Universidad Autónoma Juan Misael Saracho

Departamento de Investigación, Ciencia y Tecnología

Establecimiento invitro de dos Variedades de

Arándano (Vaccinium corymbosum)

Autores: Ing.Agr. Joel Kaleb Nuñez Cespedes

Ing.Agr. Joaquín Alejandra Díaz De La Quintana

DATOS GENERALES RESUMEN

El arándano tiene cualidades nutricionales y antioxidantes que lo hace un fruto de

Laboratorio de
alto valor medicinal y nutricional. Su adaptación en los valles de Tarija del país lo
Fitopatología y
Cultivo in vitro posiciona como especie de interés, por lo que, disponer de técnicas para la obtención
de la Facultad de material de siembra clonal es recomendable. El objetivo de esta investigación fue
de Ciencia continuar con el desarrollo del protocolo para la micropropagación de esta especie.
Agrícolas y
Se validó la etapa de establecimiento in vitro y se incluyó el uso de desinfectantes
Forestales
más efectivos como la combinación de jabón (5 ml.l-1) y hipoclorito de sodio (3%
dependiente
de la i.a.) en esta etapa. Se logró establecer material de campo en el invernadero mediante
Universidad la siembra de plantas, enraizamiento de estacas y germinación de semillas sin
Autónoma necesidad de usar ningún tipo de reguladores de crecimiento y se observó 90% de
Juan Misael
supervivencia y adaptación a las condiciones ambientales del invernadero. Una señal
Saracho
de la adaptación mostrada por las plantas recolectadas en el campo fue que el 40%
PALABRAS
presentó floración y fructificación. Con las estacas establecidas asépticamente se
CLAVES
evaluó el efecto de tres reguladores del crecimiento en el medio de cultivo WPM al
Germinación.
50%, BA (0, 3, 5, 10, 15 y 20 mgl-1), Z (0, 0,1, 0.5 mgl-1), observándose que ambas
Embrión.
citocininas fueron efectivas en concentraciones de 3 mgl-1. y 0,1 mgl-1
Medio de
Cultivo. respectivamente , pero el mejor procedimiento para la brotación y multiplicación
Desinfección. consistió en la exposición de las microestacas a un choque térmico a 5ºC por 15 días,
Hormonas. utilizando el mismo medio con 120 gl-1 de sacarosa y 0,1 mgl-1 de Z.
Crecimiento.
Posteriormente, los materiales fueron transferidos al medio WPM líquido
Contaminación.
Tratamiento. suplementado con 30 gl-1 de sacarosa y 0,1 mgl-1 de Z con puente de papel de filtro,
lo que disminuyó la oxidación de los explantes y mejoró las condiciones
nutricionales del cultivo reflejándose en mayor crecimiento y mejor apariencia de
los brotes.
 INTRODUCCION.

El nogal (Juglans sp) es un árbol con un factor geográficamente entre las siguientes
económico muy importante ya que se puede coordenadas: 21°28´ de latitud sur y 65°25 de
obtener muchos sub productos de este árbol como longitud Oeste, a una altura 2.458 m.s.n.m. del
ser: madera dura homogénea, se puede extraer Municipio de Yunchara, Provincia Avilés del
aceite del fruto, de la hojas se obtiene vermífugos Departamento de Tarija, los meses calurosos de
los cuales sirven para la industria farmacéutica, octubre a marzo y la mínima en los meses de
se puede extraer del nogal sustancias químicas invierno abril y septiembre que corresponden
que sirven para la elaboración de fungicidas también a la época seca. Los promedios
como también se obtienen tintes de color pardo mensuales de temperatura varían de acuerdo con
oscuro. (Bleisser, 2008) las estaciones siendo los meses más fríos junio y
julio y los más de lluviosos se presentan en los
Este trabajo de investigación busca una
meses de noviembre a marzo.
alternativa para la multiplicación, por medio de la
técnica de cultivo in vitro, para la producción de Para la investigación, en la fase de
plantines a partir de embriones, sin seleccionar establecimiento, se usó el diseño experimental
semilla ya que el nogal es una especie forestal completamente al azar de acuerdo al siguiente
importante, misma que en los últimos tiempos se orden:
la está tomando en cuenta como una especie para
Diseño: Completamente al azar con arreglo
la producción de nuez, ya que esta tiene muchas
bifactorial dos por cuatro.
ventajas nutritivas.
Factor A: Dos métodos de desinfección
MATERIALES Y METODO.
(Cloroformo y alcohol con hipoclorito de sodio).
El estudio se realizó en el laboratorio de
Factor B: 4 medios de cultivo (Medio base WPM
Fitopatología y Cultivos in vitro dependiente de
Woody Mediun Plant, con variación en
la Universidad Autónoma Juan Misael Saracho,
Fitorreguladores)
ubicado en la zona de El Tejar, se encuentra en la
Ciudad de Tarija, Provincia Cercado a 21°33" de Nº de repeticiones: 3
latitud Sur y 64°48 de longitud Oeste, a una altura
Nº de tratamientos: 8
de 1859 m.s.n.m.
Unidad experimental: 4 tubos de ensayo (un
El material vegetal (embriones) proviene de la
embrión por tubo)."
Comunidad de Tojo se encuentra ubicada
La metodología de investigación que se utilizó es la hipótesis nula, donde los métodos de
la investigación " Experimental y Descriptiva", desinfección no reflejan significancia.
pues se evaluó el porcentaje de contaminación, el
porcentaje de regeneración y la concentración de
Fitorreguladores con concentraciones de BAP
(1,5 mg/l) - IBA (0,15 mg/l), BAP (2 mg/l) - IBA
Grafica 1. Comparación de los métodos de
(0,2 mg/l), BAP (2,5 mg/l), - IBA (0,25 mg/l) y
desinfección.
BAP (3 mg/l) - IBA (0,3 mg/l) y se los trato con
los dos métodos de desinfección, los cuales Numero de tubos contaminados
consistieron en sumergir los embriones en
23
alcohol etílico al 75% por 30 segundos, luego en
16 16 17
hipoclorito de sodio al 4% durante 10 minutos y
se realizaron tres enjuagues con agua destilada; 12
10
en el otro método se pusieron los embriones 5 ml
de cloroformo en un frasco de vidrio 0
herméticamente cerrado durante 10 minutos. 0 3 7 12

CLOROFORMO
RESULTADOS Y DISCUSIÓN. HIPOCLORITO DE SODIO Y ALCOHOL

Método de desinfección.
En la Grafica 1. Se muestra claramente que el
Se compara los métodos de desinfección para mejor método de desinfección es con alcohol –
evaluar cuál es con menor contaminación. hipoclorito de sodio.

Cuadro 1. Comparación de los métodos de Bleisser (2008) señala que la contaminación es

desinfección. del 100% con el método de desinfección con
Análisis de Varianza (ANOVA). alcohol e hipoclorito de sodio. Al 70%
sumergidas las yemas en alcohol por 30 segundos
Fv gl SC CM FC FT 5% FT 1%
y en hipoclorito de sodio a al 2%, sumergidas por
TOTAL 23 19583.3
10 minutos.
Trata 7 7500 1071.4 1.4 2.66 4.03
Error 16 12083.3 755.2 Esto indica que la concentración al 4% de
hipoclorito de sodio sumergiendo el material
De acuerdo con el cuadro 1, Fc = 1,4 < Ft = 2,66
vegetal por 10 minutos, presenta menor
Fc es menor que la Ft al 5% (No existen
contaminación que la aplicación al 2% de
diferencias significativas), debido a esto se acepta
hipoclorito de sodio por 10 minutos.
 La concentración de fitohormonas que utilizaron
Pérez y Quenta (2015) es de 0,15 mg de ácido
Porcentaje de germinación
indolbutórico y de 1,5 mg 6 – bencilaninopurina;
Es la germinación que se manifestó en los esta concentración presentó 90% de germinación,
diferentes tratamientos. en cambio la concentración de 2,5 mg de 6 –
bencilanimopurina y 0,25 mg de ácido
Cuadro 2. Comparación de los métodos de
desinfección. indolbutirico presentó un 66,66% germinación.

Análisis de Varianza (ANOVA). Promedio de crecimiento embrionario

Fv gl SC CM FC FT 5% FT 1% A los 70 días se midieron los embriones para

TOTAL 23 14583.3
sacar el promedio entre los tratamientos
Trata 7 5833.3 833.3 1.5 2.66 4.03
Error 16 8750 546.9
Grafica 3.Promedio del Crecimiento

De acuerdo con el cuadro 2, Fc = 1,5 < Ft = 2,66 embrionario (cm).

Fc es menor que la Ft al 5% (No existen

diferencias significativas), debido a esto se acepta
la hipótesis nula, donde los métodos de
desinfección no reflejan significancia.

Grafica 2. Comparación de los porcentajes de

germinación cuarto ensayo.

En la Grafica 3 se puede observar que hasta los

70 días, los embriones, del tratamiento 6
crecieron en un promedio de 2,8 cm.

Perez y Quenta (2015) dicen que a los dos meses

se tienen embriones crecidos hasta una altura de
3,5 cm.
El porcentaje con mayor germinación es de La concentración de fitohormonas de Pérez y
66,66% del Tratamiento 7. Quenta (2015) es de 0,15 mg de ácido
Pérez y Quenta (2015) indican que obtuvieron un indolbutírico y de 1,5 mg 6–bencilaninopurina;
90 % de germinación. en estas concentraciones, los embriones
presentaron un promedio de crecimiento de 3,5
cm, a diferencia de la concentración de 2 mg de trabajo proviene de plantas silvestres sin
6–bencilanimopurina y 0,20 mg de ácido identificar, que se encontraban en una finca
indolbutírico con un promedio de crecimiento de familiar en la comunidad de Tojo.
2,8 cm.

Comparación del tiempo de germinación

entre los tratamientos

Grafica 4.
a b c d

a) Germinación del embrión vista desde un

microscopio a los 10 días.

b) Crecimiento embrionario de 1,8 cm a los 24

días.

En la Gráfica se puede observar que el c) Crecimiento embrionario de 4 cm a los 52

tratamiento 6 tiene un embrión germinado a los días.
10 días. A los 24 días, los tratamientos 3 y 7
d) Crecimiento embrionario de 5 cm formación
tienen un embrión germinado; a los 52 días, se
de hojas a los 80 días.
observa que los tratamientos 2, 3 y 5 presentan
germinación de los embriones. En conclusión, CONCLUSION
todos los tratamientos germinaron hasta los 70
En conclusión, los tratamiento con mejores
días, pero en diferentes fechas. Según Perez y
resultados para el establecimiento in vitro del
Quenta (2015) indican que la germinación
nogal son: el tratamiento 7 con el medio del
comienza a las dos semanas después del
cultivo WPM Woody Plant Medium, con la
establecimiento en laboratorio, pero el tiempo de
concentración de fitohormonas de BAP 2 mg/l -
germinación de los embriones del nogal Juglans
IBA 0.2 mg/l y el método de desinfección con
bolivianita es homogéneo.
hipoclorito de sodio y alcohol; y como alternativa
La homogeneidad de la germinación de la semilla
, el tratamiento 6 con el medio del cultivo WPM
se debe a la procedencia del material vegetal,
Medium Woody plant con la concentración de
dicha semilla es del Bancos de Germoplasma de
fitohormonas de BAP 2.5mg/l - IBA 0.25 mg/l y
Especies Tropicales y Vegetales Agrícolas de la
el método de desinfección con hipoclorito de
comunidad de Palos Blancos Sud Yungas,
sodio - alcohol.
mientras que la semilla que se usó para este
BIBLIOGRAFIA.

Bleisser, V. 2008. Cultivo in vitro del nogal Juglans regia a partir de yemas. 60p – 70p

De los Ángeles, M. 2003. Micropropagación de selección de nogal (Juglans regia L) para su uso como
patrones frutales. 14p

Infoagro. 2005. El cultivo del nogal [en línea] http://www.infoagro.com/frutas/frutos_secos/nogal.htm

visitado: 10/02/2016

Pérez, J y S, De Demetrio. 2012. Establecimiento in vitro de Abies Guatemalenses (Pinabete) a partir de

embriones cigoto 2p – 12p

Valdez, H. 2011. Técnicas experimentales, Diseños experimentales 1. 19p – 20p, 35p – 37p