Muchas bacterias tienen enzimas (endonucleasas: cortan el eje azúcar-fosfato de ácidos

nucleicos DNA en puntos internos) que reconocen y cortan secuencias de DNA

invasor, al que reconocen como extraño merced a un sistema complementario que

marca (por

metílación) el DNA propio; cada bacteria posee un sistema endonucleasa/metilasa

propio, que se denomina sistema de restricción (restringe el DNA que es tolerado

por la bacteria a aquel que es reconocido como propio), algo parecido al sistema

inmune de organismos superiores. Aunque hay varios tipos de endonucleasas, sólo

las en-donucleasas tipo ll son de interés práctico porque reconocen secuencias

específicas en el DNA (a las que deno-

minamos «dianas») y lo cortan en ese punto o región inmediatamente adyacente.

Las enzimas de restricción se denominan con una abreviatura de tres letras del

nombre de la bacteria en la que se encontró (ej.: Hin de Haemophilus influenzae); una

letra adicional identifica la cepa o serotipo, si es preciso (ej.:Hind), y finalmente un

número romano refleja el orden en que se identificó (ej.: Hindlll). Aunque en un

principio los laboratorios tenían que purificar sus propios enzimas de restricción a

partir de cepas bacterianas, en la actualidad existen varias casas comerciales que los

proporcionan. La lista de enzimas de restricción de que disponemos está en continua

expansión, existiendo muchos enzimas que reconocen secuencias específicas de 4-6

nucleótidos y algunos que lo hacen con secuencias mayores (7-8 nucleótidos, y

excepcionalmente más). El tamaño de la diana determina en gran medida con qué

frecuencia el enzima va a cortar un cierto DNA y, por tanto, el tamaño medio de los

fragmentos generados. En el supuesto de que la secuencia de DNA sea totalmente

aleatoria, con las cuatro bases representadas por igual, se podría predecir que un
enzima que reconozca 4 nucleótidos (un 4-cutter en el argot), como la Taql, cortará

cada 256 bases (44); uno que reconozca 6 bases, como el po-pular EcoR1, cortará

fragmentos de unas 4 kilobases (kb). Pero en la realidad, las secuencias de DNA no

son alea-

torias, sino que la proporción de C+G en una región ge-

nómica puede ir de un 1/4 a 3/4. Alrededor de 500 en-

zimas de restricción han sido aisladas hasta el presente,

y se denominan isosquizómeros a aquellos enzimas que

reconocen la misma secuencia, aunque pueden cortar en

distintos puntos de la misma. Por ejemplo, Xmal (C^CCGGG) y Smal (CCC^CGGG),

donde (^) indica el pun-

to de corte en la secuencia.

Las secuencias de nucleótidos habitualmente recono-

cidas por los enzimas de restricción se denominan

«Pa-Iíndromes». De manera similar a su significado lingüístico,un palíndrome en

bioquímica es una secuencia de DNA 24

Salido, E. (SF) Biología molecular y nefrología. Análisis del DNA-1 11p.

Recuperado de https://www.revistanefrologia.com/es-pdf-X0211699595022889

Avila, J. T. De Vera A. M., Hernandez C y Vasallo M. (1993). Biología Molecular en

nefrología. Análisis del DNA. II Clonar, secuenciar, y PCR. Vol XXIII. Universidad de la
Laguna. Tenerife. Recuperado de
file:///C:/Users/VAIO/Downloads/X0211699593049377.pdf
 I. Dos estudiantes del curso Organismos Transgénicos discutían sobre un artículo

publicado donde se exponían los resultados acerca de la clonación en bacterias

del gen responsable de la producción de la tela de araña, obteniendo así un

material más resistente que el Kevlar (poliparafenileno tereftalamid), utilizado

en la confección de chalecos a prueba de bala.

Uno de los estudiantes formuló las siguientes afirmaciones:

Explique si estas afirmaciones son falsas o verdaderas. Sustente sus respuestas. Cada

respuesta deberá están sustentada por tres referencias bibliográficas como mínimo, para

garantizar la validez de la misma.

1. El gen de interés es cortado del cromosoma por una enzima de restricción e

introducido a un plásmido vector, generando un DNA recombinante.

2. Los plásmidos vectores de clonación son extraídos de células humanas o construidos

sintéticamente en el laboratorio. 3. El DNA recombinante que contiene el gen de interés

es insertado en una bacteria que lo incorpora a su propio DNA. 4. En la clonación, la

bacteria receptora multiplica el DNA recombinante que contiene el gen de interés, pero

no su propio DNA.

Ingeniería genética
https://scholar.googleusercontent.com/scholar?q=cache:dY7zb69FkRgJ:scholar.google.com/+El+g
enoma+exógeno+es+insertado+en+el+núcleo+hospedador&hl=es&as_sdt=0,5

Los investigadores usan rutinariamente técnicas de clonación para

producir copias de genes que quieren estudiar. El procedimiento consiste
en insertar un gen de un organismo, a menudo denominado
“ADN exógeno”, en el material genético de un portador denominado
vector. Algunos ejemplos de vectores incluyen bacterias, células de
levadura, virus o plásmidos, que son pequeños círculos de ADN
transportados por bacterias. Una vez que se ha insertado el gen, el vector
se pone bajo condiciones de laboratorio que promueven su multiplicación,
lo cual hace que el gen se copie muchas veces.
ORGANISMOS TRANSGÉNICOS: FASE 2 ESTUDIO DE CASO 2

Biología celular y molecular

Buenos días director y compañeros, disculpen mi participación tardía al foro. He estado

documentándome sobre los temas abordados del estudio de caso propuestos en los audios
(desorden energético de un animal)
Realizo el siguiente aporte:
El ATP es fundamental en la transferencia de energía libre desde los procesos exergónicos
hacia los endergónicos. La energía se obtiene descomponiendo el ATP en ADP y unión
fosfato. En todas las células del cuerpo el ión de calcio se encuentra en bajas
concentraciones en el citosol, por eso hay dos bombas de calcio. Una bombea el calcio
hacia afuera (membrana) y otra hacia el interior de los organelos (Retículo sarcoplasmático,
células musculares y mitocondrias).
Ante un estímulo, la entrada de Ca2+ en la célula desde el medio extracelular, o la
liberación desde los depósitos intracelulares, provoca un aumento rápido de la
concentración citosólica de calcio ([Ca2+]cyt), desencadenando una respuesta celular en un
periodo breve de tiempo. Después del estímulo, gran parte de este Ca2+ se une rápidamente
a sistemas de tamponamiento citosólicos, o entra en la mitocondria; y el resto del Ca2+,
sale del citoplasma al medio extracelular o entra de nuevo al retículo endoplásmico, para
restablecer la situación de reposo. De esta manera, las células son capaces de responder
adecuadamente ante nuevos estímulos.
La principal fuente intracelular de Ca2+ es el retículo sarcoplásmico en el músculo estriado
y el retículo endoplasmático en otros tipos de células. Existen dos grandes familias de
canales de liberación de Ca2+ intracelular localizados en el retículo sarcoendoplásmico, los
receptores de rianodina (RyRs) y los receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato.
Un detector de calcio es activado cuando baja el calcio.
Referencias Bibliográficas
Nelson D., Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. Cuarta edición. Recuperado de
file:///C:/Users/VAIO/Downloads/PRINCIPIOS%20DE%20BIOQUIMICA%20(LEHNIN
GER,%204ª%20EDICION)%20-%20FL.pdf

Arias de Val J. (2013). Regulación de la homeostasis del calcio celular por MCU.
Valladolid. Instituto de biología y genética molecular IBGM
Rodwell V., Bender D.,Harper Bioquímica ilustrada.Mc Graw Hill Recuperado de
file:///C:/Users/VAIO/AppData/Local/Temp/Rar$DIa0.302/Harper%20Bioquimica%20Ilus
trada,%20Kennelly,%2029%20ed,%202013.pdf

El transportador de nucleótido adenina permite el intercambio de ATP y ADP, también que el ATP
salga de las mitocondrias hacia los sitios de utilización extramitocondrial y que ocurra el regreso
de ADP para la producción de ATP dentro de la mitocondria. Dado que en esta translocación se
eliminan de la matriz cuatro cargas negativas por cada tres introducidas, el gradiente
electroquímico a través de la membrana (la fuerza motriz de protón) favorece la exportación de
ATP. El Na+ puede intercambiarse por H+, impulsado por el gradiente de protón. Se cree que la
captación activa de Ca2+ por mitocondrias ocurre con una transferencia de carga neta de 1
(uniporte de Ca+), posiblemente por medio de un antiporte Ca2+/H+. La liberación de calcio a
partir de las mitocondrias se facilita por intercambio con Na+.

La bomba de calcio

El ATP es fundamental en la transferencia de energía libre desde los procesos exergónicos hacia
los endergónicos. La energía se obtiene descomponiendo el ATP en ADP y un ión fosfato. En
todas las células del cuerpo el ión de calcio se encuentra en bajas concentraciones en el citosol,
por eso hay dos bombas de calcio. Una bombea el calcio hacia afuera (membrana) y otra hacia el
interior de los organelos (Retículo sarcoplasmático, células musculares y mitocondrias).

Ante un estímulo, la entrada de Ca2+ en la célula desde el medio extracelular, o la liberación

desde los depósitos intracelulares, provoca un aumento rápido de la concentración citosólica de
calcio ([Ca2+]cyt), desencadenando una respuesta celular en un periodo breve de tiempo. Después
del estímulo, gran parte de este Ca2+ se une rápidamente a sistemas de tamponamiento
citosólicos, o entra en la mitocondria; y el resto del Ca2+, sale del citoplasma al medio extracelular
o entra de nuevo al retículo endoplásmico, para restablecer la situación de reposo. De esta
manera, las células son capaces de responder adecuadamente ante nuevos estímulos.

Incremento de la concentración de calcio citosólica

Las células emplean una variedad de canales de calcio que permiten la entrada
de iones Ca2+ al citosol y por tanto, hacen que aumente la concentración intracelular de calcio,
tanto de la membrana plasmática como del RE, para crear señales de Ca2+ En condiciones de
reposo, estos canales están cerrados, pero en respuesta a un estímulo externo, se abren
provocando un incremento de la [Ca2+].

Entrada de calcio desde el exterior celular

En reposo, la [Ca2+] extracelular es del orden de 1-2 mM, mientras que en el interior de las
células, la concentración se mantiene alrededor de 100 nM. Esta diferencia de concentración
sumada a la diferencia de potencial de la membrana plasmática, impulsa la entrada de Ca2+ al
interior celular a favor de gradiente electroquímico, en respuesta a un estímulo. La entrada de
Ca2+ a través de la membrana plasmática se lleva a cabo por diferentes canales cuyos nombres
indican sus propiedades de activación y desactivación: canales de calcio operados por voltaje
(VOC) que se activan en respuesta a una despolarización de la células actuando como
transductores de las señales eléctricas (Catterall, 2011); canales de calcio operados por receptor
(ROC) que se activan directamente por la unión de un ligando a un receptor (como el receptor
nicotínico de acetilcolina), o indirectamente, a través de canales asociados a receptores
metabolotrópicos (como algunos receptores de glutamato); canales de calcio operados por
depósitos intracelulares (SOC) que se activan en respuesta a una disminución del nivel de Ca2+ de
los depósitos (Wu, 2006; Cahalan, 2009); y canales de la superfamilia TRP (Transient Receptor
Potencial) que se activan por una variedad de factores, como el estrés mecánico, la osmolaridad,
la temperatura e incluso por el nivel de Ca2+ de los depósitos intracelulares (Montell, 2005; Nilius
y Owsianik, 2011)

1.2. Liberación de calcio desde los depósitos intracelulares

La principal fuente intracelular de Ca2+ es el retículo sarcoplásmico en el músculo estriado y el

retículo endoplasmático en otros tipos de células. Existen dos grandes familias de canales de
liberación de Ca2+ intracelular localizados en el retículo sarcoendoplásmico, los receptores de
rianodina (RyRs) y los receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato

Los RyRs son los canales iónicos más grandes conocidos formados por homotetrámeros que
existen como tres isoformas en mamíferos (RyR 1-3). Estas proteínas están reguladas por
fosforilación y una variedad de pequeñas proteínas e iones. El Ca2+ (citosólico y luminal) es un
ligando fisiológico que desencadena la apertura de los RyRs, al igual que lo hacen la cafeína, el ATP
o la heparina. Los cambios de voltaje a través de la membrana plasmática, también pueden causar
la apertura de los RyRs en ausencia de Ca2+ extracelular durante el acoplamiento excitación-
contracción (Rios y Brum, 1987). En músculo esquelético, los canales CaV1.1, interaccionan
directamente con los RyR1, y en músculo car