Investigacion de Crecimiento Micologico Tacna

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
Facultad de Ciencias
Escuela de Biología-Microbiología
Trabajo de Investigación
EVALUACIÓN DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE HONGOS AISLADOS DE
DISTINTAS PROVINCIAS DE TACNA
Notas de Autor
Paolo Barreda Zegarra, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
La correspondencia relacionada con esta investigación debe ser dirigida a Paolo Alejandro
Barreda Zegarra.
Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann, Av. Miraflores S/N, Tacna
Contacto: PaoloBarredaZegarra@gmail.com
Tacna, Perú - 2019

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Encabezado: EVALUCIÓN DEL CRECIMIENTO DE HONGOS EN TACNA
Copyright © 2019 por Paolo Barreda Zegarra. Todos los derechos reservados.
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Tabla de Contenidos
Capítulo I. Introducción ............................................................................................................. 1
Capítulo II. Objetivos ................................................................................................................. 2
2.1. Objetivo general .............................................................................................................. 2
2.2. Objetivos específicos ...................................................................................................... 2
Capítulo III. Revisión de la Literatura ....................................................................................... 3
3.1. Técnicas de medición del crecimiento micológico ......................................................... 3
3.1.1. Estimacion visual ..................................................................................................... 3
3.1.2. Peso seco .................................................................................................................. 3
3.1.3. Nitrogeno celular ...................................................................................................... 4
3.1.4. Medición lineal de colonias ..................................................................................... 4
3.2. Hongos de ambientes internos ........................................................................................ 6
3.3. Hongos asociados a la pudrición radicular ...................................................................... 8
3.4. Hongos en alimentos ..................................................................................................... 10
3.4.1. Chicha de jora ........................................................................................................ 11
3.4.2. Leche ...................................................................................................................... 11
Capítulo IV. Materiales ............................................................................................................ 13
4.1. Medios y soluciones ...................................................................................................... 13

iv
4.2. Instrumentos de laboratorio........................................................................................... 13
4.3. Equipos de laboratorio .................................................................................................. 13
4.4. Otros materiales ............................................................................................................ 13
Capítulo V. Marco Metodológico ............................................................................................ 14
5.1. Obtención de cultivo puro ............................................................................................. 14
5.2. Siembra para medición lineal ........................................................................................ 14
5.3. Caracterización morfológica macroscópica .................................................................. 15
5.4. Caracterización morfológica microscópica ................................................................... 15
5.5. Calculo de ritmo y curva de crecimiento ...................................................................... 15
Capítulo VI. Resultados ........................................................................................................... 16
6.1. Morfología macroscópica y microscópica .................................................................... 16
6.2. Ritmo de Crecimiento ................................................................................................... 27
Gráfica de comparación ................................................................................................... 29
6.3. Curva de Crecimiento ................................................................................................... 30
Gráfica de comparación ................................................................................................... 36
Capítulo VII. Conclusiones ...................................................................................................... 37
Capítulo VIII. Referencias bibliográficas ................................................................................ 39
Capítulo IX. Anexos................................................................................................................. 43

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Encabezado: EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO DE HONGOS EN TACNA
Capítulo I. Introducción
En la actualidad es importante el estudio micológico de los ambientes, alimentos y biosferas;
debido a que la presencia de ciertas especies de hongos determina la calidad del ecosistema,
previniendo pérdidas económicas.
Estos organismos tienen el rol de descomponedores primarios, actuando generalmente en la
materia muerta que se presenta en los animales y plantas, actuando como un agente fundamental
en los ciclos geoquímicos, degradando la materia y formando además nutrientes para el suelo que
permite el cultivo o desarrollo de especies vegetales que sirven como alimento para el reino animal,
por lo que también tienen una gran importancia biológica.
El hábitat natural de los hongos es muy variado, teniendo en algunos casos una manifestación
difícilmente visible debido a sus escasas dimensiones, encontrándose comúnmente en materiales
en descomposición, pero también pueden hallarse en suelos, o bien desarrollarse en la piel o pelos
del reino animal, como también siendo parasitarios de plantas.
El crecimiento los hongos varía de acuerdo a las condiciones ambientales y nutricionales, por
lo que la velocidad y ritmo que adopta una misma especie en dos medios es diferente. Es de
importancia conocer la velocidad del desarrollo micelial y levaduriforme para establecer un
margen de crecimiento.
Teniendo claro los puntos de investigación y su relevancia para nuevos estudios de la
identificación y taxonomía de especies no solo por caracterización morfológica (macroscópica,
microscópica) sino también por el desarrollo lineal en placas.
En el presente trabajo se evaluaron las velocidades de crecimiento de distintas especies de hongos
(entre filamentosos y levaduriformes) obtenidas de distintas muestras y zonas (ambiente de

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laboratorio de Botánica de la Faculta de Ciencias de la Universidad Nacional Jorge Basadre
Grohmann; pudrición radicular de Orégano en el Centro Poblado de Cambaya, Distrito de
Camilaca, Provincia de Candarave en la región de Tacna; leche y chicha de jora).
Capítulo II. Objetivos
2.1. Objetivo general
Evaluar la velocidad de crecimiento de hongos aislados de hongos aislados de distintos distritos
de Tacna.
2.2. Objetivos específicos
 Caracterizar la morfología macroscópica de los hongos aislados de distintos distritos de
Tacna.
 Caracterizar la morfología microscópica de los hongos aislados de distintos distritos de
Tacna.
 Calcular el ritmo de crecimiento de los hongos aislados de distintos distritos de Tacna.
 Trazar la curva de crecimiento de los hongos aislados de distintos distritos de Tacna.

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Capítulo III. Revisión de la Literatura
3.1. Técnicas de medición del crecimiento micológico
Ciertos métodos de medición del crecimiento se adaptan tanto a los microorganismos
filamentosos como a los unicelulares por los que se les llama universales. estos incluyen la
estimación visual, Peso seco el nitrógeno celular y la medición lineal.
3.1.1. Estimacion visual
La estimación visual es subjetiva, pero esta desventaja se compensa en algunos casos. Por
ejemplo, cuando se compara el crecimiento de un hongo en varios medios, este puede avanzar
rápido, ralo y superficial en unos, pero lentos, denso y profundo dentro del medio, además de tener
micelio aéreo tupido, en otros. El investigador puede llegar a establecer un sistema de evaluación
preciso si inicialmente correlaciona una apreciación visual con observaciones objetivas, como peso
seco. Se pueden realizar algo similar con colonias bacterianas o comparar la turbidez de cultivos
líquidos con un patrón constante (French & Hebert, 1980).
3.1.2. Peso seco
La determinación de peso seco se considera el método más exacto para medir el crecimiento,
pero tiene la desventaja que destruye al organismo y y para realizar mediciones periódicas es
necesario comenzar con muchos cultivos. L a metodología usual es cultivar el microorganismo en
medio líquido, separarlo por filtración o centrifugación y sacarlo en un horno a 70-
80ºC.Generalmente se realizan los cultivos en medios líquidos con agitación para que la aireación
sea adecuada.
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Los cultivos sin agitación o estacionarios de hongos aeróbicos tienes crecimiento casi
exclusivamente superficial. Debido a que muchas esporas y fragmentos de hongos utilizados como
inoculo se hunden en medios líquidos, es necesario introducirlos con un inerte (afrecho)para que
el inoculo flote y su crecimiento sea superficial; también se puede incluir una pequeña cantidad de
agar, goma arábiga, o alcohol polivinilico
El crecimiento de la mayoría de los hongos en medio liquido es anormal, por lo que es preferible
cultivarlos en medios solidos. Es mejor usar gelatina si se puede mantener baja la temperatura de
crecimiento (menos de 24 ºC) porque este solidificante se elimina fácilmente con agua caliente.
Cuando se usa agar es necesario fundirlo en un esterilizador Arnold o autoclave sin presión y luego
lavar el micelio con agua a punto de hervir. Aunque este tratamiento elimina ciertas sustancias, los
comparativos realizados con el mismo tratamiento son exactos . (French & Hebert, 1980).
3.1.3. Nitrogeno celular
El nitrógeno es un elemento que se encuentra en proporciones que varían muy poco en los
componentes del protoplasma de los microorganismos. Por lo tanto, la determinación de nitrógeno,
por el método micro-Kjeldahl, mide solo las células vivas. Es especialmente útil para los hongos,
puesto que por lo común las partes viejas de las colonias tiene células huecas, desprovistas de
protoplasma. (French & Hebert, 1980).
3.1.4. Medición lineal de colonias
Todo microorganismo que crece uniformemente sobre medio sólido, se presenta a la medición
lineal, la cual se puede repetir a intervalos para establecer el ritmo de crecimiento. Hongos,
levaduras y bacterias para este propósito puede observarse en placas Petri, pero para los hongos
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filamentoso hay dos sistemas más que presentan ventajas; los tubos de crecimiento proporcional y
los tubos con dique.
Colonias fungosas
Los hongos crecen solo por la parte terminal de las hifas y el micelio posterior envejece y muere.
Las hifas terminales se ramifican según las condiciones ambientales, especialmente las nutritivas.
Lo que se mide es el avance del micelio. E s importante en toda determinación de avance, que se
establezca el crecimiento intrínseco del hongo antes de marcar el comienzo de la extensión a medir
para esto se recomienda inocular la porción del hongo procedente del borde de avance de una
colonia que crece bajo condiciones idénticas a las de la prueba : calidad y cantidad de medio , luz
, temperatura, recipiente. (French & Hebert, 1980)
Tubos de crecimiento
Los tubos de crecimiento proporcional “growth rate tubes ” , se fabrican en tubos de Pyrex de
13 mm de diámetro interno y 40 cm de largo . Los 5 cm finales en ambos extremos se doblan hacia
arriba a un angulo de 45 grados.Se llenan hasta la mitad con medio nutritivo y se taponan ambos
extremos con algodón , para que exista una aireación superior a la que ocurre en os tubos con dique
de una sola abertura .El crecimiento se canaliza en una franka estrecha de medio , de unos 30 cm
de largo , condición muy superior al uso de placas o tubos dique para estudios de crecimiento
lineal. (French & Hebert, 1980)

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Tubos con dique
Los tubos con dique “ dam tubes” son tubos de prueba de 25 mm ( 1 pulgada ) de diámetro
cerca de cuya abertura el vidrio está hundido transversalmente formando una elevación o dique en
el interior. Este dique permite la solidificación del medio con el tubo en posición horizontal y la
formación de una franja de profundidad y forma uniforme. Se inoculan al fondo del tubo. (French
& Hebert, 1980)
Placas de Petri
Para determinar el ritmo de crecimiento de un hongo sobre placas Petri, primero dibuje sobre
el envés de la placa una cruz marcando el centro, con lápiz de cera o plumón de tinta indeleble.
Identifique cada placa con un número, y marque los cuatro radios con una letra. Inocule el centro
del medio en la placa con el hongo que haya crecido bajo las mismas condiciones de estudio.
Incube hasta que se observe un avance definitivo del hongo y marque el punto de avance sobre los
cuatro radios marcados en la placa en ese momento se da inicio al estudio de crecimiento. A
intervalos apropiados de tiempo, marque y mida el incremento. (French & Hebert, 1980)
El ritmo promedio de crecimiento se calcula dividiendo el incremento total por el tiempo. Cada
radio representa una observación y se recomienda realizar unas 20 observaciones por condición en
estudios (5 placas)
3.2. Hongos de ambientes internos
Las esporas de hongos son las partículas más numerosas y diversas tanto en ambientes internos
como externos. Los hongos trasmitidos por el aire son uno de los principales biocontaminantes del
aire interno. La mayoría de los hongos presentes en los ambientes internos son saprofíticos, porque
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ellos obtienen lo que necesitan para su metabolismo de materiales muertos, materia orgánica o
sustratos como madera, papel, pintura, suelo, polvo, piel y alimentos. (Albright, 2001)
(Mantilla , Gamez, Muñoz, & Dominguez, 2016) en la investigación titulada : Aislamiento e
identificación de hongos ambientales presentes en áreas de almacenamiento de material
bibliográfico y oficinas en la Universidad de Santander UDES Bucaramanga , reportan los géneros
de hongos que fueron aislados con una mayor frecuencia en las áreas de almacenamiento de
material bibliográfico y oficinas de la UDES se encuentran: Penicillium sp., Alternaria sp., Mucor
sp y Cladosporium sp. adicionalmente pudo observarse que las condiciones de temperatura y
humedad relativa favorecen el crecimiento y la esporulación de estos microorganismos, por lo que
sus esporas o fragmentos hifales pueden encontrarse en la atmósfera en concentraciones
importantes constituyendo un riesgo para la salud humana y causan biodeterioro de materiales e
insumos almacenados en estos lugares
(Herrera, Cobar , & Barrios , 2014) mediante la Evaluación de la contaminación del aire por
hongos microscópicos en dos colecciones biológicas y dos museos de la ciudad de Guatemala,
determinaron la calidad del aire en el interior y exterior de la Micoteca Licenciado Rúben Mayorga
Peralta (MICG), el Herbario de Biología de Guatemala (Herbario BIGU), el Museo de Historia
Natural (MUSHNAT) y el Museo de la Universidad de San Carlos de Guatemala (MUSAC). Los
géneros predominantes durante los muestreos en ambos ambientes en todas las áreas muestreadas
fueron Penicillium sp., Cladosporium sp. y Aspergillus sp. Se logró el aislamiento de otros géneros
fúngicos de gran importancia Fusarium sp. y Paecilomyces sp

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3.3. Hongos asociados a la pudrición radicular
Dentro de la enfermedades fúngicas se nombra Phythophthora cryptogea que produce necrosis
a nivel del cuello de la raíz se caracteriza por un importante deterioro de las plantas, ramas secas
y las hojas presentan manchas amarillas, marrones y negras, este hongo, se presenta en primavera
en especial en suelos húmedos y compactados (Gómez, 2004). El orégano puede ser atacado por
una podredumbre debido al desarrollo de Botrytis cinerea y por Puccinia rubsaameni. Para el caso
de la mejorana se menciona a su vez el ataque de Puccinia menthae, así como Septoria origanicola
El orégano es afectado por hongos del género Botritis, Alternaria y Oidio. En Europa se cita
también en orégano el ataque de Phythophthora crytogea, patógeno frecuente de encontrar en los
cultivos de romero, tomillo y salvia.
Botrytis , se observa cuando el tiempo se presenta lluvioso y hay elevada humedad ambiente,
aparece principalmente en forma de tizones en las inflorescencias, como cancros o pudriciones del
tallo, manchas foliares y pudriciones de raíces. Al principio las manchas son pequeñas y de color
amarillo, luego se extienden, toman color marrón claro, se hunden, coalescen y pueden cubrir toda
la hoja.
Alternaria, este hongo imperfecto ocasiona manchas en las hojas (figura 23) y ocasionalmente
puede provocar pudriciones de cuello. Por lo general las manchas foliares son de color marrón
oscuro, con tintes violáceos.
F. oxysporum es predominantemente un saprofito abundante y activo del suelo y de materia
orgánica. Además algunas cepas tienen una actividad patogénica específica, pero constituyen una
porción muy pequeña de la población total del suelo aunque causan enfermedades importantes en
los cultivos. Algunas están poco especializadas y causan muerte de plántulas, necrosis o
podredumbres; sin embargo las formas responsables de las marchitez vasculares son las más
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importantes. Causan perdidas en plantas pertenecientes a todas las familias importantes de
angiospermas (a excepción de las Gramineae) en regiones templadas o tropicales (Smith 2002).
Se denomina Fusarium a un género de hongos filamentosos ampliamente distribuido a nivel
mundial. Entre los miembros de este género se incluyen varios fitopatógenos .Otras especies de
Fusarium que causan importantes pérdidas económicas son F. oxysporum y F. solani. F.
oxysporum existe como patógeno especializado, denominado forma especial (f. sp) según la/s
planta/s hospedante/s que afecte. Este hongo es capaz de infectar más de un centenar de especies
de plantas Gimnospermas y Angiospermas.En los últimos años, F. oxysporum se ha encontrado
en Argentina como agente etiológico responsable del marchitamiento de la lechuga y el
decaimiento del perejil (Malbrán , Mourelos et al. 2014, Lori, Malbrán et al. 2016).. Junto con F.
oxysporum esta especie ha sido responsable del decaimiento y colapso en plantas de orégano,
enfermedad que ha alcanzado una incidencia entre 7-23% (Gaetán, Madia et al. 2007).
Cylindrocarpon radicicola y Thielaviopsis basicola son dos hongos del suelo a menudo
asociados, que atacan el ciclamen en todos los estadios. Son el origen del retraso de crecimiento y
floración.
El Cylindrocarpon provoca sintomas aereos de pudrición de hojas adultas y necrosis en el bulbo
El Cylindrocarpon es un hongo parasito del suelo. Sin vegetales, es capaz de vivir en el suelo
en condiciones saprofitas. Su temperatura optimal de crecimiento es de 20-21°C. Se conserva en
el suelo bajo forma de clamidosporas y de esclerotios. Es comun en suelos alcalinos y en
condiciones asfixiantes (pH >7)

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3.4. Hongos en alimentos
Según (Orbera Raton, 2004) uno de los derivados lácteos mayormente alterados por la acción
de levaduras es el yogurt, debido a la adición de frutos y saborizantes derivados de frutos. Los
contaminantes de mayor incidencia son Deb. hansenii, K. marxianus, S. cerevisiae, Rho.
mucilaginosa, K. lactis, C. versatilis y P. toletana; en menor escala los
géneros Rhodotorula, Soporobolomyces y Debaryomyces.
En los quesos las levaduras participan en la maduración metabolizando el ácido láctico por lo
que elevan el pH y favorecen el crecimiento de bacterias proteolíticas. De forma general, la
microflora es muy específica en cada lechería y se piensa contribuye al bouquet específico del
producto. En los quesos conservados, incluso en refrigeración, predominan especies de Cry.
albidus, Cry. laurentii, Rho. minuta, Rho. glutinis, Rho. rubra; así como Deb. hansenii y Ya.
lipolytica. (Orbera Raton, 2004)
Según (Lopez Arboleda, Ramirez Castrillon, Mambuscay Mena, & Osorio Cadavid, 2010)en el
artículo titulado:Diversidad de levaduras asociadas a chichas tradicionales de Colombia ,Se realizó
el aislamiento de las levaduras más representativas de la chicha de piña, mais y arracacha durante
sus tres fases de fermentación: inicial, tumultuosa y final. Mediante técnicas moleculares se
lograron identificar las especies más representativas de los tres tipos de chicha: Candida
tropicalis, Pichia kluyveri, Pichia guilliermondii, Hanseniapora guilliermondii, Pichia
fermentans, Saccharomyces cerevisiae, Candida maltosa, Rhodotorula glutinis, Torulaspora
delbrueckii, Hanseniaspora uvarum, Kazachstania exigua, Kluyveromyces marxianus, Yarrowia
lypolitica, Candida parapsilosis, Debaromyces hansenii, Cryptococcus
arboriformis, Saccharomyces martiniae, Dekkera anomala, Aureobasidium pullulans y Candida
pseudointermedia. La caracterización preliminar de los aislados obtenidos, basada en pruebas de

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tolerancia a etanol y halo-tolerancia, permitió identificar levaduras nativas con posible utilización
biotecnológica en el sector industrial.
3.4.1. Chicha de jora
La chicha de jora es una bebida alcohólica obtenida por fermentación de la materia azucarada
contenida en el mosto del maíz germinado . Esta bebida es oriunda del Perú y en la actualidad se
consume en otros países de América del Sur. (Garcia Ventocilla, 2008)
En la fermentación de la chicha de jora intervienen diversas especies de bacterias lácticas y
levaduras que generalmente pertenecen al género Saccharomyces, en donde la especie
Saccharomyces cerevisiae constituye la principal especie responsable de la fermentación de esta
bebida (Manrique Saenz, 1978).
3.4.2. Leche
Levaduras son organismos unicelulares ovalados, 3 a 5 µm de diámetro. Se pueden encontrar
en ambientes con altas concentraciones de azúcar. En leche cruda suele encontrarse levaduras
como Cándida causante de leches espumosas debido a fermentaciones alcohólicas gaseosas.
Algunos géneros de levaduras y mohos son de importancia para la industria láctea. Su presencia
indica deficientes condiciones higiénico-sanitarias. Pueden producir deterioros en la leche o en
productos derivados. Los hongos que producen mico toxinas resultan muy peligrosos, sobre todo
a que estos metabolitos son termo resistentes. Algunas especies son utilizadas como cultivos
lácteos para el afinado de los quesos madurados como el Penicillium candidum y Penicillium
camemmberti en los quesos de corteza blanca como el Camembert y el Penicillium roqueforti en
los quesos de pasta azul (Roquefort).

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Otros como Saccharomyces lactis, Penicillium comune (hongo de sótanos), Geotrichum
candidum u Oospora lactis (hongos de leche ) y Monilia nigra, producen enzimas proteolíticas y
lipolíticas que afectan la leche y los productos lácteos. (Heer, 2007)
En la leche la contaminación por levaduras puede tener lugar después de la pasteurización y es
una contaminación secundaria, en la cual participan las especies Cry. flavus, Cry. diffluens, Deb.
hansenii y Kluyveromyces marxianus. La leche cruda refrigerada tolera el crecimiento de los
grupos Cry. curvatus, G. candidum, Deb. hansenii, entre otros.
las levaduras son una causa importante de deterioro de yogur y las leches fermentadas en las
que el pH bajo proporciona un entorno selectivo para su crecimiento. De igual manera (Orbera
Raton, 2004) comenta que los derivados lácteos mayormente alterados por la acción de levaduras
es el yogurt, debido a la adición de frutos y saborizantes derivados de frutos. Los yogures
producidos bajo condiciones de buenas prácticas de fabricación no deben contener más de 10
células de levadura. Los contaminantes de mayor incidencia son D. hansenii, K. marxianus,
Saccharomycescerevisiae, Rhodotorula mucilaginosa, Kluyveromyces lactis, Candida
versatilis y Peterozyma toletana; en menor escala los géneros Rhodotorula, Soporobolomyces
y Debaryomyces .
Mohos. No tienen importancia en la leche líquida pero si en los derivados lácteos (CELIS &
JUÁREZ, 2009).
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Capítulo IV. Materiales
4.1. Medios y soluciones
 Agar PDA
 Alcohol
 Azul de Lactofenol
4.2. Instrumentos de laboratorio
 Asa de Kolle
 Mechero
 Placa de Petri
 Portaobjetos
 Sacabocado
4.3. Equipos de laboratorio
 Estufa Autonics TZ4ST
 Microscopio Micros MCX50
4.4. Otros materiales
 Bolsa de polipropileno
 Camara
 Cinta adhesiva transparente
 Cuaderno de apuntes
 Marcador indeleble
 Regla milimetrada
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Capítulo V. Marco Metodológico
5.1. Obtención de cultivo puro
Las muestras de cultivo puro primario fueron aisladas de distintas zonas y alimentos, por lo
cual se dividio en tres grupos de hongos: Hongos ambientales del laboratorio de Botánica situado
en el primer piso de la Facultad de Ciencias de la Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann,
Hongos asociados a la pudrición radicular del Oregano en el centro poblado de Cambaya ubicado
en el distrito de Camilaca, Provincia de Candarave, en la región de Tacna; y Hongos de la leche
y chicha de Jora expendidas en el Mercado Mayorista Grau.
5.2. Siembra para medición lineal
Para la medición del crecimiento lineal de los hongos aislados se rotularon previamente placas
de Petri con medio Agar PDA en dos líneas (eje transversal y longitudinal) con el marcador
indeleble, obteniendo placas con un centro definido y cuatro zonas radiales iguales (A, B, C, D).
Se procedio a la resiembra de los cultivos puros, siguiendo las normas de seguridad y asepsia
con un sacabocado de 0,4 mm de diámetro se aislo una zona del cultivo de Hongos y se traspasó
al centro de la placa de Petri rotulada. Se delimito la zona ocupada por el bloque de agar
superpuesto para evitar una mala medición, se guardo en bolsas de polipropileno para evitar la
contaminación y se incubo a 25°C por una semana.
Se realizo la medición del crecimiento de los cuatro radios cada 24 horas (13:00), asi también
como la descripción morfológica macroscópica previa.

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5.3. Caracterización morfológica macroscópica
Despues de la semana de incubación para la medición lineal con los datos obtenidos, los cultivos
de expusieron a la luz por 1 dia para la esporulación. Posteriormente se realizó la caracterización
morfológica macroscópica del cultivo en PDA, las características a tomar en cuenta fueron: Talo,
Aspecto, Textura, Forma, Elevación, Superficie, Borde, Color anverso y Color reverso.
5.4. Caracterización morfológica microscópica
Después de haber caracterizado a los hongos macroscópicamente y de haberlos expuesto a la
luz para esporulación se realizó la técnica del Microcultivo para una mejor muestra microscópica
y que sea perdurable. Mientras el microcultivo se estaba incubando también se realizó la técnica
de la Cinta Adhesiva para la caracterización microscópica del hongo, las característica a tomar en
cuenta fueron: Hifas, Conidioforos, Esporas.
5.5. Calculo de ritmo y curva de crecimiento
Despues de haber recolectado los datos diarios del crecimiento en los cuatro cuadrantes (A, B,
C, D), estos valores fueron utilizados para el cálculo del ritmo de crecimiento (constate de
crecimiento) utilizando la siguiente fórmula matemática:
𝑚𝑒𝑑𝑖𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑢𝑙𝑡𝑖𝑚𝑜 𝑑𝑖𝑎𝑐𝑚

𝑟(𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜) = = 𝑅𝑖𝑡𝑚𝑜 𝑐𝑚/𝑑
𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑑í𝑎𝑠
Los datos también se representaron gráficamente siendo extrapolados en un esquema de
dispersión de dos variables (plano x = tiempo (días), eje y = distancia (centímetros)). Y finalmente
se hizo una comparación de los valores del ritmo y de la curva de crecimiento.

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Capítulo VI. Resultados
6.1. Morfología macroscópica y microscópica
Acremonium strictum
Tabla 1. Caracteristicas morfológicas de Acremonum strictum asociado a pudrición radicular.
Morfología macroscópica
Talo Micelial
Aspecto Algodonoo
Textura Humedo
Forma Circular
Elevación Plana y extendida
Superficie Presencia de surcos hacia los bordes
Borde Liso o entero
Color anverso Color blanquecino
Color reverso Crema, amarillento
Morfología microscópica
Septadas, Hialinas, delgadas, se agrupan
Hifas paralelamente que da apariencia de una hifa
gruesa de donde se originara el conidióforo.
Conidioforos simples, ocasionalmente
Conidioforo
ramificados con fialides delgadas.
Conidios cilíndricos, en su mayoría de 3,3-5,5 x
0,9-1,8 µm no forma clamidiosporas o
Esporas
esclerocios. Están agrupadas en cabezas viscosas,
cilíndricas o elipsoidales.
Fuente: Jhonatan Cotrado Flores (2019)
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Alternaria tenuissina
Tabla 2. Caracteristicas morfológicas de Alternaria tenuissina aislado del laboratorio de

Botanica.
Talo Micelial
Aspecto Algodonoso
Textura Seco/ opaco
Forma Circular
Elevación Elevada y extendida
Superficie Con anillos concéntricos
Borde Ligeramente filamentoso
Centro oscuro casi negro con aros concéntricos oliváceos y blancos
Color anverso
grisáceos.
Color reverso Centro oscuro casi negro con aros concéntricos grisáceos oscuros.
Hifas Dematiacea, delgada y septada
Simples o ramificados, rectos o flexuosos, septados , pálidos a
Conidioforo marrón medio o marrón oliváceo, hasta 300 µm de largo, 3-5 µm de
ancho.
Solitarias o en cadenas simples o ramificadas de 2 a 7, rectas o
ligeramente curvadas de forma variada pero comúnmente oclavadas
u ovaladas, simples a menudo rostradas de color pálido a medio o
a veces marrón oscuro u oliváceo, lisas a verruculosas, con hasta 8
Esporas transversales y numerosas longitudinales o septos oblicuos, 8-60
µm de largo, incluyendo el pico cuando está presente, 6-24 µm de
ancho en la parte más ancha, picos mayormente de 8 µm o menos
de largo; 2,5-4 µm de ancho, incoloros o más bien de color marrón
pálido
Fuente: Estefania Muñoz Anculle (2019)
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Aspergillus spp
Tabla 3. Caracteristicas morfológicas de Aspergillus spp. asociado a pudrición radicular.
Talo Micelial
Aspecto Granular
Textura Densa
Forma Circular
Elevación Convexo
Superficie Marcas radiales, anillos concéntricos
Borde Entero
Color anverso Marron amarillento
Color reverso Marron oscuro
Hifas Hialinas, septadas y delgada (2,5 a 5 um)
Septado, pared lisa, marron claro, con vesicula
Conidioforo
globosa (15 a 20 um)
En cadenas, pequeñas, lisas, elípticas a globosas
Esporas
1,25 a 2 um, posición columnar y de color marron.
Fuente: Keyla Ccori Cosacani (2019)
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Brettanomyces bruxellensis
Tabla 4. Caracteristicas morfológicas de Brettanomyces bruxellensis aislado de chica de jora.
Talo Unicelular, levaduriforme
Aspecto Mucosa
Textura Brillante, humeda
Forma Circular
Elevación Plana
Superficie Lisa
Borde Entero
Color anverso Crema
Color reverso Crema
Hifas No presenta hifas
No presenta conidióforo, reproducción asexual
Conidioforo
por gemación.
Esporas
Fuente: Ever Choque Apaza (2019)
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Brettanomyces spp
Tabla 5. Caracteristicas morfológicas de Brettanomyces spp. aislado de chicha de jora.
Talo Pseudomicelial
Aspecto Cremoso
Textura Opaco o seco
Forma Irregular
Elevación Plana y limitada
Superficie Surcos radiales
Borde Irregular y ondulado
Color anverso Blanco
Color reverso Blanco/crema
Hifas Micelio rudimentario
Conidioforo No presenta conidióforo
Blastosporas Cilíndricas de 7.5 µm – 12.5 µm de
largo x 2.5 de ancho. Las ojival 5 µm – 7.5 µm de
largo por 2.5 µm
Esporas es ojival o cilíndrica, con gemación multipolar en
reproducción vegetativa. Una de las
características de este género es su tamaño celular
variable y la formación de filamentos
Fuente: Saira Hancco Ninaja (2019)
21
Candida galabrata
Tabla 6. Caracteristicas morfológicas de Candida galabrata aislado de leche.
Talo Unicelular
Aspecto Cremoso
Textura Brillante
Forma Circular
Elevación Convexa umbilicada
Superficie Surcos radiales
Borde Liso (ligeramente irregular)
Color anverso Blanco cremoso
Color reverso Blanco cremoso
Hifas No hay presencia
Conidioforo No hay presencia
Blastoconidios 2,5 a 4 um
Esporas Ovalada, tamaño 3.75 µm x 5.5 µm (las de mayor
tamaño)
Fuente: Diego Vizcarra Gutierrez (2019).
22
Cladosporium cladosporioides
Tabla 7. Caracteristicas morfológicas de Cladosporium cladosporioides aislado de leche.
Talo Filamentoso
Aspecto Aterciopelado
Textura Opaca
Forma Esferoidal
Elevación Elevada y limitada
Superficie Lisa
Borde Con mechones
Color anverso Verde pacay
Color reverso Verde oscuro
Hifas Septada, pigmentada (dematiacea) y delgada
Pigmentado, solitarios, ramificados, sin vesícula,
Conidioforo
30 um de largo aproximadamente
Lisas, limoniformes, unicelulares, en cadena,
Esporas
pigmentadas, 7.5 um x 3.75 um
Fuente: Juan Torres Quispe (2019).
23
Cylindrocarpon radicícola
Tabla 8. Caracteristicas morfológicas de Cylindrocarpon radicicola asociado a pudrición

radicular.
Talo Filamentoso
Aspecto Aterciopelado
Textura Seco
Forma Irregular
Elevación Plana y extendida
Superficie Discos radiales
Borde Lobado
Centro marron oscuro, anaranjado-amarrillo y
Color anverso
borde incoloro.
Centro marron oscuro, anaranjado-amarillo y
Color reverso
borde incoloro.
Septa, marron palido y delgada.
Hifas Presenta clamidosporas intercalares, terminales
de color marron palido.
Conidioforo Ramificado, hialino
Macroconidias cilíndricas de uno, dos y tres
Esporas
septas; y microconidias alantoideas
Fuente: Galeska Farfan Pajuelo, Rosario Duran Yujra & Rubí Quispe Mamani (2019).
24
Fusarium aquaeductuum
Tabla 9. Caracteristicas morfológicas de Fusarium aquaeductuum asociado a pudrición

radicular.
Talo Filamentoso
Aspecto Aterciopelada
Textura Brillante
Forma Irregular
Elevación Convexa umbilicada
Superficie Plegada con anillos concéntricos
Borde Ondulado
Color anverso Crema, mostaza
Color reverso De marron a crema
Hifas Septadas, hialinas, delgadas, de lento crecimiento
Simples solitarios, rectos, sin vesicula,
Conidioforo macroconidias con 4 septos, ausencia de
microconidias, conidias hialinas
Macroconidas en forma de canoa, con ambas
membranas curvadas, celula basal en forma de
Esporas
zapato y celula apical en punta. Ausencia de
microconidias
Fuente: Paolo Barreda Zegarra (2019).
25
Fusarium oxysporum
Tabla 20. Caracteristicas morfológicas de Fusarium oxysporum asociado a pudrición radicular.
Talo Filamentoso
Aspecto Algodonoso
Textura Opaco y seco
Forma Circular
Elevación Elevada y extendida
Superficie Lisa y septorizada
Borde Entero
Color anverso Rosada-clara en el centro con bordes blancos
Rosa-purpura en la parte central con bordes
Color reverso
blancos.
Septadas, Hialinas, delgadas y anchas de
Hifas
diversos tamaños
Presenta Macroconidias: moderadamente
curvadas en forma de hoz, son 3 septas tienen de
15-27 um de largo por 2.5-5um de ancho, cel.
Apical curvada y la cel. Basal forma de pie
Conidioforo
puntiagudo. Y Microconidias de forma alantoide
o fusiforme (forma de riñón) sin septas tienen un
tamaño de 7,5-10 um de largo por 2.5 um de
ancho.
no ramificadas o poco ramificado Los
Esporas conidióforos Hialinos , en microconias tienes un
conidioforo corto
Fuente: Juan Quispe Lima, Cesar Huallpa Estalla, Kelly Copaja Salcedo, Rubi Quispe Mamani & Saira Hancco
Ninaja (2019).
26
Ulocladium chartarum
Tabla 31. Caracteristicas morfológicas de Ulocladium chartarum aislado del laboratorio de

Botánica.
Talo Filamentoso
Aspecto Algodonoso, ligeramente aterciopelado
Textura Humeda, opaca
Forma Circular, ligeramente filamentosa
Elevación Elevada y limitada
Superficie Lisa
Filamentoso con ligeras irregularidades en ciertos
Borde
sectores, presenta anillos concéntricos
Color anverso Negro fuerte opaco, con la periferie verde amarillento.
Color reverse Negro fuerte opaco, con la periferie verde amarillento.
Septadas de color ligeramente opaco [ 30-35 um x
Hifas
5um]
De tipo dictiospora, se presentan comunmente en
cadenas , coloracion marron dorada algunas claras u
otras de color intenso, formas elipsoides u ovoides
Conidioforo algunas borde verrucoso, pueden tambien presenter
picos cortos o falsos, comunmente con 1-5
(comunmente 3 septos transversales) y longitudinales.
[ 20-25 um x 9-15 um]
De crecimiento simpodial, de color marron
Esporas amarillento claro
[28 – 35um]
Fuente: Anthony Rivera Prado & Steven Huanca Lopez (2019).
27
6.2. Ritmo de Crecimiento
Acremonium strictum
1,55𝑐𝑚
𝑟(𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜) = = 0,221𝑐𝑚/𝑑
7𝑑í𝑎𝑠
2,9𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
Aspergillus spp
1,65𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
0,92𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
Brettanomyces spp
0,31𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
Candida galabrata
0,32𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
28
0,67𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
Cylindrocarpon radicicola
1,44𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
0,97𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
Fusarium oxysporum
3,88𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
2,45𝑐𝑚
7𝑑í𝑎𝑠
29
Gráfica de comparación
Gráfica 1. Comparación de los Ritmos de Crecimientos de los hongos aislados.
Ritmo de crecimiento
0.60 0.55
0.50
0.41
0.40 0.35
cm/dia
0.30
0.22 0.24
0.21
0.20 0.14
0.13
0.10
0.10 0.04 0.05
0.00
Fuente: Elaboración propia (2019).

30
6.3. Curva de Crecimiento
Acremonium strictum
Gráfica 2. Curva de crecimiento de Acremonium strictum aislado de Oregano.

1.8
1.55
1.6
1.32
1.4
1.17
1.2
0.92
1
cm
0.8 0.67
0.6 0.45
0.4
0.2 0 0
0
-0.2 0 1 2 3 4 5 6 7 8
dias
Gráfica 3. Curva de crecimiento de Alternaria tenuissina aislado del laboratorio de Botánica.

3.5
3
2.5
2
1.5
cm
1
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.5
-1
dias

31
Aspergillus spp
Gráfica 4. Curva de crecimiento de Aspergillus spp. aislado de Oregano.

2.5
2
1.6 1.65
1.55
1.42
1.5
1.16
cm
0.5
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.5
dias
Fuente: Elaboracion propia (2019).
Gráfica 5. Curva de crecimiento de Brettanomyces bruxellensis aislado de chicha de jora.

1 0.92
0.85
0.8
0.6 0.5
0.4
cm
0.2
0.2
0 0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.2
-0.4
dias

32
Brettanomyces spp
Gráfica 6. Curva de crecimiento de Brettanomyces spp. aislado de Chicha de Jora.

0.4
0.35
0.31 0.31 0.31
0.3
0.25
0.2
cm
0.2 0.17
0.16
0.15
0.1
0.05
0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
dias
Candida galabrata
Gráfica 7. Curva de crecimiento de Candida galabrata aislado de leche.

0.35 0.32
0.3
0.25
0.25 0.22
0.2 0.2
0.2
cm
0.15
0.1
0.05
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.05
dias

33
Gráfica 8. Curva de crecimiento de Cladosporium cladosporioides aislado de leche.

0.8
0.67
0.7
0.6 0.55
0.5
0.5
0.4
0.4
0.25
cm
0.3
0.2
0.1
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.1
-0.2
dias
Gráfica 9. Curva de crecimiento de Cylindrocarpon radicicola aislado de Oregano.

1.6 1.44
1.4
1.2
1.2
0.95
1
0.8
0.62
cm
0.6
0.35
0.4
0.2
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.2
-0.4
dias

34
Gráfica 10. Curva de crecimiento de Fusarium aquaeductuum aislado de Oregano.

1.2
0.97
1
0.85
0.8 0.68
0.6 0.51
cm
0.4 0.31
0.2 0.11
0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.2
dias
Fusarium oxysporum
Gráfica 11. Curva de crecimiento de Fusarium oxysporum aislado de Oregano.

4.5
3.88
4
3.32
3.5
3 2.75
2.5
1.85
2
cm
1.5 1.24
1
0.5
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.5
-1
dias

35
Gráfica 12. Curva de crecimiento de Ulocladium chartarum aislado del laboratorio de Botanica.
3
2.45
2.5
2.09
2 1.76
cm
1.5 1.36
0.92
1
0.5
0 0 0
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.5
dias

36
Gráfica de comparación
Gráfica 13. Comparación de curvas de crecimiento de los hongos aislados.
4.5
Acremonium strictum
4
Alternaria citri
3.5
Aspergillus spp
3
2.5 Brettanomyces spp

cm
Candida galabrata
2
Cladosporium
1.5 cladosporioides
Cylindrocarpon radicicola
1
0.5
Fusarium oxysporum
0 Ulocladium chartarum
0 2 4 6 8
dias

37
Capítulo VII. Conclusiones
Se evaluaron las velocidades de crecimiento de los hongos aislados teniendo como datos
resultantes una gran variedad de medidas y ritmo de crecimiento tanto micelial como
levaduriforme (unicelular), en total se describieron e identificaron 11 especies distribuidos en 9
géneros, dichas especies son: Acremonium strictum, Alternaria tenuissina, Aspergillus spp,
Brettanomyces bruxellensis, Brettanomyces spp, Candida glabrata, Cladosporium
cladosporioides, Cylindrocarpon radicícola, Fusarium aquaeductuum, Fusarium oxysporum,
Ulocladium chartarum.
Se caracterizó la morfología macroscópica de los hongos mencionados siendo en su mayoría
(ocho) las de talo micelial filamentoso y tres especies de talo unicelular; con respecto al aspecto
se caracterizaron de 4 tipos presentes (algodonoso, granular, mucoso y aterciopelado), la textura
observada fueron de 3 tipos (humeda, seca y densa), las formas de las colonias fueron diversas y
algunas presentaban características específicas al igual que la elevación, superficie, borde y la
coloración de las colonias.
Se caracterizó y describió la morfología microscópica de los hongos aislados, los de talo
micelial presentaban hifas septadas, delgadas y mayormente hialinas (excepción con
Cladosporium cladosporioides, Alternaria tenuissina, Cylindrocarpon radicícola y Ulocladium
chartarum), en la parte reproductiva se observaron los esporangioforos o conifioforos (descripción
detallada en resultados) y las conidias de reproducción asexual teniendo diferentes presentaciones
(cilíndricas, en cadenas, limoniformes, en forma de canoa, etc). Con respecto a las levaduras, estas
no presentan hifas, conidióforos ni conidias.

38
Los ritmos de crecimiento de los hongos evaluados tienen un margen de proporcionalidad de
entre 0,044 cm/d a 0,554 cm/d, siendo la del ritmo de crecimiento menor Brettanomyces spp. y el
de mayor Fusarium oxysporum, por lo que se puede caracterizar en un rango de rápido, mediano
y lento crecimiento en agar PDA. Los datos calculados nos denotan una expresión lineal del
desarrollo de los hongos y que sirven para poder estimar medidas objetivas a futuro teniendo un
margen de error del 5%.
Los datos se extrapolaron en una gráfica teniendo como plano x a el tiempo (días) y en el eje y
a la distancia (cm) y se trazó la curva de crecimiento permitiendo un plano grafico de la estimación
del tamaño de los hongos a través del tiempo.

39
Capítulo VIII. Referencias bibliográficas
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producción de Pleurotus ostreatus. Biotecnología en el Sector Agropecuario y Agroindustrial
10: 136-145.
43
Capítulo IX. Anexos
Acremonium strictum
44
Alternaría tenuissina
45
Aspergillus spp
46
Brettanomyces spp
Candida glabrata
47
48
49
50
Fusarium oxysporum
51

Investigacion de Crecimiento Micologico Tacna

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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

EVALUACIÓN DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE HONGOS AISLADOS DE

DISTINTAS PROVINCIAS DE TACNA

Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann, Av. Miraflores S/N, Tacna

Tacna, Perú - 2019

Capítulo I. Introducción ............................................................................................................. 1

Capítulo II. Objetivos ................................................................................................................. 2

2.1. Objetivo general .............................................................................................................. 2

2.2. Objetivos específicos ...................................................................................................... 2

Capítulo III. Revisión de la Literatura ....................................................................................... 3

3.1. Técnicas de medición del crecimiento micológico ......................................................... 3

3.1.1. Estimacion visual ..................................................................................................... 3

3.1.2. Peso seco .................................................................................................................. 3

3.1.3. Nitrogeno celular ...................................................................................................... 4

3.1.4. Medición lineal de colonias ..................................................................................... 4

3.2. Hongos de ambientes internos ........................................................................................ 6

3.3. Hongos asociados a la pudrición radicular ...................................................................... 8

3.4. Hongos en alimentos ..................................................................................................... 10

3.4.1. Chicha de jora ........................................................................................................ 11

3.4.2. Leche ...................................................................................................................... 11

Capítulo IV. Materiales ............................................................................................................ 13

4.1. Medios y soluciones ...................................................................................................... 13

4.2. Instrumentos de laboratorio........................................................................................... 13

4.3. Equipos de laboratorio .................................................................................................. 13

4.4. Otros materiales ............................................................................................................ 13

Capítulo V. Marco Metodológico ............................................................................................ 14

5.1. Obtención de cultivo puro ............................................................................................. 14

5.2. Siembra para medición lineal ........................................................................................ 14

5.3. Caracterización morfológica macroscópica .................................................................. 15

5.4. Caracterización morfológica microscópica ................................................................... 15

5.5. Calculo de ritmo y curva de crecimiento ...................................................................... 15

Capítulo VI. Resultados ........................................................................................................... 16

6.1. Morfología macroscópica y microscópica .................................................................... 16

6.2. Ritmo de Crecimiento ................................................................................................... 27

Gráfica de comparación ................................................................................................... 29

6.3. Curva de Crecimiento ................................................................................................... 30

Gráfica de comparación ................................................................................................... 36

Capítulo VII. Conclusiones ...................................................................................................... 37

Capítulo VIII. Referencias bibliográficas ................................................................................ 39

Capítulo IX. Anexos................................................................................................................. 43

En la actualidad es importante el estudio micológico de los ambientes, alimentos y biosferas;

previniendo pérdidas económicas.

Estos organismos tienen el rol de descomponedores primarios, actuando generalmente en la

por lo que también tienen una gran importancia biológica.

difícilmente visible debido a sus escasas dimensiones, encontrándose comúnmente en materiales

del reino animal, como también siendo parasitarios de plantas.

importancia conocer la velocidad del desarrollo micelial y levaduriforme para establecer un

Teniendo claro los puntos de investigación y su relevancia para nuevos estudios de la

identificación y taxonomía de especies no solo por caracterización morfológica (macroscópica,

microscópica) sino también por el desarrollo lineal en placas.

En el presente trabajo se evaluaron las velocidades de crecimiento de distintas especies de hongos

(entre filamentosos y levaduriformes) obtenidas de distintas muestras y zonas (ambiente de

laboratorio de Botánica de la Faculta de Ciencias de la Universidad Nacional Jorge Basadre

Grohmann; pudrición radicular de Orégano en el Centro Poblado de Cambaya, Distrito de

Camilaca, Provincia de Candarave en la región de Tacna; leche y chicha de jora).

Capítulo II. Objetivos

2.1. Objetivo general

Evaluar la velocidad de crecimiento de hongos aislados de hongos aislados de distintos distritos

2.2. Objetivos específicos

 Caracterizar la morfología macroscópica de los hongos aislados de distintos distritos de

 Caracterizar la morfología microscópica de los hongos aislados de distintos distritos de

 Calcular el ritmo de crecimiento de los hongos aislados de distintos distritos de Tacna.

 Trazar la curva de crecimiento de los hongos aislados de distintos distritos de Tacna.

Capítulo III. Revisión de la Literatura