INTRODUCCIÓN AL EXAMEN DE SANGRE

FROTIS O EXTENDIDO DE SANGRE

Para realizar un extendido de sangre se coloca una gota de sangre obtenida por punción de la
yema del dedo o de las primeras gotas de la aguja en caso de una punción venosa, sobre un
portaobjetos en la línea media y cerca del extremo.

La gota se extiende deslizando otro portaobjeto colocado a 45° del anterior y ese portaobjeto
que usamos para extender debe tener el borde esmerilado o biselado para evitar la formación
de colas.
El sitio más adecuado para observar al microscopio es aquel en que los glóbulos rojos están
próximos entre sí pero sin superponerse ni alejarse demasiado.

Se utiliza sangre con anticoagulante que puede ser citrato, citrato trisódico, oxalato, EDTA, o
heparina.
El citrato trisódico, oxalato y EDTA actúan sustrayendo calcio de manera que impiden la
coagulación de la sangre.
La heparina actúa inhibiendo a la trombina que es esencial para el pasaje de fibrinógeno a
fibrina en el proceso de coagulación.
También puede utilizarse sangre sin anticoagulante recién extraída (no más de una hora de
extraída).

Coloración del extendido

Se utiliza una coloración PANÓPTICA ya que usamos 2 colorantes o más en forma sucesiva.
Se habla de coloración PANCRÓMICA cuando usamos 2 colorantes o más en forma simultánea.
La coloración que se utiliza es la de May-Grunwald-Giemsa. Pasos:

1- cubrimos el extendido con el colorante de May Grunwald 5’

2- escurrimos el colorante anterior y cubrimos con colorante de Giemsa 15’ si el frotis es fresco,
si no lo es (frotis de 2 ó 3 días), dejamos 20’ ó 30’
3- escurrimos y lavamos con agua corriente. Se deja secar al aire.

¿Qué es lo que tiñe el colorante?

- Las granulaciones acidófilas de rojo anaranjado.

- Las granulaciones basófilos de azul.

Las granulaciones acidófilas tienen afinidad con los colorantes ácidos.

Las granulaciones basófilos tienen afinidad con los colorantes básicos.
El May Grunwald es una solución de eosinato de azul de metileno en metanol que actúa como
fijador, por eso no es necesario fijarlo antes.
El Giemsa es una solución de eosina, azul de metileno y azur II en metanol (no necesita
fijador).
El Giemsa tiñe los núcleos de violeta y las granulaciones azurófilas de azul verdoso.

Elementos que se distinguen en el extendido

1) Glóbulos rojos: se observan de tamaño uniforme y redondeado (hablando de un frotis

normal), teñidos más intensamente en la periferia que en el centro debido a su forma
bicóncava y se observan de color anaranjado.

2) Plaquetas: son fragmentos citoplasmáticos de células más grandes de la médula ósea

llamadas megacariocitos. En un extendido se observan como elementos discoidales u ovales
con el centro intensamente teñido, esta zona se llama cromómero, y una zona periférica que se
tiñe de azul pálido, llamada hialómero. Son más pequeñas que los glóbulos rojos, se ven
fragmentos agrupados.
3) Glóbulos blancos: comprenden 2 grupos:

a- Polimorfonucleares: constituyen la serie mieloide, también llamados granulocitos debido a la

presencia de granulaciones citoplasmáticas específicas con características de tinción especiales
que permiten diferenciar un tipo celular de otro. Dentro de este grupo podemos distinguir 3
poblaciones:

- Neutrófilos: el núcleo polilobulado posee de 3 a 5 lóbulos, se tiñe de violeta, el citoplasma con

granulaciones muy finas se tiñe de rosa tenue.

- Eosinófilos: son más grandes que los anteriores. El núcleo excéntrico es bilobulado y el
citoplasma presenta granulaciones gruesas de color anaranjado.

- Basófilos: tienen un núcleo de forma arriñonada o de S. El citoplasma está cubierto por

abundantes granulaciones de color azul negruzco. Las granulaciones pueden cubrir el núcleo
impidiendo su fácil visualización.

b) Mononucleares: también se los llama agranulocitos porque presentan granulaciones

inespecíficas o azurófilas que pueden no ser visibles al MO. Presentan las siguientes
poblaciones:

- Monocitos: núcleo de forma variada (pleomórfico), suele adoptar forma de herradura. El

citoplasma levemente basófilo se ve de color grisáceo.

- Linfocitos: de menor tamaño, algo menor que un glóbulo rojo. Posee núcleo grande
redondeado a veces con una escotadura o muesca, ocupa la mayor parte de la célula dejando
un fino halo citoplasmático de color celeste, la cromatina es más densa que la del monocito.

Las granulaciones específicas son propias de un determinado tipo celular y no están presentes
en otro tipo de célula. Pueden contener heparina, histamina, etc.
Las granulaciones azurófilas no son exclusivas de un tipo celular sino que pueden estar
presentes en varias.

Valores normales para la fórmula leucocitaria relativa:

TIPO DE CÉLULA.
FORMULA RELATIVA.
Cél. en cayado 1-5%
Neutrófilos 50-65%
Linfocitos 30-45%
Monocitos 5-7%
Eosinófilos 1-5%
Basófilos 0-1%