Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Química

Informe Nº 7

Bioquímica I

Aislamiento de Glucógeno

Presentado por:

Isamar Aguilar 4-764-606

Sherlynn Petit 4-765-2209

Prof. Albertina Montenegro

Fecha de entrega: 27/04/2014

Resumen
El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se
encuentra principalmente en el hígado y en el músculo representando hasta un 10% y
un 1-2% de su peso húmedo, respectivamente. (Bohinski, 2001)
Las propiedades físicas y químicas de muchos polisacáridos neutros difieren lo
bastante de las de otras biomoleculas, para permitir su fácil aislamiento.
Esta experiencia tiene como propósito aislar el glucógeno de la muestra de hígado por
calentamiento con una base fuerte (KOH), hasta la destrucción total del tejido.
Al añadir ácido tricloroacético al homogeneizado anterior, precipitaron numerosas
sustancias de peso molecular elevado, como las proteínas y los ácidos nucleicos, en
tanto que el glucógeno continúa disuelto. El glucógeno puede separarse de los
monosacáridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitación con alcohol, porque
los polisacáridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los monosacáridos.
La determinación del glucógeno se dio mediante la prueba de molish la cual dio positivo
para carbohidratos (glucosa).
Objetivos

 Extraer el glucógeno presente en una muestra de hígado de pollo.

 Caracterizar mediante pruebas químicas el glucógeno extraído.
Marco teórico
El glucógeno es un polisacárido de la célula animal, que se encuentra en el hígado
(10%) y músculos (2%). La estructura del glucógeno y los polisacáridos similares se
puede describir como una ramificación en forma de abanico de moléculas de
gucopiranosa, por medio de enlaces 1-6 en los puntos de ramificación.
Presenta ramificaciones cada 8-12 glucosas con una cadena muy larga (hasta 300.000
glucosas). Se requiere dos enzimas para su hidrólisis (Glucogenofosforilasa) y alfa (1-
6) glucosidasas, dando lugar a unidades de glucosa. Dado que los seres vivos requieren
una parte constante de energía, una parte importante de metabolismo de los azucares
está relacionado con los procesos de formación de almidón y glucógeno y su posterior
degradación, Bohinski, 1991.
La importancia de que el glucógeno sea una molécula tan ramificada es debido a que:

 La ramificación aumenta su solubilidad.

 •La ramificación permite la abundancia de residuos de glucosa no reductores
que van a ser los lugares de unión de las enzimas glucógeno fosforilasa y
glucógenosintetasa, es decir, las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de
síntesis como la de degradación del glucógeno.

El glucógeno por medio de distintos procesos se convierte en ATP que es la forma de

energía más básica. Si el proceso requiere de gran cantidad de energía se realizara por
la glucólisis y parte se convertirá en ácido láctico, para este proceso no hace falta
oxígeno. Por el contrario si el proceso es menos intenso el glucógeno o glucosa pasara
por el ciclo Krebs y será necesaria la utilización del oxígeno, esto es lo denominado
ejercicio aeróbico, Mathews, 2002.
Gracias a la capacidad de almacenamiento de glucógeno, se reducen al máximo los
cambios de presión osmótica que la glucosa libre podría ocasionar tanto en el interior
de la célula como en el medio extracelular.
Materiales y Reactivos
Baño térmico, baño de hielo, centrifuga, balanza, policial, tubos de ensayo, tubos de
centrifuga cónicos plásticos con tapón, guantes de látex, hígado de pollo, solución de
KOH, Solución de tricloroacético, solución de sulfato de sodio, etanol.
Nombre Descripción Toxicidad
Apariencia: Sólido en
fragmentos, terrones, barras,
lentejas o escamas con fractura
cristalina o rombohedral, sin
olor, de color blanco - amarillo
claro, delicuescente.
Tener precaución en dosis
Punto de Ebullición (ºC): 1370
Solución de KOH elevadas
Punto de Fusión (ºC): 360
pH: 13.5 (Solución 0.1 M).
Solubilidad: Apreciable en agua
(>10%). Soluble en alcohol y
glicerina, insoluble en amonio y
éter.
Tener precaución en dosis
elevadas Tras contacto con
la piel: irritaciones de
ATC aparición local.
Tricloroacético C2HCl3O2 / CCl3COOH Tras ingestión: trastornos
Masa molecular: 163.4 gástricos e intestinales.
Información adicional:
Posible sensibilización en
personas predispuestas.
Contacto con la piel: Puede
Sinónimos : Sulfato disodio, sal
causar irritación de la piel.
disodio, Sulfato sódico
Causa irritación a los ojos.
Formula Química : (Na2SO4)
Inhalación: La sustancia es
Peso Molecular : 142.04 g/mol
irritante para las
Uso: Utilizado como desecante
Sulfato de sodio membranas mucosas y el
en el laboratorio o la industria
tracto respiratorio superior.
química. Se utiliza en la
Ingestión. La ingestión de
fabricación de la celulosa y
grandes cantidades puede
como aditivo en la fabricación
irritar el estómago con
del vidrio.
nausea y vómito.
El etanol es un líquido incoloro,
volátil, con un olor Contacto con ojos: Se
característico y sabor picante. presenta irritación.
También se conoce como Contacto con la piel: El
alcohol etílico. Sus vapores son líquido puede afectar la piel,
Etanol
más pesados que el aire. produciendo dermatitis
Se obtiene, principalmente, al caracterizada por
tratar etileno con ácido sulfúrico resequedad y
concentrado y posterior agrietamiento.
Hidrólisis.
Procedimiento

 Aislamiento de glucógeno del hígado de Pollo

1. Pesamos 4g de hígado de pollo en pequeños trozos en un vaso químico.
2. Agregamos 3mL de la solución de KOH al 30%.
3. Calentamos a baño maría, agitando constantemente durante 20 minutos.
4. Dejamos enfriar la muestra.
5. Una vez que comprobamos que estaba fría, añadimos 4 gotas de Na2SO4
mezclamos fuertemente y dejamos reposar durante 5 minutos.
6. Se precipito el glucógeno que está en solución con 7mL de etanol al 95%, agitamos
y dejamos enfriar en un baño con hielo durante 5 minutos.
7. Pasamos la solución a los tubos de la centrifuga y se centrifuga a la máxima
velocidad 5000 r/m, durante 5 minutos. Desechamos el sobrenadante y colocamos
el tubo invertido en papel toalla para eliminar restos.
8. Añadimos 5mL de solución TCA al 10% y disolvemos totalmente el precipitado.
9. Centrifugamos de nuevo a 5000 r/m durante 5 minutos.
10. Agregamos el sobrenadante a otro tubo de centrifuga más 10mL de etanol al 95%,
desechando el sedimento de la centrifugación anterior.
11. Centrifugamos nuevamente durante 5 minutos a 5000 r/m.
12. Una vez que centrifugamos desechamos el sobrenadante. El precipitado es lo que
representa el glucógeno exento de las sustancias contaminantes.
13. Hicimos prueba de molish para identificar la glucosa de la cadena de glucógeno.

Resultados y discusión

 Aislamiento de glucógeno del hígado de Pollo

Se extrajo el glucógeno de la muestra de hígado de pollo y procedimos a realizar la
prueba de molish general para carbohidratos.
Muestra Prueba de molish
Glucógeno +
Observación: (+) formación de un anillo violeta en la interfase.

Fig. 1 Formación de furfurales. Los monosacáridos (en este caso la glucosa) en caliente y medio muy ácido,
sufren una deshidratación que conduce a la formación de un anillo pentagonal de furfural ace o
hidroximetilfurfural, según se parta de pentosas o hexosas. Los oligo- y polisacáridos también sufren estas
reacciones, ya que el medio ácido favorece la hidrólisis previa del enlglicosídico. Los furfurales formados
se combinan fácilmente con diversos fenoles y aminas, dando reacciones coloreadas.

La prueba de Molish nos permite identificar la presencia de hidratos de carbono,

mediante la formación de un anillo violeta (furfural o hidroximetilfurfural) en la interfase
de la solución. (Armstrong, 1982).
El glucógeno es un polisacárido de reserva energética cuyo monómero es la glucosa.
El glucógeno da positivo a la prueba de molish debido a que al estar en presencia de
ácido sulfúrico concentrado este hidroliza y deshidrata los azúcares, obteniéndose
furfural o hidroximetilfurfural como producto final. Luego de esa reacción se mezcla con
el α-naftol, el cual ataca la zona del doble enlace del grupo carbonilo formando un
complejo de sustituyentes ácidos y fenólicos que toma una coloración rojiza violeta en
un anillo del tubo de ensayo.
En la Fig. 1. Se observa que la glucosa tiene hexosas dentro de su estructura, el ácido
sulfúrico depositado en el fondo del recipiente actúa sobre las hexosas arrancándole
una molécula de agua, generando el hidroximetilfurfural que da la coloración violeta
resultante.
Conclusiones
Se verifico que:

 El glucógeno es un polisacárido de reserva energética cuyo monómero es la

glucosa.
 La prueba de molish es general para carbohidratos.
 El glucógeno da positivo a la prueba de molish debido a que al estar en presencia
de ácido sulfúrico concentrado este hidroliza y deshidrata los azúcares,
obteniéndose furfural o hidroximetilfurfural como producto final.

Bibliografía

• Armstrong, F. (1982) Bioquímica. Barcelona. Editorial Reverte.

• BOHINSKI. 1991 Bioquímica. México. Pearson
• Brown. (2009) Química La Ciencia Central. México. Editorial Prentice Hall
• Mathews, K. E (2002).Bioquímica. México. Editorial Pearson.
• Mora, G.A (2007).Principios de Bioquímica. España. Editorial Reverte
• Wade, L.G.2005.Química Orgánica. Madrid. Editorial Pearson.