INFORME DE LABORATORIO

Cuestionario pre laboratorio:

1. Realice una breve reseña histórica del desarrollo del microscopio
2. Describa brevemente las propiedades de las lentes.
3. ¿Qué es una imagen, real, una imagen invertida?

SOLUCIÓN:
1. Reseña histórica:

La historia del microscopio empieza con la invención del microscopio compuesto, es decir,
con la idea de combinar más de una lente para observar objetos de forma aumentada. Acorde
con esta definición, la historia del microscopio empezaría a finales del siglo XVI,
posiblemente con el diseño de Zacharias Janssen. Sin embargo, antes de la invención del
microscopio compuesto, ya existían los lentes con aumento, llamados lupas. Las lupas
también son una clase de microscopio denominada microscopio simple.
Primeramente, los lentes fueron utilizados desde civilizaciones antiguas, que los usaban para
ver objetos de forma aumentada, y también se utilizaban para concentrar los rayos de luz
sobre un punto, y de esta manera generar fuego. La lente más antigua que se ha conservado
es la lente de Nimrud, fabricada en el imperio asirio alrededor del año 750 a. C.
No se conoce muy bien quien fue el original inventor del microscopio, muchos reconocen a
Zacharias Janssen como el inventor del microscopio en el año 1590, creando así un
microscopio compuesto que contenía, un tubo y 2 lentes convexas a cada extremo que tenían
más capacidad de aumento que las lupas, este es conocido por muchos como el primer
microscopio compuesto, aunque la imagen que este proporcionada era borrosa.
Un supremamente importante microscopista, fue el Aleman Antonie van Leeuwenhoeck
nacido en Delft en 1632 ), que no importando su desconocimiento de la ciencia, con sus lupas
que tallaba sobre sobre esferas de cristal, que aunque con un aumento limitado, pudo observar
y encontrar bastantes bacterias, protozoos y la existencia de los glóbulos rojos, por tales
observaciones y aportes que realizó se le conoció como el padre de la bacteriología. Tiempo
después, en 1665 Robert Hooke dio el nombre de “célula”, debido a que al observar un corcho
con un microscopio, se dio cuenta que este estaba lleno de cells(celdas).
Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por
asociación de vidrios flint y crown obtenidos en 1740. En el siglo XIX, al descubrirse que la
dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o
más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes. Los métodos
seguidos por los ópticos eran totalmente empíricos y hasta la llegada de Abbe un joven físico
de la Universidad de Jena que desarrolla la famosa teoría del microscopio, según la cual, los
grandes aumentos son inútiles si la imagen de difracción no se reduce suficientemente a
expensas de la apertura numérica del objetivo.
2. Las lentes y sus propiedades:

La lente óptica:
 tiene la capacidad de refractar la luz y formar una imagen.
 La luz que incide perpendicularmente sobre una lente se refracta hacia el plano focal,
en el caso de las lentes convergentes, o desde el plano focal, en el caso de las
divergentes.

Convergentes:
 Las lentes convergentes son más gruesas por el centro que por el borde.
 concentran (hacen converger) en un punto los rayos de luz que las atraviesan.

Divergentes:
 las lentes son más gruesas por los bordes que por el centro.
 hacen diverger (separan) los rayos de luz que pasan por ellas.
3. Imágenes:

Imagen real: Es aquella imagen formada que se puede proyectar y se observa de forma
invertida. Cuando se utilizan lentes convergentes, dependiendo de la cercanía o lejanía, una
imagen puede invertirse(Cuando se mira de lejos) o se forma un imagen al derecho (cuando
se mira de cerca).

Imagen virtual: Es aquella imagen formada que no se puede proyectar. En este caso, cuando
se utiliza un lente divergente, se observa que no es posible proyectar la imagen sobre el papel,
debido a que aunque este derecha, su tamaño es supremamente pequeño.
 Microscopia

Montaje de la
lámina

Agua de
Buscar
cilantro No ¿Están los
materiales
materiales
necesarios
Hoja ?
milimetra
Si
da
Tela Poner gota
de agua/oil
en la lámina
Letra
impresa

Letra de Solicitar No Obtener

periódico uno microscopio

Si

Colocar
lámina en
la platina

Observar
con
objetivo
4x-10x-
40x

Macrometro
y micrómetro No Ver
enfocar enfocado

Si

Anotar
observaciones
2. Realice una breve descripción de los siguientes sistemas de observación microscópica:
 Microscopio óptico: instrumento que permite observar en un tamaño aumentado por un
juego de lentes y el uso de luz visible para aumentar la imagen de una muestra.
 Microscopio de campo oscuro: muestra la imagen formada por rayos difractados, el
cono iluminador es un cono hueco de luz. Tiene como desventaja que presenta imágenes
con poca resolución.
 Microscopio de contraste de fase: permite realizar exámenes inmediatos y observar
células vivas, se basa en el retraso que produce en las ondas de luz al atravesar objetos
de refracción, amplificando dichos retrasos.
 Microscopio de interferencia: Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes
combinadas aparecen como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado; se
observan especímenes gruesos.
 Microscopio de luz polarizada: es un dispositivo que deja solo pasar la luz que vibra en
un plano determinado que se denomina eje de polarización; se le agregan filtros que
modifican la imagen.
 Microscopio de fluorescencia: es una variación del microscopio de luz ultravioleta en
el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda, con los
que se tiñen las muestras a observar, y que posee además un filtro especial, que permite
el paso de la luz emitida por el fluorocromo.

4. Técnicas histológicas para un micro preparado

1. Obtención del material histológico:

Consiste en sacar la muestra de material histológico que puede ser de los tejidos que se
obtiene de diferentes formas
Se puede obtener haciendo biopsias, necropsias, frotis de células sanguíneas, frotis de células
superficiales entre otros estos son los métodos mas conocidos para la toma del material

2. Fijación:

En este proceso lo que se busca es evitar la destrucción celular y dar solidez al tejido o al
material. es un procesos físico-químico por el cual se busca mantener a las estructuras
orgánicas en el estado mas parecido que poseían en vida
Tipos de fijadores
Químicos:
Utilizan soluciones acuosas compuestas por moléculas fijadoras que establecen puentes entre
las moléculas del tejido, manteniéndolas en sus lugares originales e impidiendo su
degradación
+inmersión las piezas de tejidos se sumergen en la solución fijadora
+perfusión la solución fijadora se introduce a través del sistema circulatorio
Con el uso de soluciones simples como:
+alcoholes (etanol-metanol)
+formol (10%)

Físicos:
Los fijadores físicos se basan en una congelación muy rápida del tejido o bien en la aplicación
de calor elevado
+ebullición
+congelación (nitrógeno liquido y dióxido de carbono)

3. Lavado

Se debe lavar el tejido para retirar el exceso de fijador químico el lavado se debe realizar con
agua destilada para que mas adelante no interfiera con los cortes histológicos

4. Deshidratación

Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados para que el solvente actúe de forma
adecuada y el bloque de inclusión alcance la dureza requerida.
Las muestras se deshidratan en baños sucesivos en soluciones de concentración creciente de
alcohol etílico. Este proceso se hace para evitar la deformación de la morfología del tejido,
debido a la rápida salida del agua.
 5. Aclaramiento

Posterior a la deshidratación el tejido se debe sumergir en un liquido que sea miscible tanto
en el medio de inclusión como n el medio de deshidratación, el liquido comúnmente utilizado
es el xilol, esta etapa se conoce con su nombre de aclaramiento debido a que el tejido se
vuelve transparente.

6. Inclusión

Los tejidos fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para que de
ellos se obtengan secciones delgadas que puedan ser observadas al microscopio óptico, por
lo cual los tejidos deben ser incluidos en una sustancia de consistencia firme, la cual puede a
su vez ser hidrófila o hidrófoba, utilizando como medio mas frecuente el uso de parafina.

7. Microtomia (obtención de los cortes)

En esta etapa los tejidos y la parafina integran un solos bloque que posee la dureza y la
consistencia suficiente para obtener secciones delgadas y transparente que permitan el paso
de la luz, para esto se utiliza un micrótomo.
Retirado el exceso de parafina y formando una pirámide truncada.

8. Coloración o tinción

Consiste en que una estructura celular o tisular adquiere específicamente un color bajo la
acción de una sustancia colorante, para esto la parafina debe ser eliminada sumergiendo los
portaobjetos con los cortes en un solvente orgánico, luego los cortes deben ser hidratados
pasando por una serie de graduaciones decreciente de alcohol etílico, hasta llegar a una
solución que sea 100% agua. Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido
Se considera que una estructura se ha decolorado o teñido cuando al ser lavada con el liquido
que disuelve al colorante, no se decolora.
Los colorantes son sales pero se clasifican en:
+ básicos: en donde la molécula de sal que colorea es la base (azul de metileno, azul de
toluidina, hematoxilina)
+ ácidos: donde la molécula de sal que colorea es el acido (eosina)+ neutros: donde las dos
partes de la solución salina proporcionan color (eosinato de azul de metileno)

9. Montaje

Concluido el proceso de tinción de los cortes, estos se deben colocar en condiciones de

protección y de poder utilizar infinidad de veces sin que se deterioren.
Este procedimiento consistente en colocar encima del corte colorado y diafanizado una gota
de una sustancia adherente, diluida, generalmente el xilol y encima de ella una laminilla
cubreobjetos, cuidando de que no quede burbujas de aire entre la resina.
A continuación se deja que el xilol se evapore y la resina adquiera solidez suficiente, para
ello las laminas se colocan en una platina caliente (45 -50º) durante 24 a 48 horas y de esa
manera estarán listas para ser observadas.

Definir los siguientes términos:

Foco:
Punto donde se reúnen los rayos de luz, calor etc, reflejados por un espejo curvo o refractado
por una lente convergente.
Magnificación:
Técnica de ampliación o aumento del tamaño de una imagen.
Nitidez:
Exactitud y el grado de detalle con el que una fotografía representa la realidad.

5.
Al colocar una gota de aceite de inmersión, el cual tiene el mismo índice de refracción que
el vidrio, entre el objetivo de 100X y el portaobjetos (placa) se reduce significativamente la
dispersión de la luz que ocurriría sino se utiliza el aceite de inmersión. Por ello, se
incrementa la resolución de la imagen
6.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio, cada lente hace converger los
rayos luminosos que la atraviesan. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida.
Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la
imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa
sencillamente como una lupa, allí la imagen se vuelve virtual. La imagen que da el
microscopio es mayor, virtual e invertida
 Referencias
https://www.apsnet.org/edcenter/disimpactmngmnt/labexercises/Microscopio/Pages/default
.aspx
https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/magnificacion

http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Linea/Apu
ntes/3_tecnica_histologica.pdf

http://galofernandez.com/ensenanza/diccionario-fotografia-video/que-es-la-nitidez/

https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/magnificacion

http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%20Linea/Apu
ntes/3_tecnica_histologica.pdf

http://galofernandez.com/ensenanza/diccionario-fotografia-video/que-es-la-nitidez/