Manual de Guias

Manual de
Guías de laboratorio de
Bioquímica
1 MANUAL DE GUÍAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 2018

Profesor: M.E.E. LUIS JAVIER NARVÁEZ ZAMORA
Tabla de contenido
Consideraciones Generales ..................................................................................................................... 3
La seguridad ante todo ........................................................................................................................... 5
La naturaleza de las sustancias químicas, el peligro de trabajar con ellas ............................................. 5
Descripción de pictogramas de seguridad en el laboratorio .................................................................. 7
Normas Generales sobre el Trabajo en el Laboratorio ......................................................................... 11
Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de química ........................................................... 12
El almacenamiento de las sustancias químicas..................................................................................... 15
¿Qué hacer con los residuos de cada práctica de laboratorio? ............................................................ 17
Los informes de laboratorio .................................................................................................................. 19
Práctica de laboratorio No. 1. Uso y Calibración de Micropipetas ....................................................... 20
Práctica de Laboratorio No. 2. Medición de Concentración de Disoluciones por Espectrofotometría 25
Práctica de laboratorio No. 3. Titulación Ácido-Base con Bureta Digital .............................................. 32
Practica de Laboratorio No. 4. Soluciones Buffers y Curvas de Titulación ........................................... 41
Guía de Laboratorio No. 5 Propiedades Químicas de los Aminoácidos ................................................ 46
Práctica de Laboratorio No. 6. Cuantificación de Proteínas y Aminoácidos ......................................... 54
Laboratorio No. 7. Separación de Aminoácidos por Cromatografía de Papel en Dos Dimensiones y
Cromatografía en Capa Fina.................................................................................................................. 57
Práctica de Laboratorio No. 8. Reconocimiento de Carbohidratos ...................................................... 61
Práctica de laboratorio No. 9. Pruebas Polarimétricas con Carbohidratos .......................................... 68
Práctica de Laboratorio No. 10. Cuantificación de Carbohidratos........................................................ 74
Practica No.11. Inversión de sacarosa .................................................................................................. 76
Practica de Laboratorio No.12. Cuantificación sacarínica en frutas ..................................................... 79
Práctica de laboratorio No. 13. Actividad catalítica de la amilasa. ....................................................... 83
Práctica de laboratorio No. 14. Pruebas Cualitativas para Ácidos Grasos ............................................ 87

Consideraciones Generales
Las experiencias planteadas en esta obra se pueden realizar por grupos de máximo
tres estudiantes en los laboratorios de Química de la Universidad Surcolombiana; el diseño
de las guías tiene en cuenta el material de laboratorio, es decir reactivos, equipos e
infraestructura existente a la fecha de publicación de la presente obra. Se busca el trabajo
en equipo para fortalecer la responsabilidad y dedicación de sus integrantes, para discutir el
experimento, profundizar en los conceptos involucrados, al tiempo de mejorar la
capacidad lectoescritora con la presentación de los informes respectivos.
Cada guía contiene algunos apartados o componentes básicos para el desarrollo
exitoso de la práctica: además del título o temática objeto de estudio, se incluyen algunos
objetivos tanto generales como específicos del experimento Por igual se incorporan los
materiales, equipos y reactivos necesarios o en su defecto se señalan otros para
reemplazarlos en la eventualidad de su carencia.
También se encuentra descrito el procedimiento a seguir, el cual lejos de convertirse
en una receta, le brinda al estudiante, la posibilidad de introducir algunas modificaciones
válidas sin detrimento de los objetivos propuestos. Otro componente muy importante es el
abordaje de los conceptos químicos incorporados en cada práctica de laboratorio; para ello
se puntualizan las definiciones más actualizadas de los conceptos, aquellas aceptadas como
válidas por la comunidad académica actual; este componente denominado marco teórico
le permite al estudiante, generar un punto de partida cognitivo, a partir del cual, buscará
profundizar en las referencias bibliográficas y en las bases de datos arbitradas, con el fin de
acceder a definiciones acertadas de los conceptos usados en cada práctica.
No menos importante, también se incorpora una sección de cuestiones o preguntas,
cuya intencionalidad es buscar aplicaciones prácticas de los conceptos objeto de estudio
correspondientes a cada guía. Esta inclusión, busca poner a prueba en contextos diferentes,
los significados conceptuales logrados a través de cada práctica.
Finalmente se incluyen algunas referencias de consulta, donde se especifican libros de

texto, artículos de revistas arbitradas, sitios web de reconocida trayectoria académica y

algunas aplicaciones tales como objetos de aprendizaje, repositorios, bases de datos
indexadas de acceso inmediato gracias a los convenios de la Universidad Surcolombiana con
las direcciones web administradoras.
La obra incluye guía de laboratorio para las siguientes disciplinas de la química, a
saber: Química General, Química Inorgánica, Química Orgánica, Química Analítica,
Fisicoquímica y Bioquímica. Para cada disciplina se prevén 16 prácticas correspondientes a
las 16 semanas de cada periodo académico, sin embargo se incluyen cómo mínimo unas 20
prácticas diferentes, en la eventualidad de presentarse dificultades con la implementación
de alguna de ellas.
Las guías en general satisfacen las exigencias académicas correspondientes a los
microdiseños del plan de estudios del programa de Licenciatura en Ciencias Naturales:
Física, Química y Biología, en consecuencia, cada práctica se debe desarrollar en dos horas,
razón por la cual, además del manejo estricto de la puntualidad, también se requiere un
análisis cuidadoso previo de la práctica a desarrollar, dedicando especial atención a la
metodología y el montaje tanto de equipos, materiales y reactivos a fin de obtener un
alcance de los objetivos planteados en cada práctica.
Sin embargo, tal como ya se señaló en párrafos anteriores, algunas veces es necesario
realizar ajustes al procedimiento a seguir y el planeamiento de tales cambios y aún la
ejecución de cada experimento conforme al procedimiento, requieren una clara
comprensión del método experimental y sus fundamentos teóricos.

La seguridad ante todo
La naturaleza de las sustancias químicas, el peligro de trabajar con
ellas
Para empezar es indispensable para el estudiante la verificación de la naturaleza

correspondiente a los reactivos requeridos en el desarrollo de cada una de sus prácticas; a
partir de 1992, la Conferencia de las Naciones Unidas sobre el Medio ambiente y el
Desarrollo (CNUMAD, capítulo 19 de la Agenda 21), organismo de la UNECE (United Nations
Economic Commission for Europe) crea el GHS (Global Harmonized System, también
denominado SGA (Sistema globalmente armonizado de Comunicación y Etiquetado de
Químicos) para y finalmente fue adoptado de manera definitiva a partir de 2002.
Este sistema busca proteger la salud humana y el medio ambiente de sustancias
químicas peligrosas obviamente con el ánimo de facilitar su comercio mundial, y sobre todo
limitar los riesgos, durante la manipulación como durante el almacenamiento o la
eliminación. Para ello el nuevo reglamento europeo CLP (Classification, Labelling and
Packaging) tiene por objetivo principal la aplicación del GHS en la Unión Europea y hacerlo
extensivo a todo el planeta. tratando de reducir la repetición de pruebas y evaluaciones de
estas sustancias Este sistema exige etiquetar todos los recipientes contenedores de
sustancias químicas con nuevos pictogramas de seguridad, los cuales se muestran a
continuación:
GHS 01 Explosivo GHS 02 Inflamable

GHS 03 Oxidante GHS 04 Gas presurizado
GHS 05 Corrosivo GHS 06 Tóxico
GHS 07 Tóxico, irritante, narcótico, peligroso GHS 08 Peligroso para el cuerpo,

mutágeno, carcinógeno, reprotóxico
GHS 09 - Dañino para el medio ambiente
A continuación se transcribe la descripción de los nuevos pictogramas de seguridad

para sustancias químicas de acuerdo con el GHS:

Descripción de pictogramas de seguridad en el laboratorio
Explosivo: este símbolo de una bomba hecha añicos alerta de que el producto puede
explotar al contacto con una llama, chispa, electricidad estática, bajo efecto del calor, en
contacto con otros productos, por rozamientos, choques, fricción, etc. Los aerosoles de todo
tipo, como lacas o desodorantes, incluso cuando se han acabado, son explosivos por encima
de 50º C.
Inflamable: el producto comienza a arder de forma muy fácil, incluso por debajo de 0º
C, al contacto con una llama, chispa, electricidad estática, etc., por calor o fricción, al
contacto con el aire o agua, o si se liberan gases inflamables. El etanol, el metanol, la
trementina y su esencia, la acetona, los disolventes de pintura, las pinturas en aerosol y
metálicas, los desheladores de cristales, los purificadores de aire, etc., son inflamables.
Comburente: a diferencia del pictograma para los productos inflamables, la llama está
encima de un círculo. Se hace esta distinción para avisar la naturaleza comburente de la
sustancia . Son productos ricos en oxígeno que en contacto con otras sustancias, sobre todo
inflamables, pueden provocar, avivar o agravar un incendio o una explosión. Los disolventes
que contienen peróxidos, como el ácido peracético, son comburentes.
Gas: el dibujo de la bombona señala que es un envase con gas a presión. Algunos
pueden explotar con el calor, como los gases comprimidos, licuados o disueltos. Los licuados
refrigerados pueden causar quemaduras o heridas criogénicas, al estar a muy baja
temperatura. En la anterior normativa no había un símbolo para estos productos a presión o
comprimido, tan solo una frase de peligro.
Corrosivo: el producto puede atacar o destruir metales y causar daños irreversibles a
la piel, ojos u otros tejidos vivos, en caso de contacto o proyección.
Toxicidad aguda: la calavera y las dos tibias cruzadas advierten sobre los efectos
adversos para la salud, incluso en pequeñas dosis, y con consecuencias inmediatas. Al entrar
en contacto con el mismo se pueden sentir náuseas, vómitos, dolores de cabeza, pérdida de
conocimiento. En un caso extremo, puede causar la muerte.

Irritación cutánea: el signo de exclamación es una advertencia de los efectos adversos
provocados por el producto en dosis altas. Algunas de estas consecuencias negativas son
irritación en ojos, garganta, nariz y piel, alergias cutáneas, somnolencia o vértigo.
Peligroso por aspiración: estos productos pueden llegar al organismo por inhalación y
causar efectos negativos muy diversos, en especial, muy graves a largo plazo. Pueden
provocar efectos cancerígenos, mutágenos (modifican el ADN de las células y dañan a la
persona expuesta o a su descendencia), tóxicos para la reproducción, causar efectos
nefastos en las funciones sexuales, la fertilidad, provocar la muerte del feto o
malformaciones, modificar el funcionamiento de ciertos órganos, como el hígado, el sistema
nervioso, etc., entrañar graves efectos sobre los pulmones y provocar alergias respiratorias.
Peligroso para el medio ambiente acuático: este pictograma con un árbol y un pez
indica que el producto provoca efectos nefastos para los organismos del medio
acuático (peces, crustáceos, algas, otras plantas acuáticas, etc.). La anterior
clasificación consideraba los efectos tóxicos también sobre el medio terrestre e incluía una
frase de riesgo indicativa del peligro del producto sobre la capa de ozono. Para mayor
información, consultar las siguientes páginas:
http://www.unece.org/fileadmin/DAM/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev01/English/01e_par
t1.pdf
http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev01/01files_s.htmL
http://www.applichem.com/fileadmin/datenblaetter/A1806_es_ES.pdf
Pictogramas antiguos
Antes del año 2002, los pictogramas de seguridad para las sustancias químicas se
clasificaban en cinco grandes grupos, los cuales aún se encuentran impresos en los frascos,
bidones y embalajes de la mayoría de reactivos químicos, denominados:: Materiales
explosivos, comburentes, inflamables, tóxicos, nocivos, corrosivos e irritantes.
La gráfica No. 1.1 presenta los símbolos de los peligros que permitirán identificar la
naturaleza de los reactivos, tomado de:

http://www.ugr.es/~quiored/lab/seguridad/pictograma.htm. Sin embargo es
demasiado importante recordar siempre que las sustancias sin rotular también pueden ser
peligrosas y que los riesgos de accidentes disminuyen en la medida en que trabajemos con
seriedad en el laboratorio.
Gráfica No. 1.1 Pictogramas válidos a 2002
a. Materiales Explosivos
Son materiales que pueden explotar bajo determinadas condiciones, por lo cual debe
evitarse choques, fricción, formación de chispas y la acción del calor, por ejemplo: cromato
de amonio (NH4)2Cr04.
b. Materiales Comburentes
Hace referencia a materiales que pueden inflamar a otros materiales combustibles o
favorecer incendios ya existentes, dificultando su extinción; debe evitarse cualquier contacto
con este tipo de sustancias, por ejemplo: permanganato de potasio KMn04, peróxido de
sodio Na202.
C. Materiales Inflamables
Son aquellos que fácilmente provocan incendios; pueden ser autoinflamables
(fósforo), gases inflamables (propano, butano) y líquidos inflamables (acetona, benceno), se

debe respectivamente, evitar el contacto con aire y aislar de las llamas, fuetes de calor y/o
chispas.
d. Materiales Tóxicos
Se refiere a materiales que pueden causar trastornos orgánicos de carácter grave e
inclusive la muerte, tras una inhalación, ingestión y/o absorción a través de la piel; deben
manipularse con mucha precaución, por ejemplo: Cloruro de mercurio HgCl y trióxido
arsénico As2O3.
e. Materiales Nocivos
Son materiales que de incorporarse al organismo producen efectos nocivos de menor
trascendencia; evitar su inhalación, por ejemplo: tricloroetileno, Cl2C=CHCl.
f. Materiales Corrosivos
Son sustancias que en contacto con la piel pueden destruir los tejidos, debe evitarse su
inhalación y el contacto con la piel, ojos o ropa; por ejemplo: ácido sulfúrico, H2S04, bromo
Br2.
g. Materiales Irritantes
Señala a las sustancias que pueden producir acción irritante sobre la piel, ojos y
órganos respiratorios, por esto debe evitarse inhalar sus vapores y el contacto con la piel y
los ojos, por ejemplo: solución de amoníaco NH4OH.
Los símbolos anexos a los pictogramas poseen los significados expresados en la Tabla
No.1.1 y .significan lo siguiente:
Tabla No. 1.1. Signos de los pictogramas de seguridad
Símbolo Significado Símbolo Significado
T+ Muy Tóxico. O Comburente.
T Tóxico. C Corrosivo.
Xn Nocivo. Xi Irritante.
F Fácilmente Inflamable. E Explosivo.
F+ Extremadamente Inflamable N Peligroso para el medio ambiente.
En conclusión, la observancia estricta de los pictogramas antiguos o nuevos, conduce a
formular una regla fundamental para garantizar el trabajo en el laboratorio:
Nunca pruebe, huela o toque un reactivo sin antes conocer su peligrosidad!,
determine antes su naturaleza.

Normas Generales sobre el Trabajo en el Laboratorio
Buscando prevenir los riesgos y proteger al personal que realiza actividades en los
laboratorios, se han recopilado los aspectos y características fundamentales para tenerse en
cuenta desde el punto de vista de seguridad: LA RESPONSABILIDAD Y SEGURIDAD DE
TRABAJO RECAE SOBRE TODAS Y CADA UNO DE LAS PERSONAS QUE HACEMOS PARTE DE
ESTA INSTITUCION, obviamente, la mayor parte de la responsabilidad recae sobre la
persona encargada del curso de laboratorio, al poseer mayor preparación y destreza en él,
por lo cual, además de compartir su conocimiento deberá contribuir a transformar y
mantener el sitio de trabajo tan seguro como sea posible y de presentarse cualquier
anomalía por trivial que parezca se deberá informar a esta persona.
La mayoría de accidentes que ocurren en un laboratorio de química, son ocasionados
principalmente por dos razones: La falta de conocimiento acerca de la labor que se realizará
y por la negligencia a seguir las normas de seguridad impartidas.
Los accidentes más frecuentes se pueden originar en las siguientes situaciones:
1. Manipulación de productos químicos y corrosivos
2 .Manipulación de vidrio roto
3. Materiales que se encuentran a temperaturas elevadas
4. Fuego proveniente de mecheros u originado por cortos eléctricos
5. Descarga eléctrica en equipos
6. Explosiones generadas por mezclas
Las tres primeras son las más comunes y las que ofrecen el mayor riesgo, las tres
últimas requieren severas precauciones en cualquier laboratorio.
Para evitar accidentes en su trabajo se recomienda seguir las reglas de seguridad
consignadas a continuación, así como también pensar en los posibles riesgos involucrados
en la realización de un proceso experimental, solamente así se logrará que el laboratorio sea
un sitio seguro y amable de trabajo.

Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de química
Complementario al proceso de identificación etiquetado y almacenaje de las

sustancias químicas con las cuales se van a realizar las prácticas de laboratorio de los
diferentes cursos incluidos en esta obra, también son importantes algunas normas básicas
de bioseguridad, cuya estricta observancia garantiza la exoneración de accidentes
personales y grupales lamentables. Las normas o recomendaciones más significativas en
cuanto a su importancia se detallan a continuación:
 Para recordar siempre: el laboratorio es un lugar de trabajo serio y el desarrollo de los
experimentos implica la exposición a varias clases de riesgos, por lo cual es necesario seguir
cuidadosamente las instrucciones y tomar todas las precauciones posibles en el manejo de
los reactivos, materiales y los equipos utilizados. Para cada práctica se hace necesario leer la
guía correspondiente, elaborar un preinforme para entregarlo al monitor del curso, para eso es
importante entender los pasos a seguir en el desarrollo de cada práctica, así como también, el
manejo apropiado del fundamento teórico.
 Siga las instrucciones cuidadosamente y de manera lógica, tomando todas las
precauciones posibles. Consulte cualquier anormalidad con el profesor o con el monitor.
 Siempre utilice la blusa de laboratorio para protegerse de manchas, algunas
quemaduras y salpicaduras de reactivos y otros. Por igual, use gafas protectoras, guantes de
nitrilo o látex según convenga; SOLO SE PERMITE EL INGRESO AL LABORATORIO
CON PANTALONES LARGOS Y ZAPATOS CERRADOS Vístase adecuada y
cómodamente, evite ropa inflamable. Use pantalón largo preferiblemente de algodón, no
lleve puestos anillos y pulseras, utilice calzado cerrado no sandalias o chancletas que dejan
los dedos destapados, sí su cabello es largo utilice un gancho para sujetarlo. Efectúe
únicamente los experimentos asignados o aprobados por el profesor. Los experimentos no
autorizados están prohibidos.
 Si se derrama un ácido u otra sustancia corrosiva, SOLICITE UNA MANTA
ABSORBENTE al profesor o al monitor para recoger la mayor cantidad de sustancia
derramada, el sobrante enjuáguelo inmediatamente con abundante agua, teniendo cuidado con
las salpicaduras.

 No toque las sustancias químicas con las manos, utilice siempre una espátula, una
pipeta u otro instrumento adecuado.
 ∙ Nunca pruebe sustancias químicas o las soluciones . a menos que se indique lo
contrario.
 Al examinar el olor de una sustancia, no coloque la cara directamente sobre el
recipiente. Dirija un poco de vapor hacia usted, agitando una mano sobre el recipiente. Para
probar el olor de una sustancia, coloque la boca del recipiente alejada de su nariz y con su
mano ventile un poco los vapores hacia su nariz, no inhale profundamente, olfatee
suavemente
 Sofoque cualquier indicio de incendio con una toalla y asegúrese de conocer la
localización del extinguidor de incendios en el laboratorio.
 Informe al profesor o al monitor sobre cualquier accidente, aún sobre una pequeña
herida.
 Para evitar confusiones, revise cuidadosamente las etiquetas de los frascos de
reactivos y de los recipientes que contienen las soluciones utilizadas en cada práctica.
 Nunca vuelva a verter las sustancias químicas sin utilizar, en los frascos de
almacenamiento, y no introduzca en ellos pipetas que no hayan sido cuidadosamente lavadas
y secadas, para evitar su contaminación. tome solamente la cantidad necesaria para la
realización de la experiencia..
 Mantenga el equipo y la superficie de su mesa limpios. Evite los derramamientos de
líquidos o sólidos, pero si llegan a ocurrir, límpielos de inmediato.
 Antes de iniciar la práctica, revise el material que se le ha entregado, y al finalizarla,
devuélvalo en el mismo estado al monitor. Los estudiantes responderán por cualquier pérdida
o daño de los elementos recibidos.
 Planifique y organice el trabajo con los compañeros de grupo, de ser necesario, el
grupo de manera autónoma define los roles y las responsabilidades de cada integrante para
agilizar el desarrollo de las prácticas. Anote todos los datos y las observaciones claramente y
de manera inmediata, para una mejor organización y comprensión.
 Si su ropa se incendia utilice la ducha, sí sobre su ropa se ha derramado algún reactivo
cáustico, quítese de inmediato la prenda afectada, en este momento no cuenta el pudor

solamente la rapidez con la cual enfrenta el problema.
 Proteja siempre en forma adecuada sus ojos, el riesgo de una lesión grave obliga a
todos (profesores y estudiantes) en el laboratorio desde el inicio hasta la finalización de la
práctica deben mantener puestas sus gafas de seguridad y así evitar daños irreversibles
ocasionados por salpicaduras de reactivos o esquirlas de vidrio que vuelan por accidente,
recuerde que a pesar de que usted no esté realizando algo peligroso, sus compañeros pueden
tener un accidente y afectarlo!
 En caso de salpicaduras de reactivos en los ojos, lave inmediatamente con
abundante agua, abra bien los párpados y mueva el ojo afectado en diferentes sentidos, acuda
al oftalmólogo lo antes posible.
 Nunca ingiera comidas o bebidas y menos fume en el laboratorio. Lave sus manos
antes y después de terminada la práctica.
 Nunca trabaje solo sin supervisión en el laboratorio, no realice ningún experimento sin
previa autorización.
 Las quemaduras y cortaduras son las lesiones más comunes en el laboratorio.
Deshágase del material de vidrio resentido o roto y deposítelo en el sitio adecuado. Nunca
intente pasar o atravesar un tubo de vidrio o un termómetro por el agujero de un tapón,
previamente asegúrese de lubricar bien con glicerina o agua jabonosa, tubo y agujero. Proteja
manos con una toalla o guantes mientras inserta el vidrio o el material cortante en el tapón.
 Recuerde que el vidrio caliente tiene el mismo aspecto que el vidrio frío.
 Nunca toque directamente con su piel, mallas de calentamiento, material de vidrio, y
materiales de laboratorio que previamente hayan sido sometidos a calentamiento; de ser
necesario hacerlo, sea extremadamente cuidadoso.
 No se frote los ojos ni se toque otras partes del cuerpo con las manos contaminadas de
reactivos, si alguna parte del cuerpo resulta impregnada con algún reactivo, se debe lavar con
suficiente agua y jabón.
 Cualquier experimento en el cual se produzcan humos tóxicos o irritantes, debe
realizarse dentro de la cámara extractora.
 Nunca agregue agua a un ácido concentrado, diluya el ácido lentamente adicionado el
ácido al agua con agitación constante, las bases deberán ser diluidas de forma análoga.

 Los mecheros pueden causar serias quemaduras, enciéndalo solo cuando haya
verificado que no se encuentran líquidos inflamables como alcohol, benceno, éter o acetona
cerca del mismo. El calentamiento de líquidos inflamables deberá efectuarse
preferiblemente con una manta eléctrica o en baño María.
 Cuando caliente un líquido en un tubo de ensayo, coloque la boca del tubo en forma
inclinada, lejos de usted y de sus vecinos; nunca caliente un líquido en un recipiente
completamente cerrado.
 Mantenga su área de trabajo limpia, seca y ordenada, siga las instrucciones para el
montaje del equipo y recuerde que los libros y objetos personales deben estar retirados del
sitio de trabajo ya que pueden interferir en su labor y resultar peligrosos
 Evite las chanzas, juegos, manifestaciones de cariño y visitas de sus amigos hasta una
vez finalizada la práctica de laboratorio.
 La mayoría de los productos químicos del laboratorio son tóxicos, para evitar
cualquier accidente lamentable con el manejo de reactivos lea cuidadosamente los rótulos de
los reactivos, el uso erróneo de sustancias puede ocasionar serios problemas.
 Nunca pipetee líquidos succionando con la boca, use los pipeteadores disponibles en
el laboratorio o en su defecto articule la pipeta a una jeringa plástica utilizando una sección de
manguera de látex.
 Si necesitas pipetear varias sustancias líquidas, utiliza un pipeteador lavado y seco
para cada uno.
 Si requieres trasvasar varias sustancias sólidas, utiliza una espátula lavada y seca para
cada una, se puede usar una sola espátula siempre y cuando se lave y se seque en cada caso.
El almacenamiento de las sustancias químicas
En cada laboratorio debe existir un espacio seguro, muy bien ventilado y de acceso
restringido, el cual se utilice como almacén de reactivos, el acceso a este sitio solo debe
estar autorizado a una o muy pocas personas, quienes se hacen responsables de su cuidado
y servicio. El almacenamiento adecuado de las sustancias químicas en el laboratorio de la
Universidad Surcolombiana se hace siguiendo las recomendaciones de la guía mixta de

almacenamiento de sustancias químicas presentada en la siguiente gráfica, la cual recoge
varias recomendaciones de las fábricas de reactivos diseminadas en varios continentes.
El laboratorio de química, adscrito a la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la
Universidad Surcolombiana, fue creado para prestar servicios de docencia y en algunos casos
de investigación, ligada a la formación académica de estudiantes y profesores; en ese
sentido se ha dispuesto el manejo y el uso adecuado de diferentes productos químicos,
muchos de los cuales tienen requerimientos especiales de almacenamiento con restricciones
de temperatura, tiempo o seguridad.
En las gráficas No. 1.2 y 1.3 se muestran las guías de almacenamiento de sustancias
químicas en el laboratorio, tomado de
http://bdigital.uao.edu.co/bitstream/10614/3035/6/Anexo%2025.%20Guia%20de%20
Almacenamiento%20de%20Productos%20Quimicos%20DRH3.3.1-MU4-DEOM-3.3.4-
F017..pdf
Gráfica No. 1.2 Matriz guía de almacenamiento químico mixta válida hasta 2002.

Gráfica No. 1.3 Matriz guía de almacenamiento químico mixta vigente
En esta organización se ha tenido en cuenta la guía presentada anteriormente a fin de
evitar los problemas más frecuentes de almacenamiento en los laboratorios debido al
almacenado conjunto de productos químicos incompatibles. El objetivo global es mantener
el control sobre los productos químicos, de modo que puedan almacenarse y recuperarse
con seguridad. No se deben ignorar algunas de estas regulaciones.
La casa comercial Merck a la cual se adquieren casi todos los reactivos del laboratorio
de química ha preparado un póster con información sobre el potencial de riesgo de varias
clases de almacenamiento y sobre todos los aspectos clave concernientes al
almacenamiento conjunto de productos químicos. Esto también incluye el cumplimiento de
medidas protectoras y códigos de conducta, así como la creación de procedimientos
normalizados de trabajo.
http://www.merckmillipore.com/chemicals/r%26s-
phrases/spanish/c_5A6b.s1LQ0QAAAEWVOYfVhTo
http://www.arlsura.com/files/sistemaglobalmentearmonizado.pdf
¿Qué hacer con los residuos de cada práctica de laboratorio?
Durante el desarrollo de una práctica de laboratorio o al final de la misma se generan
algunas sustancias residuales, por lo general líquidas, en algunos casos sólidas (soluciones,
papel, vidrio, fósforos ya usados, etc.) estos residuos JAMAS DEBEN SER LANZADOS al
vertedero del mesón de trabajo. Las sustancias líquidas se depositan en una caneca
plástica convenientemente rotulada de acuerdo a su naturaleza química; en cada
laboratorio hay recipientes plásticos para desechos orgánicos e inorgánicos, los cuales se
entregan posteriormente a los funcionarios del sistema de control ambiental, quienes deben
neutralizarlos antes de disponer su eliminación definitiva, de acuerdo con la normatividad
ecológica colombiana. Los residuos sólidos deben desecharse en recipientes provistos para
tal propósito, los cuales también se encuentran ubicados en cada laboratorio, para su
posterior tratamiento y ulterior desecho.

Los informes de laboratorio
Antes de iniciar la práctica siguiente y en la fecha convenida con el profesor, cada

grupo de estudiantes presentará el informe de laboratorio, el cual debe contener los
siguientes aspectos:
- Nombre y objetivos de la práctica.
- Fundamentos teóricos de la práctica en forma clara y resumida, limitándose a los
conceptos que tienen una relación directa con el experimento en cuestión.
- Tabla de datos y observaciones de los procesos realizados.
- Muestra de cálculos, incluyendo las unidades empleadas para todas las mediciones.
- Tabla de Resultados, Gráficos y Ecuaciones Químicas.
- Solución del cuestionario en forma concisa y ordenada.
- Análisis y discusión de resultados.
- Conclusiones referidas a la apreciación personal sobre los resultados obtenidos.

Universidad Surcolombiana
Licenciatura en Ciencias Naturales: Física, Química y Biología
Bioquímica
Profesor: Luis Javier Narváez Zamora
Práctica de laboratorio No. 1. Uso y Calibración de Micropipetas
Objetivo. Medir volúmenes precisos mediante el uso de micropipeta.

Calibrar una micropipeta
Marco teórico
Una micropipeta es un dispositivo diseñado para medir volúmenes muy pequeños de
líquidos con un alto nivel de precisión, tales líquidos no deben atacar el polipropileno o el
policarbonato, materiales de los cuales está construido el dispositivo de medida, por igual no
pueden usarse líquidos con elevadas presiones de vapor.
En cualquier caso, el volumen de líquido a medir JAMAS debe tocar el cono de
polipropileno de acoplamiento para puntas; CUALQUIER CANTIDAD DE DISOLUCIÓN
PRESENTE EN EL INTERIOR DE LA MICROPIPETA, DATERIORA EL SISTEMA DE
MEDIDA. En ningún caso se debe dejar la micropipeta en posición horizontal mientras tenga
algún líquido en la punta
La micropipeta posee un sistema con cojín de aire para el pipeteado de soluciones
acuosas con densidad media y viscosidad baja a media, siempre y cuando se lo utilice bajo
las siguientes limitaciones: – +15 °C a +40 °C (de aparato y reactivos: pueden obtenerse
otras temperaturas si así se desea), presión de vapor de hasta 500 mbar y viscosidad: 260
mPas, Brand, 2012, p 66.
Los líquidos viscosos y humectantes pueden afectar a la exactitud del volumen, por
igual, los líquidos cuya temperatura difiera en más de ±1 °C de la temperatura ambiente.
La micropipeta en referencia permite medir entre 100 y 1000 microlitros (aunque los
topes inferior y superior son de 28 y 1108 L respectivamente).
Descripción de la micropipeta

A continuación, en la gráfica No. 1.1 se muestra una fotografía, Brand, 2012, donde se
señalan las partes de una micropipeta, para este caso, de 100.0 L.
Eyector de puntas
Gráfica No. 1.1 Descripción de la micropipeta de 0 a 1000 L

Procedimiento
Una vez insertada la punta apropiada en el cono de acoplamiento, esta se debe
enjuagar con el líquido a transferir, de acuerdo la Norma ISO 8655. El proceso de
micropipeteado se describe en tres momentos: aspirar la disolución, transferirla y expulsar la
punta, a saber:
Aspirar el reactivo
1. Seleccionar el volumen a transferir utilizando el selector de volumen; si al intentar
girarlo este se resiste, es necesario mover hacia arriba el seguro de protección contra
cambio de volumen, tal como se muestra en la gráfica No. 1.2:
Seguro de protección contra cambio

de volumen desactivado
Gráfica No. 1.2. Definición del volumen a transferir
Ahora girarlo por ejemplo hasta 48 L y baja el seguro de protección contra cambio de
volumen, tal como lo muestra la gráfica No. 1.3.
Pulsador de pipeteado Seguro de protección contra

cambio de volumen activado
Gráfica No. 1.3. Activación del seguro contra cambio de volumen en micropipeta de
1000 L

Sumerge la punta 2 a 3 milímetros en el líquido a transferir, presiona el pulsador de
pipeteado hasta el primer tope, , tal como se indica en la gráfica No. 1.4:
Gráfica No.1.4. Aspirando la muestra

Ahora sin sacar la punta del líquido a transferir, suelta lentamente el pulsador de
pipeteado, para aspirar el líquido, dejando la punta sumergida durante 1 o 2 segundos para
permitirle al equipo la succión precisa de líquido, tal como se ilustra en la gráfica No. 1.5.:
Gráfica No. 1.5. Aspirando la muestra.

Expulsar el reactivo
Para expulsar el volumen medido, saca la micropipeta de la disolución permitiendo un
ligero toque de la punta con la pared del recipiente, ahora apoya la punta en la pared del
o o
recipiente donde va a transferirse el volumen medido con un ángulo de 30 a 45 y presiona
lentamente el pulsador de pipeteado con velocidad uniforme hasta el primer tope y
mantenerlo así, tal como se muestra en la gráfica No. 1.6:
Gráfica No. 1.6. Expulsión del volumen medido.

Luego, presiona el pulsador de pipeteado hasta el segundo tope para vaciar
completamente la punta y durante este tiempo escurre la punta de la pipeta contra la pared
del recipiente deslizándola una distancia de aproximada de 10 mm, tal como se indica en la
gráfica No. 1.7.
Gráfica No. 1.7. Expulsando el volumen medido

Expulsar la punta
Una vez efectuadas todas las mediciones pertinentes debes expulsar la punta, para
ello presiona hacia abajo el expulsor, hasta el tope, momento en el cual, la punta plástica
sale eyectada al sitio de su almacenamiento y posterior desecho, tal como se muestra en la
gráfica No. 1.8.
Gráfica No. 1. 8. Expulsión de la punta
La norma ISO 8655 prescribe que la punta de la pipeta, antes del proceso de
pipeteado propiamente dicho, debe enjuagarse con el líquido de la muestra.
¡No colocar nunca el aparato con la punta llena en posición horizontal! Esta acción
introduciría el líquido en el interior del mismo contaminándolo e iniciando su deterioro.
Referencias
Brand, 2012. Transferpette S. Documento consultado el 9 de agosto de 2012, En:
http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/GA/GA_Transferpette_S_DE-EN-FR-ES-IT.pdf

Bioquímica
Práctica de Laboratorio No. 2. Medición de Concentración de Disoluciones por

Espectrofotometría
Objetivos
Calcular por espectrofotometría Uv-Vis, la concentración de algunas disoluciones
problema a partir de disoluciones estándar.
Marco Teórico
Todo espectrofotómetro funciona de acuerdo con la ley de Beer-Lambert, la cual es un
algoritmo para calcular la cantidad de radiación absorbida por una sustancia. Una vez la
radiación incide sobre una sustancia, ésta absorbe una parte (Absorbancia o absorbencia) y
el resto de la radiación pasa sin didficultad (Tramitancia o Trasmtancia), estos dos
fenómenos son definidos por tres fenómenos físicos:
1. La cantidad de material de absorción en la trayectoria de la radiación
(concentración)
2. La distancia que la radiación debe atravesar a través de la muestra (distancia de la
trayectoria óptica)
3. La probabilidad de que el fotón de esa amplitud particular de onda sea absorbido por
el material (absorbancia o absorbencia o coeficiente de extinción)
Esta relación se expresa como ya se dijo con algunos algoritmos, por ejemplo:
A = εdc
Donde: A =Absorbancia ε =Coeficiente de extinción molar d =Distancia en cm y
c =Concentración molar
A medida que un haz de luz atraviesa una sustancia, la cantidad de luz absorbida en
cualquier volumen es proporcional a la intensidad de luz incidente multiplicado por el
coeficiente de absorción. Consecuentemente, la intensidad de un haz incidente decae
exponencialmente a medida que pasa a través del absorbente. Esta relación cuando se
expresa como Ley de Lambert es:

-εcd -A
T = 10 es decir: T = 10 o también: A = 2 -logT
Donde: T =Transmitancia, ε =Coeficiente molar de extinción
c = Concentración molar del absorbente, d =Distancia en cm A=Absorbancia
La transmitancia puede ser expresada como la intensidad de la radiación incidente, Io,

que divide a la luz emergente de la muestra, I. Se refiere a la relación I/Io como
transmitancia o sencillamente T.
A = -log (I/Io) o también A = -log10 (T)
El espectrofotómetro Lambda 35 de Perkin Elmer está construido para emitir dos

clases de luz: ultravioleta y visible con un rango de 190 hasta 1100 nm. Por igual posee un
sistema de lectura para establecer la relación de la radiación incidente y la transmitida por
una muestra de acuerdo con la ley de Beer-Lambert. Se pueden analizar muestras líquidas,
sólidas, pastas y muestras de polvo, también las pruebas reglamentarias que requieran
resolución variable. A continuación se presentan 3 fotografías del equipo en la gráfica No. 1:
Gráfica No. 1. Espectrofotómetro Uv-Vis Lambda 35

Especificaciones Técnicas: (Perkin Elmer a, b y c)
Programable por conexión directa a PC.
Sistema óptico: Doble haz real.
Rango de longitud de onda: 190 - 1100 nm.
Premonocromador: sólo modelo 45
Ancho de banda espectral: variable: 0.5, 1, 2 y 4 nm (en modelos 35 y 45)
Ancho de banda espectral Fijo: 1 nm (en modelo 25)
Monocromador: Red de difracción holográfica cóncava, de alta performance
Selección de longitud de onda en incrementos de 0,1 nm.
Exactitud de longitud de onda: +/- 0,1 nm (Medida sobre pico de D2/a 656,1 nm).
Rango de absorbancia: de -3 a 3A.
Luz espúrea: 0,01%T a 220 nm, 340 nm y 370 nm. (en modelos 25 y 35)
0,005% T a 220 nm, 340 nm y 370 nm. (en modelos 25 y 35) Luz espúrea de
acuerdo a Farmacopea c/KCR:> 2A a 200 nm.
Estabilidad de linea de base: 0,00015 A/h (a 500 nm, 2 seg. de respuesta).
Exactitud fotométrica de acuerdo a farmacopea: +/- 0,010A medido con K2Cr07
Nivel de ruido: 0,00003A (OA, 500 nm, 2 seg. de respuesta) RMS.
Fuentes de luz: Lámpara de Deuterio y halógena de tungsteno de baja emisión de ozono,

prealineadas y de cambio totalmente automático.
Programable desde computadora externa, conexión directa a la PC a través de la interfase
RS-232C.
Software UV Winlab (que opera bajo Windows) que permite:
Manejo completo del equipo desde la PC. Realizar el barrido espectral en pantalla.

Curvas de calibración utilizando hasta 25 patrones de referencias. Cinética química.
Programación de longitudes de ondas ( hasta 8 longitudes en un ciclo) Control de accesorios

como automuestreador, etc.
Modificar el reporte a las necesidades del usuario.
Tratamiento post-corrida del espectro como: Transformar Abs en T%

Mostrar en el gráfico los picos y los valles
Calcula el área bajo la curva
Operaciones aritméticas como sustracción o adicción de espectros, multiplicar por un
factor, etc.
Cursor con desplazamiento sobre el gráfico. Superposición de espectros en pantalla
Posee una rutina de Validación del equipo que genera un reporte de validación.
Permite la instalación de gran variedad de accesorios: portaceldas automáticos y
termostatizados, automuestreadores, accesorios de reflectancia para la lectura de color,
sistemas de inyección de flujo, etc.
Materiales y Reactivos
2 Matraz aforado de 250 mL 3 matraces aforados de 10 mL
3 Mtraces aforados de 25 mL
1 pH-metro digital 1 gradilla para tubos de ensayo
5 tubos de ensayo de 15x150mmm 1 balanza analítica
1 vidrio de reloj 1 espátula metálica
1 pipeta volumétrica de 10 mL indicador de azul de bromotimol (solución
alcohólica al 0.4% p/v) NaOH en perlas grado analítico
HCl concentrado grado analítico Muestra problema ácida
Muestra problema básica Espectrofotómetro Uv-Vis
Procedimiento
Soluciones Básicas
1. Preparar 250 mL de NaOH 0.1M, Trasvasar 4 mL de esta disolución a un
tubo de ensayo de 16x150 mm previamente lavado y seco, medir el pH y luego agregar 2
gotas de azul de bromotimol, transferir el contenido del tubo de ensayo a una celda de vidrio
del espectrofotómetro. Espectrofotometrear en la zona visible del espectro electromagnético

para determinar la zona de absorbancia óptima. Configurar la medición para que el equipo
muestre e imprima la curva de calibración.
2. Repetir la lectura usando esta vez la longitud de onda donde ocurrió la
máxima absorbancia.
3. A partir de la disolución del punto anterior, preparar 10 mL de NaOH 0.01M.
4. Trasvasar 4.0 mL de esta disolución a un tubo de ensayo de 16x150 mm
previamente lavado y seco, medir el pH y luego agregar 2 gotas de azul de bromotimol,
transferir el contenido del tubo de ensayo a una celda de vidrio del espectrofotómetro y
espectrofotometrear a la longitud de onda óptima de absorbancia.
5. A partir de la disolución del punto 2 o del punto 1, preparar 10 mL de NaOH 0.001M.
Trasvasar 4 mL de esta disolución a un tubo de ensayo de 16x150 mm previamente lavado
y seco, medir el pH y luego agregar 2 gotas de azul de bromotimol, transferir el contenido
del tubo de ensayo a una celda de vidrio del espectrofotómetro y espectrofotometrear a la
longitud de onda óptima de absorbancia.
6. A partir de la disolución del punto 2 o del punto 1, preparar 10 mL de NaOH
0.0001M. Trasvasar 4 mL de esta disolución a un tubo de ensayo de 16x150mm
previamente lavado y seco, medir el pH y luego agregar 2 gotas de azul de bromotimol,
transferir el contenido del tubo de ensayo a una celda de vidrio del espectrofotómetro y
espectrofotometrear a la longitud de onda óptima de absorbancia.
7. Con los datos obtenidos, completar la siguiente tabla:
Disolución NaOH pH práctico pH teórico A
0.1 M
0.01 M
0.001 M
0.0001 M
7. Con los datos obtenidos durante el desarrollo de la práctica elaborar una curva de
calibración, extrapolando absorbancia contra concentración y compararla con la curva
elaborada por el espectrofotómetro.
8. Medir la absorbancia de la muestra básica problema entregada a cada grupo.
Utilizando los datos de la tabla anterior calcular la concentración de la disolución problema:
Disoluciones Ácidas Procedimiento

1. Preparar 250 mL de HCl 0.1M, Trasvasar 4 mL de esta disolución a un tubo de
ensayo de 16x150mm previamente lavado y seco, medir el pH y luego agregar 2 gotas de

azul de bromotimol, transferir el contenido del tubo de ensayo a una celda de vidrio del
espectrofotómetro. Espectrofotometrear en la zona visible del espectro electromagnético
para determinar la zona de absorbancia óptima. Configurar la medición para que el equipo
muestre e imprima la curva de calibración.
2. Repetir la lectura usando esta vez la longitud de onda apropiada.
3. A partir de la disolución del punto anterior, preparar 10 mL de HCl 0.01M. Trasvasar
4 mL de esta disolución a un tubo de ensayo de 16x150 mm previamente lavado y seco,
medir el pH y luego agregar 2 gotas de azul de bromotimol, transferir el contenido del tubo
de ensayo a una celda de vidrio del espectrofotómetro y espectrofotometrear a la longitud de
onda óptima de absorbancia.
4. A partir de la disolución del punto 2 o del punto 1, preparar 10 mL de HCl 0.001M.
5. A partir de la disolución del punto 2 o del punto 1, preparar 10 mL de HCl 0.0001M.
6. Con los datos obtenidos, completar la siguiente tabla:
Disolución HCl pH práctico pH teórico A
0.1 M
0.01 M
0.001 M
0.0001 M
7. Con los datos obtenidos durante el desarrollo de la práctica elaborar una curva de
calibración, extrapolando absorbancia contra concentración.
8. Medir la absorbancia de la muestra ácida entregada a cada grupo. Utilizando los
datos de la tabla anterior calcular la concentración de la disolución problema:
Cuestiones
1. Elaborar una tabla con por lo menos 10 indicadores ácido base, donde se
involucre los cambios de color de acuerdo con el pH.
2. Escribir las estructuras moleculares de por lo menos 5 indicadores

colorimétricos empleados con frecuencia en titulaciones por neutralización.
Referencias
Brown, T. L., LeMay, H. E., Bursten, B. E. y Burdge, J. R. 2004. Química. La Ciencia
Central. 9ª edición. México, Pearson Educación.
McMurray, J. E. y Fay, R. C. 2009. Química General- 5a edición. México, Pearson Prentice

Hall.
Petrucci, R. H., Harwood, W. S. y Herring, 2008. Química General. 8a edición, ultima

reimpresión.Madrid, Pearson, Prentice Hall
Rubinson, J. F. y Rubinson, K. A. Química Analítica Contemporánea. 2007. México, Pearson

Educación.

Bioquímica
Práctica de laboratorio No. 3. Titulación Ácido-Base con Bureta Digital
Objetivo
Determinar la concentración de una disolucíon problema mediante titulación con NaOH
0.5M
Materiales Y Reactivos
1 bureta digital de 50 mL 1 pH-metro digital
2 erlenmeyer de 250 mL 2 matraces aforados de 250 mL
1 balanza analítica 0.1 mg 1 agitador magnetico
1 espátula metálica fenolftaleina solución alcohólica
NaOH Disolución acida problema
Marco Teórico
Para empezar se hace necesario describir los componentes y funciones de una bureta
digital, este utensilio de nueva generación, diseñado para medir volúmenes precisos de
disoluciones en forma de goteo asistido por un sistema electrónico. Con respecto a la bureta
convencional de vidrio con llave del mismo material o de teflón, permite además de medir
volúmenes precisos, efectuar recargas del titulante de manera fácil y rápida con el
subsecuente ahorro de tiempo sin sacrificio de precisión. La precisión del equipo se clasifica
dentro los límites de error de clase A. Esta condición se obtiene gracias a las funciones
incorporadas, las cuales se describen a continuación.
Al mantener presionada la tecla CLEAR ubicada en la parte superor de la bureta, se
accede a 4 funciones diferentes, a saber:
1. Ajustes con Easy Calibration
Para acceder a esta técnica denominada Easy Calibration basta con encender la
bureta y oprimir durante 5 segundos la tecla CLEAR. Estos ajustes se efectúan cuando el

equipo se use durante periodos largos de tiempo, o cuando se cambien piezas. El usuario
visualiza el ajuste en el visor de forma permanente, tal como se muestra en la gráfica No.
2.1.
Gráfica No. 2.1. Ajuste de la calibración
2. Preselección de la fecha de calibración

Para recordar la fecha de la próxima calibración de forma segura, simplemente se
almacena en la posición "GLP". Se puede acceder a la fecha de calibración cada vez que se
conecta el aparato. Para ello, mantener presionada la tecla Conectar/Desconectar
(On/Off)durante un corto tiempo. Se visualizará, uno tras otro, la GLP, el año y el mes de la
fecha indicada, tal como se ilustra en la gráfica No. 2.2.
Gráfica No. 2.2. Calibración de la fecha de calibración.
2. Ahorro de energía con Auto-Power-Off

Durante interrupciones prolongadas de utilización, el aparato se desconecta
automáticamente. El valor de la indicación actual se almacena y, después de la reconexión
manual, vuelve a visualizarse. En la posición “APO” (Auto-Power-Off) puede ajustar el
tiempo hasta la desconexión automática desde 1 hasta 30 minutos, tal como se ilustra en la
gráfica No. 2.3.

Gráfica No. 2.3. Uso del sistema de ahorro de energía.
Selección de cifras decimales, Para la utilización como microbureta, en la posición

"dP"(decimal point) es posible conmutar la indicación del volumen valorado de 2 a 3 cifras
decimales. A partir de 20,00 mL se visualizan 2 cifras decimales automáticamente.
Con la bureta acoplable a frascos Titrette® se pueden realizar valoraciones gota a
gota con gran sensibilidad y máxima precisión. Esta función es importante para todos los
usuarios quienes requieren trabajar con buretas de vidrio dentro de los límites de error de la
clase A según DIN EN ISO 385 (p.ej. en la industria farmacéutica). Si fuera necesario, con 3
cifras decimales hasta 20 mL.
A continuación en la tabla 1.1, se muestran los límites de error de la bureta digital,
comparados con aquellos de la bureta de vidrio tipo A.
Tabla No. 1.1 Límites de error de la bureta digital
Limitaciones de empleo
Para obtener mediciones con gran precisión se deben tener en cuenta los Limitaciones de

empleo
Para obtener mediciones con gran precisión se deben tener en cuenta los siguientes
parámetros:
Temperatura= +15 °C a +40 °C (59 °F a 104 °F), tanto del aparato como del reactivo
Presión de vapor hasta 500 mbar
2
Viscosidad hasta 500 mm /s
Altitud: máxima de trabajo. 3000 m sobre el nivel del mar, Humedad relativa del aire:
entre el 20% y el 90%
Limitaciones de uso
No se pueden realizar valoraciones con Hidrocarburos fluorados y clorados o
sustancias productoras de precipitados o sedimentos pueden dificultar o imposibilitar el
desplazamiento del émbolo, generando condiciones de deterioro del equipo.
De otra parte debe advertirse que el aparato no es autoclavable
La bureta puede usarse con las siguientes sustancias en disolución con una
concentración máxima 1 M, Brand, 2012:
Sustancias químicas (1.0 M) de uso seguro con la bureta

Ácido Acético Arsenita Sódica Sulfato Cérico
Ácido Clorhídrico Cloruro de Bario Sulfato de Zinc
Ácido Clorhídrico en acetona Dicromato de Potasio Sulfato Ferroso Amoníaco
Ácido Nítrico Edta Sulfato Ferroso
Ácido Oxálico Hidróxido de Amónio Tetra-N-butílico Tiocianato de Amonio
Ácido Perclórico Hidróxido de Potasio Tiocianato Potásico
Ácido Perclórico en ácido Acético Hidróxido de Sodio Tiosulfato Sódico
Ácido Sulfúrico Nitrato de Plata Trietanolamina en Acetona
Bromato de Potásico Nitrito de Sodio Yodato Potásico
Bromato-Bromuro de Potasio Permanganato de Potasio Yodo
Bromuro-Bromato Potasio Hidróxido Alcohólico Yoduro-Yodato
Carbonato de Sódio Sodio Cloruro
http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/Leaflets/Titrette_ES.pdf
La manipulación correcta del equipo le permite al líquido dosificado, entrar en contacto

con los materiales químicamente resistentes de los cuales está construido: vidrio de
borosilicato, Al2O3, ETFE, PFA, FEP, PTFE, Platino-iridio; PP (caperuza a rosca).
La bureta digital presentada trabaja con límites de error aproximados de 0,002 en los
primeros 20 mL de valoración, a partir de este volumen el límite de error se ubica

aproximadamente en 0,01 mL, valores ubicados dentro de los límites permisibles de la
norma DIN ISO 8655-3,
Limitaciones de empleo
 El aparato se emplea para valoraciones teniendo en cuenta los siguientes límites
físicos: 
 +15 °C a +40 °C (59 °F a 104 °F) del aparato y del reactivo 
 Presión de vapor hasta 500 mbar 
 Viscosidad hasta 500 mm2/s n Altitud: máx. 3000 m sobre el nivel del mar 
 Humedad relativa del aire: de 20% a 90% 
Bureta acoplable a frascos Titrette®, con certificado de conformidad, certificado de

calidad, además incluye: tubo de aspiración telescopico (longitud 170 - 330 mm), tubo para
dosificación inversa, 2 microbaterías de 1,5 V (AAA/UM4/LR03), 3 adaptadores de PP para
frascos (GL 45/32, GL 45/S 40, GL 32/NS 29/32), 2 visores de inspección topacios de
protección contra la luz, instrucciones de manejo.
Condiciones de almacenamiento
Almacene el aparato y los accesorios en lugar seco.
Temperatura de almacenamiento: -20 °C a +50 °C
Humedad relativa del aire: 5% a 95%
En la gráfica No. 2. 4, se describe una bureta digital de 50 mL-

Procedimiento
1. Utilizando los datos de pureza consignados en la etiqueta del frasco de
embalaje, prepara 100 mL de NaOH 0.5 M, los cuales se utilizarán como disolución titulante,
mide el pH para comprobar la concentración.
2. Una vez insertada la cánula o tubo telescópico de aspiración en la válvula de
aspiración inferior de la bureta, llena el frasco dispensador inferior con agua destilada hasta
la mitad de su capacidad. Gira a la izquierda la valvula de valoración de color rojo para
impedir la salida del agua por la cánula de valoración, tal como se muestra en la gráfica No.
2.5:

Gráfica No. 2.5. Posición de la válvula de lavado.
3. Gira el tornillo de dosificación derecho en el sentido de las manecillas del reloj para
permitir el ascenso del agua al cilindro dosificador; una vez lleno este cilindro, gira el tornillo
dosificador en el sentido contrario para obligar la salida del agua hacia el frasco
dispensador. Repite esta operación unas cinco veces, asegurándote en la última vez de
evacuar toda el agua destilada del cilindro dosificador.
4. Desacopla el frasco dosificador y en su lugar acopla otro con la disolución titulante

la cual EN NINGUN CASO PUEDE EXCEDER la concentración 1M (Un mol de soluto
/litro de disolución). En lo posible usa concentraciones inferiores a 1M para evitar el
deterioro prematuro de las partes de la bureta digital.
Una vez trasvasado el titulante debes purgar la bureta, para ello abre la válvula de
valoración girándola hacia la derecha, tal como se ilustra en la gráfica No. 2.6.

Gráfica No. 2.6 Posición de la válvula para purgar la bureta.
Ahora se coloca un beaker de 100 mL debajo de la cánula de valoración, retira la

caperuza o tapón y procede a girar el tornillo dosificador para desalojar unos mililitros del
titulante, evacuando todas las burbujas de aire atrapadas en el ducto plástico y en el cilindro
de dosificación.
5. Con una pipeta volumetrica, trasvasa una alícuota de solución ácida problema a un
erlenmeyer de 100 mL lavado y seco; añade 2 o 3 gotas del indicador respectivo e introduce
un iman y el electrodo del pH-metro para medir el pH inicial tal como se muestra en la
gráfica No. 2.7.
Gráfica No. 2.7. Montaje para titulación con bureta digital

6. Pulsa la tecla CLEAR para dejar la pantalla en 0.00, inicia la titulación girando el
tornillo dosificador en el sentido inverso de las manecillas del reloj, ajusta la velocidad del
goteo y permite la transferencia del 1 mL, en este instante pulsar la tecla PAUSA y medir el
pH resultante. Repite esta operación mL a mL hasta alcanzar el punto de equilibrio, donde la
solución ácida vira a un color fucsia muy pálido, luego agrega mL a mL unos 4 mL
adicionales de titulante y por igual mide el pH.
Con los datos obtenidos completa la siguiente tabla:
+
NaOH 0.5 M añadidos pH [H ]
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Referencias
Brand, 2012. Catalogo, documento consultado el 12 de agosto de 20212, en :

http://www.brand.de/fileadmin/user/pdf/GA/GA_Titrette_DE-EN-FR-ES-IT.pdf

Bioquímica
Practica de Laboratorio No. 4. Soluciones Buffers y Curvas de Titulación
Objetivo
Preparar un buffer de acetatos y demostrar su capacidad de amortiguamiento.
Marco Teórico
Una disolución buffer es la combinación de un par conjugado (un ácido débil con una
base fuerte o una de sus sales o también una base débil y su sal), capaz de resistir cambios
+ -
de pH cuando se añaden iones H u OH Al valorar un ácido débil con una base fuerte se
observa que el cambio de pH es mínimo generando una zona plana en la curva de titulación
en cuyo centro se ubica el punto de equilibrio; esta es la zona de tamponamiento, fuera de
ella los cambios de pH son significativos.
En el punto de equilibrio la capacidad de tamponamiento es máxima, aquí la
concentración del aceptor de protones se iguala a la concentración del dador de protones,
haciendo el pH = pKa. La capacidad de tamponamiento disminuye a medida del aumento o
disminución del pH porque cambia la proporción en la concentración del dador y el aceptor
+
de protones, entendidos estos como átomos de hidrógeno desnudos o H . La zona de
tamponamiento de un buffer se ubica una unidad por arriba y por debajo del pKa.
Al mezclar una base fuerte con un ácido débil, midiendo el pH resultante, se puede
dibujar un gráfico del pH en función de la cantidad de base añadida y esto se conoce como
curva de titulación. En la siguiente grafica se muestran cuatro curvas, tres de ellas con la
misma forma y la del HCl un tanto diferente, tal com se muestra en la gráfica No. 3.1

Gráfica No. 3.1 Curvas de titulación soluciones de algunos ácidos 0.1M
Todas las curvas de titulación de bases o ácidos débiles son similares. La razón, se
comportan como soluciones amortiguadoras cuyo pH tiende a no cambiar en la zona de
tamponamiento de acuerdo con la ecuación de Henderson-Hasselbalch. Es importante
recalcar que cada especie química, en disolución acuosa tiene un pKa
Valor Amortiguador
Las soluciones buffer difieren en su capacidad para resistir los cambios en el pH, esto
condujo a Van Slike a introducir el concepto de VALOR AMORTIGUADOR para comparar
diferentes soluciones amortiguadoras. Cuando se agrega un álcali o un ácido a una solución
amortiguadora se obtiene una curva de titulación, cuya pendiente está dada por B(pH),
donde B es el incremento de la concentración de ácido o base fuerte agregados en mol/l y
(pH) es el incremento del pH, ésta pendiente es el VALOR AMORTIGUADOR que siempre
se positivo debido a que el B es negativo. El hecho de agregar ácido produce un cambio
negativo en el pH y el valor amortiguador máximo se alcanza en el pka.
1 Matraz aforado de 250 mL pH-metro
1 pipeta de 1 mL NaOH en perlas
1 micropipeta 100-1000L CH3COOH glacial

1 bureta digital de 50 mL HCl concentrado
1 Erlenmeyer de 100 mL Erlenmeyer de 50 mL
1 beaker de 100 mL Agitador magnético

1 Beaker de 50 mL Fenolftaleina
Procedimiento
1. Prepara 50 mL de KOH 0.1 M
2. Prepara 250 mL de CH3COOH 0,002 M
3. Utiliza como alícuota los 250 mL de la disolución del punto 2 a un erlenmeyer
de 500 mL, adiciona 2 o 3 gotas de fenolftaleína.
4. Lava la bureta digital unas 5 veces y comprobar su funcionamiento óptimo.
Desalojar toda el agua usada para el lavado. Ahora transfiere toda a disolución del punto 1
al frasco de la bureta, purga la bureta y enrásala a 0.00 mL.
5. Titula mL a mL y completa la tabla No. 1.
Tabla No. 1. Titulación de HAc 0.002 M con NaOH 0.1 M
mL KOH + -
pH [H ] pOH [OH ] [HAc] Ka pKa
añadidos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

Cuestiones
1. Completar la tabla No. 2.
Tabla No.2. Características de algunos indicadores
Color del Indicador

Indicador Acido Base pKa Límite útil de pH
Azul de timol
Azul de bromofenol
Rojo de metilo
Bromocresol púrpura
Rojo de fenol
Fenolftaleina
2. Determinar el procedimiento para preparar una solución de los anteriores
indicadores potencialmente útiles en la identificación de buffers.
3. Calcular el pH del buffer preparado en la práctica, si a 100 mL de él se le
agregan por separado 2 mL de HNO3 0.01M y 3 mL de NH4OH 0.1 M.
Referencias
Bioquímica y biología molecular. 1999. Facultad de medicina UNAM, departamento de
bioquímica.
Bohinski, Robert. C. 2004. Bioquímica. Quinta edición. Editorial Addison Wesley Longman.
Mexico.
Conn, Eric. Stupmpf. P. 1991. Bioquímica Fundamental. 3ª ed. México: Limusa.
Devlin, Thomas. 2004. Bioquímica aplicada con implicaciones clínicas. 4a ed. Barcelona:
Reverté.
Horton, Robert.H. Moran, Laurence. OCHS, Raymond. RAWN, J. David..Scrimgeour, K.

Gray. 2007. Bioquímica. 4ª ed. México: Prentice Hall Hispanoamericana. S.A.
Kerridge, David. Tipton, Keith. 1980. Razonamiento Bioquímico. Zaragoza: Acribia.
Lehninger, Albert. L. 2002. Bioquímica. Las bases moleculares de la estructura y función

celular. Segunda edición. Barcelona: Omega S.A.
Lozano, J.A., Galindo J.D. y otros. 2005. Bioquímica y Biología Molecular. Buenos Aires:
McGraw Hill
Miguez, O. Jose Bernardo. 1992Practicas de Bioquímica. Universidad Pedagógica y

Tecnológica de Tunja. Boyacá,.
Murray, Robert. K. Granner, Daryl. K. Mayes, Peter. A. Rodwell, Víctor. W. 2010. Bioquímica
de Harper., Vigésimo octava edición, México: El Manual Moderno.

Plummer, David. 1981. Bioquímica Práctica. Chelsea College, University of London. Trad:
Barrera, Luis Alejandro. Revisión: Corredor Carlos. Universidad del Valle. Bogotá:
Mac- Graw Hill Latinoamericana. S:A:
Rendina, George. 1974. Técnicas de Bioquímica Aplicada. Trad, Folch Fabre, Roberto.
México:Interamericana.
Roskoski, Robert. Jr. 1998. Bioquímica. México: McGraw Hill Interamericana.
Stryer, Lubert. Bioquímica. Tomos I y II. Sexta edición. Editorial Reverte. Barcelona, 2008.
Sitios de interés en Internet:
http://www.biochemicalabstracs.com
http://www.chemicalabstracs.com

Bioquímica
Guía de Laboratorio No. 5 Propiedades Químicas de los Aminoácidos
Objetivo
Demostrar algunas propiedades químicas de los aminoácidos, mediante reacciones
cualitativas propias del grupo amino.
Marco Teórico
La presencia de los grupos amino y carboxilo le comunican a los aminoácidos

comportamiento ácido-básico; aunque existe una gran variedad de ellos, solo 20 forman
aminoácidos, es decir, el grupo amino se encuentra enlazado al carbono alfa central de
cada uno de ellos. El carbono alfa es un átomo asimétrico o quiral (a excepción del caso de
la glicina), por tanto general isómeros dextrógiros y levógiros, estos últimos integran las
proteínas.
En disoluciones acuosas con pH neutro, las dos formas isoméricas de los aminoácidos
existen como iones dipolares denominados zwitteriones (iónes híbridos), donde el grupo
+ -
amino se encuentra protonado (-NH3) y el grupo carboxilo está desprotonado (-COO ).y su
grado de disociación cambia de acuerdo al pH circundante
Por lo general un aminoácido a través de su grupo amino se enlaza al grupo carboxilo
del segundo y así sucesivamente hasta formar largas cadenas polipeptídicas propias de
cada proteína; este enlace es de tipo éster y se denomina enlace peptidico, es decir, los
aminoácidos químicamente se comportan como sales orgánicas. Todos los aminoácidos se
comportan como aminas primarias a excepción de la Pro, único iminoácido de la serie
protéica.
Por igual el radical R o cadena lateral de los aminoácidos varían en tamaño, forma,
carga, capacidad de formar puentes de hidrógeno, carácter hidrofílico-hidrofóbico y
reactividad química, Berg, Tymoczko y Stryer, 2008.
Así los aminoácidos tienen radicales: Alifáticos: Gli, Ala, Val, Leu e Ile Hidroxílicos: Ser
y Thr.
Sulfurados: Cys, Cys-Cys y Met. Acídicos: Asp y Glu
Básico: Lis y Arg Aromáticos: Phe y Tyr Heterocíclicos: Trp y His Iminoácidos: Pro e H-
pro
Propiedades Químicas de los Aminoácidos
El grupo carboxilato de los aminoácidos los obliga a comportarse como ácidos
carboxílicos produciendo todos sus derivados característicos: ésteres, amidas, anhídridos y
haluros de ácido, reacciones no incorporadas en este apartado.
A continuación se presentan las reacciones más significativas correspondientes al
grupo amino, entre ellas las siguientes:
1. Reacción Xantoprotéica
Los aminoácidos con radicales aromáticos reaccionan en caliente con el ácido nítrico
concentrado para formar productos nitroderivados de color amarillo y sus sales se
caracterizan por el color anaranjado.
Reactivos: Colección de aminoácidos disponibles en el laboratorio incluyendo
soluciones de Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L), como mínimo, HNO3 concentrado, NaOH 10M,
Fenol (1 g/L). Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo y gradilla
Procedimiento
Trasvasa 0.5 mL de cada solución de aminoácido disponible en sendos tubos de
ensayo, agrega 0.5 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno, deja enfriar y observa el
cambio de color. Seguidamente agrega suficiente NaOH 10 M hasta alcanzar alcalinidad
elevada para cambiar el color amarillo inicial hasta anaranjado brillante, prueba de la
formación de la sal correspondiente.
Repite la prueba con solución de fenol.
2. Reacción de Millón
Los derivados fenólicos reaccionan con el mercurio en medio ácido para formar
compuestos de color rojo.
soluciones de Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L) . como mínimo. Reactivo de Millón (solución de
HgSO4 150 g/L en H2SO4 15% v/v, también se puede preparar disolviendo 50 g de
Hg(NO3)2. en 100 mL de HNO3 concentrado. En su defecto disolver 5 g de Hg en 10 mL de
HNO3 concentrado y luego agregar 15 mL de agua, agitar y dejar en reposo durante 12

horas ), Fenol (1 g/L), NaNO2 (10 g/L)
Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo y gradilla, beaker de
250 mL.
Procedimiento
ensayo, usa también 0.5 mL de fenol, agregar.5 gotas del reactivo de Millón, calienta en
baño de agua hirviendo durante 10 minutos, deja enfriar y agrega 5 gotas de solución de
NaNO2, la generación de un color rojo ladrillo es prueba de un resultado positivo.
3. Reacción del ácido glioxilico
El grupo indol reacciona con el ácido glioxílico (ácido oxoacético, u ácido
formilfórmico) C2H2O3 en medio ácido para dar un derivado de color púrpura. El ácido
glioxílico se obtiene exponiendo al ácido acético durante varias horas a la luz solar.
soluciones de Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L) como mínimo. H2SO4concentrado,
250 mL, malla de asbesto.
Procedimiento
Trasvasa 2 mL de cada solución de aminoácido disponible en sendos tubos de
ensayo, agrega 2 mL de ácido glioxilico o en su defecto de CH3COOH, ahora deja resbalar
por las paredes del tubo, 2 mL de H2SO 4 concentrado, la generación de un anillo de color
violeta es prueba de un resultado positivo.
4. Reacción de Pauly
Las aminas, fenoles e imidazoles reaccionan con el ácido sulfanílico diazotizado para
formar complejos coloreados. Para esta reacción las soluciones deben enfriarse en baño de
hielo porque los compuestos diazonio solo se forman en frío.
soluciones de Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L) como mínimo. Ácido sulfanílico (10 g/L en HCl 1 M),
NaNO2 50 g/L Na2CO3 (10 g/L.,
250 mL, Beaker de 100 mL, hielo.
Procedimiento

ensayo, agrega.1 mL de solución de ácido sulfanílico y 1 mL de solución de NaNO2, enfria
en baño de hielo durante 4 minutos; alcaliniza agregando 2 mL de Na2CO3. La generación

de colores es considerada prueba positiva.
5. Reacción de Ehrlich
El p-dimetilaminobenzaldehído reacciona con aminas aromáticas, índoles y
compuestos uréicos para formar complejos coloreados característicos.
soluciones de Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L) como mínimo. Reactivo de Ehrlich (p-
dimetilaminobenzaldehído 100 g/L en HCl concentrado), HCl concentrado, Solución de urea
(1 g/L)
Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo, gradilla.
Procedimiento
ensayo, usar también solución de urea. Agregar 2 mL del reactivo de Ehrlich, observa las
coloraciones formadas.
6. Reacción del nitroprusiato
El Na2Fe(CN)5NO en exceso de amoniaco reacciona con los grupos –SH para formar
derivados de color rojo.
soluciones de Cys, Met, Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L) como mínimo. Nitroprusiato de Na 20 g/L
(úsese recién preparado) Solución de NH4OH concentrado, KCN o NaCN 1g/L
Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo
Procedimiento
ensayo, agrega 0.5 mL de solución de nitroprusiato a cada uno y añade 0.5 mL de
amoníaco concentrado, observa las coloraciones formadas.
7. Reacción de Sakaguchi
Los grupos guanidínicos reaccionan con naftol en presencia de un agente oxidante
como el agua de bromo generando un derivado de color rojo.
soluciones de Arg, Cys, Met, Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L), como mínimo. usa por igual solución
de urea (1 g/L) Solución denaftol (10 g/L en etanol absoluto), Agua de bromo, NaOH 10M
Procedimiento
ensayo, agrega 0.5 mL de solución de NaOH 10M a cada uno y añade 3 gotas de solución
de naftol, observa las coloraciones formadas.
8. Reacción con el HNO2
Todos los aminoácidos a excepción de la Pro, reaccionan con el HNO2 para formar el
correspondiente -hidroxiácido y nitrógeno gaseoso, medible por manometría.
soluciones de Pro, Arg, Cys, Met, Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L), como mínimo. Solución de HNO 2
concentrado
Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo, gradilla.
Procedimiento
ensayo, agrega 0.5 mL de HNO2 concentrado a cada uno, observa el desprendimiento de
burbujas de nitrógeno gaseoso.
9. Reacción de Sörensen
El grupo amino reacciona con el formaldehido para formar N:N-dihidrometilderivados
soluciones de Pro, Arg, Cys, Met, Gli, Tir Phe y Trp,(1 g/L), como mínimo Solución de formol
50% p/v
Materiales: Pipetas de 10 mL, pipetas de 5 mL, tubos de ensayo, gradilla, beaker 250
mL
Trasvasa 1 mL de cada aminoácido disponible en sendos tubos de ensayo, agrega 0.5
mL de formaldehído a cada uno, calienta en baño de agua a 80º C durante 3 minutos.
Observa los cambios ocurridos.
Reacciones generales de las proteínas
1. Reacción de Biuret para enlaces peptídicos
Aunque la prueba del Biuret no es exclusiva para los enlaces peptídicos, también
funciona con compuestos con dos grupos carbonilo unidos a un átomo de nitrógeno o de
carbono. La reacción del CuSO4 en medio alcalino con compuestos con 2 o más enlaces
peptídico para dar un complejo de color violeta, cuya intensidad depende de la cantidad de
enlaces peptídico presentes.

Reactivos: Soluciones de algunas proteínas como albúmina, caseína, gelatina,
peptona,(1 g/L), como mínimo. Solución de CuSO4.5H2O (10 g/L), Agua de bromo, NaOH
10M, glutatión (5 g/L).
Procedimiento
Trasvasa 1 mL de cada solución de solución de proteínas disponibles en sendos tubos
de ensayo, añade 3 gotas de solución de CuSO4, y luego 1 mL de NaOH 10M, observa las
coloraciones formadas.
2. Precipitación por metales pesados
Las proteínas se encuentran cargadas a pH neutro y ligeramente por encima de él; al
agregar cationes de metales, la carga se neutraliza y se produce una precipitación. Si el pH
es muy alcalino se precipitan los hidróxidos de os metales involucrados.
peptona,(1 g/L), como mínimo. Solución de metales pesados como: CuSO4.5H2O, Pb(NO3)2
y Hg(NO3)2 (0.1 M),

Procedimiento
Trasvasa 2 mL de cada solución de proteínas disponibles en sendos tubos de ensayo,
añade 3 gotas de solución de CuSO4,Pb(NO3) 2 y Hg(NO3) 2 y luego 1 mL de NaOH 10M,
observa las reacciones formadas.
3. Precipitación de proteínas por reactivos acídicos.
A pH ácido, algunos compuestos acídicos poseen carga negativa enorme, capaz de
neutralizar a las proteínas cargadas positivamente para formar una sal insoluble y fácilmente
detectable.
peptona,(1 g/L), como mínimo. Solución de ácido sulfosalicíco ( 20% p/V), ácido pícrico
saturado ( 10 % p/v), ácido tánico y ácido tricloroacético (20% p/v), NaOH 1 M
Procedimiento
añade 5 gotas de solución los reactivos acídicos disponibles, agrega algunas gotas de
NaOH 1 M, observar las reaccciones formadas.
4. Reacción de Folin-Lowry
Al igual que en la reacción del Biuret, donde las proteínas reaccionan con el CuSO4
alcalino, también pueden reaccionar con fosfomolibdato de sodio para dar complejos
coloreados cuya intensidad depende del número de aminoácidos aromáticos.
peptona,(1 g/L), como mínimo. Solución alcalina de Na2CO3 (20 g/L en NaOH 0.1M,
solución de cobre-tartrato sódico potásico (5 g/L CuSO4. 5H2O en tartrato sodio potásico 10
g/L, usa las dos soluciones recién preparadas), Solución alcalina preparada usando 50 mL
de la solución alcalina de carbonato de sodio y 1 mL de la solución de cobre tartrato sódico
potásico. reactivo de Folin Ciocalteau (Tungstato de sodio y molibdato de sodio en H3PO4 y
HCl concentrados de ácido sulfosalicíco ( 20% p/V), ácido pícrico saturado ( 10 % p/v), ácido
tánico y ácido tricloroacético (20% p/v), NaOH 1 M
Procedimiento
añade 5 mL de la solución alcalina, agitar vigorosamente y deja reposar a temperatura
ambiente durante 10 minutos, agrega 0.5 mL de reactivo de Folin-Cicateau en forma rápida
y observa las reacciones formadas.
Cuestiones
1. Plantea las ecuaciones de las reacciones ocurridas durante la realización de
la práctica de laboratorio.
2. Plantea el fundamento teórico, los materiales y reactivos necesarios para
realizar la prueba de Sanger.
3. Determina el valor funcional de algunos péptidos como hormonas, antibióticos
y enzimas.
4. Describe brevemente algunos mecanismos para determinar la estructura de
los péptidos.
Referencias
Baynes, J. W.; Dominczak, M. H.(2011). Bioquímica médica. 2ª edición. Revisión Sabría, M.
J. Elsevier España, S.A.
Berg, J. M., Tymoczko, J. L. y Stryer, L. (2008). Bioquímica. 6ª Ed. Barcelona: Reverté.
Concepts in Biochemistry 2ª edición (2002) R.F. Boyer. Ed. Wiley-Liss.

Devlin, T. M. (2000) .Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas 3ª edición.
Reverté.
Feduchi, Blasco, Romero, y Yáñez, (2010). Bioquímica, Conceptos esenciales. Editorial

Médica Panamericana
Flores, L. J. (2008). Manual de prácticas de bioquímica. 2ª edición. México: McGraw-Hill.
Gómez, C. r y Sanz, J. (coordinadores). (2003) Estructura de proteínas. Ariel Ciencia.
ª
Horton, H.R. Moran, L. A. Ochs, R. S. Rawn, D. K. Scrimgeour, G. (2002). Bioquímica. 3
edición. Prentice Hall.
Lehninger, A. (1995). Bioquímica. Las bases moleculares de la estructura y función celular.

Barcelona: Omega.
Luque, J. y Herráez, A. (2001).Texto ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería

Genética. Harcourt.
Macarulla, J. M. y Goñi, F. M. (2002). Biomoléculas. Lecciones de Bioquímica Estructural.

3ª Ed. Barcelona: Reverté.
Mathews, C.K. van Holde, K.E., Ahern.K.G. (2002) Bioquímica. 3ª Edición. Pearson,
Educación S.A.
Nelson, D. L. y Cox, M. M. (2000) Principios de Bioquímica 3ª edición Editorial Omega-
Plummer, D. T. (1981). Bioquímica Práctica. Chelsea College of London. Trad: Luis

Alejandro Barrera, revision: Carlos Corredor. Bogotá: Mc Graw Hill Latinoamericana.
Rendina, G. (1974): Técnicas de bioquímica aplicada, México: Interamericana, , 1974.
Stryer, L Berg, J. M.y. Tymoczko, J.L (2003) Bioquímica. 5ª Edición.Ed. Reverté-
T. Mckee, T. y Mckee. J.R. (2003). Bioquímica. La base molecular de la vida. 3ª edición.

McGraw-Hill.
Voet, D. VoetJ.G. (1995)Biochemistry. 2ª edition. Wiley & Sons.
Voet, D. Pratt, C. VoetJ.G. (2002). Fundamentals Biochemistry Update. Wiley & Sons.
Voet, J. G. y Voet, D. (2006). Bioquímica. 3ª edición. Editorial Médica Panamericana S.A

Bioquímica
Práctica de Laboratorio No. 6. Cuantificación de Proteínas y Aminoácidos
Objetivo.
Cuantificar muestras problemas de aminoácido y proteínas por valoración
espectrofotométrica.
Marco Teórico
Una de las tareas más frecuentes en la investigación bioquímica es además de la
identificación, la cuantificación de biomoléculas; para el caso específico de las proteínas y
los aminoácidos, la técnica más apropiada es la colorimetría y en especial una variante de
ella, la espectrofotometría.
La técnica se basa en la propiedad que tienen las moléculas de absorber energía
cuando son sometidas al influjo de campos electromagnéticos, todas las moléculas,
incluidas las biomoléculas al recibir una determinada cantidad de energía, absorben parte
de ella (absorbancia o extinción) y dejan pasar el resto de la misma (tramitancia).
Generalmente, las disoluciones de las proteínas y los aminoácidos carecen de color,
razón por la cual se requiere hacerlas reaccionar con sustancias capaces de generar algún
tipo de coloración, a través de la cual se pueda identificarlas y cuantificarlas sin tener que
extraerlas de mezclas complejas donde usualmente se encuentran como por ejemplo en los
tejidos. De todas formas, para estas reacciones coloreadas, la intensidad del color depende
de la concentración de las biomoléculas en estudio y esta concentración a su vez define
tanto la absorbancia como la tramitancia ocurridas.
El fenómeno de la absorbancia y la tramitancia se fundamenta en la ley de Beer-
Lambert, al cual se puede resumir de la siguiente manera: al hacer pasar un haz de luz
monocromática con una determinada intensidad Io a través de una sustancia, ésta absorbe
parte de la energía incidente y deja pasar el excedente:
A = 2- log T
donde a= absorbancia y T = tramitancia. La relación entre la absorbancia y la

tramitancia depende de la longitud (l) del medio o celda donde se encuentre confinada la
sustancia a medir y de su concentración:
Disoluciones patrón al 2% de proteínas y aminoácidos disponibles en el laboratorio (
caseína, albúmina, peptona, gelatina, Ala, Arg, Cys, Gli, Tir Phe y Trp). Reactivo de Biuret,
espectrofotómetro Uv-Vis, muestra problema de aminoácido y de proteína.
Procedimiento
1. Cada grupo recibe una muestra de disolución tanto de aminoácido como de una
proteína, posteriormente a cada una le aplicará la prueba de Biuret u otra señalada por el
profesor.
2. Inicialmente deben establecer la longitud de onda de máxima absorbancia para
cada patrón, con esa longitud de onda se deben obtener sendos espectros para diluciones
1:1, 1:5, 1:10 y 1:15 estableciendo la curva de calibración respectiva. Para evitar márgenes
de error elevados, la adición del reactivo seleccionado para esta práctica debe hacerse
manejando el mismo tiempo para cada uno de los ensayos.
3. Una vez establecida la curva de calibración correspondiente a las disoluciones
preparadas a partir del patrón inicial, mide la absorbancia o la tramitancia de las muestras
entregadas al grupo y a través de la pendiente de la curva, establece la concentración de
cada muestra.
Cuestiones Aplicativas
1. Establecer una relación aritmética entre la absorbancia y la concentración de cada
dilución de muestra (aminoácido y proteína). Presentar la curva de calibración.
2. Utilizando la curva de calibración, calcular la concentración de las dos muestras
problema entregadas a cada grupo.
3. Determinar posibles causas de errores ocurridos durante el desarrollo de la
práctica.
4. Explicar las leyes de Beer, de Lambert y unificar sus enunciados para explicar los
hechos ocurridos durante el desarrollo de la práctica.
Referencias


Alejandro Barrera, revision: Carlos Corredor. Bogotá: Mc Graw Hill Latinoamericana
Rendina, G. (1974). Técnicas de Bioquímica Aplicada. México : Interamericana.

Bioquímica
Laboratorio No. 7. Separación de Aminoácidos por Cromatografía de Papel en Dos Dimensiones

y Cromatografía en Capa Fina
Objetivo.
Separar una mezcla de algunos aminoácidos utilizando la técnica de cromatografía
bidireccional de capa fina.
Marco Teórico
La separación de los compuestos en capa fina es semejante a muchos aspectos de la
cromatografía en papel, pero tiene la ventaja adicional que se pueden usar medios
diferentes de soporte y aún mezclas de los mismos. Se pueden también incluir reactivos
fluorescentes en el medio para ayudar a la identificación de las manchas. La separación
puede hacerse por adsorción, intercambio iónico, cromatografía de partición o filtración en
gel, dependiendo de la naturaleza del medio empleado. El método es rápido y se pueden
completar varias separaciones en una hora. Las manchas obtenidas son muy compactas y
es posible por lo tanto detectar compuestos en concentraciones más bajas que sobre el
papel.
Para los experimentos con aminoácidos y proteínas se prepara un mapa en dos
dimensiones de la soluciones patrones de aminoácidos. La ninhidrina reacciona con todos
los α-aminoácidos dando un color púrpura. Algunos otros compuestos también reaccionan y
entre ellos se encuentran las aminas alifáticas primarias y secundarias y algunos
compuestos no aromáticos heterocíclicos de nitrógeno. Los aminoácidos, prolina e
hidroxiprolina reaccionan dando una coloración amarilla.
La distribución de una mezcla de aminoácidos en un corrido de cromatografía de capa
fina bidireccional se muestra en la gráfica No. 1

Butanol/ácido acético/agua
Fenol/agua/Amoniáco
Gráfica No. 1. Separación en dos dimensiones de una mezcla de aminoácidos en

papel Whatman. Plummer, 1981.
1. Equipos para cromatografía en dos dimensiones.
2. Papel de cromatografía Whatman N° 1 (20 cm X 20 cm) Placas de cromatografía de
silica gel y de Al2O3.
3. Solvente 1. (Butanol ácido acético glacial, agua)
4. Solvente 2. (Fenol-agua- amoníaco).
5. Reactivo de ninhidrina.
6. Hornos a 105 °c
7. Patrones de aminoácidos. Alanina, ácido aspártico, cisteína, cistina, ácido
glutámico, histidina, hidroxiprolina, prolina, leucina, isoleucina, lisina, metionina, ornitina,
fenilalanina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina.
Procedimiento
Examine el mapa de aminoácidos de la gráfica No. 1, escoja cuatro cuyo valor Rf (rata
de flujo o distancia de recorrido en el cromatograma) difiera bastante, y en un extremo de la
hoja de papel de cromatografía Whatman N° 1. Aplique 20 μl de cada uno. Seque las

manchas en una corriente de aire y coloque la hoja en el soporte metálico. Repita este
procedimiento en hojas diferentes hasta que se hayan aplicado todos los aminoácidos y
finalmente aplique una mezcla de todos ellos en otro papel. Cada aminoácido debe incluirse
en dos mezclas diferentes para confirmar su identidad.
Sumerja en el solvente el extremo del papel adyacente a la mancha de la mezcla y
deje correr la cromatografía durante la mayor parte del día. Por la tarde saque el soporte,
colóquelo en el extractor de gases y seque el papel en una corriente de aire frío. Gire el
soporte 90° en forma tal que el otro borde cercano a la muestra se sumerja en el segundo
solvente y deje correr el cromatograma de un día para otro. Seque los papeles como se
indicó y sepárelos del soporte. Rápidamente sumerja cada papel en reactivo de ninhidrina y
cuélguelos en el extractor de gases para dejar evaporar la acetona. Desarrolle los colores
calentando a 105°C durante 2-3 minutos.
2. Repetir el procedimiento del punto anterior, empleando en este caso, la mezcla de
aminoácidos preparada en el punto 1, y como fase estacionaria, placas cromatográficas de
sílica gel e Al2O3 por separado
Cuestiones
1. Construya un mapa de aminoácidos y compárelo con el de la figura 1.
2. .Explicar las razones moleculares por las cuales, cada aminoácido se ubica de
manera específica en los cromatogramas obtenidos.
Referencias
Baynes, J. W.; Dominczak, M. H.(2011). Bioquímica médica. 2ª edición. Revisión Sabría, M.
J. Elsevier España, S.A.
Boyer, R.F. (2002) Concepts in Biochemistry. 2ª edición. Ed. Wiley-Liss.
Devlin, T. M. (2000) . Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas 3ª edición.

Reverté.
Feduchi, Blasco, Romero, y Yáñez, (2010). Bioquímica, Conceptos esenciales. Editorial

Médica Panamericana
Flores, L. J. (2008). Manual de prácticas de bioquímica. 2ª edición. México: McGraw-Hill.
Gómez, C. y Sanz, J. (coordinadores). (2003) Estructura de proteínas. Ariel Ciencia.

Horton, H.R. Moran, L. A. Ochs, R. S. Rawn, D. K. Scrimgeour, G. (2002). Bioquímica. 3ª
edición. Prentice Hall.

Barcelona: Omega.
Luque, J. y Herráez, A. (2001). Texto ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería Genética.

Harcourt.
Macarulla, J. M. y Goñi, F. M. (2002). Biomoléculas. Lecciones de Bioquímica Estructural. 3ª

Ed. Barcelona: Reverté.
Mathews, C.K. van Holde, K.E., Ahern. K.G. (2002) Bioquímica. 3ª Edición. Pearson,
Educación S.A.
Nelson, D. L. y Cox, M. M. (2000) Principios de Bioquímica 3ª edición Editorial Omega-

Alejandro Barrera, revision: Carlos Corredor. Bogotá: Mc Graw Hill Latinoamericana.
Rendina, G. (1974): Técnicas de bioquímica aplicada, México: Interamericana, , 1974.
Stryer, L Berg, J. M.y. Tymoczko, J.L (2003) Bioquímica. 5ª Edición. Ed. Reverté-
Mckee, T. y Mckee. J.R. (2003). Bioquímica. La base molecular de la vida. 3ª edición.

McGraw-Hill.
Voet, D. Pratt, C. Voet J.G. (2002). Fundamentals Biochemistry Update. Wiley & Sons.
Voet, J. G. y Voet, D. (2006). Bioquímica. 3ª edición. Editorial Médica Panamericana S.A

Bioquímica
Práctica de Laboratorio No. 8. Reconocimiento de Carbohidratos

Objetivo
Reconocer algunos carbohidratos de uso cotidiano por la técnica colorimétrica
Marco Teórico
Estas biomoléculas provienen del proceso fotosintético vegetal y su importancia
bioquímica radica en su poder energético del cual se deriva en gran parte el mantenimiento
de la vida de todos los organismos terrestres. A nivel humano, luego de ser ingeridos en la
dieta alimentaria, son transformados den glucosa, la cual es inicialmente se almacena como
glicógeno y luego es oxidada hasta CO2 y H2O.
Los carbohidratos a nivel molecular son aldehídos (aldosas) y cetonas (cetosas) de
polihidroxialcohóles; las unidades básicas son los monosacáridos, descritos a continuación:

Estas estructuras moleculares existen en la naturaleza gracias a los carbonos quirales
o asimétricos, los cuales generan a su vez sus imágenes especulares o esteroisómeros. Por
ejemplo el gliceraldehído tiene un carbono asimétrico y dos posibilidades de distribución de
los cuatro grupos unidos a él. así, cada una de las estructuras moleculares de la gráfica
anterior tiene su propio esteroisómero denominado derivado L
Propiedades Químicas de los Carbohidratos
La condición de aldosas y cetosas les permite exhibir algunas propiedades exclusivas

para este tipo de sustancias, entre ellas las siguientes:
Prueba de Molish
La hidrólisis de los enlaces glicosídicos se puede lograr en medio ácido para producir
monosacáridos susceptibles de deshidratación para producir furfural y sus derivados, los
cuales a su vez reaccionan con -naftol produciendo un complejo de color morado
característico.
Gradilla con 10 tubos de ensayo, 1 beaker de 500 mL, 1 malla de asbesto, 1 pipeta 10
mL. Soluciones 5 g/L de: Maltosa, Fructosa, glucosa(dextrosa), celulosa, arabinosa, ribosa,
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, -naftol (50 G/ L de etanol),
H2SO4 concentrado.
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se depositan 2 mL de cada carbohidrato, a cada uno se
añaden 2 o 3 gotas de solución de a-naftol, luego y de manera cuidadosa se deja resbalar
por las paredes del tubo, 1 mL de H2SO4 concentrado hasta conseguir la formación de dos
capas. La prueba es positiva con la generación de un anillo de color morado en la interfase.
Prueba de la Antrona
Al igual de la prueba de Molish, la prueba de antrona sirve para reconocer carbohidratos
en general. El fundamento teórico de esta prueba es el mismo de la prueba anterior.
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, antrona recientemente
preparada (2g/L en H2SO4 concentrado).
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se depositan 1 mL de solución de antrona, luego se
agregan 5 gotas de solución de cada carbohidrato, mezclar y observar cambios de
coloración; la prueba es positiva si se genera un color azul verdosa.
Reacciones de Carbohidratos Reductores
Los carbohidratos pueden reducir los reactivos de Fehling 0 Benedict (soluciones
alcalinas de iones cúpricos, en forma de complejos, con iones tartratos 0 citratos,
respectivamente) 0 de Tollen (solucion amoniacal de una sal de plata) se conocen como
azucares reductores. Todos los monosacaridos (aldosas y cetosas), y la mayoría de los

disacaridos, son reductores exceptuando la sacarosa.
Para explicar las dos primeras pruebas, el Cu(OH)2 al ser calentado en solución
alcalina forma el CuO de color negro, en presencia de sustancias reductores, el Cu(OH)2
produce Cu2O de color rojo ladrillo. En las pruebas siguientes se usa CuSO4 en solución
-
alcalina y un compuesto orgánico con un grupo OH para reemplazar al hidróxido cúprico.
Los carbohidratos con un grupo carbonilo libre o potencialmente libre o un grupo
cetónico son sustancias reductoras.
Prueba de Fehling
El reactivo requiere dos soluciones (Fehling A y Fehling B), las cuales se preparan por
separado
Fehling A: Disolver 30 g de CuSO4.5H2O en 1 Litro de agua
Fehling B: Disolver 150 g de tartrato de Na y K (Sal de Rochelle) en 100 mL de agua
caliente, adicionar 900 mL g de NaOH al 5%
mL.
Soluciones 5 g/L de: Maltosa, Fructosa, glucosa(dextrosa), celulosa, arabinosa, ribosa,
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Fehling (mezclar
volúmenes iguales de Soluciones de Fehling A y Fehling B)
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se depositan 1 mL de Reactivo de Fehling, luego se
agregan 1 mL de solución de cada carbohidrato, mezclar y observar cambios de coloración;
la prueba es positiva si se genera un color rofo ladrillo
Prueba de Benedict
Esta prueba es similar a la anterior con la diferencia del uso de una sola solución.
El reactivo de Benedict se prepara de la siguiente manera: Disolver 170 g de citrato de
sodio y 100 g de Na2CO3 en 800 mL de agua caliente; filtrar y completar el filtrado hasta 850
mL. Por aparte disolver 17 g de CuSO4.5H2O en 150 mL de agua, añadir lentamente esta
segunda solución a la inicialmente preparada.

almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Benedict.
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se depositan 2 mL de cada una de laa disoluciones de
carbohidratos disponible durante la práctica, luego se adiciona 1 mL del reactivo de
Benedict, a cada tubo y se hierve durante 3 minutos. Observar los cambios ocurridos y los
colores generados.
Prueba de Barfoed
Este reactivo reduce solamente a los monosacáridos, sin embargo, cuando una
disolución de disacáridos se deja hervir por tiempo considerable, estos se hidrolizan dando
reacciones positivas falsas. esta prueba es similar a las de Benedict y Fehling, la diferencia
es la cantidad de óxido cuproso producido, razón por la cual es necesario dejar reposar por
más tiempo.
mL. Soluciones 5 g/L de: Maltosa, Fructosa, glucosa(dextrosa), celulosa, arabinosa,
ribosa, almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Barfoed
(Disolver 14 g de acetato de cobre en 200 mL de agua y agregar 1.5 mL de ácido acético
glacial)
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se depositan 2 mL de cada una de las disoluciones de
carbohidratos disponible durante la práctica, luego se adiciona 1 mL del reactivo de Barfoed,
a cada tubo y se hierve durante 1 minuto. Observar los cambios ocurridos y los colores
generados.
Pruebas para carbohidratos específicos
Prueba de Bial para Pentosas
Las disoluciones de pentosas al ser calentadas en HCl concentrado forman furfurales,
los cuales se condensan con orcinol en presencia de iones férricos generando coloraciones
verde azulosas características, sin embargo con las hexosas la reacción genera complejos
coloreados.
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Bial (Disolver 1.5

g de orcinol en 500 mL de HCl concentrado, luego añadir 0.5 mL de FeCl3 100g/L y agregar
1.5 mL de ácido acético glacial), Alcohol amílico
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se deposita1 mL de cada una de las disoluciones de
carbohidratos disponible durante la práctica, luego se adiciona 2 mL del reactivo de Bial, a
cada tubo calentar hasta que se inicie la ebullición. Observar los cambios ocurridos y los
colores generados.Una vez frios los tubos, agregar 0.5 mL de alcohól amílico.
Prueba de Seliwanoff para Cetosas
Las cetosas también se deshidratan como las aldosas para formar derivados del
furfural, los cuales a su vez reaccionan con resorcinol para generar complejos coloreados
rojos El tiempo de deshidratación de las cetosas es menor que el de las aldosas, por tanto el
calentamiento debe ser mucho más corto al empleado en la prueba anterior.
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Seliwanoff (0.5 g
de resorcinol en HCl 3 M)
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se deposita1 mL de reactivo de Seliwanoff y añada 5
gotas de cada una de las disoluciones de carbohidratos disponible durante la práctica,
calentar en baño de agua hirviendo hasta la generación del color rojo característico de la
prueba.
Prueba de Lugol para Polisacáridos
Los polisacáridos forman complejos coloreados de absorción con el yodo, así por
ejemplo, el almidón genera un color azul muy oscuro, mientras el glucógeno o el almidón
parcialmente hidrolizado generan coloraciones del tono pardo rojizo.
almidón, galactosa, manosa, gliceraldehido, almidón, celulosa, Reactivo de Lugol (5 mM en
KI 30 g/L)
Procedimiento
En sendos tubos de ensayo se deposita1 mL de cada una de las disoluciones de

carbohidratos disponible durante la práctica, adicionarles 1 mL de reactivo de Lugol calentar
en baño de agua hirviendo hasta la generación del color característico de la prueba.
Cuestiones
1. Plantear una ecuación para cada una de las pruebas realizadas durante la
práctica. Indicar en cada caso la utilidad práctica.
2. Establecer la importancia de los carbohidratos en la biósfera y a nivel humano
en particular.
3. Describir brevemente 3 enfermedades o desórdenes metabólicos derivados
del metabolismo de carbohidratos.
4. Explicar la diferencia estructural de los carbohidratos D y L y los homopolisacáridos
y los heteropolisacáridos.
Referencias


Bioquímica
Práctica de laboratorio No. 9. Pruebas Polarimétricas con Carbohidratos
Objetivo
Determinar la rotación específica y la actividad óptica de algunos carbohidratos
Marco Teórico
Los carbohidratos poseen en su estructura molecular uno o más átomos de carbono
asimétrico, esta característica genera en ellos actividad óptica, es decir, pueden hacer girar
el plano de luz polarizada, la cual se puede cuantificar en un polarímetro, aparato lustrado
en la gráfica No. 7.1.
Gráfica No.7.1. Polarímetro. Fuente: http://triplenlace.com/2012/11/25/polarimetria-iii-

el-polarimetro/
Este equipo funciona básicamente de la siguiente manera: la fuente de sodio emite

radiación electromagnética aproximada de 589.44 nm en todas las direcciones y en todos
los planos de vibración, el primer prisma de Nicol usa un haz de luz con una sola dirección

pero con todos los planos (luz polarizada). Luego atraviesa la muestra en disolución
contenida en una celda, la cual hace girar el plano de luz polarizada bien sea en el sentido
de las manecillas del reloj o en el sentido contrario. En el primer caso la sustancia es
dextrógira y en el segundo es levógira.
Para medir el grado de desviación de la luz polarizada, un segundo prisma girable
permite determinar la rotación observada, valor con el cual se determina la rotación
específica utilizando el siguiente algoritmo: 
[]
Donde:  = rotación observada, [ ] = rotación específica l= longitud del tubo en cm y c = concentración en g/ L.
De manera esquemática, en la gráfica No. 7.2. se muestra el funcionamiento del

polarímetro:
Gráfica No. 7.2. Mecanismo de funcionamiento de un polarímetro. Fuente:

http://triplenlace.com/2012/11/25/polarimetria-iii-el-polarimetro/
Soluciones 10% m/v de D-glucosa, sacarosa, D-fructosa, D-ribosa, D-manosa D-
galactosa y otros carbohidratos disponibles en el laboratorio, carbonato de sodio, agua
destilado, polarímetro con sus tubos de 10 y 20 cm . 1 balón aforado de 25 mL, 1 vidrio de
reloj, 2 espátulas metálicas,
Procedimiento
1. Encender el polarímetro 10 minutos antes de iniciar la cuantificación. Liberar el tubo

de sus dos tapas, lavarlo. Tapar como se ilustra en la gráfica No.7.4 y llenarlo con agua
destilada de tal manera que no se observen burbujas en su interior, cerrar el tubo con su
tapa rosca, como se muestra en la gráfica No. 7.3. Ajustar el equipo a cero, para ello se
debe girar el tornillo micrométrico con el cual se hace girar el prisma de Nicol analizador,
bien sea a la derecha o a la izquierda, según el caso. Desocupar el tubo y secarlo.
Tapa rosca
Ventana de vidrio
Portaventana
Empaque de caucho
Gráfica No.7.3. Tapa del tubo de polarímetro y sus componentes.
Gráfica No.7.4. Tubos de polarímetro de 10 y 20 cm sellados

La lectura correspondiente a la desviación del plano de luz polarizada se observa en el
lente telescópico del polarímetro; antes de llegar al cero de calibración y después de haberlo
obtenido se observan dos momentos bien definidos, los cuales se ilustran en las gráficas
No. 7.5.y No.
Gráfica No.7.5. Antes y después de puesta a cero

Una vez alcanzado el cero, el lente telescópico se muestra como en la gráfica No.7.6.
De otra parte, cuando se alcanza la medida de la desviación del plano de la luz polarizada
por parte de la sustancia objeto de estudio, el lente telescópico se muestra como en la
gráfica No. 7.7.
Gráfica No. 7.6. Puesta a cero Gráfica No.7.7. Medición de rotación específica
Para reportar la actividad o rotación específica de una sustancia, basta con mirar a
través de cualquiera de los dos lentes del visor, momento en el cual se hará visible el giro
del prisma de Nicol analizador de acuerdo con el giro del plano de luz polarizada por parte
de la muestra. La medición se precisa ubicando en primera instancia la cantidad de grados
en números enteros, la cual se encuentra determinada por la escala móvil. Para el ejemplo
presentado en la gráfica No. , el giro corresponde a 60 grados. Los decimales de grado se
obtienen buscando en la escala fija la división de esta escala, que coincida formando una
sola línea con alguna de las divisiones de la escala móvil. Para el caso ilustrado la huella
intermedia entre el 6 y el 7 de la escala fija se alinea con la huella de 60°, por esta razón la
rotación observada se corresponde con 60.65°, ver gráfica No. 7.8.
Grados en números enteros
Grados en números decimales
Gráfica No. 7.8. Medición de la rotación observada: 60.65°
2. Preparar 50 mL de solución de D-Glucosa al 10% m/v, recién preparada,

transferir 16 mL de esta solución al tubo para polarímetro de 20 cm, de tal manera que se

forme un menisco por encima del borde superior del tubo, deslizar la ventana de vidrio para
evitar la presencia de burbujas y sellar con la tapa rosca. Realizar una primera lectura de la
rotación específica. Realizar lecturas a intervalos de 2 minutos durante los primeros 10
minutos y después a intervalos más largos hasta cuando ya no hayan más cambios en la
rotación y completar la tabla No. 7.1. Realizar una curva de la rotación en función del tiempo
transcurrido durante la experiencia.
3. Mutarrotación en álcali. Repetir el procedimiento anterior haciendo la
siguiente variación: mezclar 15 mL de solución de glucosa recién preparada y agregar 1,5
mL de Na2CO3 0.1M y seguidamente leer la rotación observada de igual forma al punto
anterior.
4. Repetir el procedimiento del punto 2, esta vez con otro carbohidrato y así
sucesivamente hasta medir la rotación específica de los carbohidratos disponibles para la
práctica y completar la tabla No. 7.1
Tabla No.7.1. Rotación específica de algunos carbohidratos

Carbohidrato 0 min 2 min 4 min 6 min 8 min 10 min 20 min 30 min
Glucosa
Fructosa
Galactosa
Sacarosa
5. Con los datos correspondientes al minuto 30 de la tabla No. 7.1, calcular la

rotación específica de cada una de las muestras usadas.
Cuestiones
1. Determinar las razones moleculares de la actividad óptica.
2. Definir el concepto de mutarrotación y explicar su ocurrencia.
3. Enumerar y explicar brevemente algunas aplicaciones de la polarimetría.
Referencias



Bioquímica
Práctica de Laboratorio No. 10. Cuantificación de Carbohidratos
Objetivo
Determinar la concentración de algunos carbohidratos en disolución acuosa.
Marco Teórico
Una estrategia para cuantificar carbohidratos es la prueba con la antrona, la cual
genera una reacción coloreada fácilmente identificable por espectrofotometría visible. Los
carbohidratos en contacto con el H2SO4 para producir furfural y sus derivados, los cuales a
su vez reaccionan con antrona para producir un complejo coloreado, mostrado a
continuación:
OH
HO O
H OH
H O
OH H
HO OH
H+
H OH
O O
HO O
O
O
+
Este complejo tiene gamas de colores desde el azul hasta el verde, los cuales se leen
por lo general a una longitud de onda máxima de 620 nm; sin embargo no se recomienda
usar la prueba si en la muestra hay proteínas con altos contenidos de triptófano, el cual
genera una coloración roja con la antrona.
Reactivo de antrona (2 g/L en H2SO4 concentrado)
Diferentes soluciones patrón de carbohidratos (0.1 g/L)

10 tubos de ensayo gradilla para tubos
Baño maría espectrofotómetro Uv-Vis
Celdas de cuarzo para espectrofotómetro 2 pipetas de 10 mL
5 matraces aforados de 25 mL 1 micropipeta
Procedimiento
1. Cada grupo de trabajo recibe una solución patrón (0.1 g/L) de carbohidrato en
particular, con ella preparan 4 diluciones en cascada, diluyendo cada vez dos veces.
2. Transfiera 2 mL de cada carbohidrato en dilución en sendos tubos de ensayo, usar
gradilla; agregar a cada tubo 2 mL de reactivo de antrona lo más rápido posible. Introducir el
conjunto de 6 tubos (el sexto tubo se corresponde con la muestra problema del carbohidrato
asignada al grupo) en baño maría a 80 °C durante 10 minutos. Enfriar y luego
espectrofotometrear a 620 nm contra el reactivo de antrona como blanco. Elaborar la curva
de calibración y calcular la concentración de la muestra problema usando la pendiente de la
curva.
Cuestiones
1. Escribir la ecuación correspondiente a la reacción efectuada por el grupo de trabajo.
2. ¿Cuál es la razón de utilizar la pendiente para efectuar el cálculo de la
concentración correspondiente a la muestra problema?
3. Solicitar los resultados de los demás grupos de trabajo y presentar las curvas
de calibración como las concentraciones de cada una de las muestras problema.
Referencias



Bioquímica
Practica No.11. Inversión de sacarosa
Objetivo
Hidrolizar la sacarosa e isomerizar la glucosa resultante hasta fructosa.
Marco teórico
La sacarosa es un disacárido constituido por una molécula de glucosa y otra de
fructosa unidas a través de un enlace 1-4-glicosídico, tal como se muestra en la siguiente
figura:
La inversión de esta sustancia consiste en la separación hidrolítica de la glucosa y la

fructosa, generando cambios significativos en la mezcla resultante, como por ejemplo la
variación en su actividad óptica, es decir una cambio en la dirección del plano de la luz
polarizada, como también cambios en su comportamiento químico frente a reacciones
clásicas como las de Fehling, Benedict, Barfoed, Bial, Selliwanoff, Tollens, etc.
La sacarosa es exhibe dextrorrotación de +66°, al hidrolizarse en glucosa (+52°) y en
fructosa (-92°), la mezcla exhibe levorrotación de -20°; este modificación de +66° a -20° a 10
recibe el nombre de inversión.
Por carecer de carbonos anoméricos libres la sacarosa no es reductora pero en medio
ácido y caliente, se hidroliza en la piranosa y la furanosa fuertemente reductoras. Al
invertirla se obtiene un líquido espeso dorado con mayor poder edulcorante debido a la

fructosa en especial.
Materiales y reactivos
1 beaker o erlenmeyer de 1 litro 6 libras de sacarosa
1 trípode 1 mechero
1 g de ácido cítrico (10 g de NaHCO3) 1 litro de agua tibia
1 beaker de 100 ml solución de a-D-glucosa al 10%
solución de -D-fructosa al 10%
1 polarímero 1 refractómetro para sacarosa
1 espctrofotómetro IR
Reactivos de: Fehling, Benedict, Barfoed, Antrona, Bial, Selliwanoff y Tollens.
Procedimiento
1. Medir la actividad óptica de las soluciones de glucosa y fructosa al 10%
recientemente preparadas, al hacerlo se debe tener especial cuidado con la solución de
glucosa, la cual exhibe el fenómeno de la mutarrotación. Asegurarse de llenar por completo
los tubos portamuestras del polarímetro, el cual debe precalentarse hasta lograr estabilidad
en la lámpara o fuente de luz de sodio.
100 Por separado, disolver 0.5 g de sacarosa, glucosa y fructosa en agua hasta
completar 100 ml de disolución, medir la actividad óptica. Una vez terminada esta medición,
usar cada disolución para realizar las siguientes pruebas a). actividad óptica, b)
determinación de espectros IR c) pruebas típicas para carbohidratos empleadas en
prácticas pasadas (Usar en cada caso 5 ml de la disolución y 2 ml de cada reactivo
específico) y d) contenido sacarínico.
1 Inversión de la sacarosa. Disolver 6 libras de sacarosa en 1 litro de agua tibia,
agregar 1 g de ácido cítrico (en su defecto se puede usar el jugo de unos 6 limones
medianos)y 5 o 6 gotas de HCl 1M. Calentar hasta ebullición vigorosa, en este punto
disminuir la intensidad de la llama y dejar hervir a fuego bajo durante 15 minutos. Sacar una
alícuota de 50 ml y dejar enfriar. También se puede emplear otra técnica similar consistente
en mezclar las 6 libras de sacarosa con agua tibia, poner a hervir durante 10 minutos, retirar
del fuego y cuando la temperatura alcance los 50°C, añadir 10 g de NaHCO3 , mezclar bien
para homogenizar el pH, la solución adquiere un color blanco pálido, el cual desaparece
cuando se enfríe. Si queda algún residuo en la superficie, este debe retirarse para luego
almacenar convenientemente.

4. Una vez finalizado el proceso transvasar unos 20 ml del producto obtenido y
repetir con él, los pasos del punto 2.
Disponer la sacarosa invertida en recipientes para su embalaje casero.
Cuestiones.
1. Explicar el fenómeno de la mutarrotación exhibida por la glucosa.
2. Explicar brevemente el funcionamiento del polarímetro.
3. Contrastar los espectros obtenidos antes y después de la inversión.
4. Escribir las ecuaciones de las reacciones sucedidas durante el desarrollo de la
práctica.
5. Determinar los principales usos del azúcar invertido obtenido.
Referencias



Bioquímica
Practica de Laboratorio No.12. Cuantificación sacarínica en frutas
Objetivo
Determinar el contenido sacarínico de algunas frutas disponibles en la región
Marco teórico
Gracias al proceso fotosintético, los seres autótrofos biosintetizan un amplio número
de especies de carbohidratos; mono, di y polisacáridos de uso corriente por parte de los
seres heterótrofos, de estas especies químicas la más importante y abundante es la
glucosa, la cual, junto a la fructosa y la sacarosa se acumulan especialmente en citoplasma;
mientras los almidones son los carbohidratos de reserva acumulados en plastidios; la
hemicelulosa y las pectinas integran el componente estructural celular.
Las frutas deben su sabor dulce principalmente al contenido de carbohidratos, sin
embargo el concepto de sabor tradicional lo deben al contenido de ácidos orgánicos y sus
derivados, aunque en realidad y por cercanía morfológica y fisiológica de los órganos del
gusto y el olfato, este “sabor” tradicional en realidad es olor
La maduración de los frutos genera cambios radicales en la estructura molecular de
sus carbohidratos, los cuales experimentan rutas metabólicas tales como la glicólisis, el ciclo
de los ácidos tricarboxílicos y finalmente el sistema de transporte electrónico conducente a
la formación de CO2, H2O y ATP la cual facilita la biosíntesis de otros componentes
celulares
Estos carbohidratos poseen en su estructura molecular grupos aldehídídicos o
cetónico composición explicativa de su poder reductor, oxidándose en presencia de oxígeno
+ + 2+ 3-
o reduciendo en solución alcalina a iones oxidantes como Ag , Hg , Cu y Fe(CN)6
propios de una gran variedad de reactivos como los de Tollens, Fehling, Benedict, Barfoed,

etc. con los cuales reaccionan formando mezclas complejas de ácidos orgánicos.
Para cuantificar el contenido sacarínico en frutas se puede usar la refractometría o la
espectrofotometría, ambas basadas en la ley de Beer-Lambert
Materiales y reactivos
1 refractómetro para sacarosa 0-80° Brix 1 espectrofotómetro Uv-Vis
Frutas de diferentes especies Sacarosa
6 balones aforados de 50 ml 1 espátula metálica
1 balanza analítica 1 micropipeta
26 tubos de ensayo 1 gradilla para tubos de ensayo
1 baño maría Reactivo de Benedict
Procedimiento Contenido sacarínico por Refractometría

1. Seleccione una primera fruta y extraiga de ella algunas gotas de su jugo, las cuales
deben colocarse directamente en el portamuestras de la compuerta del refractómetro para
medir el contenido sacarínico. Lavar y secar el portamuestras y su tapa; repetir este paso
hasta completar la medición con todas las frutas disponibles. Completar la tabla No. 10.1
Tabla No.10.1 Contenido sacarínico en frutas por tefractometría
Fruta °Brix

Contenido sacarínico por espectrofotometría Uv-Vis
1. Preparar 100 mL de disolucion de sacarosa: 0.6 M, incubar a 25 °C; a partir
de esta disolución y sin sacar del baño maría, preparar 50 ml de cada una de las siguientes
diluciones en serie e incubar inmediatamente: 0.5M, 0.4M, 0.3M, 0.2M, y 0.1M. De cada una
de ellas, transferir 5 ml a un tubo de ensayo y a cada uno agregar 2 mL de reactivo de
Benedict, incubar a 25 °C durante 5 minutos.
2. Mientras se preparan las diluciones del punto anterior, transferir 4 ml de la
disolución de sacarosa 0.6M a un tubo de ensayo, luego añadir 4 ml de Reactivo de
Benedict, incubar a 25°C durante 5 minutos, ahora dividir el contenido en dos partes iguales
y transferirlas a dos celdas del espectrofotómetro. Determinar la longitud óptima de
absorbancia con la cual se debe construir la curva de calibración utilizando las diluciones del
punto 1.
3. Extraer 2 ml del jugo de cada fruta, depositar este volumen en un tubo de
ensayo, agregar 2 ml de reactivo de Benedict, incubar a 25°C y espectrofotometrear a la
longitud de onda óptima absorbancia definida en el punto anterior.
Completar la tabla 10.2
Tabla No. 10.2 Contenido sacarínico en frutas por Uv-Vis

Fruta M °Brix

Cuestiones.
1. Determinar las especies químicas responsables del sabor de cada fruta usada en la
práctica.
2. Explicar brevemente el funcionamiento del refractómetro.
3. Escribir las ecuaciones de las reacciones sucedidas durante el desarrollo de la
práctica.
Referencias
Alvear G. S. V. (2011). Problemas tridimensionales de química. Neiva, Editora
Surcolombiana.


http://www.horticom.com/revistasonline/extras/extra09/06_07.pdf

Bioquímica
Práctica de laboratorio No. 13. Actividad catalítica de la amilasa.
Objetivo
Determinar la actividad catalítica de la amilasa salival a través de pruebas cualitativas.
1 beaker de 50 ml solución de almidón al 1%
1 beaker de 500 ml solución alcohólica de I 0.01 M
1 pipeta de 5 ml baño María
Papel celofán 2 placas de tinción
Reloj con segundero 1 probeta de 250 ml
5 tubos de ensayo gradilla para incubación
Almidón 1% I2 0.01 M
NaCl 0.1 M H2O destilada
Na2SO4 0.1 M Fehling A y Fehling B

Papel filtro en tiras Horno desecador
Marco Teórico
La amilasa (1,4 glucano-4-glucano hidrolasa) ha sido aislada de la saliva del páncreas
humano, como también de Pseudomonas y Aspergillus. De esta enzima existen dos
variedades, las cuales se encuentran en la saliva: -amilasa y amilasa; la primera tiene
un peso molecular de 45000 Da, presente además en el jugo pancreático, hidroliza
indistintamente al azar los enlaces (1 4) glicosídicos a lo largo de la cadena de la amilosa
generando moléculas libres de glucosa y maltosa, tiene la capacidad de suprimir la
capacidad de la amilosa de producir un color azul cuando esta reacciona con el yodo La
amilasa, presente también en la malta, libera moléculas de maltosa iniciando su hidrólisis
por el extremo no reductor de la cadena de la amilosa. La amilopectina también es atacada

por las  y  amilasas, liberando moléculas de maltosa.
Sin embargo estas dos enzimas no pueden hidrolizar los enlaces (1 6) glicosídicos
de los puntos de ramificación de la amilopectina, por tanto su acción libera tantas unidades
de maltosa hasta que la hidrólisis llegue a los enlaces (1-6), para producir un núcleo muy
grande y ramificado denominado dextrina límite, la cual se hidroliza con una (1 6)-glucan-6-
glucano hidrolasa.
Procedimiento
1. Enjuagarse la boca con agua y posteriormente recoger unos 20 ml de saliva
en un beaker de 50 ml. Algunas personas secretan saliva con una actividad débil de sus
amilasas. Con una pipeta se trasvasan unos 5 ml de la saliva colectada a una bolsa de
papel celofán, amarrándola en la parte superior para impedir el derrame de la saliva
introducida; esta pequeña bolsa se introduce en unos beaker con 400 ml de agua destilada,
se espera una hora o más hasta que ocurra la diálisis.
Durante este proceso se cambia el agua unas tres veces cada 20 minutos y se agita
también la bolsa dializadora.
Diluir 20 veces la saliva restante para usarse en el punto 2
2. Pruebas Preliminares. Mientras ocurre la diálisis se debe determinar la
actividad de la amilasa, por tanto se requiere establecer la dilución óptima para hidrolizar el
almidón hasta el “punto acromático”, el cual se alcanza cuando una solución de yodo ya no
produce color azul oscuro o negro en un lapso de 5 minutos a 37 °C.
o
Incubar en baño de María, 10 ml de almidón al 1 % durante dos minutos a 37 C,
ahora agregar 2 ml de saliva inicial diluida 20 veces, obtenida en el punto 1, continuar la
incubación a la misma temperatura; cada 30 segundos y con la ayuda de una pipeta,
trasvasar 3 gotas de esta mezcla incubada a la depresión de la placa de tinción, donde
previamente se han agregado 2 gotas de solución de yodo 0.01 M. Así se identifica la
muestra que ya no da positiva a la prueba del yodo sobre el almidón (punto acromático), si
el tiempo necesario para lograr este resultado es inferior a 3 minutos, se debe diluir aún más
la saliva inicial del punto
1. Tal dilución debe permitir el resultado negativo a la prueba del yodo entre 3 a 8
minutos. Las siguientes pruebas se realizarán en la jornada de laboratorio siguiente. 3.
Activación De La Amilasa Salival. Una vez efectuada la diálisis, se transfiere el contenido
de la bolsa dializadora a una probeta de 250 ml y se diluye con agua destilada hasta una

concentración igual a la del punto acromático del punto 2. Por igual se transfieren a otra
probeta de 250 ml unos 5 ml de la saliva inicial del punto 1 y se diluye hasta la
concentración del punto acromático; estas dos soluciones se deben mezclar y transferir a 5
tubos de ensayo previamente rotulados en las cantidades definidas de la tabla siguiente:
Tubos y ml añadidos
Sustancias 1 2 3 4 5
Almidón 1% 10 10 10 10 10
NaCl 0.1 M 1 1
H2O destilada 1 1
Na2SO4 0.1 M 1
Saliva dializada diluida 2 2 2
Saliva inicial diluida 2 2
Incubar los 5 tubos a 37 °C durante 5 minutos, este es el tiempo cero en el cual se

puede agregar la saliva dializada diluida y la saliva inicial diluida; a intervalos de 1 minuto se
deben realizar sendas pruebas.
Determinar Grupos Reductores en la Mezcla de Digestión.
1. Dividir una tira de unos 16x2 cm de papel filtro en 16 partes iguales, ahora Incubar
o
10 ml de solución de almidón al 1 % durante 2 minutos a 37 C.
2. En el tiempo cero se añaden 0.2 ml de saliva sin diluir a la solución de almidón y
cada 30 segundos se hace la prueba del yodo hasta encontrar el punto acromático: al
mismo tiempo otro estudiante deposita una gota de la mezcla en digestión en cada una de
las divisiones del papel filtro hasta la última de ellas, esta tira de papel se seca al aire y
finalmente se adicionan unas dos gotas de solución de Fehling
Cuestiones
1. Determinar la composición de la saliva humana.
2. ¿Qué se trata de demostrar en el punto 3?
3. ¿De qué manera afecta la diálisis de la saliva a la capacidad de hidrolizar el
almidón?
Referencias

Buenos Aires: Omega.

Macarulla, J. M. y Goñi, F. M. (2002). Biomoléculas. Lecciones de Bioquímica Estructural. 3ª
Ed. Barcelona: Reverté.

Rendina, G. (1974). Técnicas de Bioquímica Aplicada. México : Interamericana

Bioquímica
Práctica de laboratorio No. 14. Pruebas Cualitativas para Ácidos Grasos
Una de las maneras más sencillas para identificar ácidos grasos es la saponificación,
a través de la cual un lípidos libera por acción de agentes físicos y químicos, tanto glicerol
como ácidos grasos. Para lograrlo basta con calentarlos en presencia de un álcali. Este
proceso es la base usada en la fabricación de jabones duros y blandos. El exceso de Los
ácidos grasos liberados reacciona con la base usada para formar la sal correspondiente.
Los jabones como tal son hidrosolubles pero generan precipitación en presencia de NaCl,
CaCl2, o MgCl2.
Materiales y reactivos: Grasa animal (mantequilla)
Aceite vegetal (aceite de oliva) Ácido graso (ácido esteárico) HCl concentrado
Pb(CH3COO)2 50 g/L
Pipeta de 10 mL 1 espátula
Éter etílico Agua de bromo
Fenolftaleina 10 g/ L de etanol NaOH 0.1 M
NaCl 50 g/L CaCl2 50 g/L MgCl2 50 g/L
KOH alcohólico 100 g/L Papel tornasol azul
Gradilla con 10 tubos de ensayo KHSO4
Yodo en cloroformo
Procedimiento para saponificación
1. Colocar en un tubo de ensayo grasa hasta 0.5 de altura, adicionar 1 mL de KOH
alcohólico hasta cubrir la grasa adicionada, hervir durante 1 minuto asegurándose de evitar
salpicaduras las cuales son muy caústicas. Agregar 10 mL de agua, hervir durante 10
minutos adicionales y dejar enfriar, agregar cuidadosamente HCl hasta obtener una
disolución de carácter ácido,(papel tornasol azul). Remover la capa superior de ácidos
grasos ubicada en la parte superior. Ahora adicionar 10 mL de agua al sobrenadante

retirado y agregar NaOH 0.1 M hasta obtener una disolución clara. Utilizar el producto en el
siguiente punto.
2. Obtención de jabón.
Transferir 0. 5 g de ácido esteárico a un tubo de ensayo, agregar NaOH 0.1M hasta
formar una disolución jabonosa. Dividir esta disolución en 4 tubos de ensayo, HCl (revisar
resultados) , saturar con solución de NaCl, CaCl2, MgCl2 y Pb(CH3COO)2 (observar
resultados).
Dividir la disolución del punto 1 en cuatro tubos de ensayo y repetir las pruebas del
punto 2.
Pruebas para ácidos grasos
Disolver 0.2 g de ácido esteárico en 5 mL de éter etílico, por aparte medir 5 mL de
fenolftaleína en un tubo de ensayo, añadir tantas gotas de NaOH 0.1 M hasta que prevalezca un
color ligeramente rosado. La presencia de ácidos grasos libres produce la desaparición del
color rosado.
Repetir la experiencia con mantequilla y aceite de oliva.
Prueba para glicerol
Al calentar glicerina con KHSO4 se genera una deshidratación con la subsecuente
formación de un aldehído denominado acroleína, perceptible por su olor característico. La
reacción ocurre tanto para el glicerol como para sus sales.
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar KHSO4 hasta una altura de 0.2 cm, añadir una cantidad
aproximada de 0.5 mL de glicerol; añadir más bisulfato. Calentar por dos minutos hasta
percibir el olor característico de la acroleína.
Prueba de insaturación
Por lo general, los ácidos grasos constituyentes de las grasa animales son saturados,
en cambio aquellos derivados de los vegetales poseen una o más doble ligaduras carbono
carbono. Al hidrogenar estos doble enlaces se obtienen grasas vegetales, tal como ocurre
con las margarinas.
Por igual los halógenos reaccionan fácilmente con los doble enlaces para formar
derivados halogenados (halogenuros de alquilo)
Procedimiento
Transvasar pequeñas cantidades de mantequilla, aceite de oliva y ácido esteárico en
sendos tubos de ensayo. Con mucho cuidado y evitando el contacto con la piel, agregar

gota a gota agua de bromo, agitar el tubo cada vez hasta lograr decoloración total del
bromo. Repetir el ensayo usando esta vez yodo en cloroformo.
Cuestiones
1. Plantear en cada caso, las ecuaciones correspondientes a cada reacción,
usar formato digital para este proceso. No se reciben manuscritos escaneados.
2. Establecer la importancia y los cuidados en la ingesta de ácidos grasos en la
dieta alimentaria diaria.
3. Plantear una discusión sobre el impacto de la acroleína en la salud humana.
Referencias



Bioquímica
Práctica de laboratorio No. 15. Aislamiento de cromosomas humanos usando tejido sanguíneo
Objetivo
Extraer cromosomas metafásicos a partir de sangre total humana y elaborar el
cariograma respectivo.
Marco Teórico
La metafase es la segunda etapa de la reproducción celular caracterizada por la
ruptura de la membrana celular dejando libres a los cromosomas, los cuales además de
hacerse visibles, se ubican en el plano ecuatorial celular, disponiéndose a su
desplazamiento en la anafase. La razón de escoger cromosomas metafásicos es la facilidad
para ser observados completos, es decir con sus dos cromatidas unidas al centrómero
correspondiente. Para efectuar el aislamiento y posterior observación de los cromosomas se
requiere inhibir la metafase usando colchicina, un alcaloide potencialmente teratogénico,
cuya función es actuar específicamente sobre las tubulinas del huso acromatico para
modificar su estructura molecular impidiendo la fijación de los pares cromosómicos y por
tanto, la separación de las cromatidas hermanas con lo cual se interrumpe el ciclo celular.
Usar sangre periférica permite trabajar con el tejido sanguíneo, en el cual se aislarán
los linfocitos los cuales tienen núcleo, no así las plaquetas ni los eritrocitos, así, los
cromosomas a extraer en esta práctica son linfocitarios únicamente y en metafase son
visibles al microscopio si se tiñen apropiadamente.
Microscopio 100X Nevera Centrífuga
Tubos graduados para centrifuga Pipetas Pasteur plásticas
Portaobjetos Jeringa heparinizada Incubadora Gradilla
micropipeta de 100 L guantes de nitrilo puntas para esta micropipeta
KCl 0.25 M Colchicina 016% Tinción de Giemsa Fijador de Carnoy
Cinta de enmascarar láminas portaobjetos beaker de 250 mL
Soluciones requeridas:

a) Solución dispersante hipotónica de 100 mL KCl 0.075 M a 37 °C.
b) Tinción de Giemsa: Colorante Giemsa 5 %, en buffer fosfato pH 6,8.
c) 100 mL Solución fijadora de Carnoy. Mezcla de metanol absoluto y ácido
acético glacial en proporción 3:1. Refrigerada a 4 °C.
d) solución de colchicina al 0.15%.
e) 100 mL de medio de cultivo PB-MAX: karyotyping médium (GIBCO)
f) solución de fitohemaglutinina.
Procedimiento
1. Toma de muestras de sangre. Antes de efectuar la venupunción en brazo
(condiciones asépticas), cada grupo de trabajo debe marcar un tubo graduado de
centrifuga con cinta de enmascarar y colocarlo en una gradilla, por igual deben
marcar las pipetas Pasteur . Un estudiante de cada grupo de trabajo
autónomamente permitirá la extracción de 3 mL de sangre venosa mediante el uso
de jeringa con 0.3 mL de heparina (1000 U), se invierte varias veces para
homogenizar el contenido y evitar así la coagulación.
2. Crecimiento e incubación Transferir el contenido de la jeringa a un tubo de
centrifuga previamente marcado con 5 mL de medio de cultivo PB-MAX: karyotyping
médium (GIBCO) transferidos con pipeta esterilizada previamente, suplementar 400
L de solución de fitohemoaglutinina, incubar a 37°C entre 70 y 72 horas.
3. Detención de la mitosis en metafase. Adicionar 200 L de solución de
colchicina agitar para homogenizar y dejar actuar durante 15 minutos a 37°C
4. Centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos, con sumo cuidado remover el
sobrenadante de color amarillento donde están los glóbulos blancos sin tocar el
botón celular rojo inferior, agregar lentamente y constante agitación 8 mL de KCl
0.075 M volver a incubar durante 15 minutos a 37 °C.
5. Agregar 1 ml del fijador Carnoy previamente preparado y refrigerado a 4°C
para evitar evaporación y resuspender (agitación homogénea con golpes leves al
tubo para remover el botón celular) para desintegrar los grumos; ahora incubar a 37
°C por 15 minutos. Volver a centrifugar a 1500 rpm otros 10 minutos, extraer el
sobrenadante con los glóbulos rojos usando pipetas de Pasteur, añadir fijador
Carnoy hasta 5 mL , repetir el proceso hasta obtener un botón celular de color

blanco. Colocar el tubo con el fijador a 4 °C durante 30 minutos. Centrifugar a 1500
rpm por 10 minutos y retirar el sobrenadante con leucocitos y hematíes. En el botón
celular blanco se encuentran los cromosomas aislados de los linfocitos en metafase.
Añadir 3 mL de fijador, resuspender y centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos para
lavar, ahora el sobrenadante debe ser transparente y además debe retirarse con
jeringa de Pasteur, al final resuspender y usar el líquido lechoso final para su
extendido en el portaobjetos.
6. Marcar el portabjetos desengrasado, a una altura de unos 50 cm y con
jeringa de Pasteur dejar caer unas dos o tres gotas del líquido resuspendido final,
retirar el exceso al tubo con los cromosomas aislados y dejar secar al aire libre.
Flamear al mechero para calentarla a 60 °C aproximadamente.
7. Revelado y fijación. Con un gotero adicionar varias gotas de revelador
Giemsa, dejar actuar durante 10 minutos; retirar el exceso de colorante Giemsa en el
depósito de residuos del laboratorio y lavar con agua corriente. Asi quedará teñida
de una leve coloración azul, ahora se coloca inclinada entre la superficie de la mesa
de trabajo y otro objeto cualquiera que la soporte para permitir el escurrido y secado
de la lámina portaobjetos.
8. Visualización de cromosomas. Llevar la lámina portaobjetos y observar al
microscopio a 10X hasta enfocar cúmulos de cromosomas, ahora adicionar aceite de
inmersión y visualizar a 40X y finalmente a 100X, fotografiar para posteriormente aparear
cromosomas y constituir el cariograma respectivo, este proceso ha de hacerse con un editor
de gráficos como Paint. De ser posible usar un software para análisis y conteo de
cromosomas para facilitar el apareamiento.
Cuestiones
1. Determinar la estructura molecular de un cromosoma y su relación con la cromatina.
3. Presentar el cariograma obtenido por el grupo de trabajo señalando los pares de
cromosomas somáticos y el sexual.
Referencias
Rodríguez A. R. (2005). “Manual de prácticas de genética y cuaderno de trabajo”. 1ª Edición.
UNAM. México. pp. 80,155.
Shaffer L. G. (2005). “ISCN 2005: An international system for human cytogenetic

nomenclature recommendations of the International Standing Committee on Human
Cytogenetic Nomenclature”. Editorial Karger Publesher. pp. 6,7,13.

Solari A. J. (2004). “Genética Humana: Fundamentos y Aplicaciones en Medicina”. 3ª
Edición. Editorial Médica Panamericana. Argentina. pp. 376.
O'Brien Stephen J,. Menninger Joan C, and Nash. William G. 2006. Atlas of Mammalian
Chromosomes. New Yersey: John Wiley & Sons, Inc.
Rooney D. E.and B. H. Human Cytogenetics: Essential Data Series. (Paperback). John

Wiley & Sons, Inc.


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Para empezar es indispensable para el estudiante la verificación de la naturaleza

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GHS 05 Corrosivo GHS 06 Tóxico

GHS 07 Tóxico, irritante, narcótico, peligroso GHS 08 Peligroso para el cuerpo,

GHS 09 - Dañino para el medio ambiente

A continuación se transcribe la descripción de los nuevos pictogramas de seguridad

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Programable por conexión directa a PC.

Sistema óptico: Doble haz real.

Rango de longitud de onda: 190 - 1100 nm.

Premonocromador: sólo modelo 45

Ancho de banda espectral: variable: 0.5, 1, 2 y 4 nm (en modelos 35 y 45)

Ancho de banda espectral Fijo: 1 nm (en modelo 25)