Вы находитесь на странице: 1из 7

ENZYMES IN VIVO ФЕРМЕНТЫ В КЛЕТКЕ

AND IN VITRO
N. N. CHERNOV
И ПРОБИРКЕ
ç. ç. óÖêçéÇ
A brief history of enzyme êÓÒÒËÈÒÍËÈ ÛÌË‚ÂÒËÚÂÚ ‰ÛÊ·˚ ̇Ó‰Ó‚
investigation is outlined.
Characteristics of the “é ÙÂÏÂÌÚ‡ı Í‡Í Ë Ó Î˛‰flı ÒÛ‰flÚ ÔÓ Ëı Ôӂ‰ÂÌ˲.”
activity of intracellular and Ç.Ä. ùÌ„Â脇‰Ú
extra cellular enzymes are
Одни и те же люди ведут себя по-разному в раз-
discussed. Some patho- личных условиях. Их реакции и поведение в изоля-
logical processes which ции обычно меняются по сравнению с привычной
might be caused by errors обстановкой. Эту, быть может, весьма отдаленную
аналогию можно применить и к ферментам, катали-
in the biosynthesis of зирующим почти все химические реакции в живой
enzymes are described. клетке. Наука о ферментах называется энзимоло-
New approaches for гией, а не ферментологией (чтобы не смешивать
слова с корнями из латинского и греческого языков).
studying enzyme struc- Термины “фермент” и “энзим” давно использу-
ture and regulation are ют как синонимы (первый в основном в русской и
examined in terms of their немецкой научной литературе, второй – в англо-
язычной). А более ста лет назад они отражали раз-
theoretical basis and med- личные точки зрения в теоретическом споре Л. Па-
ical applications. стера с одной стороны, и М. Бертло и Ю. Либиха –
с другой, о природе спиртового брожения. Собст-
венно ферментами (от лат. fermentum – закваска)
éÔË҇̇ ËÒÚÓËfl ËÒÒÎÂ- называли “организованные ферменты” (то есть са-
‰Ó‚‡ÌËÈ ÙÂÏÂÌÚÓ‚. é·- ми живые микроорганизмы), а термин энзим (от
ÒÛʉ‡˛ÚÒfl ÓÚ΢ËÚÂθ- греч. en – в и zym e – закваска) предложен в 1876 го-
ду В. Кюне для “неорганизованных ферментов”, се-
Ì˚Â ÓÒÓ·ÂÌÌÓÒÚË ÔÓ‚Â- кретируемых клетками, например, в желудок (пеп-
‰ÂÌËfl ÙÂÏÂÌÚÓ‚ ‚ÌÛÚ- син) или кишечник (трипсин, амилаза). Через два
Ë ÍÎÂÚÍË ÔÓ Ò‡‚ÌÂÌ˲ года после смерти Л. Пастера в 1897 году Э. Бюхнер
опубликовал работу “Спиртовое брожение без
Ò ËÁÓÎËÓ‚‡ÌÌ˚ÏË ÙÂ- дрожжевых клеток”, в которой экспериментально
ÏÂÌÚ‡ÏË, ‡ Ú‡ÍÊ ÌÂÍÓ- показал, что бесклеточный дрожжевой сок осуще-
ÚÓ˚ ԇÚÓÎӄ˘ÂÒÍË ствляет спиртовое брожение так же, как и неразру-
шенные дрожжевые клетки. В 1907 году за эту рабо-
ÒÓÒÚÓflÌËfl, Ò‚flÁ‡ÌÌ˚Â Ò ту он был удостоен Нобелевской премии.
̇Û¯ÂÌËflÏË ÒËÌÚÂÁ‡ Мне хотелось бы подробно остановиться на этих
ÙÂÏÂÌÚÓ‚. ê‡ÒÒÏÓÚÂ- хорошо известных фактах по трем причинам. Во-
первых, в некоторых изданиях, в частности в пере-
Ì˚ ÌÓ‚˚Â ÔÓ‰ıÓ‰˚ Í
воде яркого, сохранившего свою ценность и поны-
ËÁÛ˜ÂÌ˲ Ë ËÒÔÓθÁÓ‚‡- не, учебника для школьников и учителей Г. Богена
Ì˲ ÙÂÏÂÌÚÓ‚. “Современная биология” (1970 г.) с замечательным
предисловием лауреата Нобелевской премии А. Бу-
тенандта наблюдается путаница с историей опреде-
ления понятий фермент и энзим.
© óÂÌÓ‚ ç.ç., 1996

Во-вторых, мне хочется напомнить нашим со-


отечественникам и особенно молодежи имя рус-
ской женщины Марии Михайловны Коркуновой,
по мужу Манассеиной (1843 – 1903), которая в
1871 – 1872 году после стажировки в Вене у профес-
сора Ю. Вайснера опубликовала на русском и немец-
ком языках результаты своих опытов, доказывающих
образование спирта в суспензии убитых клеток

28 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹5, 1996


дрожжей, на 25 лет опередив Э. Бюхнера, знавшего различными многостадийными методами чистые
о ее работах. Имя М.М. Манассеиной упоминается ферменты из клеток. Сейчас существует оборудова-
в специальных учебниках по биохимии, но почему- ние, позволяющее осуществлять эту процедуру в
то не вошло в отечественные энциклопедии и спра- комфортных условиях, используя всего несколько
вочники. Тем более приятно читать в журнале “Би- эффективных стадий очистки. Многие стадии пол-
охимия” (№ 1 за 1994 г.) перепечатанную с разреше- ностью автоматизированы.
ния Биохимического общества Великобритании Динамику нарастания количества обнаруживае-
статью британского исследователя Джона Лагнадо, мых в природе ферментов можно представить сле-
посвященную М.М. Манассеиной, озаглавленную дующим образом:
“Первым биохимиком была женщина?”
В-третьих, события столетней давности подчер- Год 1930 1947 1957 1962 1972 1975 1994
кивают мысль, которая никогда не покидала энзи- Число
мологов: ферменты внутри клетки и вне ее ведут себя ферментов 80 200 660 880 1770 2140 3200
не совсем одинаково. В учебнике “Энзимология”,
опубликованном в 1930 году, Дж.Б.С. Холдейн (со- Мы смеем думать, что знаем все ферменты, ка-
хранены орфография и пунктуация переводчика и тализирующие химические реакции основных ме-
редактора русского издания 1934 года С.И. Прони- таболических процессов в клетке, но возможны еще
на) писал: ”Пастер был прав относительно всех сюрпризы. Доказательством может служить отно-
фактов, которые он приводил, тем не менее и Либих сительно недавнее открытие нового фермента, син-
был прав, полагая, что брожение возможно и в от- тезирующего в нашем организме важный эндоген-
сутствии жизни. С другой стороны, существуют не- ный регулятор – оксид азота (газ NO) – из хорошо
которые катализы, как, например, гликолиз с помо- известной аминокислоты аргинина.
щью эритроцитов, которые по-видимому зависят от
клеточной структуры”. Энзимологами всего мира была проделана ог-
ромная работа. Установлены аминокислотные по-
В то время еще не была выяснена белковая при- следовательности в молекулах многих ферментов,
рода ферментов. Только-только начинались работы созданы компьютерные базы данных, позволяю-
по выделению и очистке индивидуальных фермен- щие установить гомологии (идентичные последова-
тов из клеток. При выделении внутриклеточных тельности) в строении различных ферментов. При
ферментов следили за их активностью в пробирке, этом оказалось проще идентифицировать последо-
то есть способностью в искусственных условиях вательности нуклеотидов на уровне гена, чем после-
превращать добавленный извне субстрат в продукт довательности аминокислот на уровне закодиро-
реакции. Открывали все новые и новые ферменты, ванного этим геном белка. Следует отдать должное
и все они неизменно оказывались белками. Перио- английскому исследователю Ф. Сенгеру, единст-
дически в научной литературе появлялись сообще- венному ученому, дважды получившему Нобелев-
ния о том, что удалось открыть новую каталитичес- скую премию по химии: в 1958 году за разработку
кую активность, не связанную с белком, однако при метода определения первичной структуры белков и
дальнейшем исследовании всякий раз оказывалось, в 1980 году (совместно с У. Гилбертом и П. Бергом)
что это ферментный белок, способный в ничтожно за экспресс-метод установления последовательнос-
малом (неопределяемом) количестве катализиро- ти нуклеотидов в молекулах нуклеиновых кислот.
вать химическую реакцию. Так сложилось пред-
К настоящему времени для сотен ферментов пол-
ставление, что катализ в живой клетке может осу-
ностью определена трехмерная пространственная
ществляться исключительно белками. Поэтому
структура с высоким разрешением (0,15 – 0,20 нм)
долго не хотели верить в способность некоторых ви-
расположения отдельных атомов. Изучены кинети-
дов молекул РНК осуществлять автокатализ, пола-
ческие характеристики и механизмы действия мно-
гая, что эта функция принадлежит белковой приме-
гих ферментов. Результатом всей этой деятельности
си. Только получение активного катализатора путем
явился пессимизм в середине восьмидесятых годов.
синтеза его из нуклеотидов доказало существование
Венгерский энзимолог Петер Фридрих в 1984 году в
нового класса биокатализаторов, получивших на-
интересной и содержательной книге “Ферменты:
звание рибозимы.
четвертичная структура и надмолекулярные ком-
В середине шестидесятых годов казалось, что плексы” писал: “Многие биологи придерживаются
как только мы изучим структуру и механизм дейст- мнения, что энзимология пережила себя, горячие
вия ферментов, которые катализируют подавляю- точки биохимии уже не связаны с энзимологией, и
щее большинство реакций в живом организме, то поэтому энзимологи постепенно окажутся в стороне
получим возможность вмешиваться в процессы об- от общего прогресса”. “Не пора ли сказать: “Энзи-
мена веществ и корректировать многие его наруше- мология сделала свое дело, она является уже завер-
ния. Совершенствовались методы очистки фермен- шенной главой биохимии, и биохимик-энзимолог
тов. Автор этих строк 15 лучших лет своей жизни должен уступить место биохимику-технологу или
провел в холодной комнате, кропотливо выделяя клеточному биологу”, – продолжили эту мысль в

óÖêçéÇ ç.ç. îÖêåÖçíõ Ç äãÖíäÖ à èêéÅàêäÖ 29


1986 году редакторы русского перевода книги α-химотрипсин и трипсин адсорбируются (связы-
С.Е. Северин и Н.Б. Гусев. ваются) на поверхности щеточной каемки эпители-
альных клеток кишечника. Функциональное значе-
Однако ни сам автор, ни редакторы перевода не ние существования таких ассоциатов пока не ясно,
разделяли такой мрачной точки зрения, а видели но можно полагать, что образование межмолеку-
перспективу дальнейших исследований в переходе лярных и надмолекулярных комплексов изменяет
от энзимологии in vitro (в пробирке) к энзимологии (регулирует) активность ферментов. Учитывая мно-
in vivo (в организме). То есть в переходе от изучения гообразие и сложность внутриклеточных механиз-
изолированных ферментов к поиску путей исследо- мов регуляции действия ферментов (рис. 1), можно
вания их поведения в целой клетке. Что нового про- себе представить, как далеки мы от полного пони-
изошло за последние 10 лет? Имеющиеся сведения мания согласованности этих механизмов. Помочь
постепенно убеждают нас в том, что ферменты in vi- разобраться в этих вопросах могут новые направ-
vo образуют структурные комплексы и ансамбли ления в энзимологии: 1) разработка методов и
как друг с другом, так и с участками клеточных и подходов для исследования ферментов в интакт-
внутриклеточных мембран, с элементами цитоске- ной (неразрушенной) клетке, 2) изучение поведе-
лета и/или другими молекулами. Даже секретируе- ния ферментов в различных модельных системах,
мые в просвет кишечника внеклеточные ферменты 3) ферментная инженерия (конструирование и

Влияние кон–
центрации Индукция и
Изменение субстрата, репрессия
рН продукта, биосинтеза
кофермента белка
Деградация
молекул
фермента

Изменение
Химическая проницаемости
Изменение
модификация мембран; Изменение
активности
молекул фермента компартмен– количества
имеющихся
(например, тация (прост– молекул
в клетке
фосфорилирование, ранственное фермента в
молекул
дефосфорилиро– разобщение); клетке
фермента
вание) образование
надмолеку–
лярных комп– Амплифи–
лексов кация
(увеличение
копий)
генов
Влияние акти–
Бы
ре

я
стр я
гул

ваторов,
на
ен

ингибиторов,
яц

ая

Увеличение
ия
дл
и

аллостеричес–
яц

числа
Ме
гул

ких (регуля– копий


ре

торных) эффек– мРНК


торов

Изменение
интенсивности
различных
метаболических
процессов

Рис. 1. Схема внутриклеточной регуляции действия ферментов.

30 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹5, 1996


реконструкция ферментных комплексов и ансамб- ный симптом – симметричное покраснение кистей
лей, химическая модификация молекул ферментов, рук – признак недостатка одного из витаминов
получение искусственных ферментов). группы В. И думает про себя: “Я тебя, голубчик, бы-
Важную информацию о биологических функци- стро вылечу, снова почувствуешь вкус к жизни”. Де-
ях того или иного фермента дают так называемые ло в том, что недостаток или отсутствие этого вита-
“молекулярные болезни”. Термин этот был введен мина приводит к недостатку соответствующего
Л. Полингом в пятидесятых годах для обозначения кофермента и изменению ферментативных процес-
очень редких наследственных заболеваний, вызы- сов, что сопровождается серьезными нарушениями
ваемых генетически обусловленными изменениями обмена веществ и тяжелым общим состоянием ор-
(нарушениями) строения белковых молекул. О том, ганизма. В большинстве случаев такое состояние
что такие болезни существуют, поведал миру А. Гар- быстро улучшается после восстановления пищевой
род еще в 1908 году. Однако долгое время оставалось цепочки: витамин кофермент холофер-
тайной то обстоятельство, что их причиной являют- мент реакция эффект. Врач выписывает
ся мутации в молекуле ДНК и соответствующие за- витамин (обычно поливитамины, так как многие
мены в аминокислотной последовательности коди- витамины усиливают действие друг друга) и просит
руемого белка при переходе с четырехбуквенного зайти через неделю. Через неделю больной прихо-
языка нуклеиновых кислот (4 азотистых основания) дит – и увы, никакого улучшения. Врач в легком за-
на 20-буквенный язык белков (20 аминокислот). мешательстве: “Возможно, больной не принимал
Некоторые из этих мутаций являются летальными витамин, или препарат был некачественным, а мо-
(смертельными) еще на эмбриональной стадии, и мы жет быть, нарушено всасывание витамина в кишеч-
ничего о них не знаем. Другие мутации никак себя не нике, и лекарство не попадает в организм?” Врач
проявляют, и о них мы тоже не догадываемся. В ред- назначает больному внутримышечные инъекции
ких случаях удается проследить всю цепочку нару- витамина и снова просит зайти через неделю, но че-
шений: замена нуклеотида в молекуле ДНК рез неделю эффект тот же. Врач задумывается: “Ви-
соответствующая аминокислотная замена в тамин в организме бесспорно есть, но, может быть,
белке-ферменте видоизмененный фермент из него не образуется кофермент?” И назначает
отсутствие или нарушение ферментативной инъекции коферментной формы витамина – это
реакции патологические изменения в клетках дороже, но должно быть эффективнее. Через неде-
и тканях заболевание организма. лю пациент сообщает, что вроде бы немного полег-
че, но жить все равно не хочется. Тогда врач, кото-
Довольно часто нарушения действия фермента рый серьезно изучал в свое время биохимию,
не связаны с изменением его каталитической актив- понимает, что столкнулся с очень редким явлением.
ности. Изменена его способность к регуляции и/или У больного ослаблена способность белка-апофер-
взаимодействию с другими внутриклеточными мента соединяться с коферментом. Следовательно,
партнерами протекающей реакции. При определе- надо повысить концентрацию последнего с тем,
нии активности такого фермента в пробирке, в изо- чтобы сдвинуть равновесие в сторону образования
лированной от клеточного содержимого среде, не активного холофермента. И еще через неделю па-
всегда удается выявить такие отклонения, посколь- циент чувствовал себя великолепно.
ку они могут проявляться только внутри клетки.
Примерно так была установлена целесообраз-
Рассмотрим более подробно один из таких случаев,
ность использования в ряде случаев ударной “мега-
который характеризует сложные структурно-функ-
витаминной терапии” при нарушении кофермент-
циональные взаимоотношения в живом организме.
связывающих участков молекул фермента. Из схе-
Существуют ферменты, требующие для прояв- мы, приведенной на рис. 2, видно, что один и тот же
ления своей активности кроме белковой части (апо- эффект витаминной недостаточности может на-
фермента) наличие небелкового компонента (ко- блюдаться при нарушении строения и функциони-
фермента), предшественником которого часто рования различных белков, которые могут прини-
служат витамины. Активностью обладает только мать участие в последовательных превращениях
комплекс апофермент–кофермент, называемый хо- витамина, попавшего в организм с пищей.
лоферментом. Эффект недостаточности такого Возможно ли определение активности фермен-
фермента (вернее, его активности) может наблю- тов непосредственно в клетках организма? Это ис-
даться в отсутствие кофермента, а также в случае, ключительно сложная задача. Можно приблизитель-
если затруднено образование активного холофер- но судить об уровне внутриклеточной активности
мента. Причины разные, но конечный результат ферментов (в очень редких случаях), определяя в
один и тот же. моче или сыворотке крови непосредственные или
Студентам-медикам я рассказываю такую гипо- отдаленные продукты их деятельности (обычно
тетическую историю. К молодому врачу приходит продукты тут же подвергаются дальнейшим превра-
пациент. Жалуется на утомляемость, бессонницу, щениям и определить их уже нельзя). Иногда удается
потерю аппетита и вообще всякого интереса к жиз- использовать следующий прием. В организм вводят
ни. Наблюдательный врач сразу замечает характер- искусственный субстрат определенного фермента,

óÖêçéÇ ç.ç. îÖêåÖçíõ Ç äãÖíäÖ à èêéÅàêäÖ 31


Витамин назой, легко образуют молекулярные комплексы
Белки, ответственные за другие ферменты и внутриклеточные белки. Имеет
всасывание ли это обстоятельство функциональное значение?
Всасывание в Меняется ли субстратная специфичность фермен-
кишечнике
Возможные та? Или это неспецифические белок-белковые вза-
Транспортные белки
имодействия? Ответить на эти вопросы трудно, так
нарушения
как выделенные из клетки как индивидуальные
Транспорт с биосинтеза белки, так и их комплексы могут оказаться артефак-
кровотоком к том (от лат. artefactum – искусственно сделанное),
органу–мишени соответствующих результатом либо распада естественного комплек-
Ферменты, участвующие в белков или са, либо, наоборот, нехарактерного объединения
синтезе кофермента изначально изолированных ферментов. Сами мето-
ферментов ды очистки – разведение, изменение состава среды
Синтез
кофермента – могут изменить естественное состояние фермента
Апофермент и его способность к регулирующим воздействиям.
Постепенно накапливаются факты, убеждающие
Связывание с нас в реальности существования надмолекулярной
апоферментом структурной организации ферментов в живой клет-
ке. В научной литературе все чаще можно встретить
термин “метаболон” (введен в 1985 году П. Шре-
Активный ром) для обозначения комплексов функционально
холофермент связанных ферментов основных метаболических
(ферментативная
реакция) путей. В этом направлении проводятся интенсив-
ные научные исследования.
Выявить в клетке какой-либо фермент, даже с
Эффект
(функция) нарушенной каталитической активностью, можно
иммунными методами, получив предварительно
высокоспецифичные для данного фермента антите-
Рис. 2. Гипотетическая схема превращений мо-
лекулы витамина после поступления его с пищей в ла (по принципу образования комплекса антиген–
организм человека. антитело). Такая техника сейчас хорошо разработа-
Пунктирными прямоугольниками показано блоки- на. Еще проще оказалось судить о наличии опреде-
рование соответствующей стадии, вызванное на- ленного фермента по соответствующей данному
рушением биосинтеза белка. белку нуклеотидной последовательности молекул
нуклеиновых кислот.
подобранный с таким расчетом, чтобы продукт его На основе гибридизационного поиска фрагмен-
каталитического превращения не подвергался даль- тов ДНК разработаны чувствительные методы до-
нейшим изменениям и полностью выводился из ор- родового выявления возможных наследственных
ганизма в неизменном виде. Часто в таких экспери- патологий, связанных с нарушениями биосинтеза
ментах используют радиоактивные изотопы ферментов. Для этой цели с помощью специальных
водорода, углерода или фосфора. ферментов – рестриктаз, “разрезающих” молекулу
Как правило, фермент in vivo может катализиро- ДНК в строго определенных местах – проводят кар-
вать превращение разных субстратов. Совпадает ли тирование (идентификацию) участков ДНК, извле-
субстратная специфичность фермента (избиратель- ченной из зародышевых клеток, взятых из около-
ность его действия на соединения определенного плодной жидкости путем довольно несложной
химического строения) в пробирке и в клетке? операции. Таким образом, удается проверить, будет
Например, фермент гликолиза (реакций последо- ли синтезироваться интересующий нас фермент и
вательного расщепления глюкозы), окисляющий если будет, то нет ли нарушений в его аминокислот-
D-глицеральдегид-3-фосфат, может действовать и ной последовательности. Установлено, что белки с
на другие альдегиды. В мышечных клетках содержа- подобными нарушениями (ошибки биосинтеза)
ние этого фермента очень велико и намного превос- разрушаются внутри клетки значительно быстрее,
ходит концентрацию его субстратов (обычно кон- чем белки с нормальной последовательностью ами-
центрация катализатора низкая). Возможно, это нокислот.
объясняется тем, что необходимо быстро окислить
Современная биотехнология позволяет опериро-
очень активные альдегиды, которые самопроиз-
вать генами и получать штаммы микроорганизмов и
вольно могут вступать в побочные (нежелательные)
линии мышей, у которых отсутствует тот или иной
химические реакции.
фермент. Наблюдающиеся при этом отклонения
С этим широко распространенным ферментом, помогают проследить функцию отсутствующего
называющимся глицеральдегидфосфатдегидроге- фермента. Однако, к удивлению исследователей,

32 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹5, 1996


довольно часто не удается выявить изменений у ор- нерастворимой. Нерастворимые носители позволи-
ганизмов, лишенных какого-либо фермента. Ско- ли использовать ферменты в технологических про-
рее всего, это объясняется либо тем, что неизвест- цессах для производства различных продуктов, ко-
но, где и когда искать нарушения, либо “запуском” торые легко можно отделять от ферментов, а
в клетке дублирующих механизмов, которые позво- последние использовать вновь и вновь в непрерыв-
ляют компенсировать отрицательные последствия, ном промышленном режиме. Можно иммобилизо-
вызванные отсутствием данного фермента. вать и целые клетки, содержащие технологически
нужный фермент. Например, иммобилизованные
Технология рекомбинантных ДНК (со встроен-
клетки дрожжей используют при ферментации в
ными участками чужеродной ДНК), чаще называе-
производстве этилового спирта. Могли ли мечтать о
мая генной инженерией, позволяет уже сейчас по-
таких возможностях Л. Пастер и Ю. Либих?
лучать биокатализаторы, не существующие в
природе. Такого же результата можно добиться пу- Использование иммобилизованных ферментов
тем направленного мутагенеза. Для энзимологов помогло в познании деталей ферментативного ка-
весьма плодотворным оказался молекулярно-гене- тализа. Оказалось, что путем иммобилизации мож-
тический прием, позволяющий осуществлять стро- но менять не только стабильность ферментов, но их
го заданные единичные замены в нуклеотидных по- активность, оптимальные значения температуры и
следовательностях, кодирующих аминокислотную рН, субстратную специфичность и само сродство к
последовательность белков. Такой метод получения субстрату. Методом иммобилизации удалось иссле-
специфических мутаций в нормальных белках на- довать структуру олигомерных (состоящих из не-
зывается мутагенез, индуцированный нуклеотида- скольких полипептидных цепей) ферментов и фер-
ми, или сайт (от англ. site – место) направленный ментных комплексов.
(или сайт-специфический) мутагенез. Применение
Эти работы подготовили почву для принципи-
этого метода показало, что многие мутации несуще-
ально новых подходов к исследованию ферментов в
ственны для функционирования белков, но иногда
гетерогенных модельных системах, в той или иной
одна единственная аминокислотная замена в белке
степени имитирующих ситуацию внутри живой
может изменить его функцию. Путем сайт-специфи-
клетки. Перспективным оказалось использование
ческого мутагенеза удается иногда повысить устой-
микрогетерогенных систем, включающих в себя по-
чивость некоторых ферментов к действию высокой
верхностно-активные вещества (структурные ана-
температуры, изменениям рН, присутствию перок-
логи природных липидов), воду и органические
сида водорода и других денатурирующих агентов.
растворители. В таких системах фермент работает
В сознании специалистов, изучавших биологию на границе раздела фаз, внутри так называемых
до середины семидесятых годов, укоренилось пред- “обращенных” (вывернутых наизнанку) мицелл,
ставление о ферментах как о крайне неустойчивых, окруженных органическим растворителем. Появи-
малодоступных и дорогостоящих соединениях. лось новое направление исследований – “мицел-
С тех пор многое изменилось. Усовершенствование лярная энзимология”.
способов очистки ферментов снизило их стоимость
Ученых не очень удивило, что поведение многих
и повысило доступность. Основные успехи, позво-
ферментов в таких модельных условиях сильно от-
лившие широко использовать ферменты, связаны с
личается от того, что наблюдалось в водных раство-
получением иммобилизованных ферментных пре-
рах. Морально энзимологи были готовы к этому из-
паратов, стабильность которых повышена в сотни и
начально. Однако сказать, в какой мере те или иные
тысячи раз. Достигается такая стабилизация моле-
модельные условия адекватны происходящему в
кул ферментов в результате их “обездвиживания”
живой клетке, пока не может никто. Хотелось бы
при соединении с матрицей носителя.
заглянуть внутрь клетки и посмотреть своими глаза-
Поиск подходящих матриц и составлял основ- ми, как там работают ферменты? Для этого надо
ную сложность технологии воплощения идеи, по- уменьшиться в миллион раз… Но мысленно можно
явившейся еще в конце сороковых годов и реализо- вообразить клетку, увеличенную во столько же раз.
ванной только в начале семидесятых. Как правило, Тогда диаметр клетки печени составит 20 м, и клет-
это полимерные молекулы, к которым фермент ка станет похожей на лекционный зал. Большой эк-
“пришивается” химическим путем ковалентными ран на стене, если представить его сферическим,
связями. В ряде случаев такое соединение возмож- будет похож на ядро. Длина митохондрий составит
но за счет электростатических или гидрофобных 1,5 м. В таком масштабе молекулы растворимых
связей. Способы связывания фермента подбирают с глобулярных белков будут похожи на шарики диаме-
таким расчетом, чтобы сохранить его ферментатив- тром 0,5 – 1,0 см. Эти шарики будут перемещаться,
ную активность. Иногда можно просто инкапсули- объединяться в комплексы, соединяться с мембра-
ровать фермент внутрь полимерного микроконтей- нами и внутриклеточными органеллами, с молеку-
нера, липидного бислойного пузырька (липосомы) лами цитоскелета и другими молекулами. Распоз-
или обволакивающего гелеобразного соединения. нать что-либо будет достаточно сложно, так как
Матрица может быть как растворимой в воде, так и клеточное содержимое структурировано, пронизано

óÖêçéÇ ç.ç. îÖêåÖçíõ Ç äãÖíäÖ à èêéÅàêäÖ 33


конструкциями цитоскелета и мембранными обра- 2. Пиментел Дж., Кунрод Дж. Возможности химии се-
зованиями. Понять внутреннюю логику происходя- годня и завтра. Пер. с англ. М.: Мир, 1992. 288 с.
щих и быстро сменяющих друг друга событий тоже 3. Реннеберг Р. Эликсиры жизни: Новейшие результа-
будет довольно сложно. Белковые молекулы похо- ты в области исследования ферментов. Пер. с нем. М.:
Мир, 1987. 152 с.
жи друг на друга, все время синтезируются новые
4. Розенгарт В.И. Ферменты – двигатели жизни. Л.:
молекулы, старые заканчивают свое существование Наука, 1983. 160 с.
в лизосомах... 5. Коровкин Б.Ф. Проблемы современной энзимодиаг-
ностики. Вестник АМН СССР. 1985. №1. С.12 – 22.
Внимательному наблюдателю потребуется не-
6. Любарев А.Е., Курганов Б.И. Принципы простран-
мало времени, чтобы разобраться в захватывающе ственно-временной организации клеточного мета-
интересной последовательности происходящих в болизма. Успехи современной биологии. 1989. Т. 108.
клетке событий. Без эксперимента ему не обойтись. С. 19 – 35.
Ферменты ждут своих новых исследователей.
* * *
êÖäéåÖçÑìÖåÄü ãàíÖêÄíìêÄ Николай Николаевич Чернов, доктор биологи-
ческих наук, профессор Российского университета
1. Овчинников Ю.А., Шамин А.Н. Строение и функции дружбы народов. Научные интересы связаны с эн-
белков. М.: Педагогика, 1983. 128 с. зимологией. Автор 75 статей.

34 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹5, 1996