Dos estudios consiguen generar células madre de la sangre a partir de células pluripotentes

POR GENÉTICA MÉDICA · PUBLICADO EL 20 DE MAYO DE 2017

Dos grupos de investigadores han conseguido por primera vez obtener células madre
hematopoyéticas y progenitoras de la sangre a partir de células madre pluripotentes humanas.

Desde el descubrimiento y aislamiento de las células madre embrionarias, y posteriormente, las

células madre pluripotentes, la comunidad científica ha mantenido un gran interés en generar los
diferentes tipos de células de nuestro organismo, con fines terapéuticos. Ambos tipos de células
madre tienen el potencial de diferenciarse en múltiples tipos celulares cuando se les administra un
conjunto de factores de transcripción concretos, que reproducen lo que sucede durante el
desarrollo embrionario. En un contexto clínico, la idea base es simple: disponer de una fuente de
células para reemplazar aquellas dañadas o alteradas en un paciente.

En los últimos años, diferentes equipos han conseguido obtener células nerviosas, o cardiacas,
entre otras, a partir de las células madre embrionarias o pluripotentes. Sin embargo, la generación
de células sanguíneas era una barrera que no había podido ser flanqueada. Hasta ahora.

En el último número de la prestigiosa revista Nature, dos grupos de investigación independientes

acaban de publicar la producción de células madre hematopoyéticas, aquellas con potencial para
generar los diferentes tipos de células de la sangre, por dos métodos diferentes, a partir de
células endoteliales, las células que recubren los vasos sanguíneos.

En uno de los trabajos Sugimura y colaboradores adaptan un método previo para obtener células
endoteliales hemogénicas a partir de células madre pluripotenciales y a continuación añaden
diferentes factores de transcripción para dirigir a las células obtenidas hacia la generación de
células de la sangre. Los investigadores probaron diferentes combinaciones de factores, hasta
identificar un conjunto de siete de ellos (ERG, HOXA5, HOXA9, HOXA10, LCOR, RUNX1 y SPI1) que
eran los suficientes y necesarios para generar células madre hematopoyéticas y células
progenitoras. Semanas después de trasplantar las células humanas endoteliales obtenidas en
ratones, el equipo consiguió aislar diferentes tipos celulares sanguíneos humanos en la médula
ósea y sangre de los ratones. Además, algunos de los ratones eran capaces de generar una
respuesta inmunitaria humana.

Células progenitoras de la sangre y células madre, capaces de generar múltiples tipos de células
sanguíneas.“Este paso abre una oportunidad para tomar células de pacientes con trastornos
genéticos de la sangre, utilizar edición génica para corregir su defecto genético y hacer células
sanguíneas funcionales,” señala Ryohichi Sugimura, primer autor del trabajo e investigador
postdoctoral en el Boston Children’s Hospital. “Esto también nos proporciona el potencial de tener
una fuente ilimitada de células madre de la sangre a partir de células de donantes universales.
Podría aumentar potencialmente el suministro de sangre para los pacientes que necesitan
transfusiones.”
Por otra parte, Raphael Lis y colaboradores consiguen reprogramar células endoteliales adultas de
ratón en células madre hematopoyéticas, mediante la expresión transitoria de cuatro factores de
transcripción (Fosb, Gfi1, Runx1 y Spi1). El estudio también muestra que algunos tipos de células
endoteliales especializados, denominados células del nicho vascular, sirven como ambiente
nutriente en el que las células madre hematopoyéticas pueden autorenovarse. “Pensamos que la
diferencia es el nicho vascular,” señala Jason Butler, profesor en el Weill Cornell Medicine. “Crecer
las células madre en el nicho vascular las devuelve al contexto del que provienen y se multiplican.
Pensamos que es por esto por lo que fuimos capaces de conseguir que las células madre se
autorenueven.”

“Nuestro modelo de expansión de células madre en el nicho vascular podría ser utilizado para
clonar los factores de crecimiento clave desconocidos que son producidos por el nicho y son
esenciales para la auto-perpetuación de las células madre,” indica Shahin Rafii, director del Ansary
Stem Cell Institute, profesor en la Universidad Weill Cornell y director del trabajo. “La
identificación de esos factores podría ser importante para desvelar los secretos de la longevidad
de las células madre y traducir el potencial de la terapia de células madre al escenario clínico.”

células madre hematopoyéticas

Células madre hematopoyéticas reprogramadas obtenidas de células de ratón, desarrollándose

junto a un grupo de células del nicho vascular (en gris) que proporcionan los nutrientes necesarios
para la reprogramación. Imagen: Dr. Raphael Lis/Flow Cytometry and Microscopy Core, Starr
Foundation, Tri-Institutional Stem Cell Derivation Laboratory.

Los dos trabajos comparten algunos de los factores de transcripción necesarios para crear un
ambiente celular concreto y propicio para la diferenciación de las células progenitoras de la
sangre.
A pesar de los prometedores resultados, ambos trabajos presentan algunas limitaciones y retos
que deberán ser resueltos en el futuro. Por ejemplo, el rendimiento de células modificadas que
dan lugar a células madre hematopoyéticas con capacidad proliferativa, aunque suficiente para
repoblar la sangre, es pequeño todavía. Además, será necesario evaluar a largo plazo la posibilidad
de que las células madre hematopoyéticas programadas puedan convertirse en células cancerosas.
El trabajo de Lis y colaboradores muestra que no hay evidencias de este proceso pasadas 20
semanas del injerto. No obstante será necesario considerar un periodo temporal más amplio. Por
último, será necesario optimizar el método por el cual se introducen los factores de transcripción
en las células para asegurar su completa seguridad.

En caso de escalar la producción de células madre a un sistema humano, la tecnología podría

utilizarse para proporcionar células sanguíneas sanas a pacientes con determinadas patologías. Las
células de la sangre tienen una vida limitada y deben ser renovadas de forma continua, tarea de la
que se encargan las células madre o progenitoras de la sangre. Cuando este proceso está alterado,
pueden producirse enfermedades como la anemia, leucemia y otras condiciones. La posibilidad de
generar células madre sanguíneas del propio paciente podría también solventar los problemas de
los pacientes que esperan un donante de médula ósea pero no tienen a nadie compatible.

En el futuro el desarrollo de técnicas para generar células madre hematopoyéticas, unido a la

posibilidad de editar el genoma y corregir errores genéticos responsables de enfermedades podría
suponer un gran paso hacia adelante en el tratamiento de ciertas condiciones humanas. Podría ser
posible tomar células de un paciente, reprogramarlas en células pluripotenciales, editarlas y
diferenciarlas en células madre hematopoyéticas que fueran introducidas de nuevo en el paciente

Fabricación de células sanguíneas personalizadas para pacientes.

Irónicamente, el trasplante de células madre de la sangre, en forma de trasplante de médula ósea,

fue el primer tipo de terapia con células madre que se utilizó clínicamente. Los trasplantes de
médula ósea ofrecen una cura para ciertos cánceres, trastornos de la sangre, deficiencias
inmunológicas e incluso trastornos metabólicos . Pero requieren un donante compatible. Cuando
no se puede encontrar una combinación perfecta, se necesitan tratamientos severos de supresión
inmunológica para prevenir reacciones peligrosas de injerto contra huésped, en las cuales las
células del donante atacan las células del paciente.

George Q. Daley células madre hematopoyéticas células madre hematopoyéticas

Daley hablando en la manifestación de la Marcha por la Ciencia en Boston en abril

Las células madre de la sangre también se pueden obtener, de manera más segura, a partir de la
sangre del cordón umbilical. Pero la cantidad de células madre sanguíneas en un solo cordón a
menudo no es suficiente para niños mayores y adultos. El laboratorio de Leonard Zon, MD ,
también parte del Programa de Investigación de Células Madre de Boston Children's, ha estado
trabajando durante una década para descubrir medicamentos que aumentan la producción de
células madre de la sangre .

En 2013, los laboratorios de Daley y Zon lograron que las células iPS produjeran células
progenitoras de la sangre. Esto también fue una solución muy útil, ya que estas células también
producen varios tipos de células sanguíneas. Le permitió al equipo modelar la anemia de Diamond
Blackfan en un plato y realizar una detección de drogas de alto rendimiento.

Pero el trabajo publicado hoy acerca al mundo aún más a la fabricación de células madre de buena
fe a pedido.

"Este paso abre la oportunidad de tomar células de pacientes con trastornos genéticos de la
sangre, utilizar la edición de genes para corregir su defecto genético y crear células sanguíneas
funcionales", dice Ryohichi (Rio) Sugimura, MD, PhD, el primer autor del estudio y un postdoctoral
compañero en el laboratorio de Daley . “Esto también nos da el potencial de tener un suministro
ilimitado de células madre de sangre y sangre al tomar células de donantes universales. Esto
podría potencialmente aumentar el suministro de sangre para los pacientes que necesitan
transfusiones ".

Las células madre hematopoyéticas dan lugar a todos los linajes de células sanguíneas, y su
producción in vitro ha sido un objetivo largamente buscado de la biología de células madre. Dos
grupos ahora logran esta hazaña por diferentes medios. Véanse los artículos p.432 y p.439
Todo el sistema sanguíneo de los mamíferos se puede restaurar a partir de una única célula madre
hematopoyética (HSC). Estas células que se renuevan a sí mismas residen en la médula ósea,
donde su proliferación y diferenciación están estrechamente reguladas para garantizar un
suministro continuo de células sanguíneas durante toda la vida. La alta capacidad regenerativa de
las HSC las hace centrales para los trasplantes de médula ósea que salvan vidas, pero también las
hace propensas a adquirir mutaciones genéticas que inician la leucemia. La capacidad de fabricar
HSC en el laboratorio, por lo tanto, es muy prometedora para la terapia celular, la detección de
fármacos y los estudios del desarrollo de la leucemia. Dos estudios 1 , 2 en esta edición resumen
protocolos para lograr precisamente eso.

En el embrión, se cree que las primeras HSC se desarrollan a partir de células endoteliales
"hemogénicas" especializadas que recubren las paredes de un vaso sanguíneo llamado aorta
dorsal 3 , 4 . Los mecanismos moleculares precisos detrás de esta conversión intrigante aún no se
han definido, pero son ampliamente pensaron 5 a ser importante para el éxito in vitro generación
de HSCs. Los estudios actuales tomaron esta suposición como la base para el desarrollo de sus
protocolos.

En el primer estudio, Sugimura et al . 1 ( página 432 ) comenzó con células madre pluripotentes
humanas (PSC), que pueden dar lugar a cualquier tipo de célula en el cuerpo. Los autores
adaptaron un método anterior 6 para derivar células endoteliales hemogénicas a partir de PSC
humanas. Luego identificaron un subconjunto de siete factores de transcripción que podrían
inducir a las células endoteliales hemogénicas a convertirse en HSC inmaduras.

En el segundo estudio, Lis et al . 2 ( página 439 ) convirtieron directamente células endoteliales

adultas de ratón en HSC inmaduras a través de la expresión transitoria de un panel de cuatro
genes de factor de transcripción, incluidos dos, Runx1 y Spi1 , que también fueron utilizados por
Sugimura y colegas. La estrategia del grupo abre la emocionante perspectiva de que las HSC
podrían eventualmente ser inducidas directamente desde los propios tejidos de una persona.

El desarrollo de las HSC se ha comparado con la progresión de una sala de maternidad a una
escuela de finalización 7 , siendo la primera donde nacen las HSC y la última donde madura en
respuesta a señales externas. Esta analogía parece adecuada para los artículos actuales ( Fig. 1 ).
En ambos casos, la programación por factores de transcripción fue necesaria para el nacimiento de
HSC, y las señales extracelulares fueron esenciales para la posterior maduración.
Dos grupos informan diferentes protocolos para producir células madre hematopoyéticas (HSC),
que dan origen al sistema sanguíneo, a partir de células endoteliales, que recubren los vasos
sanguíneos. Sugimura et al . 1 comenzó con células madre pluripotentes humanas (PSCs), y se
utiliza un protocolo anterior para inducirlos a diferenciarse en células endoteliales especializadas
'haemogenic'. Lis et al . 2 células endoteliales adultas aisladas de ratones. Los grupos trataron sus
células con cócteles superpuestos de factores de transcripción, que produjeron un entorno que se
puede considerar como una "sala de maternidad", donde nacen las HSC. Las HSC inmaduras deben
recibir señales extracelulares aún desconocidas en un entorno de 'escuela final' para que puedan
madurar 7. Sugimura et al . Esto se logró al trasplantar sus células en la médula ósea de ratones
adultos, mientras que Lis et al . crecieron sus células en una capa de células endoteliales tomadas
de un cordón umbilical.

Imagen de tamaño completo

Sugimura et al . proporcionó señales de 'terminar la escuela' mediante el trasplante de sus HSC en

la médula ósea de ratones adultos. En contraste, Lis y sus colegas desarrollaron sus células en una
capa de células endoteliales tomadas del cordón umbilical, que liberó factores aún no definidos
que apoyan el desarrollo de HSC, antes del trasplante en ratones. Las HSC generadas por ambos
protocolos podrían injertarse cuando se trasplantan a receptores, dando lugar a todos los
principales linajes sanguíneos, y las células de estos animales podrían injertarse en un segundo
receptor, un gran paso adelante en comparación con los métodos anteriores.

Se cree que la aorta dorsal actúa como una sala de maternidad y una escuela de finalización de
HSC durante el desarrollo embrionario normal 8 . La capa de células endoteliales utilizada por Lis
et al . Captura algunos aspectos de este entorno nativo. Por el contrario, al inyectar sus células
directamente en la médula ósea de ratones adultos para lograr la maduración de HSC, Sugimura et
al . expone las células a señales del nicho en el que normalmente residen las HSC adultas. El sitio
de la escuela de finalización para las células de Sugimura y colegas podría ser el nicho perivascular
HSC, una región cercana a los vasos sanguíneos que está parcialmente formada por células
endoteliales. Hay evidencia acumulada 9que este nicho está involucrado en el mantenimiento de
HSC adultos. Por lo tanto, es plausible que haya más flexibilidad de lo que se pensaba en el tipo de
entorno que puede soportar la maduración de HSC, y que uno de los requisitos principales es una
pared endotelial.

Cuando se les preguntó por qué se les debería dar dinero público, los biólogos del desarrollo han
argumentado durante mucho tiempo que una mejor comprensión de los procesos de desarrollo
normales será crucial para la generación de tipos de células auténticos para terapias basadas en
células y detección de drogas. Los documentos actuales proporcionan excelentes ejemplos de
esto, porque sus protocolos se basan en características de mecanismos embrionarios. Ambos
estudios utilizaron células endoteliales como material de partida, en analogía con el desarrollo de
HSC en el embrión, y sus factores de transcripción incluyen cócteles como RUNX1 y SPI1, que
regulan 10 , 11 , 12 el nacimiento de las primeras HSC durante el desarrollo embrionario in vivo .

A pesar de la emoción que generarán los documentos actuales, existen algunas limitaciones
notables. Por ejemplo, solo Lis y sus colegas abordaron el potencial de las HSC programadas para
convertirse en cancerosas, sin encontrar evidencia de leucemia hasta 20 semanas después del
injerto. Se requerirá un seguimiento más prolongado, especialmente para las células humanas
producidas por Sugimura y sus colaboradores.

También es probable que las investigaciones futuras se centren en cómo se introduce el cóctel de
factores de transcripción. Los estudios actuales utilizaron vectores genéticos derivados de
retrovirus que se integran en sitios aleatorios en el genoma de la célula huésped. La expresión de
los factores de transcripción luego es impulsada por un medicamento llamado doxiciclina que se
puede administrar según sea necesario. Las estrategias de ingeniería del genoma "más limpias"
(como la tecnología CRISPR-Cas9) que pueden dirigir la inserción de secuencias en sitios
específicos en el genoma están avanzando rápidamente. Estas técnicas podrían eliminar la
preocupación de que la integración retroviral podría activar los genes causantes de cáncer 13, o
que la expresión de los factores de transcripción podría no extinguirse completamente bajo
sistemas inducibles basados en doxiciclina. Lo último es preocupante porque muchos de los
factores de transcripción utilizados en los estudios actuales también se han relacionado con el
inicio de la leucemia.

Otra advertencia es que solo una pequeña minoría de células de las poblaciones modificadas
produjo progenie que podría detectarse en el torrente sanguíneo después de unos pocos meses.
Aunque esto fue suficiente para repoblar la sangre, se requerirán más estudios para definir
completamente la composición molecular de las HSC producidas in vitro . Esto es particularmente
apremiante porque ambos estudios sugieren que, aunque las celdas programadas son similares a
las HSC, no son idénticas.

Las HSC se definen por su capacidad de injertar y dar lugar a todos los linajes de células sanguíneas
durante muchos meses. Este es posiblemente el ensayo más riguroso de cualquier célula madre
adulta. Las células que cumplen con estos criterios ahora se han producido de dos maneras: un
hecho que no solo abre oportunidades interesantes en el campo de la hematopoyesis, sino que
también representa un hito para la comunidad más amplia de células madre. Aunque se necesitan
más estudios, el largo viaje para traducir la promesa de la investigación con células madre en
beneficio directo para el paciente puede haberse acortado un poco.