La giberelina antagoniza la defensa inducida por jasmonato contra Meloidogyne

graminicola en arroz

Henok Zemene Yimer, Kamrun Nahar, Tina Kyndt , Ashley Haeck, Lieven Van Meulebroek, Lynn
Vanhaecke, Kristof Demeestere, Monica H€ofte and Godelieve Gheysen.

Hipótesis:
 El aumento de la respuesta de Jasmonato en la biosíntesis de Giberelina y los mutantes de
señalización desempeña un rol en la susceptibilidad reducida a M. graminicola.
 La defensa inducida por JA contra M. graminicola implica la represión de la vía de GA.
 La degradación de SLR1 mediada por GA libera JAZ para atenuar la respuesta de defensa basal
inducida por JA contra los nematodos.

Objetivos generales:
 Desarrollar una caracterización profunda del rol que cumple la Giberelina en la interacción
compatible entre el arroz y la RKN M. graminicola.
 Conocer la interacción entre la auxina y la vía de Jasmonato con Giberelina después de la
infección por M. graminicola en el arroz.
Resultado
1. La infección por Meloidogyne graminicola induce la acumulación de GA12 en agallas
Post infección de M. graminicola se obtuvo el crecimiento y reducción cuantitativa de
diferentes fitohormonas (GA3, JA, SA y IAA); destacándose una elevada concentración de
IAA y JA en la llagas producidas por nematodos que en las puntas de raíz, a la vez, se observó
que las concentraciones de GA3 no fueron medibles o cuantificadas, pero gracias a la masa
molecular se determinó la presencia de GA12, la cual, se presentó principalmente en las agallas.
2. Tratamiento foliar con una baja concentración de GA3 y Susceptibilidad a M.
graminicola en arroz.
La plantas T65 a exponerse a diferentes concentraciones de GA3 (0,1, 1, 10, 100 μM) se
estableció que la concentración que potencia la producción de llagas en las raíces es de 0,1
μM, a comparación con la planta control, en las concentraciones restantes no se observaron
variaciones en el número de llagas producidas por nematodos, luego de los resultados
obtenidos se realizó una medición cuántica del número de individuos por planta, este fue
mayor en la los 0,1 μM de GA3 dando como resultado que la Giberelina influye principalmente
la atracción de nematodos y / o su penetración en las raíces.
3. La vía de la AG es importante para la infección por M. graminicola sobre el arroz

Al exponer plantas con diferentes mecanismos de acción para reducir o inhibir la biosíntesis de AG o
su señalización con M. graminicola, se obtuvo que las plantas mutantes gid1-8, gid2-2 y SLR 1-d1
fueron menos susceptibles a la infección por los nematodos, al ser comparadas con la plantas silvestres.
Es importante mencionar que las plantas gid2-2 fueron las menos susceptibles a la infección. De modo
opuesto, la planta mutante slr1-1 que fue más susceptible. En las plantas T65 y d35 (tratadas con GA3)
se observó que el Nº de llagas por planta fue mayor en comparación a las mismas variedades tratadas
con Uniconazol 10μM que es un inhibidor de la biosíntesis de GA.
 4. La susceptibilidad del arroz inducido por el ácido giberélico por M. graminicola no aumenta con
la adición de auxina, pero se bloquea al inhibir el transporte de auxina.

Las exponer plántulas con un de GA3 o con Auxina sintetiza NAA durante 15 días como pre-
tratamiento para una posterior inoculación de nematodos, se obtuvo que las hormonas aumentan la
susceptibilidad de las plantas, de manera conjunta al igual pero en menor grado cuando el tratamiento
es realizado con una sola hormona. Al utilizar la variedad mutante GH3.1 que codifica una IAA-amido
sintetasa que conjuga IAA con aminoácidos, lo que da como resultado concentraciones reducidas de
IAA endógena, se observó una reducción significativa en el número de nematodos por planta y el
desarrollo de los nematodos, al igual que en el tratamiento anterior con GA3 se observó un aumento
en el número de nematodos y llagas por platas. Otro de los tratamientos realizados es la inhibición del
transporte de Auxinas por medio de NPA provocando una reducción en el Nº de llagas y desarrollo de
nematodos, y al realizar conjuntamente el proceso anterior con GA3, la susceptibilidad de las platas
aumento.
5. La aplicación de 0.1 μM de GA3 anula la defensa inducida por JA contra M. graminicola en el
arroz

Con el propósito de confirmar que la fitohormona jasmonato reduce la susceptibilidad de las plantas
frente nematodos se adiciono 100 μM de MeJA en plantas de arroz, obteniendo como resultado una
reducción importante en el número de individuos por planta, otro tratamiento fue la utilización de un
inhibidor en plantas T65, que dio como resultado un incremento en la susceptibilidad, pero al realizar
el tratamiento conjuntamente entre 0,1μM de GA3 y 100 μM de MeJA, la tasa de nematodos aumento,
estableciendo que la GA supera la defensa generada por Jasmonato.
6. La respuesta de defensa inducida por jasmonato contra M. graminicola depende de la
represión basada en SLR1 de la señalización de GA

Al realizar tratamiento conjuntos entre plantas mutantes en señalización y biosíntesis de GA

y el tratamiento de MeJA entre las t35 y plantas silvestres, se obtuvo una reducción en el
grado de susceptibilidad frente nematodos en las plantas silvestres pero no en las variedades
d35 y gid1-8, con el propósito de obtener mayor información más se realizó un estudio sobre la
expresión de GA y JA tanto en plantas mutantes como silvestre, en este proceso, se obtuvo como
resultado que el gen GA (OsGA20ox) interactúa negativamente frente a los genes reguladores de JA
(OsAOS2) y su factor de transcripción Myb, se ha establecido que la vía JA es dependiente de la vía
GA, ha demostrado que JA reprime la respuesta de GA liberando el regulador negativo de la vía de
GA, SLR1 (Ikeda et al., 2001). Los resultados a la interacción de nematodos frente slr1-1(susceptible
a GA) en presencia de MeJA, se obtuvo que la susceptibilidad de nematodos es baja, además de una
elevada tasa de crecimiento de M. graminicola.
Discusión
1. La giberelina desencadena la susceptibilidad del arroz a M. graminicola

En estudios realizados tanto en Arabidopsis como en el arroz la función de la hormona Giberelina

es opuesta, lo cual, permite establecer que la respuesta de esta fitohormona depende del tipo de
nematodo y la plasta hospedera, a la vez cabe destacar que en los resultados anteriores se establece
que la interacción nematodo-planta depende de las concretrancion de GA.
Respecto al SLR1 es necesario mencionar de GA3 produce su degradación, lo cual, explica que durante
el procediendo de adición de GA3, se provocará una menor susceptibilidad frente M. graminicola
provocando que la vía GA aumentara y la vía JA disminuyera. En las plantas mutantes al ser tolerantes
GAR1 poseen una mayor concentración de SLR1 y por ende, se potencia la vía de biosíntesis de
jasmonato, estos resultados avalan la hipótesis establecida.
 2. La giberelina desempeña un papel dominante sobre JA en la determinación de la
susceptibilidad a RKN en el arroz

Estudios a priori demostraron que las plantas de arroz disminuyen se capacidad de crecimiento
ante la una infección por patógenos y aumenta sus defensas, generando que la vía JA prevalece
sobre la vía GA, de manera contrario con los resultados obtenidos, la vía GA suprimiendo la
vía JA siendo más importante el crecimiento que la defensa, el más claro ejemplo es cuando
se suministró GA3 y MeJA en platas silvestres y generando la misma susceptibilidad en el
tratamiento en ausencia de MeJA, este mecanismo puede originarse tanto por la concentración
de las hormonas, el tipo de nematodo, o el tejido donde se produce la infección, esto a la vez
puede explicarse por el llamado modelo de "alivio de la represión" (revisado por De Bruyne et al.,
2014), Donde se produce la degradación de la proteína SLR1 provocando la liberación del
represor de señalización de JA JAZ para obtener así MYC2, logrando interrumpir la
señalización de la vía JA, de forma contaría cuando GA está ausente, SLR1 se une de forma
competitiva con las proteínas JAZ, liberando así el factor de transcripción de JA MYC2 para
desarrollar y activar las respuestas de defensa mediada por JA

3. La defensa inducida por jasmonato contra M. graminicola implica la represión mediada

por SLR1 de las respuestas de GA.

Al exponer MeJA a la variedad mutante slr1-1, este no presento ningún tipo defensa frente a
los nematodos ya que este mutante no puede promover la acumulación de SLR1, en caso
contrario, en las plantas silvestres si se observó una disminución en la susceptibilidad frente
al nematodo M. graminicola logrando una represión de la vía GA por la acumulación de SRL1.

4. La susceptibilidad a los nematodos inducida por GA es independiente de la biosíntesis

de auxinas, pero no del transporte de auxinas.
las auxinas son gran importancia para el crecimiento y desarrollo de las plantas, a la vez, juega un rol
en la defensa de las plantas frente patógenos, en el arroz la auxinas promueven la sustentabilidad frente
hemibiotrofos, en el caso de los RKM promueve la formación de células gigantes y llagas en
Arabidopsis, los resultados obtenidos frente la aplicación de NAA, es una elevación en el número de
individuos por plantas, ya que, aumenta la sustentabilidad del arroz frente a nematodos, de manera
contraria al realizar el tratamiento con GA3 se observa que estas fitohormonas compiten entre sí, pero
es importante mencionar que la susceptibilidad del arroz a los nematodos promovido por GA3 es
independiente de la concentración de auxinas.
Respecto al tratamiento con el inhibidor NPA y GA3 se observa una clara reducción en la propagación
de nematodos, al igual que al utilizar NPA de manera individual, estableciendo que la vía GA depende
el transporte de auxinas.

Conclusión
A modo de conclusión es necesario destacar la importancia de la fitohormona GA en la defensa del
patógeno M. graminicola en plantas de arroz, a la vez, es importante mencionar que la vía señalización de
GA es un supresor de la vía de defensa JA y que esta vía produce la reducción de la vía GA a través de SLR1,
el mecanismo de acción por el cual existente distintas respuestas de plantas frente a patógenos depende del
hospedero, del nematodo, las concentraciones de GA, o por medio del "alivio de la represión", así mismo, es
necesario acentuar que el transporte de auxinas es necesario para la vía de GA.