Вы находитесь на странице: 1из 12

БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 12, с. 1580 – 1591

УДК 577.367

НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ ЛОВУШКИ: МЕХАНИЗМЫ ОБРАЗОВАНИЯ, РОЛЬ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

Обзор

© 2014

Н.В. Воробьева 1 * , Б.В. Пинегин 2

1 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, 119991 Москва; электронная почта: nvvorobjeva@mail.ru 2 Институт иммунологии ФМБА России, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24/2

Поступила в редакцию 05.07.14

В обзоре представлены современные данные, касающиеся уникального механизма клеточной смерти, ха рактерного для нейтрофилов (НЕТоза). НЕТоз представляет собой процесс, при котором происходит выб рос из клеток фибрилл хроматина с адгезированными к ним бактерицидными компонентами гранул, ядра и цитоплазмы (нейтрофильные ловушки). Состав ловушек определяет их бактерицидные, фунгицидные, антипротозойные и антивирусные свойства. В связи с этим их образование рассматривается как важная от ветная реакция иммунной системы на патогены. С другой стороны, было показано, что НЕТоз является этиологическим фактором многих воспалительных и аутоиммунных заболеваний, а также участвует в регу ляции ряда неинфекционных процессов. В обзоре подробно рассматриваются молекулярные механизмы НЕТоза, его роль в защите хозяина от патогенов, а также участие в неинфекционных, воспалительных и ау тоиммунных процессах. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нейтрофил, нейтрофильные внеклеточные ловушки, НЕТоз, аутоиммунные заболе вания, воспаление.

В 2004 г. Циклинский с соавт. [1] обнаружил, что нейтрофилы могут убивать патогены вне клеток, выбрасывая т.н. «нейтрофильные вне клеточные ловушки» (Neutrophil Extracellular Traps, NETs). Поскольку в процессе образова ния ловушек нейтрофилы утрачивают также свою жизнеспособность, то в 2007 г. Стейнберг и Гринштейн [2] назвали такую форму клеточной гибели нейтрофилов «НЕТозом». Показано, что бактерицидность ловушек связана с их уникаль ным составом: ДНК, компоненты гранул, гисто ны и некоторые цитоплазматические белки. Следует отметить, что образование ловушек бы ло показано также для эозинофилов [3], тучных клеток [4], гетерофилов цыпленка [5] и макро фагов/моноцитов [6]. Помимо человека и мы

[6]. Помимо человека и мы Принятые сокращения: АПК –
[6]. Помимо человека и мы Принятые сокращения: АПК –
[6]. Помимо человека и мы Принятые сокращения: АПК –
[6]. Помимо человека и мы Принятые сокращения: АПК –

Принятые сокращения: АПК – антигенпрезентиру ющая клетка; ИФН – интерферон; ЛПС – липополисаха рид; МНС – главный комплекс гистосовместимости; ПДК – плазмоцитоидная дендритная клетка; ЦИК – циркулиру ющий иммунный комплекс; ФНО – фактор некроза опу холей. * Адресат для корреспонденции.

шей, НЕТоз был описан и у других животных, например, быков, лошадей, рыб, кошек, кроли ков и беспозвоночных. Выброс нуклеиновых кислот клетками эноцитоидами восковой моли Galleria mellonella является важным защитным механизмом от патогенов у насекомых [7]. Об разование внеклеточных филаментов ДНК бы ло обнаружено также у растений и, как предпо лагают, этот механизм играет существенную роль в защите кончиков корней от грибковых инфекций [8, 9]. В связи с тем, что выброс хро матина во внеклеточное пространство осущест вляется не только нейтрофилами, но и другими типами клеток, а также в связи с распространен ностью этого явления среди позвоночных, бес позвоночных и растений, этот механизм полу чил более широкое название ЭТоз (от англ. Extracellular Traps (ETs)). В настоящем обзоре рассмотрен механизм образования ловушек нейтрофилами – НЕТоз. Морфология ловушек. Ультраструктура лову шек уникальна. Их остов образован хроматино выми филаментами диаметром ~15–17 нм [1],

1580

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1581

состоящими из модифицированных нуклеосом [10]. Этот остов усеян глобулярными структура ми диаметром около 50 нм, представляющими собой белки гранул и других клеточных компарт ментов [1]. Удивительно, что ловушки могут иметь морфологию не только вытянутых в дли ну тонких филаментов, но и выглядеть как обла коподобные структуры, занимающие площадь, в 10–15 раз превышающую первоначальный размер клетки. Предполагают, что такая морфо логия ловушек встречается in vivo в условиях достаточного межклеточного пространства, на пример, в легочных альвеолах. Механизм образования ловушек. Ловушки образуются в результате уникальной формы кле точной гибели, при которой первоначально происходит утрата всех внутриклеточных мемб ран, за которой следует нарушение целостности цитоплазматической мембраны. На сегодняш ний день о механизмах НЕТоза известно крайне мало. Это связано в первую очередь с тем, что нейтрофилы являются короткоживущими, тер минально дифференцированными, не способ ными к делению лейкоцитами, генетические манипуляции с которыми затруднены. Кроме того практически отсутствуют линии нейтрофи лов, полноценно отражающие физиологию пер вичных клеток крови. Тем не менее известно, что в процессе НЕТоза, нейтрофилы подвергаются серьезным морфоло гическим изменениям (рисунок, см. цветную вклейку). Так, через несколько минут после ак тивации клетки распластываются и прочно прикрепляются к субстрату. В течение следую щего часа ядро утрачивает сегментарную струк туру, хроматин деконденсируется, а внутренний и внешний листки ядерной мембраны отделя ются друг от друга. Одновременно происходит распад гранул. Через 1 ч ядерная мембрана рас падается на отдельные везикулы, а нуклеоплаз ма и цитоплазма сливаются в гомогенную массу. Наконец, клетки округляются и, видимо, сокра щаются до тех пор, пока цитоплазматическая мембрана не разрывается, после чего содержи мое клетки «извергается» во внешнее простран ство, образуя пучки тонких филаментов, то есть ловушки. Состав ловушек. Удивительно, что даже пос ле перемешивания содержимого всех клеточных компартментов в составе ловушек обнаружива ют не более 30 различных белков (табл. 1) [10]. Большая часть этих белков гранулярного проис хождения, только несколько типов белков попа дает в ловушки из ядра (гистоны) и совсем не большое количество – из цитоплазмы [10]. В не которых работах было показано, что ловушки образуются живыми клетками, эозинофилами и

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

нейтрофилами, в результате выброса во внекле точное пространство ДНК митохондрий [3, 11]. Однако, следует отметить, что митохондрий в нейтрофилах крайне мало [12], поэтому митохонд риальной ДНК, обнаруженной в этих экспери ментах, было в 100 000 раз меньше, чем ядерной. Недавно был описан новый уникальный ме ханизм образования ловушек, при котором ци топлазматическая мембрана оставалась интакт ной, а клетки сохраняли свою жизнеспособ ность [13]. В этих экспериментах нейтрофилы стимулировали Staphylococcus aureus в течение 5–60 мин (обычно НЕТоз развивается в течение 3–4 ч) и наблюдали выброс из клеток везикул с включенными в них деконденсированным хро матином и бактерицидными белками гранул. Все эти компоненты перемешивались и форми ровали ловушки во внеклеточном пространстве. Индукторы НЕТоза – это многие физиологи ческие стимулы, к которым относятся бактерии, грибы, простейшие и вирусы (табл. 2). НЕТоз могут индуцировать такие активные формы кислорода (АФК) как пероксид водорода [14], антитела [15] и антиген антительные комплек сы [16, 17], микробные компоненты, липополи сахарид (ЛПС) [18, 19], белок М1 из Streptococcus pyogenes [20] и липофосфогликаны из Leishmania amazonensis [21]. Ловушки также могут быть ин дуцированы тромбоцитами, активированными TLR4 [22]. Показано, что для индукции НЕТоза необхо димо прикрепление клеток к субстрату, при ко тором активируются МАС 1 интегриновые ре цепторы [23]. В суспензии нейтрофилы тоже могут образовывать ловушки, но гораздо слабее. По видимому, в этой ситуации срабатывает ме ханизм блокирования НЕТоза (или отсутствия стимуляции), предохраняющий организм от возможного тромбообразования в кровеносных сосудах с участием ловушек. Молекулярные механизмы образования лову шек. Как было показано ранее, процесс образо вания ловушек происходит постепенно и вклю чает несколько последовательных стадий: 1) гене рацию АФК; 2) транспорт нейтрофильной элас тазы (НЭ) и, позднее, миелопероксидазы (МПО) из гранул в ядро; 3) модификацию гистонов; 4) и, наконец, разрыв цитоплазматической мемб раны и выброс хроматина. На всех перечислен ных стадиях стоит остановиться немного подроб нее, поскольку все они составляют совершенно уникальный механизм гибели клеток, НЕТоз. Итак, было показано, что для НЕТоза необ ходимы АФК. У нейтрофилов АФК образуются в процессе т.н. «дыхательного взрыва» при учас тии ферментного комплекса, NADPH оксидазы [24]. Этот многокомпонентный комплекс соби

1582

ВОРОБЬЕВА,

ПИНЕГИН

Таблица 1. Белки, ассоциированные с ловушками [10]

Клеточная локализация

Название белка

Название гена

Гранулы

нейтрофильная эластаза (НЭ) лактоферрин азуроцидин катепсин G миелопероксидаза (МПО) протеиназа 3 лизоцим С дефензины 1 и 3 BPI (катионный бактерицидный/увеличивающий проницаемость белок) кателицидин hCAP18/LL 37

ELA2

LTF

AZU1

CTSG

MPO

PR3

LYZ DEFA 1 и 3 BPI CAMP

Ядро

гистон Н2А гистон Н2В:

H2A

а) гистон Н2В б) гистон Н2В подобный гистон Н3 гистон Н4 миелоидный ядерный дифференцировочный антиген

H2B

H2B

H3

H4

MNDA

Цитоплазма

S100 кальций связывающий белок А8 S100 кальций связывающий белок А9 S100 кальций связывающий белок А12

S100A8

S100A9

S100A12

Цитоскелет

актин (β и/или γ) миозин 9 α актинин (1 и/или 4) пластин 2 цитокератин 10

ACTB, ACTG1 MYH 9 ACTN1, ACTN4

LCP1

KRT 10

Пероксисомы

каталаза

CAT

Гликолитические

α энолаза транскетолаза

ENO1

ферменты

TKT

рается при активации в мембранах специфичес ких гранул и на цитоплазматической мембране нейтрофилов и осуществляет перенос электро нов от расположенного в цитоплазме NADPH через мембрану на молекулярный кислород. Кислород далее подвергается одноэлектронно му восстановлению, ведущему к образованию супероксид анион радикала (О ). О в свою очередь претерпевают окислительно восстано вительные превращения, спонтанно или же при участии супероксиддисмутазы, с образованием пероксида водорода. Эти первичные АФК (О и Н 2 О 2 ) могут подвергаться дальнейшей транс формации, в результате которой образуются бо лее активные метаболиты, например, гидрок сильный радикал (ОН ) и хлорноватистая кис лота (HOCl). Хлорноватистая кислота обладает сильнейшими микробицидными свойствами и образуется при участии миелопероксидазы, фермента азурофильных гранул. Участие АФК в образовании ловушек было доказано не только фармакологически, но и при изучении нейтрофилов пациентов, страдающих

2

2

2

хронической гранулематозной болезнью (ХГБ). Эта патология обусловлена мутациями субъеди ниц NADPH оксидазы, приводящими к сборке нефункционального или малофункционального ферментного комплекса, не способного синте зировать АФК. Люди с такими мутациями всю жизнь страдают от рецидивирующих инфекций

[25, 26], а их нейтрофилы не образуют нейтро фильные ловушки [14]. Однако, было обнаруже но, что добавление Н 2 О 2 к нейтрофилам паци ентов с ХГБ восстанавливает их способность

выбрасывать ловушки [14]. Таким образом, АФК в цепи передачи информации находятся между ферментным комплексом и последующи ми медиаторами. Молекулы, участвующие в передаче сигнала от рецепторов к NADPH оксидазе, были обна ружены в результате скрупулезного ингибитор ного анализа, проведенного в лаборатории Цик линского [27]. Дело в том, что наиболее эффек тивным и часто используемым активатором НЕТоза является форбол 12 миристат 13 аце тат (ФМА), непосредственный стимулятор про

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1583

Таблица 2. Микроорганизмы и химические факторы, индуцирующие образование ловушек [14]

Микроорганизмы

Химические факторы

Aspergillus fumigatus (конидии и гифы) Candida albicans (конидии и гифы) Cryptococcus gattii Cryptococcus neoformans Eimeria bovis Enterococcus faecalis Escherichia coli Haemophilus influenzae Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Leishmania amazonensis L. donovani, L. major, L. chagasi Listeria monocytogenes Mannheimia haemolytica и лейкотоксин Mycobacterium tuberculosis, M. canettii Serratia marcescens Shigella flexneri Staphylococcus aureus Streptococcus (группа А GAS) Streptococcus dysgalactiae Streptococcus pneumoniae Toxoplasma gondii Yersinia enterocolitica ВИЧ 1

аутоантитела (анти LL 37/анти HNP) ионы кальция глюкозооксидаза GM CSF + C5a GM CSF + ЛПС пероксид водорода IFN α + C5a IFN γ + C5a IL 8 липополисахарид (ЛПС) белок M1/белок М1 + фибриногеновый комплекс NO форбол 12 миристат 13 ацетат (ФМА) ФМА + иономицин фактор активации тромбоцитов

TLR4

TNF статины δ токсин из Staphylococcus epidermidis

теинкиназы С. Было показано, что при актива ции НЕТоза с помощью ФМА индуцируется Raf MEK ERK сигнальный каскад [27], а также Rac2 (малая ГТФаза Rho семейства) опосредо ванный путь [19]. Другим характерным свойством НЕТоза яв ляется утрата хроматином сегрегации на эу и гетерохроматин [14]. Этот процесс происходит при участии нейтрофильной эластазы и миело пероксидазы, ферментов азурофильных гранул. Оба фермента попадают из гранул в ядро на са мых ранних этапах НЕТоза, пока еще не извест ным способом. Первой в ядро транспортируется нейтрофильная эластаза, где она катализирует расщепление линкерного гистона Н1 и модифи цируют коровые гистоны [28]. Показано, что эластаза крайне важна для образования ловушек, поскольку мыши, дефицитные по этому фер менту, не были способны к НЕТозу [28]. МПО мигрирует в ядро позднее, и ее функция связана

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

с усилением деконденсации хроматина, видимо, благодаря синтезу хлорноватистой кислоты [28]. Следует заметить, что пациенты, имеющие му тации гена МПО, не способны образовывать полноценные ловушки [29], видимо, из за не достаточного количества хлорноватистой кис лоты [30]. Кроме частичного расщепления гистонов эластазой и МПО, происходит еще одна моди фикация, усиливающая деконденсацию хрома тина. После соответствующей активации в нейтрофиле индуцируется пептидиларгинин дезаминаза 4 (PAD4), которая катализирует де заминирование аргининовых остатков в цитрул линовые в трех из четырех коровых гистонов, что ведет к ослаблению их связывания с ДНК. В ряде работ было показано, что в составе лову шек, а также в деконденсированном хроматине, гистоны цитруллинированы [18, 23, 31]. Роль этого процесса в НЕТозе была доказана фарма

1584

ВОРОБЬЕВА,

кологически на клеточных линиях, образующих небольшое количество ловушек. Кроме того мыши, мутантные по PAD4, не были способны к цитруллинированию гистона Н3, и как след ствие, не образовывали ловушки [32, 33]. Недавно было обнаружено, что для НЕТоза необходима аутофагия, и в пути передачи ин формации этот механизм подключается после NADPH оксидазы [34]. Было замечено, что сти муляция нейтрофилов с помощью ФМА приво дит к образованию огромных вакуолей, сходных с аутофагосомами. Однако участие аутофагии в НЕТозе на сегодняшний день изучено не доста точно. В работах Неели и соавт. [18, 23] было впер вые обнаружено, что немаловажную роль в регу ляции НЕТоза нейтрофилов человека играет ци тоскелет. Ранее показано, что тубулиновый ци тоскелет определяет направление движения гра нул при экзоцитозе и фагоцитозе нейтрофилов. В своей работе Неели и соавт. [18] показали, что деполимеризация тубулинового цитоскелета нокодазолом останавливала разрушение ядер ной мембраны при индукции НЕТоза липопо лисахаридом (ЛПС), и как следствие, подавляла образование ловушек. Кроме того в этой же ра боте было доказано участие в НЕТозе актиново го цитоскелета, поскольку добавление к нейтро филам цитохалазина D также приводило к по давлению выброса хроматина [18]. Полученные в этих работах данные можно бы было интерп ретировать следующим образом. На сегодняш ний день все еще не ясно, каким образом элас таза и МПО попадают в ядро для осуществления деконденсации хроматина. Вполне вероятно (предположение авторов), что именно цитоске лет обеспечивает транспорт азурофильных гра нул по направлению к ядру, после чего происхо дит, пока еще не известным способом, переход ферментов из одного компартмента в другой. Неели и соавт. [23] предположили, что MAC 1 интегрины, активируемые при НЕТозе, могут инициировать соответствующую перестройку цитоскелета. Была высказана гипотеза о регуляторной ро ли цитоскелета в процессе сокращения клетки на терминальной стадии НЕТоза, выбросе хро матина за ее пределы. Однако это предположе ние требует серьезной доказательной базы. Ингибиторные пути. В последнее время на копилось большое количество фактов, указыва ющих на негативную роль НЕТоза для организ ма хозяина (этот вопрос будет освещен в соответ ствующем разделе). Показано, что ловушки мо гут вызывать серьезные локальные воспалитель ные процессы и аутоиммунные заболевания. В связи с этим весьма актуальными являются ме

ПИНЕГИН

ханизмы, способные негативно регулировать НЕТоз. Недавно было показано, что белок SerpinB1, являющийся ингибитором таких се риновых протеаз, как эластаза, катепсин G и протеиназа 3, транспортируется из цитоплазмы в ядро на ранних стадиях НЕТоза, где блокирует деконденсацию хроматина [35]. Обнаружен еще один фактор, способный ингибировать НЕТоз – MUNC13 4, являющий ся членом семейства белков MUNC13 [36]. Этот ранее описанный белок участвует в генерации АФК, экзоцитозе азурофильных гранул и созре вании фаголизосом у нейтрофилов. Кроме того сывороточная эндонуклеаза, ДНКаза1 может катализировать деградацию выброшенного из нейтрофилов хроматина и ог раничивать НЕТоз [37]. Таким образом, регуля торные пути, ингибирующие образование лову шек, могут ограничивать повреждения, вызван ные чрезмерной активацией нейтрофилов. Антимикробная активность ловушек. Извест но, что основной функцией нейтрофилов явля ется устранение патогенов. По представлению Циклинского, ловушки эволюционно разви лись для сдерживания инфекции, благодаря зах вату патогенов и ограничению их распростране ния, путем инактивации факторов вирулентнос ти, а также уничтожению патогенов [1]. Захват микроорганизмов ограничивает их распространение из первичного очага инфек ции. Предполагают, что патогены попадают в ловушки благодаря электростатическим взаи модействиям, возникающим между отрицатель но заряженными фибриллами хроматина и по ложительно заряженной поверхностью бакте рий [38]. Действительно, было показано, что па тогены, имеющие капсулы или способные изме нять свой поверхностный заряд, не связываются ловушками [39]. Еще одним способом избежать попадания в ловушки является синтез и присое динение к поверхности патогена нуклеаз [40]. Так, стрептококки группы А (GAS) Streptococcus pyogenes [41], виды рода Pneumococcus и Staphylo coccus aureus [42] синтезируют эндонуклеазы, высвобождающие их из ловушек и позволяю щие проникать в более глубокие органы [43]. Кроме того ловушки могут инактивировать микробные белки, называемые факторами ви рулентности, способные изменять функции клеток хозяина. Было показано, что эластаза в составе ловушек специфически катализирует расщепление факторов вирулентности Shigella flexneri, Salmonella typhimurium и Yersinia enteroco litica [1, 44]. В составе ловушек были также обна ружены катепсин G и протеиназа 3, сходные с эластазой и способные расщеплять факторы ви рулентности других классов патогенов [45].

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1585

Есть данные, что ловушки включают белки, способные убить или ингибировать патогены. К ним относятся такие ферменты, как лизоцим и протеазы, антимикробные пептиды (белок BPI и дефензины), хелаторы ионов (кальгранулин), и, что интересно, гистоны. По видимому, анти микробная активность ловушек обусловлена совместным действием этих компонентов, а также их высокой локальной концентрацией на фибриллах хроматина. В составе ловушек были также обнаружены компоненты, способные действовать самостоя тельно. Так, Паркер и соавт. [46] показали, что активности МПО вполне достаточно, чтобы уничтожить Staphylococcus aureus. В ловушках был обнаружен еще один белок, кальгранулин, обладающий фунгицидной активностью [10, 47]. Этот белок хелатирует цинк, необходимый для роста грибов, и, как оказалось, эффективно сдерживает рост Candida albicans и виды рода Aspergillus. Наконец, была показана важная роль гистонов для киллинга патогенов. В экспери ментах, связанных с добавлением антител к гис тонам, было обнаружено ингибирование кил линга различных классов микроорганизмов, обусловленного образованием ловушек [1]. Эти факты подтвердили предположение о сильней ших бактерицидных свойствах гистонов. Кроме активности по отношению к бактери ям, грибам и паразитам, ловушки обладают ан тивирусным действием. Недавно Саито и соавт. показали [48], что ловушки индуцируются виру сом иммунодефицита человека 1 (ВИЧ1), види мо, через эндосомальные TLR7 и TLR8 рецеп торы, чувствительные к вирусной РНК. Инте ресно, что вирионы, связавшиеся ловушками, были полностью инактивированы, а процесс их подавления блокировался добавлением ДНКазы, ведущей к деградации фибрилл ДНК [48]. Таким образом, в системе in vitro было пока зано, что ловушки ингибируют грамположи тельные и грамотрицательные бактерии, грибы, вирусы и паразитов. Однако, данные о действии ловушек в системе in vivo не так многочисленны. Известно, что новорожденные довольно чувствительны к инфекциям, и было показано, что образование ловушек у них снижено [49, 50, 51]. Существенно, что пациенты с мутациями в генах, кодирующих NADPH оксидазу, МПО, эластазу, то есть дефицитные по главным действующим медиаторам НЕТоза, страдают от рецидивирующих инфекций. Однако, посколь ку все эти компоненты участвуют также в таких эффекторных функциях нейтрофила, как фаго цитоз и дегрануляция, то предстоит еще выяс нить их специфический вклад в каждую из этих функций.

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

Ярким примером роли ловушек в подавле нии инфекции является случай, приведенный в работе Бианчи и соавт. [26]. В этой публикации был описан пациент с ХГБ, страдающий тяже лым аспергиллезом, нейтрофилы которого были неспособны к киллингу гиф ряда штаммов Aspergillus из за невозможности его клетками образовывать ловушки. Однако, после генной терапии функция NADPH оксидазы и способ ность образовывать ловушки была восстановле на, и пациент практически поправился. Участие ловушек в воспалительных процессах. За последнее десятилетие накопилось достаточ но большое количество фактов, указывающих на негативное влияние нейтрофильных лову шек. Так, было описано несколько воспалитель ных процессов, в которых НЕТоз играет немало важную роль как негативный регулятор. К ним можно отнести такие заболевания легких, как острый респираторный дистресс синдром взрос лых (acute respiratory distress syndrome), острое повреждение легких (acute lung injury), кистоз ный фиброз (cystic fibrosis). В таком процессе как тромбообразование, НЕТоз играет двоякую роль, как позитивную, так и негативную. Оста новимся лишь на некоторых из перечисленных патологий, происходящих с участием НЕТоза. Кистозный фиброз (муковисцидоз). Кистоз ный фиброз представляет собой тяжелое наслед ственное заболевание, обусловленное мутацией гена CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conduc tance regulator), и характеризуется поражением желез внешней секреции, тяжелыми нарушени ями органов дыхания и желудочно кишечного тракта. Мутации этого гена приводят к наруше нию нормального транспорта ионов Cl через эпителиальный слой клеток, и, как следствие, вызывают дегидратацию, сгущение слизистых секретов желез и затруднение их оттока. В слу чае легочной формы кистозного фиброза повы шенная вязкость слизи способствует колониза ции органа такими бактериями, как Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae и Pseudomonas aeru ginosa. Другим фактором, ответственным за высо кую вязкость слизи, является обнаруженное в мокроте больных муковисцидозом большого количества молекул ДНК [52], что коррелирует с высокой концентрацией нейтрофилов и нали чием нейтрофильных ловушек в легких [53]. Бы ло показано, что присутствие ловушек при этом заболевании никак не влияло на количество па тогенов, более того, даже увеличивало их титры в слизи. Интересно, что больным муковисцидозом для снижения вязкости слизи проводят терапев тические курсы с использованием рекомбинант

1586

ВОРОБЬЕВА,

ной ДНКазы. Однако, как было показано, ре комбинантная ДНКаза способна катализиро вать расщепление свободной ДНК, а не ДНК белковых комплексов, характерных для лову шек. В связи с этой проблемой обсуждается воз можная позитивная роль эластазы в этом про цессе. Так, по мнению Папаяннопулос и соавт. [54], эластаза должна способствовать растворе нию секрета, деградируя гистоны и обеспечивая доступ хроматина для ДНКазы. С другой сторо ны, образовавшаяся свободная эластаза и дру гие протеолитические компоненты ловушек мо гут повреждать ткани легких и усиливать тем са мым иммунный ответ. Возможно, что для лече ния больных с таким заболеванием, как муко висцидоз, необходима комплексная терапия, включающая как рекомбинантную ДНКазу, так и ингибиторы протеаз. Коагуляция (свертываемость крови). Коагу ляция представляет собой процесс формирова ния сгустков крови внутри кровеносных сосу дов, направленный на снижение кровопотери при травмах, а также способствующий ограни чению распространения микробной инфекции в организме. Было показано, что в процессе формирования сгустка при коагуляции в качест ве позитивного фактора принимают участие нейтрофильные ловушки. Вместе с тем их избы точное образование может привести к чрезмер ной коагуляции, способной блокировать кро воснабжение жизненно важных органов и тяже лой ишемии. Известно, что при формировании сгустка как артериальной, так и венозной крови, на эн дотелии сосудов адгезируются нейтрофилы. В местах прочной адгезии они выбрасывают хро матиновые фибриллы (ловушки), образующие пробки, стимулирующие последующее тромбо образование [55]. Эластаза и катепсин G, адсор бированные на фибриллах хроматина и являю щиеся сериновыми протеазами, деградируют ингибиторы коагуляции. В подтверждение этого механизма было показано, что у мышей, дефи цитных по обоим ферментам, артериальное тромбообразование уменьшалось благодаря снижению образования сгустков крови и поли меризации фибрина. Такой же эффект наблюда ли у мышей после введения им антител к компо нентам ловушек [56]. Следует отметить еще один удивительный факт, связанный с действием ловушек. Так, при инфицировании мышей Escherichia coli изоляция бактерий в микрососудах печени происходила луч ше у животных с функциональным НЕТозом, чем у мышей, получавших антитела к ДНК, бло кирующих НЕТоз [56]. Эти эксперименты явля ются прямым доказательством того, что коагу

ПИНЕГИН

ляция при участии НЕТоза снижает распростра нение патогенов в организме хозяина. Таким образом, исходя из представленных фактов, можно сделать заключение, что нейтро филы и их ловушки эффективно взаимодейству ют с факторами коагуляции и эндотелием сосу дов, а такие эффекты ловушек, как бактерицид ность и прокоагуляция могут синергически участвовать в поддержании гомеостаза при инфек ционных заболеваниях, например, при сепсисе. Периодонтит. Еще одной патологией, в ко торой ловушки играют немаловажную роль, яв ляется периодонтит. Периодонтит – это воспа лительное заболевание периодонта, вызванного микроорганизмами, заселившими гингиваль ную полость зуба. Чаще всего периодонтит ассо циирован с бактериями Porphyromonas gingivalis [57], которые при попадании в гингивальную полость зуба привлекают нейтрофилы, которые затем выбрасывают хроматиновые ловушки [58] для предотвращения распространения патогена. Участие ловушек в аутоиммунной патологии. Как и многие физиологические процессы, про текающие в организме, процесс образования ловушек играет не только положительную, но и отрицательную роль. Отрицательная роль лову шек связана с их участием в развитии аутоим мунных заболеваний, основой которых служит самоподдерживающийся адаптивный иммун ный ответ на собственные антигены организма, что приводит к повреждению его клеток и тка ней [59]. Исходно в индукции адаптивного отве та лежит хроническая активация клеток врож денного иммунитета и синтез ими провоспали тельных цитокинов. Одним из главных цитоки нов, активирующих клетки врожденного имму нитета, являются интерфероны (ИФН) I типа. Их синтез в организме строго регулируется. Не достаток ИФН I типа ведет к повышенной склонности к инфекционным заболеваниям и некоторым вида рака; избыток – к развитию ау тоиммунной патологии [16, 17]. ИФН I типа ускоряют созревание антиген презентирующих клеток (АПС), макрофагов и дендритных клеток, повышают на них экспрес сию МНС I и II классов и костимуляторных мо лекул. Особенно сильным является эффект ИФН I типа на В клеточное звено иммунитета. Совместно с IL 6 они индуцируют созревание плазмобластов в зрелые плазматические клетки, стимулирует синтез IgG всех субклассов и син тез аутоантител В1 клетками. ИФН I типа синтезируются практически всеми ядросодержащими клетками организма, но наиболее интенсивно – плазмоцитоидными дендритными клетками (ПДК). Главными ин дукторами их синтеза являются нуклеиновые

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1587

кислоты (НК). В условиях нормально функцио нирующего организма нуклеиновые кислоты всегда в небольшом количестве присутствуют вне клеток. Они могут «вытекать» из апоптоти ческих клеток, несвоевременно убранных мак рофагами с помощью фагоцитоза. НК могут по являться внеклеточно также в результате НЕТоза. Но здоровый организм располагает механизма ми, предохраняющими рецепторы клеток врож денного иммунитета от контакта с НК. Прежде всего НК распознающие домены этих рецепто ров локализуются на внутренней поверхности эндосом клеток врожденного иммунитета и по этому они недоступны для НК. Кроме того, при наличии во внеклеточной среде мощного арсе нала эндонуклеаз, НК практически мгновенно расщепляются при выходе из клеток. В нейтрофилах во вторичных гранулах нахо дится белок кателицидин, hCAP 18, который при активации клетки расщепляется с образова нием катионного пептида LL 37. С помощью электростатических связей этот пептид образует комплексы практически со всеми видами нук леиновых кислот, в том числе, с ауто ДНК и ау то РНК, обладающими выраженными имму ностимулирующими свойствами, в частности, способностью индуцировать синтез ИФН I типа

[60–66].

Пептид LL 37 вызывает агрегацию НК и за щищает их от действия нуклеаз ДНК/РНК, спо собствует эндоцитозу и проникновению НК в эндосомальный отдел дендритных клеток [61], а также входит в состав нейтрофильных внекле точных ловушек [16, 17]. Показано, что фраг менты ловушек, полученных из нейтрофилов, обладают способностью индуцировать синтез ИФН α в культуре плазмоцитоидных дендрит ных клеток (ПДК) [17]. Поэтому есть все осно вания полагать, что НЕТоз играет существенную роль в развитии аутоиммунных заболеваний. При наличии ингибиторов нуклеаз или при сни жении функциональной активности нуклеаз (ДНКазы1) у людей с соответствующей предрас положенностью, ловушки являются источни ком аутоантигенов и вызывают развитие ауто иммунного ответа на ДНК и белки, входящие в их состав [37]. В настоящее время показано об разование ловушек при системной красной вол чанке (СКВ), ANCA васкулитах, диабете II ти па, атеросклерозе, ревматоидном артрите, псо риазе, подагре. Более подробно роль ловушек исследована при СКВ. Как известно, СКВ является иммуно комплексной патологией. В 70 х гг. прошлого ве ка было установлено, что циркулирующие им мунные комплексы (ЦИК) больных СКВ состоят из ДНК/РНК/белка и специфических IgG анти

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

тел к этим компонентам. Сравнительно недавно были выделены ЦИК из сывороток больных СКВ, состоящие только из ДНК и IgG. В составе таких ЦИК всегда обнаруживали пептид LL 37. При добавлении ЦИК, содержащих пептид LL 37, к культуре ПДК происходил выраженный синтез ИФН α. Удаление из ЦИК LL 37 отменяло их способность стимулировать ИФН α [17]. Источником пептида LL 37 в составе ЦИК у больных СКВ являются нейтрофилы. Эти клет ки у больных СКВ имеют существенные отли чия от нейтрофилов здоровых людей. Эти нейт рофилы характеризуются повышенным апопто зом, некрозом и НЕТозом. В то же время фаго цитоз апоптотических нейтрофилов у таких больных существенно понижен. Снижена дегра дация апоптотического материала. На поверхнос ти нейтрофилов выявляется повышенная плот ность молекул LL 37. Другим отличием больных СКВ от здоровых доноров является повышен ный уровень гранулоцитов низкой плотности (LDG) [67]. Эта уникальная субпопуляция нейт рофилов характеризуется незрелым фенотипом (СD14 СD15 + CD16 + CD10 + ), повышенным син тезом ИФН α , ФНО, повышенной экспрессией LL 37, миелопероксидазы, эластазы, катепсина G. От обычных нейтрофилов LDG отличаются вы раженной склонностью к НЕТозу [67, 68]. Помимо антител к различным белкам и НК, в сыворотке больных СКВ выявляются антитела к пептиду LL 37, α дефензинам (HNP) и анти микробным белкам первичных гранул нейтро филов [69]. Анти LL 37 и анти HNP антитела являются мощными индукторами НЕТоза у больных СКВ [17]. Таким образом, частичная расшифровка ме ханизмов развития СКВ и участие в этом про цессе НЕТоза позволяет разработать стратегию лечения таких пациентов. Следует упомянуть, что около 30% больных СКВ вообще не способ ны разрушать ловушки из за низкой активности сывороточной ДНКазы1 (мутации гена), экспрес сии ингибиторов ДНКазы1 или высоких титров аутоантител, защищающих ловушки от деграда ции ДНКазой1 [37, 70]. Было показано [70], что вышеупомянутые группы пациентов обладают более высокими титрами аутоантител и страдают от такого тяжелого сопутствующего заболевания при СКВ, как волчаночный нефрит. Таким обра зом, стратегии, направленные на устранение ло вушек и их компонентов, являются на сегодняш ний день наиболее перспективными в лечении больных системной красной волчанкой. НЕТоз или образование нейтрофильных внеклеточных ловушек является важным стра тегическим ответом иммунной системы на раз нообразные патогены. Такой компонент лову

1588

ВОРОБЬЕВА,

шек, как хроматин, связывает патогены, огра ничивая тем самым их распространение в орга низме хозяина, а бактерицидные белки ядра и гранул эффективно снижают их вирулентность или приводят к их полному уничтожению. Кроме выполнения антимикробной функ ции, ловушки участвуют в регуляции ряда неин фекционных процессов, а также являются этио логическим фактором многих воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Несмотря на то, что с момента первого опи сания НЕТоза A. Циклинским прошло ровно 10 лет, в биологии этого явления остается еще много бе лых пятен. Так, не ясно, посредством каких меха низмов эластаза и МПО попадают в ядро из азуро фильных гранул на начальных стадиях НЕТоза, не ясна роль аутофагии в этом процессе, не по нятно, как клетка выбирает конкретную прог

ПИНЕГИН

рамму, направленную на защиту хозяина от па тогенов: фагоцитоз, дегрануляцию или НЕТоз. Однако можно полагать, что интерес, кото рый в настоящее время вызывает НЕТоз в науч ном сообществе, позволит в ближайшее время ответить на многие неясные вопросы, касающи еся этого уникального процесса.

Авторы выражают искреннюю благодар ность проф., чл. корр. РАН С.А. Недоспасову за организацию этого номера журнала «Биохи мия», посвященного памяти проф. А.А. Ярили на, и за ценные рекомендации при подготовке рукописи данной публикации.

Авторы благодарят Е.С. Шилова за прочте ние текста и сделанные им предложения по его улучшению.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Brinkmann, V., Reichard, U., Goosmann, C., Fauler, B.,

Uhlemann, Y., Weiss, D.S., Weinrauch, Y., and Zychlinsky,

A. (2004) Neutrophil extracellular traps kill bacteria,

Science, 303, 1532–1535.

2. Steinberg, B.E., and Grinstein, S. (2007) Unconventional roles of the NADPH oxidase: signaling, ion homeostasis,

and cell death, Sci. STKE, 379, pe11.

3. Yousefi, S., Gold, J.A., Andina, N., Lee, J.J., Kelly, A.M., Kozlowski, E., Schmid, I., Straumann, A., Reichenbach,

J., Gleich, G.J., and Simon, H. U. (2008) Catapult like

release of mitochondrial DNA by eosinophils contributes to antibacterial defense, Nature Med., 14, 949–953.

4. von Kockritz Blickwede, M., Goldmann, O., Thulin, P., Heinemann, K., Norrby Teglund, A., Rohde, M., and

Medina, E. (2008) Phagocytosis independent antimicro bial activity of mast cells by means of extracellular trap for mation, Blood, 111, 3070–3080.

5. Chuammitri, P., Ostojic, J., Andreasen, C.B., Redmond, S.B., Lamont, S.J., and Palic, D. (2009) Chicken het erophil extracellular traps (HETs): novel defense mecha nism of chicken heterophils, Vet. Immunol. Immunopathol., 129, 126–131.

6. Chow, O.A., von Kockritz Blickwede, M., Bright, A.T., Hensler, M.E., Zinkernagel, A.S., Cogen, A.L., Gallo, R.L., Monestier, M., Wang, Y., Glass, C.K., and Nizet, V. (2010) Statins enhance formation of phagocyte extracellu lar traps, Cell Host Microbe, 8, 445–454.

7. Altincicek, B., Stotzel, S., Wygrecka, M., Preissner, K.T., and Vilcinskas, A. (2008) Host derived extracellular nucle ic acids enhance innate immune responses, induce coagu lation, and prolong survival upon infection in insects, J. Immunol., 181, 2705–2712.

8. Wen, F., White, G.J., VanEtten, H.D., Xiong, Z., and Hawes, M.C. (2009) Extracellular DNA is required for root tip resistance to fungal infection, Plant Physiol., 151, 820–829.

9. Hawes, M.C., Curlango Rivera, G., Wen, F., White, G.J., Vanetten, H.D., and Xiong, Z. (2011) Extracellular DNA:

the tip of root defenses? Plant Sci., 180, 741–745.

10. Urban, C.F., Ermert, D., Schmid, M., Abu Abed, U., Goosmann, C., Nacken, W., Brinkmann, V., Jungblut, P.R., and Zychlinsky, A. (2009) Neutrophil extracellular

traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex involved in host defense against Candida albicans, PLoS Pathog., 5, e1000639.

11. Yousefi, S., Mihalache, C., Kozlowski, E., Schmid, I., and Simon, H.U. (2009) Viable neutrophils release mitochon drial DNA to form neutrophil extracellular traps, Cell Death Differ., 16, 1438–1444.

12. Maianski, N.A., Geissler, J., Srinivasula, S.M., Alnemri, E.S., Roos, D., and Kuijpers, T.W. (2004) Functional char acterization of mitochondria in neutrophils: a role restrict ed to apoptosis, Cell Death Differ., 11, 143–153.

13. Pilsczek, F.H., Salina, D., Poon, K.K., Fahey, C., Yipp, B.G., Sibley, C.D., Robbins, S.M., Green, F.H., Surette, M.G., Sugai, M., Bowden, M.G., Hussain, M., Zhang, K., and Kubes, P.J. (2010) A novel mechanism of rapid nuclear neutrophil extracellular trap formation in response to Staphylococcus aureus, J. Immunol., 185, 7413–7425.

14. Fuchs, T.A., Abed, U., Goosmann, C., Hurwitz, R., Schulze, I., Wahn, V., Weinrauch, Y., Brinkmann, V., and Zychlinsky, A. (2007) Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps, J. Cell Biol., 176, 231–241.

15. Kessenbrock, K., Krumbholz, M., Schonermarck, U., Back, W., Gross, W.L., Werb, Z., Grone, H.J., Brinkmann, V., and Jenne, D.E. (2009) Netting neutrophils in autoim mune small vessel vasculitis, Nature Med., 15, 623–625.

16. Garcia Romo, G.S., Caielli, S., Vega, B., Connolly, J., Allantaz, F., Xu, Z., Punaro, M., Baisch, J., Guiducci, C., Coffman, R.L., Barrat, F.J., Banchereau, J., and Pascual, V. (2011) Netting neutrophils are major inducers of type I IFN production in pediatric systemic lupus erythematosus, Sci. Transl. Med., 3, 73ra20, DOI. 10.1126.

17. Lande, R., Ganguly, D., Facchinetti, V., Frasca, L., Conrad, C., Gregorio, J., Meller, S., Chamilos, G., Sebasigari, R., Riccieri, V., Bassett, R., Amuro, H., Fukuhara, S., Ito, T., Liu, Y.J., and Gilliet, M. (2011) Neutrophils activate plasmacytoid dendritic cells by releas ing self DNA peptide complexes in systemic lupus erythe matosus, Sci. Transl. Med., 3, 73ra19, DOI. 10.1126.

18. Neeli, I., Dwivedi, N., Khan, S., and Radic, M. (2009) Regulation of extracellular chromatin release from neu trophils, J. Innate Immun., 1, 194–201.

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1589

19. Lim, M.B.H., Kuiper, J.W.P., Katchky, A., Goldberg, H., and Glogauer, M. (2011) Rac2 is required for the forma tion of neutrophil extracellular traps, J. Leukoc. Biol., 90,

771–776.

20. Oehmcke, S., Mоrgelin, M., and Herwald, H. (2009) Activation of the human contact system on neutrophil extracellular traps, J. Innate Immun., 1, 225–230.

21. Guimarаes Costa, A.B., Nascimento, M.T., Froment, G.S., Soares, R.P., Morgado, F.N., Conceiсаo Silva, F., and Saraiva, E.M. (2009) Leishmania amazonensis pro mastigotes induce and are killed by neutrophil extracellular traps, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106, 6748–6753.

22. Clark, S.R., Ma, A.C., Tavener, S.A., McDonald, B., Goodarzi, Z., Kelly, M.M., Patel, K.D., Chakrabarti, S., McAvoy, E., Sinclair, G.D., Keys, E.M., Allen Vercoe, E., Devinney, R., Doig, C.J., Green, F.H., and Kubes, P. (2007) Platelet TLR4 activates neutrophil extracellular traps to ensnare bacteria in septic blood, Nature Med., 13, 463–469.

23. Neeli, I., Khan, S.N., and Radic, M. (2008) Histone deimination as a response to inflammatory stimuli in neu trophils, J. Immunol., 180, 1895–1902.

24. Воробьева Н.В. (2013) NADPH оксидаза нейтрофилов и заболевания, связанные с ее дисфункцией, Иммуно логия, 34, 232–238.

25. Пинегин Б.В., Маянский А.Н. (2007) Нейтрофилы:

структура и функция, Иммунология, 6, 374–382.

26. Bianchi, M., Hakkim, A., Brinkmann, V., Siler, U., Seger, R.A., Zychlinsky, A., and Reichenbach, J. (2009) Restoration of NET formation by gene therapy in CGD controls aspergillosis, Blood, 114, 2619–2622.

27. Hakkim, A., Fuchs, T.A., Martinez, N.E., Hess, S., Prinz, H., Zychlinsky, A., and Waldmann, H. (2011) Activation of the Raf MEK ERK pathway is required for neutrophil extracellular trap formation, Nature Chem. Biol., 7, 75–77.

28. Papayannopoulos, V., Metzler, K.D., Hakkim, A., and Zychlinsky, A. (2010) Neutrophil elastase and myeloperox idase regulate the formation of neutrophil extracellular traps, J. Cell Biol., 191, 677–691.

29. Metzler, K.D., Fuchs, T.A., Nauseef, W.M., Reumaux, D., Roesler, J., Schulze, I., Wahn, V., Papayannopoulos, V., and Zychlinsky, A. (2011) Myeloperoxidase is required for neutrophil extracellular trap formation: implications for innate immunity, Blood, 117, 953–959.

30. Palmer, L.J., Cooper, P.R., Ling, M.R., Wright, H.J., Huissoon, A., and Chapple, I.L.C. (2012) Hypochlorous acid regulates neutrophil extracellular trap release in humans, Clin. Exp. Immunol., 167, 261–268.

31. Wang, Y., Li, M., Stadler, S., Correll, S., Li, P., Wang, D., Hayama, R., Leonelli, L., Han, H., Grigoryev, S.A., Allis, C.D., and Coonrod, S.A. (2009) Histone hypercitrullina tion mediates chromatin decondensation and neutrophil extracellular trap formation, J. Cell Biol., 184, 205–213.

32. Li, P., Li, M., Lindberg, M.R., Kennett, M.J., Xiong, N., and Wang Y. (2010) PAD4 is essential for antibacterial innate immunity mediated by neutrophil extracellular traps, J. Exp. Med., 207, 1853–1862.

33. Hemmers, S., Teijaro, J.R., Arandjelovic, S., and Mowen, K.A. (2011) PAD4 mediated neutrophil extracellular trap formation is not required for immunity against influenza infection, PLoS ONE, 6, e22043.

34. Remijsen, Q., Vanden Berghe, T., Wirawan, E., Asselbergh, B., Parthoens, E., De Rycke, R., Noppen, S., Delforge, M., Willems, J., and Vandenabeele, P. (2011) Neutrophil extracellular trap cell death requires both autophagy and superoxide generation, Cell Res., 21, 290–304.

35. Farley, K., Stolley, J.M., Zhao, P., Cooley, J., and Remold O’Donnell, E. (2012) A serpinB1 regulatory mechanism is essential for restricting neutrophil extracellular trap gener ation, J. Immunol., 189, 4574–4581.

36. Monfregola, J., Johnson, J.L., Meijler, M.M., Napolitano, G., and Catz, S.D. (2012) MUNC13 4 protein regulates the oxidative response and is essential for phagosomal mat uration and bacterial killing in neutrophils, J. Biol. Chem., 287, 44603–44618.

37. Hakkim, A., Furnrohr, B.G., Amann, K., Laube, B., Abed, U.A., Brinkmann, V., Herrmann, M., Voll, R.E., and Zychlinsky, A. (2010) Impairment of neutrophil extra cellular trap degradation is associated with lupus nephritis, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 9813–9818.

38. Brinkmann, V., and Zychlinsky, A. (2007) Beneficial sui cide: why neutrophils die to make NETs, Nature Rev. Microbiol., 5, 577–582.

39. Wartha, F., Beiter, K., Albiger, B., Fernebro, J., Zychlinsky, A., Normark, S., and Henriques Normark, B. (2007) Capsule and D alanylated lipoteichoic acids protect Streptococcus pneumoniae against neutrophil extracellular traps, Cell. Microbiol., 9, 1162–1171.

40. Sumby, P., Barbian, K.D., Gardner, D.J., Whitney, A.R., Welty, D.M., Long, R.D., Bailey, J.R., Parnell, M.J., Hoe, N.P., Adams, G.G., Deleo, F.R., and Musser, J.M. (2005) Extracellular deoxyribonuclease made by group A Streptococcus assists pathogenesis by enhancing evasion of the innate immune response, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102, 1679–1684.

41. Buchanan, J.T., Simpson, A.J., Aziz, R.K., Liu, G.Y., Kristian, S.A., Kotb, M., Feramisco, J., and Nizet, V. (2006) DNase expression allows the pathogen group A Streptococcus to escape killing in neutrophil ex tracellular traps, Curr. Biol., 16, 396–400.

42. Berends, E.T.M., Horswill, A.R., Haste, N.M., Monestier, M., Nizet, V., and von Kockritz Blickwede, M. (2010) Nuclease expression by Staphylococcus aureus facilitates escape from neutrophil extracellular traps, J. Innate Immun., 2, 576–586.

43. Beiter, K., Wartha, F., Albiger, B., Normark, S., Zychlinsky, A., and Henriques Normark, B. (2006) An endonuclease allows Streptococcus pneumoniae to escape from neutrophil extracellular traps. Curr. Biol., 16,

401–407.

44. Weinrauch, Y., Drujan, D., Shapiro, S., DWeiss, J., and Zychlinsky, A. (2002) Neutrophil elastase targets virulence factors of enterobacteria, Nature, 417, 91–94.

45. Averhoff, P., Kolbe, M., Zychlinsky, A., and Weinrauch, Y. (2008) Single residue determines the specificity of neu trophil elastase for Shigella virulence factors, J. Mol. Biol., 377, 1053–1066.

46. Parker, H., Albrett, A.M., Kettle, A.J., and Winterbourn, C.C. (2012) Myeloperoxidase associated with neutrophil extracellular traps is active and mediates bacterial killing in the presence of hydrogen peroxide, J. Leukoc. Biol., 91,

369–376.

47. Bianchi, M., Niemiec, M.J., Siler, U., Urban, C.F., and Reichenbach, J. (2011) Restoration of anti Aspergillus defense by neutrophil extracellular traps in human chronic granulomatous disease after gene therapy is calprotectin dependent, J. Allergy Clin. Immunol., 127, 1243–1252.

48. Saitoh, T., Komano, J., Saitoh, Y., Misawa, T., Takahama, M., Kozaki, T., Uehata, T., Iwasaki, H., Omori, H., Yamaoka, S., Yamamoto, N., and Akira, S. (2012) Neutrophil extracellular traps mediate a host defense response to human immunodeficiency virus 1, Cell Host Microbe, 12, 109–116.

49. Fadeel, B. (2009) Babies born without safety NET, Blood, 113, 6270–6271.

50. Yost, C.C., Cody, M.J., Harris, E.S., Thornton, N.L., McInturff, A.M., Martinez, M.L., Chandler, N.B., Rodesch, C.K., Albertine, K.H., Petti, C.A., Weyrich, A.S., and Zimmerman, G.A. (2009) Impaired neutrophil

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1590

ВОРОБЬЕВА,

extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune deficiency of human neonates, Blood, 113, 6419–6427.

51. Yost, C.C., and Zimmerman, G.A. (2009) Response:

Gestational age as a factor in neutrophil extracellular trap formation, Blood, 114, 4911–4912.

52. Yoo, D.G., Winn, M., Pang, L., Moskowitz, S.M., Malech, H.L., Leto, T.L., and Rada, B. (2014) Release of cystic fibrosis airway inflammatory markers from Pseudomonas aeruginosa stimulated human neutrophils involves NADPH oxidase dependent extracellular DNA trap formation, J. Immunol., 192, 4728–4738.

53. Marcos, V., Zhou, Z., Yildirim, A.O., Bohla, A., Hector, A., Vitkov, L., Wiedenbauer, E.M., Krautgartner, W.D., Stoiber, W., Belohradsky, B.H., Rieber, N., Kormann, M., Koller, B., Roscher, A., Roos, D., Griese, M., Eickelberg, O., Doring, G., Mall, M.A., and Hartl, D. (2010) CXCR2 mediates NADPH oxidase independent neutrophil extra cellular trap formation in cystic fibrosis airway inflamma tion, Nature Med., 16, 1018–1023.

54. Papayannopoulos, V., Staab, D., and Zychlinsky, A. (2011) Neutrophil elastase enhances sputum solubilization in cys tic fibrosis patients receiving DNase therapy, PLoS One, 6,

e28526.

55. Fuchs, T.A., Brill, A., Duerschmied, D., Schatzberg, D., Monestier, M., Myers, D.D., Jr., Wrobleski, S.K., Wakefield, T.W., Hartwig, J.H., and Wagner, D.D. (2010) Extracellular DNA traps promote thrombosis, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 15880–15885.

56. Geddings, J.E., and Mackman, N. (2014) New players in haemostasis and thrombosis. Thromb. Haemost., 111,

570–574.

57. Farquharson, D., Butcher, J.P., and Culshaw, S. (2012) Periodontitis, Porphyromonas, and the pathogenesis of rheumatoid arthritis, Mucosal Immunol., 5, 112–120.

58. Vitkov, L., Klappacher, M., Hannig, M., and Krautgartner, W.D. (2009) Extracellular neutrophil traps in periodontitis, J. Periodontal Res., 44, 664–672.

59. Ярилин А.А. (2010) Иммунология, ГЭОТАР Медиа, Мoсква.

60. Lande, R., Gregorio, J., Facchinetti, V., Chatterjee, B., Wang, Y.H., Homey, B., Cao, W., Wang, Y.H., Su, B., Nestle, F.O., Zal, T., Mellman, I., Schroder, J.M., Liu, Y.J., and Gilliet, M. (2007) Plasmacytoid dendritic cells sense self DNA coupled with antimicrobial peptide, Nature, 449, 564–569.

ПИНЕГИН

61. Ganguly, D., Chamilos, G., Lande, R., Gregorio, J., Meller, S., Facchinetti, V., Homey, B., Barrat, F.J., Zal, T., and Gilliet, M. (2009) Self RNA antimicrobial peptide complexes activate human dendritic cells through TLR7 and TLR8, J. Exp. Med., 206, 1983–1994.

62. Chamilos, G., Gregorio, J., Meller, S., Lande, R., Kontoyiannis, D.P., Modlin, R.L., and Gilliet, M. (2012) Cytosolic sensing of extracellular self DNA transported into monocytes by the antimicrobial peptide LL37, Blood, 120, 3699–3707.

63. Singh, D., Qi, R., Jordan, J.L., San Mateo, L., and Kao, C.C. (2013) The human antimicrobial peptide LL 37, but not the mouse ortholog, mCRAMP, can stimulate signal ing by poly(I:C) through a FPRL1 dependent pathway, J. Biol. Chem., 288, 8258–8268.

64. Lai, Y., Adhikarakunnathu, S., Bhardwaj, K., Ranjith Kumar, C.T., Wen, Y., Jordan, J.L., Wu, L.H., Dragnea, B., San Mateo, L., and Kao, C.C. (2011) LL37 and cation ic peptides enhance TLR3 signaling by viral double strand ed RNAs, PLoS One, 6, e26632.

65. Chuang, C.M., Monie, A., Wu, A., Mao, C.P., and Hung, C.F. (2009) Treatment with LL 37 peptide enhances anti tumor effects induced by CpG oligodeoxynucleotides against ovarian cancer, Hum. Gene Ther., 20, 303–313.

66. Kahlenberg, J.M., and Kaplan, M.J. (2013) Little peptide, big effects: the role of LL 37 in inflammation and autoim mune disease, J. Immunol., 191, 4895–4901.

67. Kaplan, M.J. (2011) Neutrophils in the pathogenesis and manifestations of SLE, Nature Rev. Rheumatol., 27,

691–699.

68. Denny, M.F., Yalavarthi, S., Zhao, W., Thacker, S.G., Anderson, M., Sandy, A.R., McCune, W.J., and Kaplan, M.J. (2010) A distinct subset of proinflammatory neu trophils isolated from patients with systemic lupus erythe matosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs, J. Immunol., 184, 3284–3297.

69. Будихина А.С., Пинегин Б.В. (2008) Дефензины – мультифункциональные катионные пептиды челове ка, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2,

31–40.

70. Leffler, J., Martin, M., Gullstrand, B., Tydеn, H., Lood, C., Truedsson, L., Bengtsson, A.A., and Blom, A.M. (2012) Neutrophil extracellular traps that are not degraded in systemic lupus erythematosus activate complement exacerbating the disease, J. Immunol., 188, 3522–3531.

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1591

NEUTROPHIL EXTRACELLULAR TRAPS:

MECHANISMS OF FORMATION AND THEIR ROLE IN HEALTH AND DISEASE

N. V. Vorobjeva 1 , B. V. Pinegin 2

1 M. V. Lomonosov Moscow State University, Biology faculty, Lenin Hills 1/12, Moscow 119991, Russia; E mail: nvvorobjeva@mail.ru 2 National Research Center «Institute of Immunology» of the Federal Medical Biological Agency, Kashirskoe shosse 24, bld. 2, Moscow 115478, Russia

Received July 5, 2014

Here recent insights into a specific type of cell death typical for neutrophils called NETosis are summarized. NETosis is a process of generation of Neutrophil Extracellular Traps (NETs), the main components of which are DNA, gran ular antimicrobial peptides, and nuclear and cytoplasmic proteins. The structure of NETs determines their bacterici dal, fungicidal, antiprotozoan, and antiviral properties. Therefore, production of NETs by neutrophils is an essential immune response to infection. Besides its antimicrobial function, NETosis is involved in many inflammatory and autoimmune disorders and participates in regulation of noninfectious processes. In this review, the molecular mech anisms of NET formation, their bactericidal action, as well as implication in some noninfectious, autoimmune, and inflammatory processes are discussed. Key words: neutrophils, neutrophil extracellular traps, NETosis, autoimmune diseases, inflammation

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014