LA CROMATOGRAFIA AREA DE OPORTUNIDAD PARA EL ANALISIS DE LOS

CAMBIOS CONFORMACIONALES Y CARACTERIZACION DE COMPUESTOS

AIDA YURANY RODRIGIEZ BUITRAGO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

INGENIERIA DE ALIMENTOS
TUNJA
2019

1
CONTENIDO
RESUMEN……………………………………………………………………………………02
INTRODUCCIÓN……………………………………………………………………………04
OBJETIVOS ……………………………………..............................................................05
METODOLOGÍA……………………………………………………………………………..06
RESULTADOS……………………………………………………………………………….07
DISCUSIÓN………………………………………………………………………………….08
CONCLUSIONES……………………………………………………………………………10
BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………………………………11

2
LA CROMATOGRAFIA AREA DE OPORTUNIDAD PARA EL ANALISIS DE LOS
CAMBIOS CONFORMACIONALES Y CARACTERIZACION DE COMPUESTOS

Palabras claves: cromatografía, analito, retención, muestra, purificación, componente

Resumen
La Cromatografía es una técnica de separación en la que los componentes de una
muestra se separan en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial, y una
fase móvil. El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los componentes de
la muestra. Cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes
velocidades, estos se separan en determinados tiempos. Cada componente tiene un
tiempo de paso característico a través del sistema, llamado tiempo de retención. La
separación cromatografía se logra cuando el tiempo de retención del analito difiere del
resto de componentes de la muestra.
La separación de mezclas se logra gracias a su exposición en un sistema de dos fases
(generalmente una es móvil y la otra estacionaria), la cual puede presentarse como
líquido – líquido, gas – líquido, gas – sólido y líquido – sólido. Por su parte, en
cromatografía en capa fina se emplea como fase estacionaria alúmina (Al2O3) o gel de
sílice (ácido silícico, SiO2·H2O) en diferentes soportes y una fase móvil orgánica; la
alúmina y el gel de sílice actúan del mismo modo, ya que su función es generar la
separación por la retención de los diferentes componentes de una mezcla en su
superficie por la combinación e intensidad con la que actúan los ácidos y bases de
Lewis.
La cromatografía preparativa se refiere a la separación de los componentes de una
mezcla para su posterior procesamiento, y se puede considerar un método de
purificación.
En la cromatografía analítica generalmente se hace con una pequeña muestra
permitiendo para cuantificar la proporción relativa de los componentes en la mezcla.
La cromatografía de capa fina requiere de pocos materiales como: placas (fase
estacionaria), aplicador capilar, disolvente o mezcla de disolventes (fase móvil), cámara
para el desarrollo de la placa, cámara de revelado (físico: lámpara de UV; o químico:
cámara de yodo o ácido sulfúrico)

3
La cromatografía se clasifica en diferentes técnicas teniendo en cuenta algunos criterios
como son:
 la relación de polaridad de las fases (fase normal y fase inversa)
 el mecanismo de separación (adsorción, exclusión, intercambio iónico, reparto y
afinidad)
 la naturaleza de la fase (solido, liquido, gas)
 disposición de las fases (columna y plano)
 forma de desarrollo del proceso (de deslazamiento, frontal y de elución)
En la siguiente tabla se muestran las diferentes técnicas de cromatografía y sus
diferentes fases móviles y fases estacionarias.

4
 Introducción

La validación de un método analítico cuantitativo, se realiza con el propósito de

garantizar la veracidad de los resultados que se obtengan de los análisis. Para
garantizarlos se han establecido parámetros que aporten información estadística,
Ayudando a concluir si el método analítico es válido o no La metodología analítica
cumple con los parámetros de aptitud del sistema, linealidad, exactitud, precisión
(repetitividad y precisión intermedia) para la cuantificación de los principios activos. El
método analítico desarrollado es efectivo y reproducible, cumple con las
especificaciones necesarias para la aplicación si se realiza a las mismas. Condiciones
de laboratorio y con los mismos principios activos, permitiendo que se obtengan
resultados satisfactorios y confiables.

5
OBJETIVOS:
GENERAL

 Apropiación de las temáticas y conceptos básicos requeridos para el

desarrollo de las prácticas propuestas.

ESPECIFICOS

 Incorporar los conceptos teóricos en los que se fundamenta la cromatografía en

capa fina para los sus diferentes tipos.

 Lograr el desarrollo de un pensamiento crítico y científico ante los

resultados obtenidos en el laboratorio.

 Apropiación de las temáticas y conceptos básicos requeridos.

6
METODOLOGÍA:

CROMATOGRAFÍA DE GASES
La muestra se recoge haciendo pasar una cantidad conocida de aire a través de un
tubo relleno dé carbón activo, mediante una bomba de muestreo personal, que dando
los vapores orgánicos adsorbidos sobre el carbón. Posteriormente se desorben con
sulfuro de carbono y se analiza la disolución resultante en un cromatógrafo de gases
equipado con detector de ionización de llama.
Se obtienen las áreas de los picos de los analitos de interés y del patrón interno,
determinando la cantidad' presente en la muestra.
A partir de la masa de los analitos presentes en la muestra se obtienen las
concentraciones ambientales.
Reactivos y productos
 Gases
 Nitrógeno purificado
 Hidrógeno purificado
 Aire sintético puro
 Reactivos
 Benceno

Resultados
1. Registrar los tiempos de retención de cada gas.
2. Identificar en la mezcla los tiempos de retención de cada gas.
3. Registrar las áreas para cada gas.
4. Calcular la concentración para cada gas, estándar nitrógeno, CO2 y trazar la curva
estándar
5. Calcular la concentración de la muestra problema.
Se recopila la información relativa a dicho cromatograma: los compuestos volátiles
detectados, sus tiempos de retención y los factores de identificación correspondientes a

7
cada uno de ellos. Se observa que estos compuestos volátiles identificados son, en
general, hidrocarburos aromáticos y disolventes clorados. Sin embargo, también se
identifican dos tipos de sulfuros orgánicos (dimetil disulfuro y dimetil trisulfuro),
compuestos a los cuales se atribuye principalmente el mal olor de la muestra.
DISCUSIÓN
La cromatografía de gases es una técnica muy útil para de separación y determinación
de compuestos orgánicos volátiles y semivolátiles que sean térmicamente estables.
Acoplada a la espectrometría de masas, permite una identificación inequívoca de los
distintos componentes separados sin necesidad de disponer de patrones de los mismos

Cromatografía en columna

Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina). Se deposita una pequeña
cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la
placa. Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que sólo
la parte inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente es la
fase móvil y asciende por la placa de CCF por capilaridad.
A medida que el eluyente pasa por el lugar donde está la mancha de la mezcla
problema se establece un equilibrio entre las moléculas de cada uno de los
componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en disolución.
En principio, los componentes se diferenciarán en solubilidad y en la fuerza de su
adsorción, de forma que unos componentes se desplazarán más que otros. Cuando el
eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la cubeta, se seca, y los
componentes separados de la mezcla se visualizan.
Visualización de las manchas
Si los compuestos son coloreados se pueden observar las manchas a simple vista. Si
no es así, hay varios métodos para visualizar las manchas correspondientes a cada
componente de la mezcla.
Utilizar luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se adiciona un
colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea fluorescente en todas
partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un compuesto orgánico.

8
Utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo inespecífico.
Emplear reactivos específicos para desarrollar coloración en las manchas. Esto se
puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolución que los contenga o en
forma de spray.

CALCULOS

Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor
de Rf (factor de retención), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa.
Cada compuesto tiene un Rf característico que depende del disolvente empleado y del
tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente del recorrido del disolvente. De
esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una mezcla al comparar
su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente cuando se hacen eluir en la
misma placa de CCF).

Discusión.
Si los compuestos separados en una cromatografía en columna son coloreados, el
progreso de la separación se puede monitorizar visualmente. No obstante, a menudo
los compuestos que deben ser aislados suelen ser incoloros. En este caso, se recogen
secuencialmente pequeñas fracciones de eluatos en tubos rotulados y la composición
de cada fracción se analiza por cromatografía en capa fina. Una vez identificadas las
diferentes fracciones que contienen el mismo producto, se reúnen, se elimina el
disolvente y se analiza la identidad de los componentes por métodos espectroscópicos

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

9
Con la micro pipeta, tome una pequeña cantidad de la solución-problema y aplique una
gota sobre la capa de Silica gel, a 1 cm. aprox. del borde inferior de la placa y trace una
marca, con un lápiz fino, en el borde derecho, para no perder el punto de aplicación.
Para saber cuál es el efecto de la concentración (o el tamaño) de las gotas, se harán 3
aplicaciones de la solución No. 1 en orden creciente de concentración, en una sola
placa.
Para desarrollar el cromatoqrama, introduzca la placa en una cámara de elución, (que
puede prepararse con un frasco de tamaño apropiado), a la que previamente se le
coloca por dentro un cuadro de papel filtro para aumentar la saturación de los vapores
del eluyente, coloque unos 4 mL de acetato de etilo y tápela. Una vez que la placa esté
dentro de Ia cámara, no debe moverla. Cuando el frente del eluyente esté casi en el
borde superior de la capa de Silicagel, abra el frasco, retire la placa y marque el frente
del eluyente con un lápiz fino. Coloque la placa en su hoja de papel, donde anotará sus
datos, y déjela secar al aire. Para visualizar las manchas, revele primero con la lámpara
de luz UV , marcando el contorno de cada una con un lápiz fino y luego introduciendo la
placa en una cámara con cristales de yodo.
MATERIALES
 Pipeta de 5 ml
 Probeta de 25 ml
 Tubos capilares
 Agitador de vidrio
 Espátula
 Frasco p/cromatoqraf ía c/tapa

REACTIVOS
 Tolueno.
 Diclorometano.
 Éter etílico.
 Pentano.
 Vainilla.
 Benzaldehído.
 Cloroanilina.
Cristales de Yodo
DISCUSIÓN

10
se observó en esta práctica que por medio de la cromatografía es posible identificar que
sustancias esta compuesta una mezcla. Como la polaridad del solvente utilizados para
la cromatografía determinan la el resultado mostrándonos sus diferentes compuestos.

Conclusiones:

Es evidente que la cromatografía es un poderoso método de separación y análisis. Las

técnicas cromatografías pueden llevarse a cabo por diferentes mecanismos como son:
absorción continua, adsorción, partición e intercambio iónico. Son claras sus ventajas
en la purificación, particularmente la cromatografía ha sido utilizada con éxito para
determinar cambios conformacionales en sin numero de condiciones experimentales,
que pueden depender de las características es por ello que se identifica como un área
de oportunidades para establecer procesos generales

11
Referencias bibliográficas:

 Nápoles Méndez D, Gómez Neyra Y, Caveda Gil A. Experiencia del uso del misoprostol en la
preinducción e inducción del parto. Rev Cubana Obstet Ginecol 2007; 33(3). [consulta:12 febrero
2008].

 Fiala C, Aronsson A, Granath F, Stephansson O, Seyberth HW, Watzer B, et al. Pharmacokinetics

of a novel oral slow-release form of misoprostol. Hum Reprod 2005; 20(12):3414-8.

 http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1029-30192011000500003

 Nápoles Méndez D, Cutié León ER. Nuevo protocolo diagnóstico y terapéutico en la

distocia de fase latente del trabajo de parto [tesis doctoral]. 2008. Hospital Provincial
Ginecoobstétrico "Mariana Grajales Coello", Santiago de Cuba.
<http://tesis.repo.sld.cu/83/1/Danilo_Napoles.pdf>

 Powers BL. Pharmacokinetics and safety of the 100 mcg misoprostol vaginal insert.
Cytokine Pharma Sciences 2007.<http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00528255

 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html

 HARRIS DANIEL C. (2003) Análisis Químico cuantitativo 3ra Edición, Editorial, Editorial Reverte.
España

 https://core.ac.uk/download/pdf/41780740.pdf

12