,1697 596,3726

FO

IN
DE
Tabla Nº 9. Análisis de varianza para cada una de las variables respuesta en función del factor
AS
Consorcio Microbiano Nativo.

EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
63
Anexo 22.
N
IÓ
AC
GRUPOS HOMOGÉNEOS
Y1: DBO5 TRATAMIENTO
IC
1
UN
CMN 15% 185,4643
DUNCAN
M
CMN 10% 208,7786
CO
CMN 5% 237,5029
TESTIGO 290,0400
Y2: MOC TRATAMIENTO GRUPOS HOMOGÉNEOS
Y
A
1 2
Sig. 0,180
IC
DUNCAN TESTIGO ÁT 143,6300
CMN 10% 178,0843
CMN 5% 210,4943 210,4943
RM
CMN 15% 381,3857

FO
Sig. 0,465 0,055

IN
Y3: BAMV TRATAMIENTO GRUPOS HOMOGÉNEOS

1 2
DE
DUNCAN TESTIGO 1,7567E+009

AS
CMN 5% 2,5283E+009
CMN 10% 1,8469E+012
EM
CMN 15% 3,0856E+013

ST
Sig. 0,842 1,000

TRATAMIENTO GRUPOS HOMOGÉNEOS
SI
Y4: NMP
1
DE
DUNCAN CMN 15% 335,6714

CMN 10% 481,2729
N
491,9000
IO
CMN 5%
TESTIGO 567,6714
CC
Sig. 0,250
RE
DI
Tabla Nº 10. PRUEBA DUNCAN para la comparación de tratamientos en cada una de las
variables respuestas en función del factor Consorcio Microbiano Nativo.
64
Anexo 23.
350.0000
300.0000
N
IÓ
250.0000
Media de Y2: DBO5
AC
200.0000
IC
150.0000
UN
100.0000
M
50.0000
CO
0.0000
testigo 5% 10% 15%
Y
A
FACTOR
IC
ÁT
Fig. 11. Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para la DBO5 en función del factor
RM

FO
IN
DE
450
AS
400
EM
350
300
NMedia de Y3: MOC
ST
250
SI
200
DE
150
100
50
IO
0
CC
TESTIGO CMN 10% CMN 5% CMN 15%

FACTOR
RE
DI
Fig. 12. Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para MOC en función del factor
65
Anexo 24.
3.50E+13
3.00E+13
N
IÓ
2.50E+13
Media de Y1: BAMV
AC
2.00E+13
IC
1.50E+13
UN
1.00E+13
M
5.00E+12
CO
0.00E+00
Y
A
FACTOR
IC
ÁT
Fig. 13. Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para las BAMV en función del
RM
factor Consorcio Microbiano Nativo.

FO
IN
DE
600
500
AS
Media de Y4: NMP
400
EM
300
ST
SI
200
DE
100
N
0
IO

CC
FACTOR
RE
Fig. 14. Gráficos de la PRUEBA DUNCAN para Coliformes Totales (NMP) en

DI
función del factor Consorcio Microbiano Nativo.
66

Mendoza Medina, Luis Hernan y Ramírez Lecca, Joe Luis

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Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y

Efecto de la concentración de un consorcio microbiano nativo

del canal de regadío “Santa Rosa” – Distrito de Santa Rosa,

provincia de Chepén, 2015.

PARA OBTENER EL TÍTULO DE

AUTOR: Br. Luis Hernan Mendoza Medina

Br. Joe Luis Ramírez Lecca

ASESOR: Ms. C. Jaime Enrique Agreda Gaitán.

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ

Dr. STEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA

PROFESOR SECRETARIO GENERAL

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI

Dra. EVA VILLANUEVA TARAZONA

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

El que suscribe, Asesor de la presente Tesis titulada:

Efecto de la concentración de un consorcio microbiano nativo en la degradación de materia

Ramírez Lecca continuar con los trámites correspondientes.

Ms. C. Jaime Enrique Agreda Gaitán

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y

Trujillo, Mayo 2016

Luis Hernan Mendoza Medina Joe Luis Ramírez Lecca

Bachiller en Ciencias Biológicas Bachiller en Ciencias Biológicas

MIEMBROS DEL JURADO

Dr. ANIBAL QUINTANA DÍAZ

Ms. C. JAIME ENRIQUE AGREDA GAITÁN

informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo

Dr. ANIBAL QUINTANA DÍAZ

Ms. C. JAIME ENRIQUE AGREDA GAITÁN

Gracias a todas aquellas personas que están y estuvieron a mi lado, y quienes

A los señores trabajadores de la sección técnica del departamento de

Microbiología y Parasitología. Al señor Carlos Alberto Guzmán Delgado y al señor

siempre ha estado brindándome su comprensión, cariño y amor incondicional. No fue

esperanzadora, me decías que lo lograría perfectamente. Me ayudaste hasta donde te era

posible, incluso más que eso.

verdaderos amigos y sé que siempre contare con ellos.

no te tenga conmigo siempre estarás en mi corazón y en mi mente.

arduo. Mis mejores deseos para ti ahora y en tu futuro.

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……...….……..ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS…………...…….iii

AGRADECIMIENTO AUTOR 1…………………………………………………………ix

DEDICATORIA AUTOR 2……………………………………………………………….x

AGRADECIMIENTO AUTOR 2………………………………………………………..xi

1. MATERIAL DE ESTUDIO ……………………………………………...............13

2.1 Recolección De La Muestra……………………..…………………………….13

2.2 Preparación y prueba de los biorreactores…………………………………….14

2.3 Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del

A. Aislamiento del consorcio microbiano nativo a partir del sedimento

de las aguas residuales colectadas del canal de regadío “Santa

B. Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno

C. Determinación de la Materia Orgánica Consumida

D. Determinación de Coliformes Totales……………………………..18

2.6 Análisis Estadístico…………………………………………………………....18

Anexo 01. Ubicación geográfica y localización satelital de la provincia de Chepén en el

Anexo 03. Plano de ubicación de los puntos de toma de muestra para la

trabajo, usado para la determinación de la capacidad degradativa del Consorcio

Anexo 07. Aislamiento del consorcio microbiano nativo y estandarización del

Anexo 08. Determinación de oxígeno disuelto y la demanda bioquímica de

tratamiento de las muestras residual proveniente del efluente del canal de

regadío “Santa Rosa”…………………………………………………………49