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Introducción

Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energía más rápidamente debido a la
presencia de catalizadores biológicos llamados enzimas. Como sucede con los catalizadores
inorgánicos, las enzimas modifican la velocidad de una reacción sin alterar el equilibrio final y
solo se requieren pequeñas cantidades para efectuar la concentración de un gran número de
moléculas de sustrato. El alfa-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva
humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El
almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilasa y la amilo pectina, ambos
polisacáridos de glucosa. La amilasa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por
enlaces a- C1-C4, mientras que la amilo pectina tiene, además de estos últimos enlaces,
uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La a-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto
en la amilasa como en la amilo pectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas
(oligosacáridos) como productos. Si bien es cierto existen evidencias de que la enzima poli-ADP
ribosa polimerasa-1 (PARP) Desempeña un papel muy importante en la modulación de la
expresión génica durante el desarrollo y en respuesta a señales celulares específicas,
ejerciendo su acción a diferentes niveles. PARP-1 pertenece a una familia de enzimas (PARP)
que usando NAD+ como sustrato, sintetizan y transfieren homopolímeros de ADH-ribosa en
residuos de ácido glutámico en proteínas aceptoras principalmente involucradas en el
experimento a realizar como la actividad enzimática. Para poder mostrar la actividad
enzimática se debe tener presente fundamentalmente que la acción catalítica de las enzimas
es de carácter específico; o sea, cada reacción química debe ser catalizada por una
determinada enzima. El reactante o sustancia química que reacciona para dar un producto en
un sistema enzimático se llama SUATRATO, habría entonces tantos sistemas enzimáticos como
sustratos reaccionantes existen en un organismo vivo. Debido a que solo se necesitan muy
bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada, solo muy pocas enzimas
pueden medirse directamente. ¿Qué es una enzima? Las enzimas son proteínas que ayudan a
que las reacciones químicas ocurran con mayor rapidez. Sin enzimas nuestros cuerpos se
detendrían en seco. En este experimento, las enzimas que estamos utilizando provienen del
ablandador de carnes y cortan las proteínas tal como un par de tijeras.

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo Pipetas graduadas de 1 ml, 5ml y 10ml. Gradilla Frasco goteros Pinzas para
tubos de ensayo Con respecto a los materiales que se van a emplear como reactivos tenemos:
- Solución de almidón con un PH 6.6, al 1%. Cloruro de sodio solución al 0.1M Enzima al 1%
(AMILASA SALIVAL) Ácido clorhídrico 0.05N Solución yodada Reactivo folin Wu : A) Solución
Cúprica alcalina B) Solución fosfomolíbdica. Gradilla

Procedimiento

Primero se arma el siguiente sistema : TUBOS COMPONENTES I II Solución de almidón 1% pH


6.6 5 ml. 5 ml. Solución de cloruro de sodio 0.1M 1 ml. 1 ml. Agua destilada 4 ml. 3 ml. 1.1.
Preparar los tubos I y II con cada componente indicado. 1.2. Colocar los tubos al baño de agua
a 37°C por 5 minutos. 1.3. Agregar 1 ml. de enzima Amilasa al 1% al tubo II. 1.4. Volverlos a
colocar al baño de agua a 37°C durante 10 minuto
Explicación: A simple vista el contenido del tubo I y II es idéntico, lo cual no es correcto, porque
en el tubo II ocurrió la reacción de la enzima Amilasa con Almidón (enzima-sustrato) pero no es
visible debido a que no usamos un marcador. 2. Luego: TUBOS COMPONENTES III IV Ácido
clorhídrico 0.05 N 5 ml. 5 ml. 0.5 ml. 0.5 ml. 0.5 ml. 0.5 ml. De los tubos I y II
(respectivamente): Etapa 1 Solución yodada Preparar los tubos III y IV con cada componente
indicado. De cada uno de los tubos de incubación transferir 0.5 ml. de su correspondientes del
cuadro siguiente (contenido del tubo I al tubo III y el contenido del tubo II al tubo IV),
inmediatamente de cumplidos los 10 minutos. Mezclar, observar y anotar los resultados de
cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante.

Explicación: El cambio de color del tubo III de incoloro a azul-violáceo se debe a que el
indicador usado (solución yodada) reacciono con la presencia del almidón (sustrato), en
cambio en el tubo IV el color amarillo claro se debió a que el indicador no encontró sustrato
(porque se había convertido en productos) sobre el cual actuar, manteniendo el color
característico de la solución yodada. Por último: TUBOS V VI 1ml. 1ml. 1ml. 1ml. Solución
Fosfomolíbdica 1ml. 1ml. Agua destilada 2ml. 2ml. COMPONENTES De los tubos I y II
(respectivamente): Etapa 1 Solución Cúprica alcalina Hervir 8 minutos Enfriar. Preparar los
tubos V y VI con cada componente indicado (de los tubos I y II de la etapa 1 y solución cúprica
alcalina). Poner los tubos a hervir en baño maría durante 8 minutos.

Luego ponerlos a enfriar. Por último agregar la solución fosfomolíbdica y agua destilada.
Explicación: En el tubo V se obtuvo un color celeste, distinto al tubo VI en el cual se obtuvo un
color naranja, esto se debió a que la solución cúprica reacciono con los productos de la
reacción enzimática que son azucares reductores como Glucosa, Maltosa, etc., los cuales
actúan sobre el cobre, reduciéndolo. Al agregar la solución fosfomolíbdica ocurren diferentes
cosas en los tubos. En el tubo V no se observo ningún cambio en el color debido a que no hay
ningún tipo de productos, en cambio en el tubo VI paso del color naranja a un azul-violáceo
debido a la reacción reductora de los productos sobre el molibdeno (azul de molibdeno).

Conclusiones

La presente práctica de laboratorio nos permitió determinar que existen reactivos llamados
indicadores capaces de demostrarnos la actividad enzimática a partir de las variaciones del
color que mostraban los tubos después de cada reacción. La enzima Amilasa salival tiene la
capacidad para degradar el Almidón en azúcares más simples y con carácter reductor como la
Glucosa, Maltosa

Referencias

https://es.slideshare.net/DANYYSOTOO/informe-de-bioquimica