БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 12, с.

1580 – 1591

УДК 577.367

НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ
ЛОВУШКИ: МЕХАНИЗМЫ ОБРАЗОВАНИЯ,
РОЛЬ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ
Обзор
© 2014 Н.В. Воробьева1*, Б.В. Пинегин2
1
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова,
биологический факультет, 119991 Москва;
электронная почта: nvvorobjeva@mail.ru
2
Институт иммунологии ФМБА России, 115478
Москва, Каширское шоссе, 24/2
Поступила в редакцию 05.07.14

В обзоре представлены современные данные, касающиеся уникального механизма клеточной смерти, ха
рактерного для нейтрофилов (НЕТоза). НЕТоз представляет собой процесс, при котором происходит выб
рос из клеток фибрилл хроматина с адгезированными к ним бактерицидными компонентами гранул, ядра
и цитоплазмы (нейтрофильные ловушки). Состав ловушек определяет их бактерицидные, фунгицидные,
антипротозойные и антивирусные свойства. В связи с этим их образование рассматривается как важная от
ветная реакция иммунной системы на патогены. С другой стороны, было показано, что НЕТоз является
этиологическим фактором многих воспалительных и аутоиммунных заболеваний, а также участвует в регу
ляции ряда неинфекционных процессов. В обзоре подробно рассматриваются молекулярные механизмы
НЕТоза, его роль в защите хозяина от патогенов, а также участие в неинфекционных, воспалительных и ау
тоиммунных процессах.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нейтрофил, нейтрофильные внеклеточные ловушки, НЕТоз, аутоиммунные заболе
вания, воспаление.

В 2004 г. Циклинский с соавт. [1] обнаружил, шей, НЕТоз был описан и у других животных,
что нейтрофилы могут убивать патогены вне например, быков, лошадей, рыб, кошек, кроли
клеток, выбрасывая т.н. «нейтрофильные вне ков и беспозвоночных. Выброс нуклеиновых
клеточные ловушки» (Neutrophil Extracellular кислот клеткамиэноцитоидами восковой моли
Traps, NETs). Поскольку в процессе образова Galleria mellonella является важным защитным
ния ловушек нейтрофилы утрачивают также механизмом от патогенов у насекомых [7]. Об
свою жизнеспособность, то в 2007 г. Стейнберг и разование внеклеточных филаментов ДНК бы
Гринштейн [2] назвали такую форму клеточной ло обнаружено также у растений и, как предпо
гибели нейтрофилов «НЕТозом». Показано, что лагают, этот механизм играет существенную
бактерицидность ловушек связана с их уникаль роль в защите кончиков корней от грибковых
ным составом: ДНК, компоненты гранул, гисто инфекций [8, 9]. В связи с тем, что выброс хро
ны и некоторые цитоплазматические белки. матина во внеклеточное пространство осущест
Следует отметить, что образование ловушек бы вляется не только нейтрофилами, но и другими
ло показано также для эозинофилов [3], тучных типами клеток, а также в связи с распространен
клеток [4], гетерофилов цыпленка [5] и макро ностью этого явления среди позвоночных, бес
фагов/моноцитов [6]. Помимо человека и мы позвоночных и растений, этот механизм полу
чил более широкое название ЭТоз (от англ.
П р и н я т ы е с о к р а щ е н и я : АПК – антигенпрезентиру Extracellular Traps (ETs)). В настоящем обзоре
ющая клетка; ИФН – интерферон; ЛПС – липополисаха рассмотрен механизм образования ловушек
рид; МНС – главный комплекс гистосовместимости; ПДК –
плазмоцитоидная дендритная клетка; ЦИК – циркулиру нейтрофилами – НЕТоз.
ющий иммунный комплекс; ФНО – фактор некроза опу Морфология ловушек. Ультраструктура лову
холей. шек уникальна. Их остов образован хроматино
* Адресат для корреспонденции. выми филаментами диаметром ~15–17 нм [1],

1580
 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1581

состоящими из модифицированных нуклеосом нейтрофилами, в результате выброса во внекле

[10]. Этот остов усеян глобулярными структура точное пространство ДНК митохондрий [3, 11].
ми диаметром около 50 нм, представляющими Однако, следует отметить, что митохондрий в
собой белки гранул и других клеточных компарт нейтрофилах крайне мало [12], поэтому митохонд
ментов [1]. Удивительно, что ловушки могут риальной ДНК, обнаруженной в этих экспери
иметь морфологию не только вытянутых в дли ментах, было в 100 000 раз меньше, чем ядерной.
ну тонких филаментов, но и выглядеть как обла Недавно был описан новый уникальный ме
коподобные структуры, занимающие площадь, ханизм образования ловушек, при котором ци
в 10–15 раз превышающую первоначальный топлазматическая мембрана оставалась интакт
размер клетки. Предполагают, что такая морфо ной, а клетки сохраняли свою жизнеспособ
логия ловушек встречается in vivo в условиях ность [13]. В этих экспериментах нейтрофилы
достаточного межклеточного пространства, на стимулировали Staphylococcus aureus в течение
пример, в легочных альвеолах. 5–60 мин (обычно НЕТоз развивается в течение
Механизм образования ловушек. Ловушки 3–4 ч) и наблюдали выброс из клеток везикул с
образуются в результате уникальной формы кле включенными в них деконденсированным хро
точной гибели, при которой первоначально матином и бактерицидными белками гранул.
происходит утрата всех внутриклеточных мемб Все эти компоненты перемешивались и форми
ран, за которой следует нарушение целостности ровали ловушки во внеклеточном пространстве.
цитоплазматической мембраны. На сегодняш Индукторы НЕТоза – это многие физиологи
ний день о механизмах НЕТоза известно крайне ческие стимулы, к которым относятся бактерии,
мало. Это связано в первую очередь с тем, что грибы, простейшие и вирусы (табл. 2). НЕТоз
нейтрофилы являются короткоживущими, тер могут индуцировать такие активные формы
минальнодифференцированными, не способ кислорода (АФК) как пероксид водорода [14],
ными к делению лейкоцитами, генетические антитела [15] и антигенантительные комплек
манипуляции с которыми затруднены. Кроме сы [16, 17], микробные компоненты, липополи
того практически отсутствуют линии нейтрофи сахарид (ЛПС) [18, 19], белок М1 из Streptococcus
лов, полноценно отражающие физиологию пер pyogenes [20] и липофосфогликаны из Leishmania
вичных клеток крови. amazonensis [21]. Ловушки также могут быть ин
Тем не менее известно, что в процессе НЕТоза, дуцированы тромбоцитами, активированными
нейтрофилы подвергаются серьезным морфоло TLR4 [22].
гическим изменениям (рисунок, см. цветную Показано, что для индукции НЕТоза необхо
вклейку). Так, через несколько минут после ак димо прикрепление клеток к субстрату, при ко
тивации клетки распластываются и прочно тором активируются МАС1интегриновые ре
прикрепляются к субстрату. В течение следую цепторы [23]. В суспензии нейтрофилы тоже
щего часа ядро утрачивает сегментарную струк могут образовывать ловушки, но гораздо слабее.
туру, хроматин деконденсируется, а внутренний Повидимому, в этой ситуации срабатывает ме
и внешний листки ядерной мембраны отделя ханизм блокирования НЕТоза (или отсутствия
ются друг от друга. Одновременно происходит стимуляции), предохраняющий организм от
распад гранул. Через 1 ч ядерная мембрана рас возможного тромбообразования в кровеносных
падается на отдельные везикулы, а нуклеоплаз сосудах с участием ловушек.
ма и цитоплазма сливаются в гомогенную массу. Молекулярные механизмы образования лову;
Наконец, клетки округляются и, видимо, сокра шек. Как было показано ранее, процесс образо
щаются до тех пор, пока цитоплазматическая вания ловушек происходит постепенно и вклю
мембрана не разрывается, после чего содержи чает несколько последовательных стадий: 1) гене
мое клетки «извергается» во внешнее простран рацию АФК; 2) транспорт нейтрофильной элас
ство, образуя пучки тонких филаментов, то есть тазы (НЭ) и, позднее, миелопероксидазы (МПО)
ловушки. из гранул в ядро; 3) модификацию гистонов;
Состав ловушек. Удивительно, что даже пос 4) и, наконец, разрыв цитоплазматической мемб
ле перемешивания содержимого всех клеточных раны и выброс хроматина. На всех перечислен
компартментов в составе ловушек обнаружива ных стадиях стоит остановиться немного подроб
ют не более 30 различных белков (табл. 1) [10]. нее, поскольку все они составляют совершенно
Большая часть этих белков гранулярного проис уникальный механизм гибели клеток, НЕТоз.
хождения, только несколько типов белков попа Итак, было показано, что для НЕТоза необ
дает в ловушки из ядра (гистоны) и совсем не ходимы АФК. У нейтрофилов АФК образуются
большое количество – из цитоплазмы [10]. В не в процессе т.н. «дыхательного взрыва» при учас
которых работах было показано, что ловушки тии ферментного комплекса, NADPHоксидазы
образуются живыми клетками, эозинофилами и [24]. Этот многокомпонентный комплекс соби

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1582 ВОРОБЬЕВА, ПИНЕГИН

Таблица 1. Белки, ассоциированные с ловушками [10]

Клеточная локализация Название белка Название гена

Гранулы нейтрофильная эластаза (НЭ) ELA2

лактоферрин LTF
азуроцидин AZU1
катепсин G CTSG
миелопероксидаза (МПО) MPO
протеиназа 3 PR3
лизоцим С LYZ
дефензины 1 и 3 DEFA*1 и *3
BPI (катионный бактерицидный/увеличивающий проницаемость белок) BPI
кателицидин hCAP18/LL37 CAMP

Ядро гистон Н2А H2A

гистон Н2В:
а) гистон Н2В H2B
б) гистон Н2Вподобный H2B
гистон Н3 H3
гистон Н4 H4
миелоидный ядерный дифференцировочный антиген MNDA

Цитоплазма S100 кальцийсвязывающий белок А8 S100A8

S100 кальцийсвязывающий белок А9 S100A9
S100 кальцийсвязывающий белок А12 S100A12

Цитоскелет актин (β и/или γ) ACTB, ACTG1

миозин9 MYH*9
αактинин (1 и/или 4) ACTN1, ACTN4
пластин2 LCP1
цитокератин10 KRT*10

Пероксисомы каталаза CAT

Гликолитические αэнолаза ENO1

ферменты транскетолаза TKT

рается при активации в мембранах специфичес хронической гранулематозной болезнью (ХГБ).

ких гранул и на цитоплазматической мембране Эта патология обусловлена мутациями субъеди
нейтрофилов и осуществляет перенос электро ниц NADPHоксидазы, приводящими к сборке
нов от расположенного в цитоплазме NADPH нефункционального или малофункционального
через мембрану на молекулярный кислород. ферментного комплекса, не способного синте
Кислород далее подвергается одноэлектронно зировать АФК. Люди с такими мутациями всю
му восстановлению, ведущему к образованию жизнь страдают от рецидивирующих инфекций
супероксиданионрадикала (О2 ). О2 в свою [25, 26], а их нейтрофилы не образуют нейтро
очередь претерпевают окислительновосстано фильные ловушки [14]. Однако, было обнаруже
вительные превращения, спонтанно или же при но, что добавление Н2О2 к нейтрофилам паци
участии супероксиддисмутазы, с образованием ентов с ХГБ восстанавливает их способность
пероксида водорода. Эти первичные АФК (О2 и выбрасывать ловушки [14]. Таким образом,
Н2О2) могут подвергаться дальнейшей транс АФК в цепи передачи информации находятся
формации, в результате которой образуются бо между ферментным комплексом и последующи
лее активные метаболиты, например, гидрок ми медиаторами.
сильный радикал (ОН•) и хлорноватистая кис Молекулы, участвующие в передаче сигнала
лота (HOCl). Хлорноватистая кислота обладает от рецепторов к NADPHоксидазе, были обна
сильнейшими микробицидными свойствами и ружены в результате скрупулезного ингибитор
образуется при участии миелопероксидазы, ного анализа, проведенного в лаборатории Цик
фермента азурофильных гранул. линского [27]. Дело в том, что наиболее эффек
Участие АФК в образовании ловушек было тивным и часто используемым активатором
доказано не только фармакологически, но и при НЕТоза является форбол12миристат13аце
изучении нейтрофилов пациентов, страдающих тат (ФМА), непосредственный стимулятор про

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1583

Таблица 2. Микроорганизмы и химические факторы, индуцирующие образование ловушек [14]

Микроорганизмы Химические факторы

Aspergillus fumigatus (конидии и гифы) аутоантитела (антиLL37/антиHNP)

Candida albicans (конидии и гифы) ионы кальция
Cryptococcus gattii глюкозооксидаза
Cryptococcus neoformans GMCSF + C5a
Eimeria bovis GMCSF + ЛПС
Enterococcus faecalis пероксид водорода
Escherichia coli IFNα + C5a
Haemophilus influenzae IFNγ + C5a
Helicobacter pylori IL8
Klebsiella pneumoniae липополисахарид (ЛПС)
Lactococcus lactis белок M1/белок М1 + фибриногеновый комплекс
Leishmania amazonensis NO
L. donovani, L. major, L. chagasi форбол12миристат13ацетат (ФМА)
Listeria monocytogenes ФМА + иономицин
Mannheimia haemolytica и лейкотоксин фактор активации тромбоцитов
Mycobacterium tuberculosis, M. canettii TLR4
Serratia marcescens TNF
Shigella flexneri статины
Staphylococcus aureus δтоксин из Staphylococcus epidermidis
Streptococcus (группа А  GAS)
Streptococcus dysgalactiae
Streptococcus pneumoniae
Toxoplasma gondii
Yersinia enterocolitica
ВИЧ1

теинкиназы С. Было показано, что при актива с усилением деконденсации хроматина, видимо,
ции НЕТоза с помощью ФМА индуцируется благодаря синтезу хлорноватистой кислоты [28].
RafMEKERKсигнальный каскад [27], а также Следует заметить, что пациенты, имеющие му
Rac2 (малая ГТФаза Rhoсемейства)опосредо тации гена МПО, не способны образовывать
ванный путь [19]. полноценные ловушки [29], видимо, изза не
Другим характерным свойством НЕТоза яв достаточного количества хлорноватистой кис
ляется утрата хроматином сегрегации на эу и лоты [30].
гетерохроматин [14]. Этот процесс происходит Кроме частичного расщепления гистонов
при участии нейтрофильной эластазы и миело эластазой и МПО, происходит еще одна моди
пероксидазы, ферментов азурофильных гранул. фикация, усиливающая деконденсацию хрома
Оба фермента попадают из гранул в ядро на са тина. После соответствующей активации в
мых ранних этапах НЕТоза, пока еще не извест нейтрофиле индуцируется пептидиларгинин
ным способом. Первой в ядро транспортируется дезаминаза 4 (PAD4), которая катализирует де
нейтрофильная эластаза, где она катализирует заминирование аргининовых остатков в цитрул
расщепление линкерного гистона Н1 и модифи линовые в трех из четырех коровых гистонов,
цируют коровые гистоны [28]. Показано, что что ведет к ослаблению их связывания с ДНК. В
эластаза крайне важна для образования ловушек, ряде работ было показано, что в составе лову
поскольку мыши, дефицитные по этому фер шек, а также в деконденсированном хроматине,
менту, не были способны к НЕТозу [28]. МПО гистоны цитруллинированы [18, 23, 31]. Роль
мигрирует в ядро позднее, и ее функция связана этого процесса в НЕТозе была доказана фарма

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1584 ВОРОБЬЕВА, ПИНЕГИН

кологически на клеточных линиях, образующих ханизмы, способные негативно регулировать

небольшое количество ловушек. Кроме того НЕТоз. Недавно было показано, что белок
мыши, мутантные по PAD4, не были способны к SerpinB1, являющийся ингибитором таких се
цитруллинированию гистона Н3, и как след риновых протеаз, как эластаза, катепсин G и
ствие, не образовывали ловушки [32, 33]. протеиназа3, транспортируется из цитоплазмы
Недавно было обнаружено, что для НЕТоза в ядро на ранних стадиях НЕТоза, где блокирует
необходима аутофагия, и в пути передачи ин деконденсацию хроматина [35].
формации этот механизм подключается после Обнаружен еще один фактор, способный
NADPHоксидазы [34]. Было замечено, что сти ингибировать НЕТоз – MUNC134, являющий
муляция нейтрофилов с помощью ФМА приво ся членом семейства белков MUNC13 [36]. Этот
дит к образованию огромных вакуолей, сходных ранее описанный белок участвует в генерации
с аутофагосомами. Однако участие аутофагии в АФК, экзоцитозе азурофильных гранул и созре
НЕТозе на сегодняшний день изучено не доста вании фаголизосом у нейтрофилов.
точно. Кроме того сывороточная эндонуклеаза,
В работах Неели и соавт. [18, 23] было впер ДНКаза1 может катализировать деградацию
вые обнаружено, что немаловажную роль в регу выброшенного из нейтрофилов хроматина и ог
ляции НЕТоза нейтрофилов человека играет ци раничивать НЕТоз [37]. Таким образом, регуля
тоскелет. Ранее показано, что тубулиновый ци торные пути, ингибирующие образование лову
тоскелет определяет направление движения гра шек, могут ограничивать повреждения, вызван
нул при экзоцитозе и фагоцитозе нейтрофилов. ные чрезмерной активацией нейтрофилов.
В своей работе Неели и соавт. [18] показали, что Антимикробная активность ловушек. Извест
деполимеризация тубулинового цитоскелета но, что основной функцией нейтрофилов явля
нокодазолом останавливала разрушение ядер ется устранение патогенов. По представлению
ной мембраны при индукции НЕТоза липопо Циклинского, ловушки эволюционно разви
лисахаридом (ЛПС), и как следствие, подавляла лись для сдерживания инфекции, благодаря зах
образование ловушек. Кроме того в этой же ра вату патогенов и ограничению их распростране
боте было доказано участие в НЕТозе актиново ния, путем инактивации факторов вирулентнос
го цитоскелета, поскольку добавление к нейтро ти, а также уничтожению патогенов [1].
филам цитохалазина D также приводило к по Захват микроорганизмов ограничивает их
давлению выброса хроматина [18]. Полученные распространение из первичного очага инфек
в этих работах данные можно бы было интерп ции. Предполагают, что патогены попадают в
ретировать следующим образом. На сегодняш ловушки благодаря электростатическим взаи
ний день все еще не ясно, каким образом элас модействиям, возникающим между отрицатель
таза и МПО попадают в ядро для осуществления нозаряженными фибриллами хроматина и по
деконденсации хроматина. Вполне вероятно ложительнозаряженной поверхностью бакте
(предположение авторов), что именно цитоске рий [38]. Действительно, было показано, что па
лет обеспечивает транспорт азурофильных гра тогены, имеющие капсулы или способные изме
нул по направлению к ядру, после чего происхо нять свой поверхностный заряд, не связываются
дит, пока еще не известным способом, переход ловушками [39]. Еще одним способом избежать
ферментов из одного компартмента в другой. попадания в ловушки является синтез и присое
Неели и соавт. [23] предположили, что MAC1 динение к поверхности патогена нуклеаз [40].
интегрины, активируемые при НЕТозе, могут Так, стрептококки группы А (GAS) Streptococcus
инициировать соответствующую перестройку pyogenes [41], виды рода Pneumococcus и Staphylo*
цитоскелета. coccus aureus [42] синтезируют эндонуклеазы,
Была высказана гипотеза о регуляторной ро высвобождающие их из ловушек и позволяю
ли цитоскелета в процессе сокращения клетки щие проникать в более глубокие органы [43].
на терминальной стадии НЕТоза, выбросе хро Кроме того ловушки могут инактивировать
матина за ее пределы. Однако это предположе микробные белки, называемые факторами ви
ние требует серьезной доказательной базы. рулентности, способные изменять функции
Ингибиторные пути. В последнее время на клеток хозяина. Было показано, что эластаза в
копилось большое количество фактов, указыва составе ловушек специфически катализирует
ющих на негативную роль НЕТоза для организ расщепление факторов вирулентности Shigella
ма хозяина (этот вопрос будет освещен в соответ flexneri, Salmonella typhimurium и Yersinia enteroco*
ствующем разделе). Показано, что ловушки мо litica [1, 44]. В составе ловушек были также обна
гут вызывать серьезные локальные воспалитель ружены катепсин G и протеиназа 3, сходные с
ные процессы и аутоиммунные заболевания. В эластазой и способные расщеплять факторы ви
связи с этим весьма актуальными являются ме рулентности других классов патогенов [45].

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1585

Есть данные, что ловушки включают белки, Ярким примером роли ловушек в подавле
способные убить или ингибировать патогены. К нии инфекции является случай, приведенный в
ним относятся такие ферменты, как лизоцим и работе Бианчи и соавт. [26]. В этой публикации
протеазы, антимикробные пептиды (белок BPI был описан пациент с ХГБ, страдающий тяже
и дефензины), хелаторы ионов (кальгранулин), лым аспергиллезом, нейтрофилы которого были
и, что интересно, гистоны. Повидимому, анти неспособны к киллингу гиф ряда штаммов
микробная активность ловушек обусловлена Aspergillus изза невозможности его клетками
совместным действием этих компонентов, а образовывать ловушки. Однако, после генной
также их высокой локальной концентрацией на терапии функция NADPHоксидазы и способ
фибриллах хроматина. ность образовывать ловушки была восстановле
В составе ловушек были также обнаружены на, и пациент практически поправился.
компоненты, способные действовать самостоя Участие ловушек в воспалительных процессах.
тельно. Так, Паркер и соавт. [46] показали, что За последнее десятилетие накопилось достаточ
активности МПО вполне достаточно, чтобы но большое количество фактов, указывающих
уничтожить Staphylococcus aureus. В ловушках на негативное влияние нейтрофильных лову
был обнаружен еще один белок, кальгранулин, шек. Так, было описано несколько воспалитель
обладающий фунгицидной активностью [10, ных процессов, в которых НЕТоз играет немало
47]. Этот белок хелатирует цинк, необходимый важную роль как негативный регулятор. К ним
для роста грибов, и, как оказалось, эффективно можно отнести такие заболевания легких, как
сдерживает рост Candida albicans и виды рода острый респираторный дистресссиндром взрос
Aspergillus. Наконец, была показана важная роль лых (acute respiratory distress syndrome), острое
гистонов для киллинга патогенов. В экспери повреждение легких (acute lung injury), кистоз
ментах, связанных с добавлением антител к гис ный фиброз (cystic fibrosis). В таком процессе
тонам, было обнаружено ингибирование кил как тромбообразование, НЕТоз играет двоякую
линга различных классов микроорганизмов, роль, как позитивную, так и негативную. Оста
обусловленного образованием ловушек [1]. Эти новимся лишь на некоторых из перечисленных
факты подтвердили предположение о сильней патологий, происходящих с участием НЕТоза.
ших бактерицидных свойствах гистонов. Кистозный фиброз (муковисцидоз). Кистоз
Кроме активности по отношению к бактери ный фиброз представляет собой тяжелое наслед
ям, грибам и паразитам, ловушки обладают ан ственное заболевание, обусловленное мутацией
тивирусным действием. Недавно Саито и соавт. гена CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conduc
показали [48], что ловушки индуцируются виру tance regulator), и характеризуется поражением
сом иммунодефицита человека 1 (ВИЧ1), види желез внешней секреции, тяжелыми нарушени
мо, через эндосомальные TLR7 и TLR8рецеп ями органов дыхания и желудочнокишечного
торы, чувствительные к вирусной РНК. Инте тракта. Мутации этого гена приводят к наруше
ресно, что вирионы, связавшиеся ловушками, нию нормального транспорта ионов Cl– через
были полностью инактивированы, а процесс их эпителиальный слой клеток, и, как следствие,
подавления блокировался добавлением ДНКазы, вызывают дегидратацию, сгущение слизистых
ведущей к деградации фибрилл ДНК [48]. секретов желез и затруднение их оттока. В слу
Таким образом, в системе in vitro было пока чае легочной формы кистозного фиброза повы
зано, что ловушки ингибируют грамположи шенная вязкость слизи способствует колониза
тельные и грамотрицательные бактерии, грибы, ции органа такими бактериями, как Staphylococcus
вирусы и паразитов. Однако, данные о действии aureus, Haemophilus influenzae и Pseudomonas aeru*
ловушек в системе in vivo не так многочисленны. ginosa.
Известно, что новорожденные довольно Другим фактором, ответственным за высо
чувствительны к инфекциям, и было показано, кую вязкость слизи, является обнаруженное в
что образование ловушек у них снижено [49, 50, мокроте больных муковисцидозом большого
51]. Существенно, что пациенты с мутациями в количества молекул ДНК [52], что коррелирует
генах, кодирующих NADPHоксидазу, МПО, с высокой концентрацией нейтрофилов и нали
эластазу, то есть дефицитные по главным чием нейтрофильных ловушек в легких [53]. Бы
действующим медиаторам НЕТоза, страдают от ло показано, что присутствие ловушек при этом
рецидивирующих инфекций. Однако, посколь заболевании никак не влияло на количество па
ку все эти компоненты участвуют также в таких тогенов, более того, даже увеличивало их титры
эффекторных функциях нейтрофила, как фаго в слизи.
цитоз и дегрануляция, то предстоит еще выяс Интересно, что больным муковисцидозом
нить их специфический вклад в каждую из этих для снижения вязкости слизи проводят терапев
функций. тические курсы с использованием рекомбинант

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1586 ВОРОБЬЕВА, ПИНЕГИН

ной ДНКазы. Однако, как было показано, ре ляция при участии НЕТоза снижает распростра
комбинантная ДНКаза способна катализиро нение патогенов в организме хозяина.
вать расщепление свободной ДНК, а не ДНК Таким образом, исходя из представленных
белковых комплексов, характерных для лову фактов, можно сделать заключение, что нейтро
шек. В связи с этой проблемой обсуждается воз филы и их ловушки эффективно взаимодейству
можная позитивная роль эластазы в этом про ют с факторами коагуляции и эндотелием сосу
цессе. Так, по мнению Папаяннопулос и соавт. дов, а такие эффекты ловушек, как бактерицид
[54], эластаза должна способствовать растворе ность и прокоагуляция могут синергически
нию секрета, деградируя гистоны и обеспечивая участвовать в поддержании гомеостаза при инфек
доступ хроматина для ДНКазы. С другой сторо ционных заболеваниях, например, при сепсисе.
ны, образовавшаяся свободная эластаза и дру Периодонтит. Еще одной патологией, в ко
гие протеолитические компоненты ловушек мо торой ловушки играют немаловажную роль, яв
гут повреждать ткани легких и усиливать тем са ляется периодонтит. Периодонтит – это воспа
мым иммунный ответ. Возможно, что для лече лительное заболевание периодонта, вызванного
ния больных с таким заболеванием, как муко микроорганизмами, заселившими гингиваль
висцидоз, необходима комплексная терапия, ную полость зуба. Чаще всего периодонтит ассо
включающая как рекомбинантную ДНКазу, так циирован с бактериями Porphyromonas gingivalis
и ингибиторы протеаз. [57], которые при попадании в гингивальную
Коагуляция (свертываемость крови). Коагу полость зуба привлекают нейтрофилы, которые
ляция представляет собой процесс формирова затем выбрасывают хроматиновые ловушки [58]
ния сгустков крови внутри кровеносных сосу для предотвращения распространения патогена.
дов, направленный на снижение кровопотери Участие ловушек в аутоиммунной патологии.
при травмах, а также способствующий ограни Как и многие физиологические процессы, про
чению распространения микробной инфекции текающие в организме, процесс образования
в организме. Было показано, что в процессе ловушек играет не только положительную, но и
формирования сгустка при коагуляции в качест отрицательную роль. Отрицательная роль лову
ве позитивного фактора принимают участие шек связана с их участием в развитии аутоим
нейтрофильные ловушки. Вместе с тем их избы мунных заболеваний, основой которых служит
точное образование может привести к чрезмер самоподдерживающийся адаптивный иммун
ной коагуляции, способной блокировать кро ный ответ на собственные антигены организма,
воснабжение жизненно важных органов и тяже что приводит к повреждению его клеток и тка
лой ишемии. ней [59]. Исходно в индукции адаптивного отве
Известно, что при формировании сгустка та лежит хроническая активация клеток врож
как артериальной, так и венозной крови, на эн денного иммунитета и синтез ими провоспали
дотелии сосудов адгезируются нейтрофилы. В тельных цитокинов. Одним из главных цитоки
местах прочной адгезии они выбрасывают хро нов, активирующих клетки врожденного имму
матиновые фибриллы (ловушки), образующие нитета, являются интерфероны (ИФН) I типа.
пробки, стимулирующие последующее тромбо Их синтез в организме строго регулируется. Не
образование [55]. Эластаза и катепсин G, адсор достаток ИФН I типа ведет к повышенной
бированные на фибриллах хроматина и являю склонности к инфекционным заболеваниям и
щиеся сериновыми протеазами, деградируют некоторым вида рака; избыток – к развитию ау
ингибиторы коагуляции. В подтверждение этого тоиммунной патологии [16, 17].
механизма было показано, что у мышей, дефи ИФН I типа ускоряют созревание антиген
цитных по обоим ферментам, артериальное презентирующих клеток (АПС), макрофагов и
тромбообразование уменьшалось благодаря дендритных клеток, повышают на них экспрес
снижению образования сгустков крови и поли сию МНС I и II классов и костимуляторных мо
меризации фибрина. Такой же эффект наблюда лекул. Особенно сильным является эффект
ли у мышей после введения им антител к компо ИФН I типа на Вклеточное звено иммунитета.
нентам ловушек [56]. Совместно с IL6 они индуцируют созревание
Следует отметить еще один удивительный плазмобластов в зрелые плазматические клетки,
факт, связанный с действием ловушек. Так, при стимулирует синтез IgG всех субклассов и син
инфицировании мышей Escherichia coli изоляция тез аутоантител В1клетками.
бактерий в микрососудах печени происходила луч ИФН I типа синтезируются практически
ше у животных с функциональным НЕТозом, всеми ядросодержащими клетками организма,
чем у мышей, получавших антитела к ДНК, бло но наиболее интенсивно – плазмоцитоидными
кирующих НЕТоз [56]. Эти эксперименты явля дендритными клетками (ПДК). Главными ин
ются прямым доказательством того, что коагу дукторами их синтеза являются нуклеиновые

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1587

кислоты (НК). В условиях нормально функцио тел к этим компонентам. Сравнительно недавно
нирующего организма нуклеиновые кислоты были выделены ЦИК из сывороток больных СКВ,
всегда в небольшом количестве присутствуют состоящие только из ДНК и IgG. В составе таких
вне клеток. Они могут «вытекать» из апоптоти ЦИК всегда обнаруживали пептид LL37. При
ческих клеток, несвоевременно убранных мак добавлении ЦИК, содержащих пептид LL37, к
рофагами с помощью фагоцитоза. НК могут по культуре ПДК происходил выраженный синтез
являться внеклеточно также в результате НЕТоза. ИФНα. Удаление из ЦИК LL37 отменяло их
Но здоровый организм располагает механизма способность стимулировать ИФНα [17].
ми, предохраняющими рецепторы клеток врож Источником пептида LL37 в составе ЦИК у
денного иммунитета от контакта с НК. Прежде больных СКВ являются нейтрофилы. Эти клет
всего НКраспознающие домены этих рецепто ки у больных СКВ имеют существенные отли
ров локализуются на внутренней поверхности чия от нейтрофилов здоровых людей. Эти нейт
эндосом клеток врожденного иммунитета и по рофилы характеризуются повышенным апопто
этому они недоступны для НК. Кроме того, при зом, некрозом и НЕТозом. В то же время фаго
наличии во внеклеточной среде мощного арсе цитоз апоптотических нейтрофилов у таких
нала эндонуклеаз, НК практически мгновенно больных существенно понижен. Снижена дегра
расщепляются при выходе из клеток. дация апоптотического материала. На поверхнос
В нейтрофилах во вторичных гранулах нахо ти нейтрофилов выявляется повышенная плот
дится белок кателицидин, hCAP18, который ность молекул LL37. Другим отличием больных
при активации клетки расщепляется с образова СКВ от здоровых доноров является повышен
нием катионного пептида LL37. С помощью ный уровень гранулоцитов низкой плотности
электростатических связей этот пептид образует (LDG) [67]. Эта уникальная субпопуляция нейт
комплексы практически со всеми видами нук рофилов характеризуется незрелым фенотипом
леиновых кислот, в том числе, с аутоДНК и ау (СD14СD15+CD16+CD10+), повышенным син
тоРНК, обладающими выраженными имму тезом ИФНα, ФНО, повышенной экспрессией
ностимулирующими свойствами, в частности, LL37, миелопероксидазы, эластазы, катепсина G.
способностью индуцировать синтез ИФН I типа От обычных нейтрофилов LDG отличаются вы
[60–66]. раженной склонностью к НЕТозу [67, 68].
Пептид LL37 вызывает агрегацию НК и за Помимо антител к различным белкам и НК,
щищает их от действия нуклеаз ДНК/РНК, спо в сыворотке больных СКВ выявляются антитела
собствует эндоцитозу и проникновению НК в к пептиду LL37, αдефензинам (HNP) и анти
эндосомальный отдел дендритных клеток [61], а микробным белкам первичных гранул нейтро
также входит в состав нейтрофильных внекле филов [69]. АнтиLL37 и антиHNPантитела
точных ловушек [16, 17]. Показано, что фраг являются мощными индукторами НЕТоза у
менты ловушек, полученных из нейтрофилов, больных СКВ [17].
обладают способностью индуцировать синтез Таким образом, частичная расшифровка ме
ИФНα в культуре плазмоцитоидных дендрит ханизмов развития СКВ и участие в этом про
ных клеток (ПДК) [17]. Поэтому есть все осно цессе НЕТоза позволяет разработать стратегию
вания полагать, что НЕТоз играет существенную лечения таких пациентов. Следует упомянуть,
роль в развитии аутоиммунных заболеваний. что около 30% больных СКВ вообще не способ
При наличии ингибиторов нуклеаз или при сни ны разрушать ловушки изза низкой активности
жении функциональной активности нуклеаз сывороточной ДНКазы1 (мутации гена), экспрес
(ДНКазы1) у людей с соответствующей предрас сии ингибиторов ДНКазы1 или высоких титров
положенностью, ловушки являются источни аутоантител, защищающих ловушки от деграда
ком аутоантигенов и вызывают развитие ауто ции ДНКазой1 [37, 70]. Было показано [70], что
иммунного ответа на ДНК и белки, входящие в вышеупомянутые группы пациентов обладают
их состав [37]. В настоящее время показано об более высокими титрами аутоантител и страдают
разование ловушек при системной красной вол от такого тяжелого сопутствующего заболевания
чанке (СКВ), ANCAваскулитах, диабете II ти при СКВ, как волчаночный нефрит. Таким обра
па, атеросклерозе, ревматоидном артрите, псо зом, стратегии, направленные на устранение ло
риазе, подагре. вушек и их компонентов, являются на сегодняш
Более подробно роль ловушек исследована ний день наиболее перспективными в лечении
при СКВ. Как известно, СКВ является иммуно больных системной красной волчанкой.
комплексной патологией. В 70х гг. прошлого ве НЕТоз или образование нейтрофильных
ка было установлено, что циркулирующие им внеклеточных ловушек является важным стра
мунные комплексы (ЦИК) больных СКВ состоят тегическим ответом иммунной системы на раз
из ДНК/РНК/белка и специфических IgGанти нообразные патогены. Такой компонент лову

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1588 ВОРОБЬЕВА, ПИНЕГИН

шек, как хроматин, связывает патогены, огра рамму, направленную на защиту хозяина от па
ничивая тем самым их распространение в орга тогенов: фагоцитоз, дегрануляцию или НЕТоз.
низме хозяина, а бактерицидные белки ядра и Однако можно полагать, что интерес, кото
гранул эффективно снижают их вирулентность рый в настоящее время вызывает НЕТоз в науч
или приводят к их полному уничтожению. ном сообществе, позволит в ближайшее время
Кроме выполнения антимикробной функ ответить на многие неясные вопросы, касающи
ции, ловушки участвуют в регуляции ряда неин еся этого уникального процесса.
фекционных процессов, а также являются этио
логическим фактором многих воспалительных и Авторы выражают искреннюю благодар
аутоиммунных заболеваний. ность проф., чл.корр. РАН С.А. Недоспасову за
Несмотря на то, что с момента первого опи организацию этого номера журнала «Биохи
сания НЕТоза A. Циклинским прошло ровно 10 лет, мия», посвященного памяти проф. А.А. Ярили
в биологии этого явления остается еще много бе на, и за ценные рекомендации при подготовке
лых пятен. Так, не ясно, посредством каких меха рукописи данной публикации.
низмов эластаза и МПО попадают в ядро из азуро
фильных гранул на начальных стадиях НЕТоза, Авторы благодарят Е.С. Шилова за прочте
не ясна роль аутофагии в этом процессе, не по ние текста и сделанные им предложения по его
нятно, как клетка выбирает конкретную прог улучшению.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Brinkmann, V., Reichard, U., Goosmann, C., Fauler, B., traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex
Uhlemann, Y., Weiss, D.S., Weinrauch, Y., and Zychlinsky, involved in host defense against Candida albicans, PLoS
A. (2004) Neutrophil extracellular traps kill bacteria, Pathog., 5, e1000639.
Science, 303, 1532–1535. 11. Yousefi, S., Mihalache, C., Kozlowski, E., Schmid, I., and
2. Steinberg, B.E., and Grinstein, S. (2007) Unconventional Simon, H.U. (2009) Viable neutrophils release mitochon
roles of the NADPH oxidase: signaling, ion homeostasis, drial DNA to form neutrophil extracellular traps, Cell
and cell death, Sci. STKE, 379, pe11. Death Differ., 16, 1438–1444.
3. Yousefi, S., Gold, J.A., Andina, N., Lee, J.J., Kelly, A.M., 12. Maianski, N.A., Geissler, J., Srinivasula, S.M., Alnemri,
Kozlowski, E., Schmid, I., Straumann, A., Reichenbach, E.S., Roos, D., and Kuijpers, T.W. (2004) Functional char
J., Gleich, G.J., and Simon, H.U. (2008) Catapultlike acterization of mitochondria in neutrophils: a role restrict
release of mitochondrial DNA by eosinophils contributes ed to apoptosis, Cell Death Differ., 11, 143–153.
to antibacterial defense, Nature Med., 14, 949–953. 13. Pilsczek, F.H., Salina, D., Poon, K.K., Fahey, C., Yipp,
4. von KockritzBlickwede, M., Goldmann, O., Thulin, P., B.G., Sibley, C.D., Robbins, S.M., Green, F.H., Surette,
Heinemann, K., NorrbyTeglund, A., Rohde, M., and M.G., Sugai, M., Bowden, M.G., Hussain, M., Zhang, K.,
Medina, E. (2008) Phagocytosisindependent antimicro and Kubes, P.J. (2010) A novel mechanism of rapid nuclear
bial activity of mast cells by means of extracellular trap for neutrophil extracellular trap formation in response to
mation, Blood, 111, 3070–3080. Staphylococcus aureus, J. Immunol., 185, 7413–7425.
5. Chuammitri, P., Ostojic, J., Andreasen, C.B., Redmond, 14. Fuchs, T.A., Abed, U., Goosmann, C., Hurwitz, R.,
S.B., Lamont, S.J., and Palic, D. (2009) Chicken het Schulze, I., Wahn, V., Weinrauch, Y., Brinkmann, V., and
erophil extracellular traps (HETs): novel defense mecha Zychlinsky, A. (2007) Novel cell death program leads to
nism of chicken heterophils, Vet. Immunol. Immunopathol., neutrophil extracellular traps, J. Cell Biol., 176, 231–241.
129, 126–131. 15. Kessenbrock, K., Krumbholz, M., Schonermarck, U.,
6. Chow, O.A., von KockritzBlickwede, M., Bright, A.T., Back, W., Gross, W.L., Werb, Z., Grone, H.J., Brinkmann,
Hensler, M.E., Zinkernagel, A.S., Cogen, A.L., Gallo, V., and Jenne, D.E. (2009) Netting neutrophils in autoim
R.L., Monestier, M., Wang, Y., Glass, C.K., and Nizet, V. mune smallvessel vasculitis, Nature Med., 15, 623–625.
(2010) Statins enhance formation of phagocyte extracellu 16. GarciaRomo, G.S., Caielli, S., Vega, B., Connolly, J.,
lar traps, Cell Host Microbe, 8, 445–454. Allantaz, F., Xu, Z., Punaro, M., Baisch, J., Guiducci, C.,
7. Altincicek, B., Stotzel, S., Wygrecka, M., Preissner, K.T., Coffman, R.L., Barrat, F.J., Banchereau, J., and Pascual,
and Vilcinskas, A. (2008) Hostderived extracellular nucle V. (2011) Netting neutrophils are major inducers of type I
ic acids enhance innate immune responses, induce coagu IFN production in pediatric systemic lupus erythematosus,
lation, and prolong survival upon infection in insects, J. Sci. Transl. Med., 3, 73ra20, DOI. 10.1126.
Immunol., 181, 2705–2712. 17. Lande, R., Ganguly, D., Facchinetti, V., Frasca, L.,
8. Wen, F., White, G.J., VanEtten, H.D., Xiong, Z., and Conrad, C., Gregorio, J., Meller, S., Chamilos, G.,
Hawes, M.C. (2009) Extracellular DNA is required for root tip Sebasigari, R., Riccieri, V., Bassett, R., Amuro, H.,
resistance to fungal infection, Plant Physiol., 151, 820–829. Fukuhara, S., Ito, T., Liu, Y.J., and Gilliet, M. (2011)
9. Hawes, M.C., CurlangoRivera, G., Wen, F., White, G.J., Neutrophils activate plasmacytoid dendritic cells by releas
Vanetten, H.D., and Xiong, Z. (2011) Extracellular DNA: ing selfDNApeptide complexes in systemic lupus erythe
the tip of root defenses? Plant Sci., 180, 741–745. matosus, Sci. Transl. Med., 3, 73ra19, DOI. 10.1126.
10. Urban, C.F., Ermert, D., Schmid, M., AbuAbed, U., 18. Neeli, I., Dwivedi, N., Khan, S., and Radic, M. (2009)
Goosmann, C., Nacken, W., Brinkmann, V., Jungblut, Regulation of extracellular chromatin release from neu
P.R., and Zychlinsky, A. (2009) Neutrophil extracellular trophils, J. Innate Immun., 1, 194–201.

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1589

19. Lim, M.B.H., Kuiper, J.W.P., Katchky, A., Goldberg, H., 36. Monfregola, J., Johnson, J.L., Meijler, M.M., Napolitano,
and Glogauer, M. (2011) Rac2 is required for the forma G., and Catz, S.D. (2012) MUNC134 protein regulates
tion of neutrophil extracellular traps, J. Leukoc. Biol., 90, the oxidative response and is essential for phagosomal mat
771–776. uration and bacterial killing in neutrophils, J. Biol. Chem.,
20. Oehmcke, S., Mоrgelin, M., and Herwald, H. (2009) 287, 44603–44618.
Activation of the human contact system on neutrophil 37. Hakkim, A., Furnrohr, B.G., Amann, K., Laube, B.,
extracellular traps, J. Innate Immun., 1, 225–230. Abed, U.A., Brinkmann, V., Herrmann, M., Voll, R.E.,
21. GuimarаesCosta, A.B., Nascimento, M.T., Froment, and Zychlinsky, A. (2010) Impairment of neutrophil extra
G.S., Soares, R.P., Morgado, F.N., ConceiсаoSilva, F., cellular trap degradation is associated with lupus nephritis,
and Saraiva, E.M. (2009) Leishmania amazonensis pro Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107, 9813–9818.
mastigotes induce and are killed by neutrophil extracellular 38. Brinkmann, V., and Zychlinsky, A. (2007) Beneficial sui
traps, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106, 6748–6753. cide: why neutrophils die to make NETs, Nature Rev.
22. Clark, S.R., Ma, A.C., Tavener, S.A., McDonald, B., Goodarzi, Microbiol., 5, 577–582.
Z., Kelly, M.M., Patel, K.D., Chakrabarti, S., McAvoy, E., 39. Wartha, F., Beiter, K., Albiger, B., Fernebro, J., Zychlinsky,
Sinclair, G.D., Keys, E.M., AllenVercoe, E., Devinney, A., Normark, S., and HenriquesNormark, B. (2007)
R., Doig, C.J., Green, F.H., and Kubes, P. (2007) Platelet Capsule and Dalanylated lipoteichoic acids protect
TLR4 activates neutrophil extracellular traps to ensnare Streptococcus pneumoniae against neutrophil extracellular
bacteria in septic blood, Nature Med., 13, 463–469. traps, Cell. Microbiol., 9, 1162–1171.
23. Neeli, I., Khan, S.N., and Radic, M. (2008) Histone 40. Sumby, P., Barbian, K.D., Gardner, D.J., Whitney, A.R.,
deimination as a response to inflammatory stimuli in neu Welty, D.M., Long, R.D., Bailey, J.R., Parnell, M.J., Hoe,
trophils, J. Immunol., 180, 1895–1902. N.P., Adams, G.G., Deleo, F.R., and Musser, J.M. (2005)
24. Воробьева Н.В. (2013) NADPH оксидаза нейтрофилов Extracellular deoxyribonuclease made by group A
и заболевания, связанные с ее дисфункцией, Иммуно* Streptococcus assists pathogenesis by enhancing evasion of
логия, 34, 232–238. the innate immune response, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
25. Пинегин Б.В., Маянский А.Н. (2007) Нейтрофилы: 102, 1679–1684.
структура и функция, Иммунология, 6, 374–382. 41. Buchanan, J.T., Simpson, A.J., Aziz, R.K., Liu, G.Y.,
26. Bianchi, M., Hakkim, A., Brinkmann, V., Siler, U., Seger, Kristian, S.A., Kotb, M., Feramisco, J., and Nizet, V.
R.A., Zychlinsky, A., and Reichenbach, J. (2009) (2006) DNase expression allows the pathogen group A
Restoration of NET formation by gene therapy in CGD Streptococcus to escape killing in neutrophil ex tracellular
controls aspergillosis, Blood, 114, 2619–2622. traps, Curr. Biol., 16, 396–400.
27. Hakkim, A., Fuchs, T.A., Martinez, N.E., Hess, S., Prinz, 42. Berends, E.T.M., Horswill, A.R., Haste, N.M., Monestier,
H., Zychlinsky, A., and Waldmann, H. (2011) Activation of M., Nizet, V., and von KockritzBlickwede, M. (2010)
the RafMEKERK pathway is required for neutrophil Nuclease expression by Staphylococcus aureus facilitates
extracellular trap formation, Nature Chem. Biol., 7, 75–77. escape from neutrophil extracellular traps, J. Innate
28. Papayannopoulos, V., Metzler, K.D., Hakkim, A., and Immun., 2, 576–586.
Zychlinsky, A. (2010) Neutrophil elastase and myeloperox 43. Beiter, K., Wartha, F., Albiger, B., Normark, S.,
idase regulate the formation of neutrophil extracellular Zychlinsky, A., and HenriquesNormark, B. (2006) An
traps, J. Cell Biol., 191, 677–691. endonuclease allows Streptococcus pneumoniae to escape
29. Metzler, K.D., Fuchs, T.A., Nauseef, W.M., Reumaux, D., from neutrophil extracellular traps. Curr. Biol., 16,
Roesler, J., Schulze, I., Wahn, V., Papayannopoulos, V., 401–407.
and Zychlinsky, A. (2011) Myeloperoxidase is required for 44. Weinrauch, Y., Drujan, D., Shapiro, S., DWeiss, J., and
neutrophil extracellular trap formation: implications for Zychlinsky, A. (2002) Neutrophil elastase targets virulence
innate immunity, Blood, 117, 953–959. factors of enterobacteria, Nature, 417, 91–94.
30. Palmer, L.J., Cooper, P.R., Ling, M.R., Wright, H.J., 45. Averhoff, P., Kolbe, M., Zychlinsky, A., and Weinrauch, Y.
Huissoon, A., and Chapple, I.L.C. (2012) Hypochlorous (2008) Single residue determines the specificity of neu
acid regulates neutrophil extracellular trap release in trophil elastase for Shigella virulence factors, J. Mol. Biol.,
humans, Clin. Exp. Immunol., 167, 261–268. 377, 1053–1066.
31. Wang, Y., Li, M., Stadler, S., Correll, S., Li, P., Wang, D., 46. Parker, H., Albrett, A.M., Kettle, A.J., and Winterbourn,
Hayama, R., Leonelli, L., Han, H., Grigoryev, S.A., Allis, C.C. (2012) Myeloperoxidase associated with neutrophil
C.D., and Coonrod, S.A. (2009) Histone hypercitrullina extracellular traps is active and mediates bacterial killing in
tion mediates chromatin decondensation and neutrophil the presence of hydrogen peroxide, J. Leukoc. Biol., 91,
extracellular trap formation, J. Cell Biol., 184, 205–213. 369–376.
32. Li, P., Li, M., Lindberg, M.R., Kennett, M.J., Xiong, N., 47. Bianchi, M., Niemiec, M.J., Siler, U., Urban, C.F., and
and Wang Y. (2010) PAD4 is essential for antibacterial Reichenbach, J. (2011) Restoration of antiAspergillus
innate immunity mediated by neutrophil extracellular defense by neutrophil extracellular traps in human chronic
traps, J. Exp. Med., 207, 1853–1862. granulomatous disease after gene therapy is calprotectin
33. Hemmers, S., Teijaro, J.R., Arandjelovic, S., and Mowen, dependent, J. Allergy Clin. Immunol., 127, 1243–1252.
K.A. (2011) PAD4mediated neutrophil extracellular trap 48. Saitoh, T., Komano, J., Saitoh, Y., Misawa, T., Takahama,
formation is not required for immunity against influenza M., Kozaki, T., Uehata, T., Iwasaki, H., Omori, H.,
infection, PLoS ONE, 6, e22043. Yamaoka, S., Yamamoto, N., and Akira, S. (2012)
34. Remijsen, Q., Vanden Berghe, T., Wirawan, E., Asselbergh, Neutrophil extracellular traps mediate a host defense
B., Parthoens, E., De Rycke, R., Noppen, S., Delforge, response to human immunodeficiency virus1, Cell Host
M., Willems, J., and Vandenabeele, P. (2011) Neutrophil Microbe, 12, 109–116.
extracellular trap cell death requires both autophagy and 49. Fadeel, B. (2009) Babies born without safety NET, Blood,
superoxide generation, Cell Res., 21, 290–304. 113, 6270–6271.
35. Farley, K., Stolley, J.M., Zhao, P., Cooley, J., and Remold 50. Yost, C.C., Cody, M.J., Harris, E.S., Thornton, N.L.,
O’Donnell, E. (2012) A serpinB1 regulatory mechanism is McInturff, A.M., Martinez, M.L., Chandler, N.B.,
essential for restricting neutrophil extracellular trap gener Rodesch, C.K., Albertine, K.H., Petti, C.A., Weyrich,
ation, J. Immunol., 189, 4574–4581. A.S., and Zimmerman, G.A. (2009) Impaired neutrophil

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014

1590 ВОРОБЬЕВА, ПИНЕГИН
extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune
deficiency of human neonates, Blood, 113, 6419–6427.
51. Yost, C.C., and Zimmerman, G.A. (2009) Response:
Gestational age as a factor in neutrophil extracellular trap
formation, Blood, 114, 4911–4912.
52. Yoo, D.G., Winn, M., Pang, L., Moskowitz, S.M.,
Malech, H.L., Leto, T.L., and Rada, B. (2014) Release of
cystic fibrosis airway inflammatory markers from
Pseudomonas aeruginosastimulated human neutrophils
involves NADPH oxidasedependent extracellular DNA
trap formation, J. Immunol., 192, 4728–4738.
53. Marcos, V., Zhou, Z., Yildirim, A.O., Bohla, A., Hector,
A., Vitkov, L., Wiedenbauer, E.M., Krautgartner, W.D.,
Stoiber, W., Belohradsky, B.H., Rieber, N., Kormann, M.,
Koller, B., Roscher, A., Roos, D., Griese, M., Eickelberg,
O., Doring, G., Mall, M.A., and Hartl, D. (2010) CXCR2
mediates NADPH oxidaseindependent neutrophil extra Kumar, C.T., Wen, Y., Jordan, J.L., Wu, L.H., Dragnea,
cellular trap formation in cystic fibrosis airway inflamma B., San Mateo, L., and Kao, C.C. (2011) LL37 and cation
tion, Nature Med., 16, 1018–1023.
54. Papayannopoulos, V., Staab, D., and Zychlinsky, A. (2011)
Neutrophil elastase enhances sputum solubilization in cys 65. Chuang, C.M., Monie, A., Wu, A., Mao, C.P., and Hung,
tic fibrosis patients receiving DNase therapy, PLoS One, 6,
e28526.
55. Fuchs, T.A., Brill, A., Duerschmied, D., Schatzberg, D.,
Monestier, M., Myers, D.D., Jr., Wrobleski, S.K.,
Wakefield, T.W., Hartwig, J.H., and Wagner, D.D. (2010)
Extracellular DNA traps promote thrombosis, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 107, 15880–15885.
56. Geddings, J.E., and Mackman, N. (2014) New players in
haemostasis and thrombosis. Thromb. Haemost., 111,
570–574.
57. Farquharson, D., Butcher, J.P., and Culshaw, S. (2012)
Periodontitis, Porphyromonas, and the pathogenesis of
rheumatoid arthritis, Mucosal Immunol., 5, 112–120.
58. Vitkov, L., Klappacher, M., Hannig, M., and Krautgartner,
W.D. (2009) Extracellular neutrophil traps in periodontitis,
J. Periodontal Res., 44, 664–672.
59. Ярилин А.А. (2010) Иммунология, ГЭОТАРМедиа,
Мoсква.
60. Lande, R., Gregorio, J., Facchinetti, V., Chatterjee, B.,
Wang, Y.H., Homey, B., Cao, W., Wang, Y.H., Su, B.,
Nestle, F.O., Zal, T., Mellman, I., Schroder, J.M., Liu,
Y.J., and Gilliet, M. (2007) Plasmacytoid dendritic cells
sense selfDNA coupled with antimicrobial peptide,
Nature, 449, 564–569.
61. Ganguly, D., Chamilos, G., Lande, R., Gregorio, J.,
Meller, S., Facchinetti, V., Homey, B., Barrat, F.J., Zal, T.,
and Gilliet, M. (2009) SelfRNAantimicrobial peptide
complexes activate human dendritic cells through TLR7
and TLR8, J. Exp. Med., 206, 1983–1994.
62. Chamilos, G., Gregorio, J., Meller, S., Lande, R.,
Kontoyiannis, D.P., Modlin, R.L., and Gilliet, M. (2012)
Cytosolic sensing of extracellular selfDNA transported
into monocytes by the antimicrobial peptide LL37, Blood,
120, 3699–3707.
63. Singh, D., Qi, R., Jordan, J.L., San Mateo, L., and Kao,
C.C. (2013) The human antimicrobial peptide LL37, but
not the mouse ortholog, mCRAMP, can stimulate signal
ing by poly(I:C) through a FPRL1dependent pathway, J.
Biol. Chem., 288, 8258–8268.
64. Lai, Y., Adhikarakunnathu, S., Bhardwaj, K., Ranjith

ic peptides enhance TLR3 signaling by viral doublestrand
ed RNAs, PLoS One, 6, e26632.
C.F. (2009) Treatment with LL37 peptide enhances anti
tumor effects induced by CpG oligodeoxynucleotides
against ovarian cancer, Hum. Gene Ther., 20, 303–313.
66. Kahlenberg, J.M., and Kaplan, M.J. (2013) Little peptide,
big effects: the role of LL37 in inflammation and autoim
mune disease, J. Immunol., 191, 4895–4901.
67. Kaplan, M.J. (2011) Neutrophils in the pathogenesis and
manifestations of SLE, Nature Rev. Rheumatol., 27,
691–699.
68. Denny, M.F., Yalavarthi, S., Zhao, W., Thacker, S.G.,
Anderson, M., Sandy, A.R., McCune, W.J., and Kaplan,
M.J. (2010) A distinct subset of proinflammatory neu
trophils isolated from patients with systemic lupus erythe
matosus induces vascular damage and synthesizes type I
IFNs, J. Immunol., 184, 3284–3297.
69. Будихина А.С., Пинегин Б.В. (2008) Дефензины –
мультифункциональные катионные пептиды челове
ка, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2,
31–40.
70. Leffler, J., Martin, M., Gullstrand, B., Tydеn, H., Lood,
C., Truedsson, L., Bengtsson, A.A., and Blom, A.M.
(2012) Neutrophil extracellular traps that are not degraded
in systemic lupus erythematosus activate complement
exacerbating the disease, J. Immunol., 188, 3522–3531.
БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014
 РОЛЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛОВУШЕК В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ 1591

NEUTROPHIL EXTRACELLULAR TRAPS:

MECHANISMS OF FORMATION
AND THEIR ROLE IN HEALTH
AND DISEASE
N. V. Vorobjeva1, B. V. Pinegin2
1
M. V. Lomonosov Moscow State University, Biology faculty,
Lenin Hills 1/12, Moscow 119991, Russia;
E*mail: nvvorobjeva@mail.ru
2
National Research Center «Institute of Immunology»
of the Federal Medical*Biological Agency, Kashirskoe shosse 24,
bld. 2, Moscow 115478, Russia
Received July 5, 2014

Here recent insights into a specific type of cell death typical for neutrophils called NETosis are summarized. NETosis
is a process of generation of Neutrophil Extracellular Traps (NETs), the main components of which are DNA, gran
ular antimicrobial peptides, and nuclear and cytoplasmic proteins. The structure of NETs determines their bacterici
dal, fungicidal, antiprotozoan, and antiviral properties. Therefore, production of NETs by neutrophils is an essential
immune response to infection. Besides its antimicrobial function, NETosis is involved in many inflammatory and
autoimmune disorders and participates in regulation of noninfectious processes. In this review, the molecular mech
anisms of NET formation, their bactericidal action, as well as implication in some noninfectious, autoimmune, and
inflammatory processes are discussed.
Key words: neutrophils, neutrophil extracellular traps, NETosis, autoimmune diseases, inflammation

БИОХИМИЯ том 79 вып. 12 2014