FORMATO GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

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PRÁCTICA N° 9

Título de la Práctica: DESARROLLO DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO:

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES DE UNA MUESTRA
VEGETAL
Asignatura: Análisis instrumental. Semestre: V

1. OBJETIVOS.

1.1General:

1.1.1: Desarrollar un método espectrofotométrico para la determinación del contenido de

fenoles totales de una muestra vegetal.

1.2 Específicos

1.2.1: Desarrollar un método espectrofotométrico

1.2.2: Construir una curva de calibración
1.2.3: Determinar el contenido de fenoles en una muestra vegetal.

2. INFORMACIÓN BÁSICA PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

En todos los laboratorios de química se requiere por necesidad el establecimiento de ciertas

reglas de conducta y normas de seguridad, de cuyo cumplimiento dependen el orden en el
trabajo, la comodidad y la seguridad de todos los estudiantes y docentes dentro del
laboratorio. La mesa, materiales y equipos utilizados deben quedar limpios y en su lugar
correspondiente antes de salir del laboratorio. Las llaves del gas y del agua deben quedar
debidamente cerradas.

A continuación, se enuncian algunas reglas generales que se deben leer cuidadosamente:

 Previamente para cualquier práctica de leer las instrucciones dentro de esta guía de
laboratorio y experimento antes de ir al laboratorio.
 Utilizar los implementos para su seguridad definidos en esta práctica de laboratorio.
 No toque nunca los compuestos químicos con las manos a menos que se le autorice.
 Para la manipulación de compuestos químicos, utilizar espátulas, pinzas, etc.
 Lavarse las manos antes de salir del laboratorio.
 Deje pasar suficiente tiempo para que se enfríen el vidrio y los objetos calientes antes
de manipularlos.
 Todos los sólidos y papeles que sean desechados se deben arrojar a un recipiente
adecuado para desechos contenedores y caneca de color rojo.
 No arroje al sifón cerillas, papel de filtro o sólidos poco solubles.
 Compruebe cuidadosamente los rótulos de los frascos de reactivos antes de usarlos.
 No devuelva nunca a los frascos de origen los sobrantes de compuestos utilizados, a
menos que se le indique.
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3. FUNDAMENTO TEÓRICO

Para la cuantificación de sustancias que puedan absorber la luz que las atraviesa, las
técnicas espectrofotométricas son confiables y de fácil manejo. Además, no sólo sirven
para calcular la cantidad de soluto presente en una disolución, sino también se puede
utilizar para identificar sustancias de manera cualitativa.

Cuando se realiza un proyecto de investigación, se puede requerir el desarrollo de un

método espectrofotométrico para cuantificar algún soluto o quizás el producto de una
reacción, que tengan la cualidad de absorber la luz. Para conseguir esto se necesita:
a) Conocer la longitud de máxima absorbancia del compuesto, que se obtiene haciendo
un barrido en la región del espectro de absorción de interés.
b) La preparación de una curva de calibración con disolventes de concentración
conocida. Conocer la curva permite verificar si la ley de Beer- Lambert se cumple en el
intervalo de trabajo.
c) Conocer si hay interferencias entre los reactivos, si las reacciones involucradas son
estables en las condiciones de trabajo y si hay reproducibilidad en los resultados
experimentales

4. TRABAJO PREVIO

4.1: Definir la ley de Beer-Lambert

4.2: ¿Qué es una curva de calibración?
4.3: ¿Cómo se construye una curva de calibración?
4.4: ¿Qué son los fenoles? ¿Qué métodos existen para determinar el contenido de fenoles?

5. ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA

5.1 Materiales y Equipos

Espectrofotómetro Gradilla para tubos de ensayo

2 celdas para espectrofotómetro Balón volumétrico de 50 ml
Vidrio de reloj 2 Erlenmeyer de 100 ml
Espátula 1 pipeta de 2ml
Transferpipetas 4 Beacker de 50 ml
4 balones volumétricos de 10 ml 1 pipeta de 10 ml
2 Beacker de 200 ml Puntas para transferpipetas
20 tubos de ensayo de 20 ml

5.2 Reactivos

Folín-Ciocalteu fruta o planta.

Ácido gálico
Na2CO3
Nota: Se necesita un extracto de una
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5.3 Elementos de Protección Personal

Guantes Bata
Gafas

6. DESARROLLO EXPERIMENTAL (Describa detalladamente como se va a realizar cada una

de las etapas de la práctica de laboratorio)

6.1. PREPARACIÓN DE MUESTRA

Tomar 5g de hojas frescas, agregar 10 ml de etanol y triturar. Hacer un lavado con 5ml de
etanol, filtrar la solución.

6.2 Determinación de fenoles (expresados como ácido gálico)

El análisis de fenoles totales se realiza por el método de Folín-Ciocalteu, de acuerdo
con lo establecido por Waterman y Mole (1994) y Scalbert (1992), utilizando ácido
gálico como estándar, por lo que los resultados se expresan como porcentaje de ácido
gálico en cada extracto. El método espectrofotométrico consiste en agregar 15 µL de
muestra a un tubo de ensayo, 127,5 µL de agua destilada, luego 37,5 µL del reactivo
comercial de Folín-Ciocalteu. Dejar reposar 5 min. Agregar 120 µL de Na 2CO3 al 7,1 %
p/v. El blanco de muestra consiste en 15 µL de muestra, 165 µL de agua destilada y
120 µL de Na2CO3 al 7,1 % p/v. Se deja reaccionar por una hora y se mide la
absorbancia a 760 nm. Se prepara una curva estándar de 50 a 500 ppm de ácido
gálico (50, 100, 200, 300, 400 y 500 ppm).

7. RESULTADOS

1. Construya una gráfica de la absorbancia en función de la concentración (mol/L).

Compruebe en que intervalo se cumple la ley de Beer- Lambert.
2. Determine el contenido de fenoles totales en la muestra problema, exprésela en
µmol de Ácido gálico/g de muestra.

8. BIBLIOGRAFÍA

Waterman, P.G. y S. Mole. 1994. Methods in ecology. Analysis of phenolic plant

metabolites. Blackwell Scientific publications. 237p.

Scalbert, A. 1992. Quantitative methods for the estimation of tannins in plant tissues.
Plant polyphenols. Plenum Press, Nueva York. 450 p.