TECNICA GRUPAL #3 - AISLAMIENTO E IDENTIFICAION DE BACTERIAS

CAUSANTES DE INFECCIONES ENTERICAS

INFECCIONES ENTÉRICAS
Las infecciones entéricas también conocidas como enteritis, son causadas por
microorganismos que penetran por vía oral, se desarrollan y multiplican en alguna porción
del tubo digestivo alterando los procesos fisiológicos, produciendo mayormente diarrea,
como consecuencia de la falta de higiene en las personas o presentándose cuando el
organismo es sometido a desórdenes alimentarios. Las infecciones entéricas incluyen el
grupo de infecciones que tienen como mecanismo de transmisión lo que se conoce como
“mano-ano-boca”, es decir, enfermedades que se contraen por la ingesta de agua o
alimentos contaminados con microorganismos provenientes de materia fecal.

La diarrea es una alteración de las heces en cuanto a volumen, fluidez o frecuencia en

relación normal a la fisiológica (implica más de tres deposiciones al día) y conlleva a
baja absorción de líquido y nutrientes. En niños se pierden grades cantidades de
electrolitos y nutrientes.

TIPOS DE DIARREA

Diarrea secretora acusa

Se caracteriza por evacuaciones intestinales frecuentes, más o menos líquidas. Provocada
por mecanismos patogénicos que atacan el intestino delgado proximal, porción del intestino
en la que se produce más del 90% de la absorción fisiológica de fluidos. La diarrea
secretora es una diarrea acuosa abundante que produce deshidratación con trastornos del
equilibrio hidroelectrolítico y ácido básico y es producida principalmente por el Vibrio
cholerae y la Escherichia coli enterotoxigénica (ECET), aunque otras bacterias como la
Shigella spp, la Yersinia enterocolitica y las Aeromonas también pueden producirla.

Diarrea invasiva o disentérica

Inicia con evacuaciones intestinales frecuentes, las heces son de menor volumen que en la
diarrea acuosa y contienen sangre, moco y pus. Se acompaña de fiebre, dolor abdominal y
el tenesmo el cual es un espasmo persistente del recto o vejiga acompañado del deseo de
defecar u orina. La patología se centra en el colon. Pueden provocar cambios inflamatorios
y destructivos en la mucosa de este, por invasión directa o mediante la producción de
Citotóxinas. Este daño es responsable del pus y la sangre observados en las heces. No
origina una pérdida importante de fluido, debido a que la capacidad de absorción y
secreción del colon es mucho menor que la del intestino delgado. Los síntomas y los signos
pueden variar de modo significativo de unos pacientes a otros y en fases de evolución de la
enfermedad

Los agentes bacterianos que producen diarrea se pueden clasificar en cuatro (4) grandes
grupos:

Bacterias Enterotoxigénicas: Producen diarrea por la elaboración de una exotoxina, como

por ejemplo Vibrio cholerae, algunas cepas de E. coli, Salmonella y C. perfrigens
Bacterias Productoras de Citotóxinas: Las citotoxinas pueden llevar a la destrucción de
la mucosa. Actualmente se han descubierto en Shigella dysenteriae, Clostridium difficile y
en ciertos serotipos de E. coli.

Bacterias Enteroadherentes: La capacidad de adherencia se ha entendido bien en cepas de

E. coli enterotoxigénica y E. Coli adherente, en las cuales se ha demostrado la presencia de
pilis y fimbrias que median esta capacidad y a los que se han denominado factores de
colonización.

Bacterias Enteroinvasivas: Provocan diarrea por invasión a la mucosa intestinal. Ejemplo:

Shigella spp, Salmonella, Yersinia enterocolitica, algunas cepas de E. coli y Campylobacter
jejunii.

BACTERIAS PRODUCTORAS DE INFECCIONES ENTÉRICAS

Familia: Enterobacteriaceae
Escherichia coli
Es una bacteria presente frecuentemente en el intestino distal de los organismos de sangre
caliente. La mayoría de las cepas de E. coli son inocuas, pero algunas pueden causar graves
intoxicaciones alimentarias
 E. coli enteropatogénica (ECEP)
 E. coli enterotoxigénica (ECET)
 E. coli enteroinvasiva (ECEI)
 E. coli enteroadherente (ECEA)
Características

 Son bacilos Gram negativo (-)

 Es anaerobio facultativo
 Móvil por los flagelos períticos (que rodean su cuerpo)
 No forma esporas
 Es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa.
Mecanismo de transmisión: Causado generalmente por productos de carne cruda o poco
cocinada, la leche cruda y las hortalizas contaminadas por materia fecal.
Período de incubación: De 20 a 72 horas.
Clínica: Es una de las diarreas del viajero. De corta duración, alrededor de tres días
consistes en una hipersecreción en el intestino delgado, diarreas súbitas en ocasión con
presencia de sangre y en pocos casos vómitos, dolor abdominal grave, a veces con
presencia de un poco de fiebre o nada..
Tratamiento: El uso de antibióticos es poco eficaz y casi no se prescribe.
Genero de Escherichia

 Enteropatógenas:
Causan diarreas en infantes por mecanismos aun no bien definidos, aunque se ha
demostrado que se adhieren a la mucosa intestinal y producen una citotoxina. No invade la
mucosa
Sus manifestaciones clínicas se caracterizan por fiebre, vómito diarrea con mucho moco
pero sin sangre. Algunas veces persiste por más de 14 días.

 Enterotoxigénicas:
Se caracteriza por la elaboración de enterotoxinas unas termolábiles y, unas termoestable o
ambas.

 La termolábil: estimulan de la actividad de la adenilciclasa con el consiguiente

aumento de adenosin monofosfato cíclico (AMPC cíclico)
 La termoestable: tiene una función más rápida y menos prolongada se ha
demostrado que actúa estimulando el sistema guanosín monofosfato cíclico
(GMPC)
En ambos sistemas ocurren cambios en el flujo iónico a través de la mucosa intestinal que
resulta en la perdida de agua y electrolitos
La ingesta de agua o alimentos contaminados con E. coli enterotoxigénica lleva a infección
con producción de diarrea acuosa, náuseas, dolor abdominal y fiebre.

 Enteroinvasiva:
Causan enfermedad caracterizada por invadir la mucosa intestinal causando destrucción
celular. Parecidas a las infecciones por Shigellas, las manifestaciones son toxemia, diarrea
acuosa, con sangre, moco pus y gran cantidad de leucocitos fecales. Estas cepas a menudo
son difíciles de identificar

 Enteroadherente:
No producen toxina y no son invasivas. Tiene distintos tipos de adherencia clasificados en
3 categorías: Agregativas, localizadas y difusas, dependiendo de la distribución de las
microcolonias al adherirse sobre las células HEP-2. Los síntomas son diarrea acuosa, con
presencia de sangre, dolor abdominal y fiebre
HEP-2: el sistema de prueba de IFA ANA HEp-2 de ZEUS es un ensayo previamente estandarizado que está
diseñado para la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos antinucleares. Diseñada para ayudar a
determinar el lupus eritematoso sistemático (LES) y para diferenciar trastornos del tejido conectivo que son
clínicamente similares. Diagnostico in vitro.
 INTOXICACIÓN ALIMENTARIA
Son enfermedades causadas por el consumo de alimentos contaminados. El mecanismo de
patogenicidad de los microorganismos causantes de intoxicaciones alimentarias está
determinado por la capacidad de producir toxinas en los alimentos que contaminan, de tal
modo que la enfermedad es el resultado de la acción de estas toxinas preformadas y no de
las bacterias en sí.
Entre las bacterias causantes de intoxicación alimentación se encuentran:

 Staphylococcus aureus,
 Clostridium perfringens,
 Clostridium botulinum
 Bacillus cereus
 Vibrio parahemolityus

STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Características

 Cocos Gram +
 Contienen catalasas, proteínas A y N- acetilglucosiamida
 Anaerobia
 Inmóviles, no forman esporas
Mecanismo de Transmisión: Se adquiere al consumir alimentos contaminados con las
toxinas de S. aureus.
Periodo de incubación: 2- 12 horas
Clínica: En el intestino las enterotoxinas estafilocócicas estimulan los receptores
neuronales locales que viajan al centro del vómito, de este modo el individuo experimentará
vómitos explosivos y puede presentar diarreas
Tratamiento: Sintómatico en caso de infecciones entéricas.

CLOSTRIDIUM SPP
Características

 Bacilos gram +
 Móviles con esporas.
 Anaeróbicos y aeróbicos facultativos
 Incapacidad para reducir sulfatos a sulfitos
Mecanismo de transmisión: alimentos envasados de forma inadecuada y por el consumo
de las esporas.
Periodo de incubación: 6-24 horas

Dependiendo de las cepas la clínica será distinta:

Clínica: C. BOTULINUM.

 La bacteria produce la toxina botulínica únicamente en ambientes altamente

deficientes de oxígeno y cuyo pH no sea muy ácido razón por la cual es más
frecuente encontrarla en alimentos enlatados o cerrados
 Botulismo alimentario: La enfermedad se inicia con náuseas, vómitos
estreñimiento. Y dolor abdominal, así como xerostomía y visión borrosa. Ejerciendo
de igual forma efecto sobre los nervios que activan los músculos que bloquea estas
terminaciones nerviosas. Y produce parálisis facial, en miembros superiores,
aparato respiratorio, garganta

Clínica: C. PERFRINGENS.

 Producida por la ingestión de alimentos que contienen las esporas de las clostridias
 Intoxicación alimentaria: Inicio rápido de espasmos musculares y diarrea acuosa
en ausencia de fiebre, nauseas o vómitos. De resolución espontanea

BACILLUS CEREUS
Característica

 Bacteria Gram Positivo

 Aerobio
 No móvil
 Esporulado.

Mecanismo de transmisión: Se encuentran en granos verduras y productos lácteos.

Cuando los alimentos preparados con dichos productos se refrigeran de manera incorrecta y
después se recalientan, las esporas de B. cereus germinan y las células vegetativas producen
enterotoxinas.
Periodo de incubación: de 1 a 6 horas
Clínica: Ocasiona dos tipos de intoxicación alimenticia:

 La forma diarreica: Los pacientes sufren retortijones graves y diarrea 10 a 18horas

tras la ingestión de alimentos como de carne, verduras o salsas contaminadas. (la
enterotoxina termolábil )
 La forma emética: Caracterizada por náuseas y vómitos que ocurren de 1 a 5horas
tras la ingestión de alimentos como el arroz contaminado con la enterotoxina (La
enterotoxina termoestable)
VIBRIO PARAHAEMOLITYCUS
Características:

 Es un bacilo curvado
 Pertenece al tipo Gram negativo
 Es móvil
 No presenta cápsula ni espora.
Mecanismo de transmisión: por consumo de alimentos marinos contaminados como
cangrejos, langostinos, camarones que suelen consumirse no muy cocidos
Periodo de incubación: 5 a 72 horas
Clínica: La gravedad de la gastroenteritis producida por V parahaemolyticus puede
comprender desde una diarrea de resolución espontánea hasta una enfermedad semejante al
cólera. En general, la enfermedad se desarrolla después del período de incubación de 5 a 72
horas y se manifiesta con diarrea acuosa y explosiva. En los casos muy graves hay
presencia de sangre y pus en las haces.
La cefalea, los espasmos abdominales, las náuseas, los vómitos y la febrícula pueden
perdurar durante un período superior a 72 horas.

TOXIINFECCIÓN ALIMENTARIA
Se produce tras ingerir alimentos contaminados por microorganismos que, al desarrollarse
en el interior del consumidor, segregan distintas toxinas. Pueden ser producidas por los
propios microorganismos patógenos o sus toxinas. Sus principales agentes son:

 Shigella spp
 Salmonella spp
 Campylobacter spp

SHIGELLA SPP.
Características

 Es una bacteria Gram-.

 No móviles,
 No es formadora de esporas e incapaz de fermentar la lactosa.
 Anaerobio facultativo
Mecanismo de transmisión: Se produce cuando se ingiere alimentos o agua contaminada
con material fecal humano. Sobreviven hasta 30 días en leche, huevo, queso o camarones
Período de incubación: De 24 a 72 horas. (1 – 3dias)
Clínica: Causa la clásica disentería bacilar Diarrea severa con dolor abdominal, moco
sangre y pus. El examen revela abundancia de células inflamatorias eritrocitos y pocas
bacterias inmóviles. La patología se denomina Shigelosis. Lactantes y niños son los más
susceptibles Llegan al colon y producen una respuesta inflamatoria y ulceran el sitio de
invasión.
Tratamiento: la administración de antibióticos como ciprofloxacina

Este género posee 4 especies y cada especie varios serotipos

 Shigella dysenteriae (serogrupo A, 13 serotipos) causa infecciones más graves.

Responsable de toxoinfección alimentaria y enteritis.
 Shigella flexneri (serogrupo B, 6 serotipos) infecciones común en los países en
desarrollo.
 Shigella boydii (serogrupo C, 18 serotipos) no se suele aislar.
 Shigella sonnei (serogrupo D, 1 serotipo).responsable de la mayoría de las infecciones
en los países desarrollados

SALMONELLA SPP
Características

 Bacteria Gram-.
 Anaerobios facultativos,
 Con flagelos períticos
 No desarrollan cápsula ni esporas.
 Producen sulfuro de hidrógeno (H2S)
 Fermentan glucosa.
Mecanismo de transmisión: especial por alimentos de origen animal. Se disemina a través
de la carne de aves mal cocida o por falta de higiene en la preparación de la misma. Otra
fuente incluye productos lácteos, huevo, juego, y agua contaminada
Período de incubación: Es por lo general entre 12 y 72 horas, a veces hasta 6 y 48 horas.
Clínica: Limitada al íleo terminal, penetran a la pared intestinal y producen enterotoxinas,
que causan nauseas, vómito y diarrea sanguíneo inician 8 a 24 horas tras la ingestión de
alimentos o bebidas contaminados con Salmonella. En la primera semana ocurre
ulceración del intestino y en la segunda semana son expulsadas en número enorme.
La salmonelosis es una enfermedad benigna excepto en niños pequeños personas de edad
avanzada y enfermedades debilitantes. La invasión a los tejidos se detecta por la presencia
de polimorfonucleares en heces.
Tratamiento: No siempre es recomendable tomar antibióticos para combatir la salmonella,
ya que con un tratamiento de antibiótico no acorta el periodo de enfermedad ni los síntomas
de la misma. Por lo tanto, el tratamiento con antibióticos solo está reservado a niños recién
nacidos, mayores de 50 años, pacientes inmunodeprimidos

CAMPYLOBACTER SPP
Es una de las causas más comunes de intoxicación alimentaria. La gran mayoría de los
casos ocurren como eventos aislados, no como parte de un brote reconocido

Características

 Son bacilos Gram -

 Con forma de coma
 Móviles por la presencia de uno o dos flagelos polares.
 Miden entre 0,5 y 5 micras de largo por 0,2 a 0,5 micras de ancho.
Mecanismo de transmisión: Agua, alimentos contaminados como carne de aves cruda,
productos agrícolas frescos o leche sin pasteurizar.
Período de incubación: De 2 a 5 días.
Clínica: Se manifiesta principalmente por la aparición de fiebre, dolor abdominal y
Diarrea.
Tratamiento: La infección típicamente desaparece por si sola

OTRAS ENTERNOBACTERIAS
VIBRIO CHOLERAE
Es el agente etiológico del cólera. Se transmite por la ingestión de aguas contaminadas con
vómitos o heces de enfermos, de portadores sanos o alimentos contaminados. Su síntoma
más característico corresponde a la aparición de diarrea acuosa también conocida como
diarrea en agua de arroz.
Características

 Bacteria Gram-
 Con forma de bacilos curvados
 Da positivo en las pruebas de la catalasa y de la oxidasa.
 Es una bacteria anaerobia facultativa
 Poseen flagelación polar, que les otorga una movilidad máxima.
Mecanismo de transmisión: Se contrae al consumir alimentos o beber agua contaminados
por la materia fecal de una persona infectada
Clínica: Por lo general, la enfermedad comienza con una diarrea repentina, indolora y
acuosa, además de vómitos. En los casos graves se llega a perder casi un litro de líquido por
hora, pero usualmente la cantidad es mucho menor
Período de incubación: Aparición brusca sin período de incubación (período de 2-3 días
que varía entre 5 horas y 5 días).
Tratamiento: en los casos muy graves se deben utilizar antibióticos, siendo la tetraciclina
el fármaco de elección, siempre bajo control médico.

YERSINIA ENTEROCOLÍTICA
Este género comprende varias especies entre ellas

 Y. pesti, agente de la peste o plaga bubónica o neumónica, comúnmente llamada la

muerte negra, enfermedad de los roedores, trasmitida ocasionalmente al hombre por
las pulgas, con pandemias históricas desde el siglo VI, donde mató a un tercio de la
población en Europa.
 Y. enterocolitica, se ingiere con agua o alimentos contaminados.

Características

 Bacilos Gram-,
 Aerobios y anaerobios facultativos;
 Son móviles a 22ºC, pero no a 37ºC, por flagelos anfítricos o perítricos,
 Forman pilis y fimbrias.
 No forman cápsulas de gran espesor ni esporas.
Mecanismo de transmisión: se transmite sobre todo por el consumo de agua o alimentos
contaminados
Período de incubación: De 4 a 6 días y varía desde 1 hasta 14 días.
Clínica: Raramente presenta infecciones sistémicas. Sin embargo, las bacterias atraviesan
con frecuencia la mucosa y se multiplican en los nódulos linfáticos mesentéricos. Debido a
los intensos dolores abdominales el cuadro puede confundirse con apendicitis.
Ocasionalmente puede haber una artritis reactiva 2 a 6 semanas luego de la infección
Tratamiento: No requiere tratamiento a menos que sean infecciones graves pueden ser
tratados con Tetraciclinas
KLEBSIELLA

Características:
 Son bacilos Gram negativos.
 Inmóviles.
  A menudo capsulados. La cápsula es de naturaleza polisacarídica
 El poseer cápsula otorga a estas bacterias un aspecto colonial mucoide.
 Patógenos oportunistas.

La principal especie de este género es Klebsiella pneumoniae, muy expandida en la

naturaleza.

Mecanismo de transmisión: Se la aísla frecuentemente de materias fecales del hombre y

los animales, pero también de aguas, vegetales y alimentos.

Cuadros clínicos: infecciones urinarias, bacteriemias, neumonías, infecciones hepato-

biliares, etc.
Un porcentaje elevado de aislamientos de Klebsiella, particularmente aquellos de
infecciones nosocomiales, contienen plásmidos de resistencia a los antibióticos.
Puede ser resistencia a betalactámicos, aminoglucósidos, etc.

VIBRIONACEAE

Características
 Bacilos Gram negativos con un hábitat primario acuático.
 Rectos o curvos,
 Móviles por flagelos polares.
 No forman esporos,
 Anaerobios facultativos
 Requiere 2-3% de NaCl o agua marina para desarrollar

Se los encuentra en el mar en aguas frescas y en relación con animales acuáticos.

Quimioorganotrofos, desarrollan en medios simples, capaces de tener un metabolismo
fermentativo o respiratorio. La mayoría oxidasas positivo.

Los géneros que forman esta familia son

 Vibrio
 Aeromonas
 Plesiomonas

2. Determinar el momento apropiado cuando debe colectarse una muestra de heces

para el diagnóstico de infecciones bacterianas y cuál es el tipo de muestra que debe
colectarse para el diagnóstico de: intoxicación alimentaria y toxiinfección alimentaria

La eliminación de los productos de desecho de la digestión es indispensable para la salud.

Dichos productos excretados se conocen como excremento o heces. El examen de éstas se
realiza con frecuencia en la evaluación de trastornos gastrointestinales y sus resultados
ayudan a descubrir sangrado y obstrucción gastrointestinal, ictericia obstructiva,
enfermedades parasitarias, disentería, colitis ulcerosa y aumento de la excreción de grasas.
Una muestra de heces adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el período agudo
de la enfermedad, cuando es más fácil comprobar la presencia de pus, moco o sangre y
debe hacerse antes de la administración de drogas antimicrobianas. Por tanto, es ideal para
el diagnóstico clínico de infección intestinal bacteriana.

Cuando el diagnóstico clínico no permite orientar hacia un agente en particular, se

recomienda tomar la muestra de heces en tres partes:
1) Una para el examen coprológico,
2) Otra para el coprocultivo
3) Una tercera para el diagnóstico viral.

MUESTRA IDEAL EN UNA INTOXICACIÓN ALIMENTARIA

 La muestra ideal es la fuente alimenticia sospechosa o alimento que se

sospecha que ocasiono la intoxicación
 Se examina una muestra de heces para detectar niveles altos de esporas de
microorganismos.
 Vomito recién emitido

MUESTRA IDEAL EN UNA TOXIINFECCION

 La muestra ideal es de heces

 Vomito

3. Técnicas de recolección de la muestra de heces y como debe ser enviadas al

laboratorio para su análisis.

La recolección y transporte de las muestras son consideraciones fundamentales, dado que

cualquier resultado generado por el laboratorio está limitado por la calidad de la muestra y
la condición en que llega. Las muestras se deben obtener de manera que eliminen o
disminuyan al mínimo la posibilidad de introducir microorganismos extraños
(contaminantes) que no intervienen en el proceso infeccioso.

1. MATERIAS FECALES
Esta muestra se utiliza para el diagnóstico etiológico de gastroenterocolitis aguda.
Excepcionalmente se puede utilizar para la búsqueda de portadores de Salmonella sp. En
los laboratorios de Microbiología de índole asistencial de adultos se realiza búsqueda de
Salmonella y Shigella. Si se sospechan otros agentes consultar con el Laboratorio de
Microbiología.

MATERIAL NECESARIO

 Recipiente de boca ancha para recoger las heces, no es necesario que esté estéril,
solo es preciso que esté limpio. No contendrá restos de jabones, detergentes,
desinfectantes o iones metálicos.
  Recipiente estéril de boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra.
(Ejemplo: frasco de urocultivos). La muestra de heces para colocar en el frasco se
recoge con espátula o bajalenguas.
 Medios de transporte para heces. Se emplean solo si el envío de la muestra se
demora y se solicita en laboratorio de Microbiología. Existen sistemas comerciales
para bacterias. (Cary-Blair o solución de glicerol tamponado)

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

 Solo se procesan materias líquidas o a lo sumo pastosas. Si son pastosas se toma

una porción con una patela de madera o bajalenguas del recipiente donde hayan sido
emitidas. En caso de heces líquidas puede utilizarse jeringa para aspirado del
material fecal del recipiente en donde ha sido emitido
 Recoja la materia fecal preferiblemente de aquellas áreas que parezcan contener
sangre, mucosidad o líquido. Coloque suficiente.
 Etiquetar el recipiente, escribiendo el nombre completo del paciente y la fecha y
hora cuando recogió las muestras. De no hacerlo, el laboratorio no podrá realizar
el análisis y será necesario obtener otra muestra.
 Guardar la muestra de manera apropiada y llevarla al laboratorio lo antes posible.

Tomar en cuenta:
 No se debe recoger la muestra del agua del excusado, así como tampoco si ha
estado en contacto con la orina, puesto que ello podría eliminar los microbios o
parásitos que haya en las heces.
 No debe utilizarse para la recogida papel higiénico, porque suelen tener sales de
bario que inhiben algunas bacterias enteropatógenas

VOLUMEN MINIMO

 Heces pastosas: muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadas pues permiten
realizar la mayoría de los estudios.
 Heces líquidas entre 5 y 10 ml.

TRANSPORTE

 Si la muestra no se envía en forma inmediata se debe refrigerar para evitar el

sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los
enteropatógenos
 Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas después de su emisión, no necesitan
medio de transporte.
 Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultivo, pues
este diluye las partículas virales disminuyendo la sensibilidad.
 2. HISOPOS RECTALES

Los hisopos rectales solo se aceptarán en casos en que no se puedan obtener heces, por
ejemplo, en neonatos o adultos debilitados, o internados en unidades de cuidados
intensivos. No se recomienda su uso cuando las bacterias están en poca cantidad en los
casos de portadores sanos, para estos casos se recomienda tomar las muestras
preferiblemente por deposición de heces frescas recién emitidas.

 Se ha demostrado eficacia en la sospecha de disentería basilar o gastroenteritis por

E. colienteropatógena en niños, aislamiento de Neisseria gonorrhoeae,
Campylobacter spp., Shigella spp.(protege de la desecación), C. difficile,
especialmente en el hospital, virus herpes simple y en portadores anales de
Streptococcus pyogenes.

 No es válido para la búsqueda de antígenos.

MATERIAL NECESARIO

 Hisopos con medio de transporte

 Guantes.
 Guarde este material en un sitio fresco (nunca en nevera), fuera del alcance de los
niños.

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

 Para realizar la toma se introduce el hisopo sobrepasando el esfínter anal y se rota

para hacer la toma de las criptas anales, hasta una profundidad de 3 cm tratando de
recoger material mucosanguinolento en las paredes de la ampolla rectal.
 Dejar 10 a 30 segundos para que se absorban los microorganismos y retirar.
 Una vez realizado se introduce en un medio de transporte.
 Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte de la
varilla sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el tubo.
 Identifique la muestra, escribiendo claramente en la etiqueta el nombre completo,
edad, hora y fecha de la toma de muestra.
 Enviar lo más pronto posible al laboratorio para su procesamiento, dentro de las 4-6
horas de recolectada la muestra.

TRANSPORTE

 Se envían en medio de transporte adecuado (Stuart, Cary-Blair, para anaerobios en

el caso de C. difficile
 El medio de transporte más utilizado es el de Cary-Blair el cual mantiene la
viabilidad de los patógenos bacterianos intestinales, incluso Campylobacter y
especies de Vibrio. Es semisólido debido a la baja concentración de agar, lo cual
impide la oxigenación y el derrame durante el transporte.
  Tiene un mínimo aporte de nutrientes que permite la recuperación de los
microorganismos sin que haya replicación. Puede ser almacenado a temperatura
ambiente por hasta 1 año después de preparado.

4. Describir el procedimiento para la investigación de leucocitos fecales en una

muestra de heces y señalar el tipo de células inflamatorias a observar según la
naturaleza del proceso entérico infeccioso.
En los procesos infecciosos en indispensable el reconocimiento de su naturaleza, por lo que
en las muestras de heces se busca evidenciar el tipo de células inflamatorias presentes, lo
que es de gran ayuda al momento del diagnóstico e identificación de las patologías
bacterianas entéricas.
Una vez tomada la muestra se procede a la búsqueda de leucitos (polimorfonucleares,
eosinófilos, linfocitos, entre otros).
Es importante mencionar que en el caso de muestras de materia fecal que contengan sangre
o moco, al agregarle una porción igual de azul de metileno de Loeffer se facilita la
detección de leucitos, formas de parásitos o levaduras, Una vez observadas algunas de estas
células se reporta su predominio para identificar el tipo de infección entérica, que puede ser
de origen bacteriano, viral, parasitario o micótico.

MÉTODO
El examen se puede realizar en fresco o en frotis fijados, en cualquiera de los dos casos se
utiliza como colorante el azul de metileno de Loeffler.
El montaje en fresco se realiza mezclando una gota del colorante con una pequeña cantidad
de materia fecal y se observa entre lámina y laminilla con objetivo de 40X dentro de los 30
minutos siguientes al montaje, en busca de células leucocitarias.
También se pueden realizar frotis delgados de la muestra de materia fecal, se dejan secar al
aire y se colorean por dos minutos con azul de metileno. Se observan al microscopio con
objetivo de 40X en busca de los leucocitos.
En casos positivos se puede hacer un porcentaje diferencial entre polimorfonucleares:
células con núcleo lobulado y mononucleares: células con un solo núcleo que
generalmente ocupa la mayor parte del citoplasma. Las células que no se puedan
diferenciar se ignoran.

RESULTADOS

La presencia en muestras de materia fecal de 3-5 leucocitos en por lo menos 5 campos se

considera como resultado positivo. Como consecuencia sólo en este evento y salvo en casos
de sospecha de cólera, se deberá realizar un coprocultivo para aislar gérmenes
enteropatógenos
La observación al microscopio de las infecciones entéricas de origen bacteriano ha
permitido evidenciar la presencia de determinadas células y su predominancia, denotando
lo siguiente:

Enfermedad Tipo de célula predominante

Shigelosis Polimorfonucleares (84%)

Salmonelosis Polimorfonucleares (75%)

E. coli invasiva Polimorfonucleares (85%)

Fiebre Tifoidea Mononucleares (95%)

Amibiasis Generalmente Mononucleares

Polimorfonucleares (88%)
Colitis ulcerosa
/Eosinofilos (8%)

Diarrea alérgica Mononucleares (95%)

Diarreas virales, toxigénicas y personas

Generalmente sin células inflamatorias.
sanas

Diarrea Infecciosa
Tipo Inflamatoria ( Invasiva) No inflamatoria ( No Invasiva)
 Rotavirus
 Salmonella
 Adenovirus
 Shigella
 Cryptosporidium
 Campyiobacter
Agentes Causales  Isospora belli
 Yersinia difficile
 Giardia lamblia
 E. coli
 E. coli
 E.histolytica
 Vibrio cholerae
Localización Colon - Íleon Delgado
Tipo Disentérica Acuosa
Leucocitos Fecales Presentes Ausentes

Los organismos invasivos tales como Shigella, Campylobacter, algunas cepas de

Salmonella, E. coli enteropatógena o entero/invasiva, Yersinia y la Entamoeba histolytica
impiden al intestino llevar a cabo su normal absorción de agua y electrolitos. Estos
organismos tienen predilección por el colon y el proceso cursa con disentería (materia fecal
con moco y sangre). En la mayoría de los casos al examen microscópico se observan
leucocitos, bien sea polimorfonucleares o mononucleares.
Estos últimos aparecen especialmente en casos de fiebre tifoidea o amibiasis. Los
polimorfonucleares aparecen también en colitis ulcerativa producida por Clostridium
difficile posterior al tratamiento con algunos antimicrobianos como Clindamicina,
Lincomicina o Ampicilina.

Cuando la diarrea es acuosa, tipo secretora y por tanto no inflamatoria, el agente infeccioso
se localiza en el intestino delgado y aunque en algunos casos pueden aparecer hematíes, los
leucocitos fecales están ausentes. Este tipo de diarrea tiene como agentes principales a
organismos como virus del tipo Rotavirus, virus Norwalk o Adenovirus, bacterias como el
Vibrio cholera y Vibrio parahaemolyticus o algunas cepas de E. coli enterotoxigénico.

Entre los parásitos implicados están las coccidias como el Cryptosporidium, la Isospora
belli y otros protozoos como las giardias, todos éstos relacionados generalmente con
deficiencias inmunológicas del huésped y transmitidos por aguas contaminadas. La
deshidratación en algunos de estos casos puede ser crítica y por tanto se hace indispensable
un diagnóstico temprano para evitar tratamientos inadecuados e instaurar rápidamente la
hidratación oral.

5. Describir el procedimiento a seguir en la realización de un coprocultivo:

aislamiento primario y aislamiento secundario/Importancia del coprocultivo

COPROCULTIVO

Un coprocultivo es un examen bacteriológico en el cual se investiga la presencia de

bacterias patógenas en materia fecal.

IMPORTANCIA

 Permite identificar el agente causal del cuadro entérico y tratarlo con el antibiótico
adecuado, en caso de que corresponda hacerlo.
 El coprocultivo también ayuda a determinar la necesidad o no de un estudio
bacteriológico a los miembros del núcleo familiar o de trabajo del paciente debido a
que ciertas bacterias se adquieren por fuentes comunes de alimentos.
 Además se puede determinar los portadores sanos de bacterias.

FUNDAMENTOS BÁSICOS DEL COPROCULTIVO

TOMA DE MUESTRA

 Recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad

 Antes de la administración de drogas antimicrobianas.

SIEMBRA
  En las muestras de heces las bacterias entéricas patógenas se encuentran siempre
asociadas a una gran variedad de bacterias comensales.
 Para facilitar el aislamiento e identificación, se emplean medios de enriquecimiento,
medios selectivos y medios de identificación.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

 Se utilizan para incrementar el número de bacterias en una muestra de heces.

 La muestra se siembra primero en ello y luego se procede a aislar en placas.
 En el laboratorio clínico los medios de enriquecimiento más frecuente se utilizan
para la recuperación de especies de Salmonella y Shigella.
 Se basan en el principio de que E. coli y otros microorganismos Gramnegativo que
constituyen la flora fecal normal son mantenidos en una fase de latencia prolongada
por las sustancias químicas inhibidoras en el caldo. Las especies de Salmonela y
Shigella son mucho menos inhibidas, entran en una fase de crecimiento exponencial
y se recuperan con más facilidad de muestras fecales.

Dentro de los medios de enriquecimiento se tiene:

CALDO SELENITO:

 Finalidad: Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella.

 El selenito de sodio es inhibidor de E. coli y otros bacilos entéricos gramnegativos,
incluyendo muchas cepas de shigella.
 Subcultivar dentro de las primeras 8 horas en medios selectivos, ya que estos
medios ya no suprimen el crecimiento de E. coli y otros microorganismos entéricos.

CALDO DE MUELLER- KAUFFMAN O CALDO DE TETRATIONATO

 Finalidad: Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella.

 Utilizado con mayor frecuencia
 Tetrationato de Sodio, el cual inhibe el crecimiento de las bacterias grampositivas y
limita el crecimiento de casi la totalidad de las enterobacterias, siendo muy efectivo
para el enriquecimiento de Salmonelas.

MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES

 El aislamiento e identificación de bacterias entéricas se basa en el uso de este tipo

de medios, que permiten inhibir a un tipo de bacterias favoreciendo el crecimiento
de otras.
 En los medios se combinan el aislamiento y las pruebas bioquímicas.
Los medios selectivos y diferenciales comúnmente empleados en la realización de un
coprocultivo son:

AGAR MACCONKEY

 Finalidad: Es un medio diferencial para la selección y recuperación de

Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Las sales
biliares y cristal de violeta inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas y
algunas bacterias gramnegativas exigentes. La lactosa es el único carbohidrato.
 Interpretación:
Positivo: presencia de bacterias fermentadoras de lactosa que producen colonias
con tonos variables de rojo.
Negativo: colonias no fermentadoras de lactosa se ve incoloras o trasparente.

BISMUTO-SULFITO AGAR O AGAR WILSON-BLAIR

 Finalidad: Es un medio muy selectivo para el aislamiento de Salmonella typhi y de

algunas otras salmonellas.
 La dextrosa, el extracto de carne y la peptona proporcionan los nutrientes necesarios
para el crecimiento de los microorganismos.
 El sulfato ferroso actúa como indicador en la producción de sulfuro de hidrógeno
 El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben considerablemente el crecimiento
de bacterias contaminantes.

Resultado: En este medio las colonias de S. typhi se observan colores negros o gris oscuro
con brillo metálico, otras salmonelas y Arizona pueden producir colonias negras o verde
oscuro.

AGAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS AGAR)

 Finalidad: Es un medio de aislamiento altamente selectivo para salmonelas y

shigellas por contener sales biliares que favorecen el desarrollo de gramnegativos e
inhiben el crecimiento de los grampositivo.
 Es además un medio diferenciador porque contiene lactosa permitiendo la
diferenciación de gérmenes fermentadores o no fermentadores

Resultados:

 Color neutro es rojo naranja.

 Las colonias de salmonelas y shigellas no lactofermentadores, son incoloras y
transparente.
  Aquellos gérmenes fermentadores de lactosa acidifican el medio, obteniéndose
colonias rosadas sobre un fondo rojizo.
 La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro.
 Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en
Selenito caldo.

MEDIO DE LEVINE O AGAR EOSINA-AZUL DE METILENO (EMB):

 Finalidad: Medio diferencial y moderadamente selectivo.

 Se utiliza en el aislamiento de E. coli enteropatógena, salmonella y Shigella.
 Inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas de cultivos mixtos y también
muchas especies de cultivos gramnegativos exigentes.
 El uso de eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias
fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras

Resultados:

 Las colonias fermentadoras de lactosa intensas forman colonias verdes-negras con

un brillo metálico.
 Los fermentadores débiles, incluyendo producen colonias púrpuras.
 Los no fermentadores de lactosa, incluyendo producen colonias transparentes.

MEDIO XLD (XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO):

 Recomendado para aislamiento de especies de Shigella.

 Las colonias de Shigella se ponen de manifiesto por la aparición de un color rojo
intenso.
 La aparición de colonias amarillas en este medio pertenece a la flora normal.

EL COPROCULTIVO CONSTA DE LOS SIGUIENTES PASOS:

1. El aislamiento primario.

2. El aislamiento secundario.

3. La identificación bioquímica de la cepa aislada.

4. La identificación serológica.

1. AISLAMIENTO PRIMARIO:
Comprende la siembra directa en medios selectivos y diferenciales y la siembra de un
medio de enriquecimiento.

 Para la siembra directa se coloca una gota de heces liquidas, en el caso de heces
sólidas, una suspensión de heces con solución salina estéril, sobre la superficie de
medios selectivos y diferenciales
 Con el asa de siembra se extiende la muestra por agotamiento sobre la superficie del
medio.
 Si la muestra de heces o el material tomado por hisopado rectal llega al laboratorio
en medio de Cary-Blair o de Amies, se extrae el hisopo con una pinza y se pasa a un
tubo con 1cc de solución salina fisiológica estéril en el cual por agitación, se
suspende el material. Con esta suspensión se realizan siembras directas en medios
selectivos.
 La siembra del medio de enriquecimiento se efectúa emulsionando 1 gr de heces, o
colocando unos 2 ml de suspensión o el hisopo, en Caldo Tetrationato.
 Se lleva a incubación por 18-24 horas a 37°C en aerobiosis y el caldo de
enriquecimiento por 12-18 horas a la misma temperatura.

2. AISLAMIENTO SECUNDARIO:
 Consiste en la siembra en medios selectivos y diferenciales a partir del caldo
tetrationato que han sido incubado en el aislamiento primario.
 Las placas son incubadas a 35-37ºC por 18-24 horas.
 Las colonias sospechosas se identifican mediante el estudio de propiedades
bioquímicas en el tercer paso y la constitución antigénica mediante el cuarto paso
del coprocultivo.

3. IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE LA CEPA AISLADA:

Cada colonia sospechosa de ser germen gramnegativo patógeno, se siembra en medio de

identificadores como: medio TSI, LIA, SIM, caldo MR-VP, Urea, Citrato.

 TSI: Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. Útil

en la identificación de E.coli
 (LIA) Medio agar lisina hierro: se usa para determinar si un bacilo gramnegativo
descarboxila o desamina la lisina y forma H2S.
 SIM: Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
 Urea: Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus
spp., otras enterobacterias y estafilococos.
 Caldo MR-VP (Rojo de Metilo y Voges Proskauer): Es particularmente útil para la
clasificación de enterobacterias.
  Citrato: Determina la capacidad de un microorganismo para usar el citrato de sodio
como única fuente de carbono y sales inorgánicas de amonio como única fuente de
nitrógeno.

4. IDENTIFICACIÓN SEROLÓGICA (CONSTITUCIÓN ANTIGÉNICA):

Una vez aislada e identificada una cepa de Salmonella, Shigella, E. coli enteropatógena, se
procede a su identificación serológica para la determinación de sus antígenos “O” y “H” (si
lo poseen) y “K” (E. coli enteropatógena).

Para la identificación serológica por lo general se utiliza la aglutinación rápida sobre la

lámina. Para ello se suspende una pequeña porción del cultivo en varias gotas de solución
salina sobre una lámina portaobjeto, luego se agregan unas gotas de antisuero contra
distintos serotipos del microorganismo.

Los anticuerpos específicos presentes en el antisuero se fijan a los antígenos de superficie

de la bacteria y si la concentración del germen es suficiente, se produce aglutinación
formando agregados visibles.

 INTERPRETACIÓN

Se reconoce la aglutinación porque los anticuerpos específicos presentes en el antisuero se

fijan a los antígenos de superficie de la bacteria. Si la concentración de germen es suficiente
hay formación de gránulos finos o grandes conglomerados.

REPORTE FINAL. DEBE INCLUIR LOS SIGUIENTES ASPECTOS:

1) Resultados del examen directo con azul de metileno: Aparición de leucocitos y su

proporción.
2) Aislamiento o no del agente causal. Indique el género y la especie. En algunos casos
se debe incluir el serotipo. Señale los enteropatógenos estudiados.
3) Reporte la sensibilidad y resistencia del agente a los antibióticos si se realiza el
antibiograma