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INSTITUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE CINTALAPA

ING. EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRACTICA No. 4 “PRUEBA DEL ALCOHOL”

TECNOLOGÌA DE LÀCTEOS

CUETO VAZQUEZ ERICK YAEL 16884005

ESPINOSA CRUZ LISSET AYLIN 16884017

ESPINOSA LÓPEZ NANCY 16884039


VERÓNICA

GUTIÉRREZ CORONEL MARÍA 16884041


LEYDI
LÓPEZ CRUZ YALIA ETELBINA 16884015

MÉNDEZ LAMADRID JOSÉ 16884019


FRANCISCO

PÉREZ LÓPEZ MARLENN DEL 16884034


ROCÍO
DRA. ANAYANCY LAM GUTIÈRREZ

7to SEMESTRE GRUPO “C”

CINTALAPA, CHIAPAS A 28 DE SEPTIEMBRE DEL 2019.


INTRODUCCIÓN.

En el manejo de la leche cruda rumbo a su transformación se practica un conjunto


de pruebas para evaluar su calidad; entre ellas destacan las relacionadas con
propiedades fisicoquímicas notables que revelan su estado de frescura, su
evolución y la condición de estabilidad ante un posible tratamiento de
transformación como la pasteurización, la ultra pasteurización, o su conversión en
derivados lácteos.

Esta prueba permite apreciar la floculación debido a que la leche ha sufrido


cambios en algunas de sus propiedades fisicoquímicas que pueden presentarse
en caso de acidez y procesamiento térmico mal aplicado, etc., un exceso de
acidez provoca la floculación y es presuntivamente señal de un mal manejo
sanitario de la leche (contaminación bacteriana).

Prueba de Alcohol: Permite detectar de forma rápida y cualitativamente la termo


estabilidad de una leche cruda. El alcohol que se agrega a la leche provoca la
precipitación de las micelas presentes en ésta, cuando es afectada la termo
estabilidad. Se considerará positiva la prueba si se observan partículas
coaguladas de caseína (cuajada) en el tubo dosificador o en la pared del tubo de
ensayo, por lo que la leche no podrá ser aceptada.

Es muy importante saber cuáles son los cambios que afectan a la leche, para
poder evitar que cantidades de leche no sean desechadas. Se realizara una
prueba de alcohol para lograr determinar la presencia de floculación causado por
los cambios que sufre la leche en algunas de sus propiedades físicas y químicas.
OBJETIVOS:

 Determinar la presencia de floculación debidas a cambios que ha sufrido la


leche en algunas propiedades fisicoquímicas.

 Reconocer las pruebas que determinan la aceptación o rechazo de la leche


cruda en la industria láctea.

MARCO TEÓRICO

Para obtener buenos resultados es requisito indispensable tomar muestras que


sean verdaderamente representativas del producto a analizar y con una frecuencia
tal, que permita establecer si el producto cumple o no los requisitos mínimos
impuestos por la planta o los reglamentos.

Las llamadas pruebas de recepción o de plataforma se realizan directamente


sobre la leche cruda bien mezclada y sin mayor preparación. Pero para las
pruebas de laboratorio es indispensable seguir ciertas pautas que permitan tomar
las muestras en forma representativa y conservarla de manera adecuada hasta su
análisis. (AOAC, 1965).

Se entiende por leche natural el producto integro, no alterado ni adulterado y sin


calostros, del ordeño higiénico, regular completo e interrumpido de las hembras
mamíferas, domesticas, sanas y bien alimentadas. En forma genérica se entiende
exclusivamente la leche como la de vaca, y cuando nos referimos a las de otros
animales se indica el nombre de la especie correspondiente.1

La leche es una emulsión de materia grasa en una solución acuosa, liquida,


blanca opaca, dos veces más viscosa que el agua, de sabor ligeramente
azucarado y olor poco acentuado; la cual contiene numerosos elementos, unos en
disolución y otros en estado coloidal.2
La buena calidad sanitaria hace referencia a la ausencia de microorganismos
patógenos tales como Salmonella, Staphylococcuss aureus, los mohos, las
levaduras, los coniformes fecales, los coniformes totales y Listeria
monocytogenes, entre otros, que son los causantes de enfermedades (infecciones
e intoxicaciones) ocasionadas por el consumo de alimentos no sanos.

Cuando se encuentra gran cantidad de bacterias en la leche, estas pueden


interferir en la calidad y elaboración de productos lácteos que se obtiene a partir
de procesos microbianos, como el queso maduro o el yogur. Si la leche es de una
mala calidad bacteriológica los iniciadores empleados no actúan adecuadamente y
no se pueden obtener productos de buena calidad ya que se afecta su sabor,
aroma y textura.3

EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES

 Alcohol etílico 70ºGL


 8 tubos de ensayo
 1 gradilla para tubos de ensayo
 1 pipeta
 1 vaso precipitado
 Cinta mastín
 vinagre
 Leche bronca
 leche bronca acidificada naturalmente dejándola fuera de refrigeración al
menos 18 horas (control positivo)
 leche bronca acidificada con ácido acético (adicionar 0.2 ml de ácido
acético al 0.1%) con leche de tetra pack UHT (control negativo) y con una
muestra de 50% leche y de 50% de agua
 cronómetro
PROCEDIMIENTO

1. Se mezclan 10 mL muestra láctea tetrapack con 10 mL de alcohol etílico de


70ªGL y se deja reposar, dándole un ligero movimiento, si después de 5
min observar si se aprecia floculación, el resultado es positivo, si en dado
caso hay ausencia de floculación, el resultado es negativo, repetir con las
demás mezclas a excepción de una que será 50%agua y 50% leche (elegir
cualquiera de las 3 leches)
DIAGRAMA DE FLUJO

PRUEBA DE ALCOHOL

Mezclar 10ml de cada mezcla y


10 ml de alcohol

Se reposa

Hay floculación

No hay floculación
RESULTADOS

 LECHE ENTERA DE TETRAPAC

a) b) c)
a
a) la muestra no presenta floculación por lo tanto es negativa
b) la muestra no presenta floculación por lo tanto es negativa
c) se presentan ambas muestras

 LECHE 50% AGUA Y 50% LECHE TETRAPACK

d) e) f)
d) la muestra no presenta floculación por lo tanto es negativo
e) la muestra no presenta floculación por lo tanto es negativo
f) se presentan ambas muestras
 LECHE BRONCA

g) h) i)
g) la muestra presenta floculación por lo tanto es positivo
h) la muestra presenta floculación por lo tanto es positivo
i) se presentan ambas muestras

 Leche acidificada

j) l)
k)
j) la muestra presenta floculación por lo tanto es positivo
k) la muestra presenta floculación por lo tanto es positivo
l) se presentan ambas muestras
CUESTIONARIO

1.- Cuando la prueba es positiva se aprecia floculación. Explique la o las


razones por las que corre la floculación
la floculación se hace presente porque hay un exceso de acidez y esto indica que
la leche ya ha sufrido cambios fisicoquímicos a causa de un mal manejo sanitario
de la leche.

2.- ¿Cómo puede interpretarse el resultado obtenido en esta determinación


con respecto al estado sanitario de la leche? Explique.
Que en el caso de la leche bronca al momento de ordeñar o de envasar hubo un
mal manejo sanitario, porque se observó presencia de floculación, de la misma
manera en la leche acidificada, esas muestras de leche ya habían sufrido un
cambio fisicoquímico.

3.- ¿puede una leche pasteurizada dar positivo? Sí, no ¿Por qué?
No, porque la leche pasteurizada ya fue sufrió un cambio térmico el cual hace que
sus propiedades sean estables, este cambio es el que hace que ya no existan
cambios en sus propiedades y que la mayoría de los microrganismos sean
eliminados para no provocar acidez.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

La floculación existe por la ausencia de exceso de acidez y por cargas


microbianas, lo cual se determinó que la leche bronca al estar en contacto con el
alcohol etílico a 68 % presento floculación lo que revela que la leche ya ha sufrido
una cierta acidificación por actividad de la flora láctica, de la misma manera se
presentó con la leche acidificada, la leche de tetra pack no presento floculación,
esto indica que esta en óptimas condiciones para consumir porque no ha sufrido
cambios fisicoquímicos, de igual manera la leche que ya está disuelta con 50% de
agua aunque se le agrego más liquido no hubo carga microbiana que alterara su
composición y la acidificara.

Sbodio, O.A. y Revelli (2012) comentan que la coagulación enzimática, puede


dividirse en dos partes, una primaria (hidrólisis enzimática) y otra secundaria
(agregación). Durante la etapa primaria, la k-caseína es “cortada” por la acción de
la enzima en el enlace Phe105- Met106, formando una porción hidrofóbica: para k-
caseína y una hidrofílica: caseinmacropéptido. Como resultado de esta acción se
produce la reducción de la carga negativa neta y de la repulsión estérica. De esa
manera, las micelas modificadas comienzan a ser susceptibles de agregarse

Enríquez P. Urith S. (2007) realizaron una prueba de alcohol en la Universidad


Autonama de Chiapas, en la que argumentan que esta prueba constituye un
indicador indirecto del grado de acidificación de la leche cruda. Por tanto también
revela, indirectamente, la carga microbiana total de la leche, y su probable
comportamiento ante un tratamiento térmico.

Ana C. Cruz C. (2018) realiza la prueba de alcohol en diferentes tipos de leche,


por lo que afirma que al acidificarse la leche, las micelas de caseína se vuelven
sensibles al exponerse al alcohol del 68% o del 72%, ya que esta sustancia las
hidrata favoreciendo su precipitación como un floculo blanco. Es decir, si una
muestra de leche cruda se mezcla con un volumen equivalente de alcohol al 68 o
72%, y tras agitarse se observa la formación de pequeños copos de caseína,
entonces la prueba es positiva lo que revela que la leche ya ha sufrido una cierta
acidificación por actividad de la flora láctica. A medida que la concentración de
alcohol empleado crece, la prueba se hace más estricta, es decir, detecta unja
acidez menor. En consecuencia, se aplica para la leche destinada a soportar un
tratamiento térmico más severo, como el de UHT. Entonces, para la leche cruda
destinada a pasteurización, se aplica la prueba de alcohol al 68%, para leche UHT
y se emplea alcohol al 72%. A pesar de su sencillez o quizá por eso mismo, esta
prueba se sigue empleando tanto en plantas industriales medianas como en la
grandes, muy tecnificadas y modernas.

Donnelly and Horne (1986) comentan que un rango de valores de pH entre 6.35 –
6.40 inicial en leche llega a los 300 días de lactancia a un rango de 6.6 –6.7,
llegando en los últimos días previos al parto a valores de pH de 6.8., estos autores
establecieron que la menor estabilidad de la prueba del alcohol a finales de
lactancia se debe a los cambios en los valores de pH de la leche.

MIF (1964) realiza una prueba y argumenta; que una prueba de alcohol positiva
indica también pica estabilidad de la leche al calor, lo cual es muy importante si el
producto ha de ser pasteurizado o esterilizado, esta prueba también es útil para la
detección de la leche anormal como calostro o leches con alteraciones en el
balance salino, que las hacen más susceptibles a la congelación; pero en este
sentido no es una prueba confiable.

Espejo I (200) comenta que la prueba del alcohol es uno de los tests claves a nivel
de recepción, tanto en las industrias como en los CAL, a fin de detectar la termo
estabilidad de la leche cruda. Si la muestra es inestable se produce la coagulación
de la leche, por lo que no es apta para su industrialización. Actualmente la
concentración de etanol utilizada en la prueba de alcohol es establecida por cada
industria lechera.
Víctor Cotrino B. DMV (2017), dice que cuando la concentración de ácidos
aumenta se va perdiendo la estabilidad de las proteínas y se produce la
coagulación de la leche cuando se mezcla a partes iguales con alcohol etílico al
68% calificándola como positivo a la prueba de alcohol. Si se aumenta la
concentración de alcohol la prueba se hace más sensible. Las leches
verdaderamente positivas se coagulan cuando se someten a ebullición, la
combinación acidez-ebullición es la que se utiliza para preparar el postre “cortado
de leche” donde a una leche normal se le agregan unas gotas de limón.

Zadow (1993), menciona que ya en los primeros estudios sobre estabilidad de la


leche al etanol, se determinó que los cationes bivalentes y la concentración del
etanol tenían un importante efecto en la prueba, estableciendo que la
concentración del etanol requerida para coagular la caseína en un volumen igual
de leche, estaba inversamente relacionado con la concentración del ión calcio.

Horne y Parker (1981) postulan que el efecto del alcohol es reducir la constante
dieléctrica del medio, eliminando la barrera de energía que previene la
coagulación. Si la constante dieléctrica es reducida hasta un valor de pH crítico,
las micelas de caseína precipitan.

Víctor Cotrino B. DMV (2010), comenta que la prueba de alcohol diseñada hace
muchos años para la detección de leches acidas producto del metabolismo
bacteriano y que por esta vía sirve como indicador de la calidad de la leche cruda
se fundamenta en la capacidad que tienen las bacterias para producir distintos
ácidos, principalmente Láctico, a partir de la fermentación de la lactosa que utilizan
como fuente de energía para su multiplicación, estableciéndose una relación
directa entre la cantidad de ácido y el número de bacterias pero inversa con el pH
de la leche, que normalmente es entre 6.3 y 6.5 para la leche fresca y que va
descendiendo con el mayor grado de acidez.
CONCLUSIÓNES.

María Leydi Gutiérrez Coronel.

En esta práctica que se realizó, cumplí con el objetivo de determinar la presencia


de floculación de los diferentes tipos de leche, y en la cual aprendí que la prueba
de alcohol es una de las pruebas que más se utilizan para poder determinar si la
leche está en buen o mal estado, ya que cada una de ellas sufren diferentes
cambios, es por ellos que las muestras fueron 4 haciéndolo por duplicado.

Las muestras leche de tetra pack, leche bronca y última muestra se encontraba
con 50 % agua y 50 % leche de tetra pack, en cada una de ellas observe que no
había floculación, excepto en una muestra de leche acidificada se notaba una
mínima cantidad de floculación, en la cual comprendí que quizá estaba tantito
acida, pero en la leche bronca si hubo floculación esto indica que la leche esta
acida, pero en las demás muestras observe que no hubo presencia de floculación,
lo cual me indico que sus niveles de acidez están bien, de igual manera la leche
era apta para poder ser consumida.

Cuando hay presencia de floculación nos indica que la leche no es apta para ser
consumida o ya no puede ser utilizada en la industria de alimentos, pero de
manera viceversa cuando no hay presencia de floculación esa leche si puede ser
usada de manera industrial, y además también investigue y comentan que cuando
hay floculación en la leche es por cuestiones de la alimentación de la vaca, por
cuestiones genéticas o porque hubo alguna contaminación bacteriana después del
ordeño.

Para mí, como futura ingeniero es muy importante poder saber y entender cuáles
son los métodos o pruebas que se deben realizar a los productos lácteos para
determinar si son aptos para el consumo o no, de esta manera poder evitar daños
y pérdidas para la empresa. Así como también es importante saber cuáles son los
principales factores que afectan a la leche y hacen que haya presencia de
floculación

José Francisco Méndez Lamadrid:

En esta práctica no nos demoramos mucho ya que es algo muy sencillo, lo único
que teníamos que hacer era determinar la presencia de floculación debidas a
cambios que ha sufrido la leche en algunas propiedades fisicoquímicas, lo cual a
mi parecer si se cumplió con el objetivo establecido, ya que pudimos observar la
floculación de cada una de las muestras, principalmente a las que le les
adicionamos ácido acético (vinagre), los cuales cuajaron o flocularon casi al
instante.

Esta prueba se realiza con el fin de determinar la estabilidad de la leche al


tratamiento térmico e indirectamente puede relacionarse con la acidez
desarrollada en la leche, en una empresa láctea esta prueba se realiza
diariamente y a todos los proveedores, ya que es una prueba de recepción, es
decir de ella depende la aceptación o el rechazo de la materia prima.

Esta prueba es ampliemente conocida en el medio y consiste en mezclar


apoximadamente 2 ml de alcohol etílico al 68-70 % por cada 2 ml de leche,
observando la presencia o ausencia de floculación, en caso positivo la leche es
rechazada.

El alcohol actua deshidratando los coloides de proteínas, los factores que afectan
esta prueba son: -Leches con elevada carga bacteriana por malas condiciones de
refrigeración o falta de condiciones higiénicas. - Leches de descomposición
anormal como por ejemplo el exceso de albumínas. - Leches con desequilibrio
salino.

Además cabe hacer mención que es una de las pruebas de plataforma o de cajón
en lácteos sirven como criterio en la determinación de la calidad de la leche y el
resultado se traduce en el precio al cual se está pagando la leche. El número de
pruebas de plataforma en la leche es muy variado. Sin embargo, entre más
pruebas se realicen mayor será la información disponible y por lo tanto el criterio
tendrá que ser más acertado para el destino de esa leche.

Marlenn del Rocío Pérez López:

La calidad de la leche comercial y de sus derivados elaborados en una industria


láctea, depende directamente de la calidad del producto original o materia prima,
proveniente de las zonas de producción y de las condiciones de transporte,
conservación y manipulación en general hasta la planta. Por lo tanto, el éxito y
buen nombre de la industria y en última instancia la calidad del producto que llega
al consumidor, dependen del control que se lleve sobre la leche cruda. En esta
práctica nos enfocamos a la prueba del alcohol comúnmente empleada en las
industrias lácteas con el propósito de establecer la calidad sanitaria.

Las pruebas de plataforma específicamente en lácteos sirven como criterio en la


determinación de la calidad de la leche y el resultado se traduce en el precio al
cual se está pagando la leche. El número de pruebas de plataforma en la leche es
muy variado. Sin embargo, entre más pruebas se realicen mayor será la
información disponible y por lo tanto el criterio tendrá que ser más acertado para el
destino de esa leche.

En esta práctica se realizó una prueba de alcohol que nos permitió detectar de
forma rápida y cualitativamente la termo estabilidad de una leche cruda. El alcohol
que se agregó a la leche provoca la precipitación de las micelas presentes en
ésta, cuando es afectada la termo estabilidad. Se considerará positiva la prueba si
se observan partículas coaguladas de caseína (cuajada) en el tubo dosificador o
en la pared del tubo de ensayo, por lo que la leche no podrá ser aceptada.

Los resultados obtenidos en la práctica, indican que dos muestras cumplen con las
normas. En el otro caso de la leche acidificada el resultado indica que existen
problemas de contaminación durante el tiempo que estuvo a temperatura
ambiente, y probablemente también en el recogida y transporte pudiendo ser
también los utensilios que se utilizan para la elaboración de los dichas etapas.

Las pruebas estudiadas nos muestran a cabalidad la calidad de la leche que


muchas veces las consumimos.

Se recomienda evaluar las medidas de higiene necesarias que los en todo lo que
concierne para obtener una leche de calidad durante el proceso de la obtención
leche, para disminuir las cargas microbiológicas y cumplir con las normas
establecidas y asegurarla salud del consumidor.

Erick Yael Cueto Vázquez

Prueba de alcohol: Se definió como estabilidad de la leche a la prueba de alcohol


como Con los resultados del presente estudio se concluye que no existiría una
razón justificada de la concentración de etanol a 70% en la prueba de recepción
de leche, puesto que el tiempo de resistencia a la coagulación de las proteínas a
temperaturas de 135ºC varía para una prueba con igual concentración de etanol.

Sin embargo, no se determinó una correlación significativa entre prueba de alcohol


y termo estabilidad, por lo tanto, se acepta la hipótesis planteada en el estudio. La
máxima concentración de la solución de etanol que no produce coagulación
obteniéndose un valor promedio para la totalidad de las muestras.
El porcentaje de muestras que fueron positivas a la prueba de alcohol con las
distintas concentraciones de etanol utilizadas a nivel de recepción de leche.

Al utilizar una mayor concentración de etanol en la prueba, se producirá una


mayor desestabilización de las proteínas, por la modificación de la constante
dieléctrica del medio, modificando así la carga de las proteínas.

Además, determinaron que a mayor contenido de Ca+2 en la leche se produce


menor termo estabilidad por alteraciones del balance salino de ella.

El análisis estadístico indicó que no existen diferencias significativas (p> 0,05)


entre predios y entre muestras en la prueba de alcohol.

La prueba de alcohol se utiliza en la industria lechera como prueba de recepción


de leche a fin de medir su termo estabilidad; la concentración de etanol
recomendada inicialmente fue de 68% v/v, la cual ha sido aumentada por las
industrias hasta 78% (v/v), lo cual podrían producirse rechazos de leche no
justificadamente, ya que desde el punto de vista de la calidad higiénica y
composicional no presentan problemas.

Nancy Verónica Espinosa López

En esta práctica nuestro trabajo fue realizar una prueba del alcohol en diferentes
tipos de leche siendo esta una prueba sencilla, ya que solo necesitamos de
alcohol etílico al 70 % V/V y en este caso utilizamos 10 ml de leche, observando la
presencia o ausencia de floculación, en caso de que la presencia de floculación
sea positivo la leche es rechazada.

La prueba del alcohol es usada desde siempre, como prueba


presuntiva preliminar para establecer estabilidad de la leche a los tratamientos
térmicos, sin embargo no es por sí sola definitiva; nos dice que también se
recomienda hacerla junto a la prueba de estabilidad por ebullición.

Al realizar esta práctica podremos observar que el alcohol actúa deshidratando los
coloides de proteínas, los factores que afectan esta prueba los podemos dividir en
tres grupos:

1) Leches con elevada carga bacteriana por malas condiciones de refrigeración o


falta de condiciones higiénicas

2) Leches de composición anormal (ejemplo, exceso de albúminas)

3) Leches con desequilibrio salino.

El objetivo de esta revisión fue intentar aclarar los factores que afectan la
estabilidad de esta prueba en leche de origen bovino (entera, bronca y tetra pack),
haciendo hincapié en el desequilibrio salino. Se considerará positiva la prueba si
se observan partículas coaguladas de caseína (cuajada) en el tubo dosificador o
en la pared del tubo de ensayo, por lo que la leche no podrá ser aceptada.

En nuestro caso realizamos muestras por duplicado en la cual observamos la


presencia de floculación en solo uno de nuestros tubos en la leche bronca, que se
pudo observar a simple vista ya que en este identificamos pequeños grumos en la
leche, siendo esto presencia de floculación y dándonos como conclusión que
nuestra leche bronca contaba con alguna carga bacteriana.

Yalia Etelbina López Cruz

En mi opinión esta práctica me sirvió para conocer de una manera rápida el grado
de conservación de la leche, ya que añadiendo alcohol a las distintas leches pude
darme cuenta, que la leche tetra pack no hubo floculación es decir que no se
coagulo mientras que la leche bronca y la acidificada si hubo dicha floculación, y
esto se debe a que las características propias de la leche normalmente no se
coagula con la utilización de alcohol al 70% pero al disminuirse su grado de
conservación por efecto de la temperatura, acidez, o incluso por un mal ordeño
etc. ésta va a coagular al mezclarse una determinada cantidad de la solución de
alcohol al 70% con otra similar de leche.

Entonces, Aprendí que Si no hay formación de grumos, significa que puede


utilizarse en la mayoría de los procesos a los que se desee destinar, porque esta
es de buena calidad, y si hay formación de grumos en esta leche se presume un
grado bajo de conservación, es decir que es de mala calidad y que contienen un
exceso de albúmina por causas fisiológicas (como por ejemplo los calostros) o
patógenas (en el caso de las mastitis).

Gracias a que pude determinar la floculación en la leche pude ver su calidad, así
mismo pude concretar con el objetivo.

La prueba del alcohol es usada en la industria láctea como prueba presuntiva


preliminar para establecer estabilidad de la leche a los tratamientos térmicos.

El incremento de calcio iónico (forma soluble) a principios y finales de la lactancia


es uno de los factores de disminuye la estabilidad de la leche frente a la prueba
del alcohol. Por tal razón los resultados de esta prueba la leche bronca fue la que
era de mala calidad.

Por último aprendí que la floculación aglutina sólidos en suspensión, provocando


su precipitación y eso hace que se cuaje la leche.
BIBLIOGRAFÍA

1. ESPEJO, I. 2000. Calidad higiénica y composicional de la leche


cruda de seis predios de alta producción. Sector de Máfil. Tesis Ing. Alim.,
Universidad Austral de Chile, Facultad Cs. Agrarias, Valdivia.

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5. ZADOW, J. 1993a. The rate of addition of alcohol has a major effect on


the alcohol stability of skim milk. Aust. J. Dairy Technol.

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