Fundamento: Son cuatro pruebas bioquímicas.

Se emplean
Indol, Rojo de fundamentalmente para la identificación de
Metilo, Voges- las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios
Proskauer y facultativos con metabolismo fermentador). Dependiendo
Citratos de las condiciones, las enterobacterias, pueden realizar un
metabolismo aerobio (si disponen de oxígeno), realizar
una respiración anaerobia (si hay nitratos u otro aceptor
de electrones) y distintas fermentaciones.
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-imvic.htm

Incluyen un grupo de cuatro pruebas usadas para diferenciar a los microorganismos entéricos
(Familia Enterobacteriaceae)

IMViC

PRUEBAS BIOQUIMICAS FALTANTES

Malonato (caldo malonato fenilalanina):

Fundamento: Evalúa la capacidad del microorganismo de utilizar el
malonato como única fuente de carbono y la desaminación de la fenilalanina, en
forma combinada.Las Enterobacterias no tienen la capacidad enzimática de
realizar las dos reacciones simultáneamente, por lo que, o se observa la utilización
del malonato o la desaminación de la lisina.
Lectura e interpretación: Un viraje de color verde al azul, da una reacción
positiva, de lo contrario es negativa.

El medio actualmente está compuesto por extracto de levadura,

sulfato de amonio, fosfato dipotásico, fosfato monopotásico, cloruro de
sodio, malonato de sodio, dextrosa y azul de bromotimol. Esta prueba
se incluye generalmente en la batería bioquímica de identificación para
Enterobacterias, ayudando a la diferenciación de ciertos géneros y
especies. La prueba de malonato se basa principalmente en la capacidad
que tienen algunos microorganismos de utilizar como única fuente de
carbono al malonato de sodio y como fuente de nitrógeno al sulfato de
amonio.
Fundamento Malonato

La prueba del malonato consiste en evidenciar aquellas bacterias que

son capaces de utilizar el malonato de sodio como única fuente de
carbono y el sulfato de amonio como fuente de nitrógeno.

La mayoría de las enterobacterias que no utilizan el malonato son

capaces de crecer en este medio, tomando como nutrientes la dextrosa
y el extracto de levadura.

En este caso, cualquier intento de alcalinización por el uso de las

peptonas será contrarrestada por la producción de ácidos generados por
la fermentación de la dextrosa. Así mismo, los fosfatos dipotásico y
monopotásico actúan como tampón manteniendo el pH a 6,7.

Es por ello que, cuando la prueba es negativa, el caldo queda del mismo
color original (verde). En raras ocasiones el medio podría acidificarse
debido a la fermentación de la dextrosa; sin el uso de las peptonas y el
indicador de pH haría virar el color del medio hacia amarillo. Para que
ello ocurra el pH debe bajar a 6.

Ahora bien, cuando esta prueba es positiva se dice que el

microorganismo utilizó el malonato y al sulfato de amonio como fuentes
de carbono y nitrógeno respectivamente, sin hacer uso de los otros
componentes.

En este caso el medio se alcaliniza debido a la liberación del sodio y la

consecuente formación de NaOH. En este sentido, el indicador de pH
(azul de bromotimol) hace virar el color del medio de verde hacia azul
cuando el pH es igual o mayor a 7,6. El azul puede ser claro o intenso
(azul de Prusia).

Finalmente, el cloruro de sodio mantiene la osmolaridad del medio y el

agua es el diluente de todos los componentes.

Interpretación

Caldo del mismo color (verde): prueba negativa

Caldo amarillo: prueba negativa

Caldo azul claro o intenso: prueba positiva

Existe una variante denominada caldo fenilalanina malonato, también

llamado medio de Shaw y Clarke. En este caso se pueden analizar dos
pruebas, el uso del malonato como fuente de carbono y la producción de
ácido pirúvico a partir de la fenilalanina.

Fundamento Nitrato

Con esta prueba se investiga la capacidad de las bacterias para reducir los nitratos convirtiéndolos
en nitritos o en nitrógeno, es decir se estudia la presencia de nitrato reductasa y nitrito reductasa.
Se utiliza el medio de cultivo caldo nitratos. Para revelar la presencia de nitritos en el medio se
emplearán dos reactivos: reactivo A (ácido sulfamínico al 0.8% en ácido acético glacial 5N) y
reactivo B (α-naftilamina al 0.5% en ácido acético glacial 5N) que se añadirán tras la incubación

En esta prueba se detecta una respiración anaerobia: la que utiliza nitrato como
aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen a nitritos y algunas bacterias
reducen los nitritos a productos gaseosos ( N2 y N2O). Las enzimas responsables de
ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente. La
prueba detecta nitritos en los cultivos con reactivos que originan una coloración roja.
La reducción de nitritos hasta gas se detecta por medio de una campanita Durham.

Materiales y -Medio de cultivo con nitrato), reactivos para detección

reactivos de nitritos (soluciones en ácido acético de alfa-
naftilamina y ácido sulfanílico) y zinc
Método: Inocular el medio de cultivo. Incubar a 37 oC durante 48
horas
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-reduccion_nitratos_nitritos.htm