Pichia pastoris

ichia pastoris es una especie de levadura metilo trófica. Pichia se usa ampliamente para la
producción de proteínas utilizando técnicas de ADN recombinante. Por lo tanto, se utiliza
eninvestigación bioquímica y procesos biotecnológicos.

Trataresu aplicación es algunos aritculos

La fermentación continua se aplicó a la producción de quimotripsinógeno humano

recombinante B (hCTRB) por levadura metilotrófica Pichia pastoris como herramienta para
el análisis cinético del crecimiento y la formación de productos. Usando metanol como
única fuente de carbono, energía e inducción, el crecimiento celular podría describirse
mediante un enfoque MONOD no competitivo . Máximo la tasa de crecimiento μ max se
determinó a 0.084 h ± 1 y el valor K M para metanol a 0.22 g´L ± 1 , respectivamente. Con
respecto al producto formación, se estableció un modelo similar que exhibe una
concentración de metanol de 0.13 g´L ± 1 como el valor K M y un máximo tasa de formación
de productos específicos de biomasa de π max = 0.23 mg´g ± 1 ´h ± 1 . La producción de
hCTRB estuvo estrictamente relacionada con el crecimiento. Los datos proporcionados
cubren el rango de concentraciones de metanol entre 0 y 4 g´L ± 1 . Concentraciones de
sustrato superiores a esta superior valor llevó a un colapso completo de la formación del
producto. Este cambio en el fenotipo resultó ser irreversible, lo que indica una genética
Inestabilidad de Pichia pastoris transformada causada por un exceso de metanol

En la investigación se llevo acabo una configuración de fermentación continuautilizado

para la investigación de las influencias de la temperatura yconcentración del inductor en el
crecimiento y la formación del producto parala expresión extracelular de quimio humano
recombinantetripsinógeno B de Pichia pastoris. En un enfoque nutristático,usando metanol
como la única fuente de carbono y energía tambiénen cuanto a la inducción del promotor
AOX1, el sustratola concentración estaba estrictamente controlada por un circuito
cerradoción En esta configuración, la tasa de dilución D (μ) resultó en funciónde los
parámetros de fermentación establecidos
La influencia de la concentración de metanol en la tasa de crecimientode Pichia pastoris
productor de quimotripsinógeno se informaen la Fig. 4. Dentro del rango de concentración
utilizado para experimentos, una inhibición del crecimiento no podría ser observado. Por lo
tanto, un enfoque M ONOD como se describe enEq. (4) podría usarse para la adaptación de
un modelo de crecimientoa los datos obtenidos de la fermentación continua con alta
precisión El valor K M , que describe la concentración de sustrato en tasa de crecimiento
media máxima
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La cinética de crecimiento de P. pastoris y los efectos tóxicos derivados de la presencia de
metanol en el medio, fueroncomparados en medio sólido (SSF) y medio líquido (SmF). Los
cultivos SmF presenta lisis moderada a las 72h sin metanol,comparados con la ausencia de
lisis que se detectan en los cultivos SSF. La presencia de metanol causó lisis en SmF y SSF,
sinembargo, fue tres veces mayor este efecto en SmF. La biomasa máxima producida en
SSF fue de 52 g / L, en comparación con laobtenida en SmF, 42 g / L. Las observaciones
microscópicas observaciones agregados celulares más pequeños en SmF comparadoscon
los encontrados en SSF. Este es el primer trabajo donde se muestra un efecto menor de la
autofagia celular en cultivosen espuma de poliuretano a bajas concentraciones de
metanol comparados con los cultivos en matraz agitado. Estos resultadospueden
explicarse en términos de comunicación célula a célula y en diferentes condiciones en la
difusión en los agregadoscelulares. Este trabajo abre la posibilidad de utilizar espuma de
poliuretano para cultivos SSF con el objetivo de producirproteınas recombinantes
utilizando glicerol como fuente de carbono y metanol como inductor para la expresión

se siguió la evolución del peso de las células secas.por la ecuación logística Velhurst-Pearl
como anteriormentedescrito (Viniegra-González et al., 2003). Donde, X max es el valor
máximo de concentración de la biomasa. X (g L −1 ), y µ (h −1 ) es la tasa específica de
crecimiento. Después de la ecuación de integración 1 entre elvalor inicial X 0 y el valor
final X (t) , el siguientese obtiene la expresión.
De manera similar a la sección anterior, la inicialpuntos de datos de crecimiento de seis
fermentaciones independientesde P. pastoris, antes de la adición de metanol,
fueronajustado por la ecuación logística para estimar elvalores extrapolados máximos de
concentración de biomasa(X max ). Vale la pena notar que el máximo observadolos
valores fueron superiores al 95% de X max extrapoladovalores. Por lo tanto, este
parámetro es una buena indicación deEl nivel de biomasa alcanzado por el uso de glicerol
como la principal fuente de carbono y antes de agregar metanol
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Un modelo bioquímico cinético estructurado para el crecimiento de Pichia pastoris y la
producción de proteínas recombinantes.capaz de predecir la producción de proteína r y
optimizar la estrategia de alimentación se informa. Pichia pastoris fue di-dividido en tres
compartimentos, se consideró el producto recombinante eritropoyetina humana
(rHuEPO)en un compartimento, las enzimas alcohol oxidasa y proteasa extracelular se
ensamblaron en la enzimacompartimento matic y el resto de los componentes celulares
(incluidas las proteasas intracelulares) se reunieron enEl compartimento celular. Después
de la identificación de parámetros por el método simplex, el análisis de sensibilidad
fuellevado a cabo para confirmar que se alcanzaron los valores óptimos globales para los
parámetros del modelo.El modelo simuló con éxito los cambios dinámicos y la producción
resultante de rHuEPO causada porvariaciones en la tasa de alimentación de metanol,
incluso en el retraso y las fases estacionarias. El modelo con éxitopredijo las estrategias de
alimentación óptimas y tiene un gran potencial para su uso en la simulación y control de
procesosde la producción de proteínas recombinantes glicosiladas por las células de Pichia
pastoris
La figura presenta el modelo estructural que considera los afectores importantes de la
producción de proteínas recombinantes en Pichia pas-toris expresada a partir de un gen
bajo el promotor AOX 1. En este modelo, la celda se dividió en tres compartimentos: (i) un
equipo de producción partición para el producto proteico recombinante, eritropoi-
humanoetin (rHuEPO); (ii) un compartimento enzimático que contiene alcoholenzimas
oxidasas y proteasas; y (iii) un compartimento celular con-conteniendo todos los demás
componentes celulares. Solo las proteasas extracelulares fueronincluido en el
compartimento enzimático y el pro- intracelularlas burlas se agruparon con el resto de los
componentes celulares, ya que HuEPO fue diseñado para ser secretado en el medio
extracelulary así se degrada principalmente por proteasas extracelulares. Se asumió que la
tasa de producción de proteínas extracelulares es igual a su velocidad de transporte al
[1] [2] [3] [4] [5]

Referencias

[1] M. Lopez and G. Viniegra, "Differential toxicity caused by methanol on the growth of pichia
pastoris cultured in solid-state and in submerged fermentation," Revista Mexicana de
ingeniería química, vol. XVI, no. 3, pp. 735-743, 2017.

[2] C. Simons and K. Thomas, "Recombinant protein production with pichia pastoris in continuos
fermentation," Eng. Life. Sci., no. 8, pp. 229-235, 2002.

[3] E. Çelik, P. Çalk and S. Oliver, "A structured kinetic model for recombinant protein production
by Mut+ strain of pichia pastoris," Chemical Engineering Science, no. 64, pp. 5028 - 5035,
2009.

[4] M. Jahic, J. Mulder and H. ka, "Modeling of growth and energy metabolism of Pichia pastoris
producing a fusion protein," Bioprocess Biosyst Eng, no. 24, p. 385–393, 2002.

[5] N. KirikyaliI and K. Connerton, "Heterologous expression and kinetic characterisation of

Neurospora crassa β-xylosidase in Pichia pastoris," Enzyme and Microbial Technology, vol. 57,
pp. 63-68, 2014.