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CAMPYLOBACTERACEAE

Bacteriología

Curso de Bacteriología
HISTORIA

Curso de Bacteriología
THEODOR ESCHERICH 1886

Bacilos Gram negativos curvos en


DESCRIBE deposiciones de 16/17 niños
fallecidos por diarrea

Bacilos semejantes en gatos


OBSERVA jóvenes con diarrea Vibrio felinus

Curso de Bacteriología
Los primeros aislamientos de especies del género Campylobacter fueron
realizados en el área de la microbiología veterinaria, en 1909 y 1913.

Sir McFadyean John (1853-1941) Sir Stockman Stewart (1869-1926)


Royal Veterinary College London Royal Veterinary College London
Veterinary pathology

 1918 Mac Fadyean y Stockmann y posteriormente Smith establecieron la


participación de una bacteria microaerófila en el aborto del ganado bovino y
ovino, de morfología similar al género Vibrio, por lo que se lo llamó Vibrio fetus.

Curso de Bacteriología
En 1931, Jones y Little aislaron a partir de bovinos con
disturbios intestinales “un vibrión” microaerófilo, al que
denominaron Vibrio jejuni.
En 1944 Doyle describió “un vibrión” aislado del intestino de
cerdos con diarrea y lo denominó Vibrio coli.

Curso de Bacteriología
En 1957 E. King
 Estudia las características de
Vibrios aislados de diferentes
fuentes.
 Estableció que no todos
correspondían a Vibrio fetus .
 Determinó dos grupos con
características serológicas y
bioquímicas diferentes
 Algunos eran capaces de crecer a
25 y 37°C
 Otros lo hacían a 42°C, a estos
† Elizabeth King 1966
los consideró como “Vibrios
 “related Vibrio” relacionados” y se comprobó que
eran agentes causantes de diarrea
aguda.

Curso de Bacteriología
En 1972 Dekeyser y Butzler aislaron
los microorganismos de las heces de
pacientes con enteritis aguda usando
una técnica de filtración que permitía
el pasaje de pequeños bastones
curvos a través de una membrana,
pero retenía microorganismos fecales
más grandes.

Butzler y Skirrow, Bolton y Robertson,


Blaser y col, desarrollaron medios
selectivos que permitieron aislar estos
Prof. J.-P. Butzler
microorganismos con relativa facilidad
St. Pierre Hospital - VUB y establecer su participación en
diferentes cuadros infecciosos en el
hombre.

Curso de Bacteriología
La primera asociación entre “vibriones” microaerófilos
y diarrea en el hombre fue sugerida por Levy en 1946,
el que realizó un estudio en un brote de gastroenteritis
sobre 357 pacientes en un penal en Illinois,
observando en exámenes directos la presencia de
vibrios en el 20% de las muestras.

En 1963, Sébald y Veron proponen la creación del género


Campylobacter.

Curso de Bacteriología
Taxonomía
 REINO Procaryotae
 DIVISION Gracillicutes
 CLASE Proteobacteria
 FAMILIA Campylobacteraceae
 GENEROS Campylobacter
Arcobacter
Sulfospirillum
 ESPECIE Bacteroides ureolyticus

Curso de Bacteriología
PFEIFFER 1987

Describe:
- hallazgos clínicos post-mortem en
intestino grueso compatibles con
enteritis por Campylobacter
- bacterias espiraladas, de 2 a 3 vueltas
regulares, móviles, no cultivables

Curso de Bacteriología
Los primeros aislamientos de especies del género Campylobacter fueron
realizados en el área de la microbiología veterinaria, en 1909 y 1913.

1909 -1919 fetos bovinos y ovinos Vibrio fetus


1931 bovinos con diarrrea Vibrio jejuni
1944 cerdos con diarrea Vibrio coli
1957 gastroenteritis? related vibrios
1958 vibriosis hepática Vibrio hepaticus
1963 DNA Gén. Campylobacter
1971 –1972 diarrea en humanos C. fetus subsp. jejuni
1977 medio selectivo
1992 taxonomía Fam. Campylobacteraceae

Curso de Bacteriología
CAMPYLOBACTER : taxonomía y nomenclatura

V. jejuni
V. coli Related V. fetus
Vibrios
V. hepaticus

C. fetus subsp.
C. fetus intestinalis
subsp. jejuni

C. jejuni C. fetus subsp.


C. coli fetus

Curso de Bacteriología
Género % G-C Metabolismo

Campylobacter 29-35 No Fermentativo

Vibrio 44-50 Fermentativo

Curso de Bacteriología
Vandamme y col. 1992

TAXONOMÍA DE BACILOS GRAM NEGATIVOS CURVOS

Helicobacter, Campylobacter, Arcobacter y


Wolinella
pertenecen a un grupo distinto de bacterias
Superfamilia V del rARN

Curso de Bacteriología
Vandamme y col. 1992
Superfamilia VI del rARN

Campylobacter

Bacteroides ureolyticus
Campylobacteraceae

Arcobacter

Flexispira

Wolinella
rRNA superfamilias I a V
Helicobacter

Organismos “Campylobacter-like” de vida libre

Curso de Bacteriología
Vandamme y col. 1992
Cambios de Nomenclatura

Campylobacter cinaedi ⇒ Helicobacter cinaedi


C. fenneliae ⇒ H. feneliae
C. nitrofrigilis ⇒ Arcobacter nitrofrigilis
C. cryaerophila ⇒ A. cryaerophilus
Wolinella recta ⇒ Campylobacter rectus
W. curva ⇒ C. curvus

Curso de Bacteriología
Vandamme y col. 1992

FAMILIA
CAMPYLOBACTERACEAE

GÉNERO GÉNERO GÉNERO BACTEROIDES UREOLYTICUS


CAMPYLOBACTER ARCOBACTER SULFUROSPIRILLUM

19 especies y 4 especies 4 especies


subespecies

Curso de Bacteriología
ESPECIES DEL GÉNERO ARCOBACTER

CARACTERÍSTICAS
• bacilos gram negativos curvos
• cultivos viejos: formas cocoides y
• A. nitrofrigilis* filamentos largos

• A. cryaerophilus • monotricos: bipolar o monopolar


• oxidasa positivos
• A. butzleri
• crecen entre 15 y 37ºC (24ºC)
• A. skirrowii • aerobiosis y anaerobiosis
• G + C 27 a 31 mol%
• menaquinona - 6

Curso de Bacteriología
ESPECIES DEL GÉNERO
SULFUROSPIRILLUM

• S. deleyianum* CARACTERÍSTICAS
• bacilos gram negativos curvos
• S. archaconense • oxidasa positivos
• crecen entre 8 y 36ºC
• de difícil cultivo ¿fastidiosos?
• S. arsenophilum
• G + C 32 a 42 mol%
• de vida libre
• S. barnesii • asociados a presencia de metales

Curso de Bacteriología
ESPECIE
BACTEROIDES UREOLYTICUS

• bacilo gram negativo curvo


• inmóvil
• crece a 36ºC
• microaerófilo + hidrógeno
• metabolismo proteolítico
• asociados a infecciones de:
- tejidos blandos,uretritis,
- enfermedad periodontal
• > número de cepas para clasificación definitiva
Curso de Bacteriología
Especies de Campylobacter
con patogenicidad conocida

• C. jejuni ssp. jejuni


• C. coli
• C. fetus subsp. fetus
• C. upsaliensis
• C. lari

Curso de Bacteriología
ESPECIES DE CAMPYLOBACTER

Campylobacter lari
• ssp. lari (cepas clásicas NARTC)
• ssp. ureasum (variedades atípicas -urea neg, AN S)
• ssp. subantaricum (animales subantárticos)

11th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter and related organisms,


Freiburg, 2001

Curso de Bacteriología
Especies de Campylobacter emergentes o
con patogenicidad no bien establecida
• C. jejuni ssp. doylei
•C. hyointestinalis (hyointestinalis, lawsonii)
• C. sputorum (sputorum, fecalis, ureolyticus)
• C. concisus
• C. mucosalis
• C. gracilis
• C. rectus
• C. curvus
• C. lenienae

Curso de Bacteriología
Especies de Campylobacter no patógenos
para el hombre

• C. fetus subsp. venerealis


• C. showae
• C. helveticus

Curso de Bacteriología
Curso de Bacteriología
Curso de Bacteriología
CEPA CONTROL POSITIVO: C. jejuni
CEPA CONTROL NEGATIVO (DÉBIL): C. upsaliensis ATCC 43954

Curso de Bacteriología
CEPA CONTROL POSITIVO: Campylobacter jejuni ssp jejuni
CEPA CONTROL NEGATIVO: Escherichia coli

Curso de Bacteriología
IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA
CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO
• 42ºC – 48 h de incubación
• Microaerofilia

MORFOLOGÍA DE LA COLONIA
(Colonia invasora)
MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA
• Gram (bacilo Gram – curvo)
• Contraste de fase (bacilo curvo, móvil)

CATALASA (+)

OXIDASA (+)

Nuestro aislamiento corresponde a


Campylobacter sp.

Curso de Bacteriología
IDENTIFICACIÓN DEFINITIVA (determina especie)
TEMPERATURAS DE CRECIMIENTO
• crecimiento a 26 – 37 y 42ºC

SUSCEPTIBILIDAD A CEFALOTINA Y
ÁCIDO NALIDÍXICO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
• hidrólisis del hipurato
• hidrólisis del indoxil acetato
• producción de H2S
• reducción de NO3 y otras

Nuestro aislamiento corresponde a alguna de


las especies del género Campylobacter

Curso de Bacteriología
CAMPYLOBACTER: TEMPERATURAS DE CRECIMIENTO

ESPECIE 26°C 37°C 42°C


C. jejuni ssp. jejuni - + +
C. jejuni ssp. doylei - + -
C. coli - + +
C. lari - + +
C. upsaliensis - + +
C. fetus ssp. fetus + + v
C. fetus ssp. venerealis + + -
C. hyointestinalis - + v

Curso de Bacteriología
V = variable
ALGUNAS PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE CAMPYLOBACTER
C. fetus C. jejuni C. jejuni C. coli C. lari C. upsa-
fetus jejuni doylei liensis
Catalasa + + + + + d/-
Red. NO3 + + - + + +
H2S - +/- - - + -
Hipurato - + - - - -
Indoxilacet. - + + + - +
Crecim. 25ºC + - - - - -
Crecim. 37ºC + + + + + +
Crecim. 42ºC - + - + + V
Sens. Ác. Nal. R S S S R R
Sens. Cefalot. S R S R R V

Curso de Bacteriología
Patogenicidad de Campylobacter

Países desarrollados: Más frecuente en pacientes


con diarrea
Diarrea c/septicemia: Hemocultivos positivos
Pacientes c/diarrea: Altos títulos de Ac.
homólogos
Tratamiento antibiótico: Eritromicina
Inoculación Experimental: Monos- perros- pollos-
cerdos- becerros
Diarrea experimental en humanos

Curso de Bacteriología
Infección Intestinal

• Trasmisión: oral-fecal
• Dosis infectante 5x102 a 106
• Mecanismos defensivos del huésped
• Factores de virulencia

Curso de Bacteriología
Mecanismos de virulencia

• ADHERENCIA
• INVASIÓN
• ENTEROTOXINA
• CITOTOXINAS

Curso de Bacteriología
Adhesinas

• Proteínas de membrana externa


• Lipopolisacárido
• Flagelo

Curso de Bacteriología
Curso de Bacteriología
Campylobacter: producción de
enterotoxina

Demostrada utilizando:
• Perfusión intestinal en ratas
transporte de electrolitos al intestino

• Asa ligada en intestino de rata


aumento de fluido intestinal

• Cultivos celulares (CHO)


efecto citotónico (aumento de AMPc)

Curso de Bacteriología
PERFUSIÓN EN ASA INTESTINAL DE RATA

Dr. Heriberto FernándezUniversidad Austral de Chile / Facultad de Medicina / Instituto De Microbiologia Clinica
Curso de Bacteriología
ASA LIGADA DE RATA

Dr. Heriberto FernándezUniversidad Austral de Chile / Facultad de Medicina / Instituto De Microbiologia Clinica
Curso de Bacteriología
Célula CHO normales

Célula CHO elongadas por


efecto de la enterotoxina

Curso de Bacteriología
CDT +
C. jejuni 74.2%
Célula VERO normales
C. coli 64.7%

Curso de Bacteriología
BIOTIPIA Y SEROTIPIA DE

Campylobacter

Curso de Bacteriología
BIOTIPIA DE Campylobacter

Curso de Bacteriología
Esquemas propuestos para
biotipia de Campylobacter
 Hidrólisis del Hipurato y la Prueba Rápida para H2S.
M.B. Skirrow and J. Benjamin. 1980. Differenciation of enteropathogenic campylobacter. J. Clin. Path.
33:1122

 Hidrólisis del Hipurato, Hidrólisis del DNA y Crecimiento en Agar


Extracto de Levadura y Carbón. G.A. Hebert,
D.H. Hollis, R.E. Weaver, M.A. Lambert, M.J. Blaser and C.W.Moss 1982. 30 years of campylobacters:
biochemical characteristics and a biotyping proposal for Campylobacter jejuni. J. Clin. Microbiol, 15: 1065
– 1073.

 Prueba Rápida de Hidrólisis del Hipurato, Prueba Rápida de H2S


y la Prueba de Hidrólisis del DNA.
Lior, H. 1984. New extended Biotyping Scheme for Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, and
“Campylobacter laridis”. J. Clin. Microbiol. 20:636-640

Curso de Bacteriología
Esquema de Biotipia del Dr. Hermy Lior

Lior, H. 1984. New extended Biotyping Scheme for Campylobacter jejuni,


Campylobacter coli, and “Campylobacter laridis”. J. Clin. Microbiol. 20:636-640

Curso de Bacteriología
BIOTIPIA DE Campylobacter

 Para todas las pruebas de debe tener en


cuenta:
 Utilizar cultivos que hayan crecido en Agar
Mueller Hinton Sangre.
 Incubadas a 37°C o a 43°C y Bajo condiciones
de microaerofilia o con mezcla de gases
recomendado para Campylobacters.

Curso de Bacteriología
BIOTIPIA DE Campylobacter
Esquema del Dr. H. Lior

 PRUEBA RAPIDA DE HIDROLISIS DEL HIPURATO

 PRUEBA RAPIDA DE H2S

 PRUEBA DE HIDROLISIS DEL DNA

Curso de Bacteriología
PRUEBA RAPIDA DE
HIDRÓLISIS DEL HURATO

Curso de Bacteriología
Hidrólisis del Hipurato
H2O
Ácido hipúrico Benzoato de sodio + Glicina
Hipuricasa
(hidrolasa)

Hidrólisis del ácido Hipúrico:


 Detección del benzoato cloruro férrico al 7%
 Detección de glicina ninhidrina (oxidante)

Color púrpura ninhidrina residual + NH3 CO2

Curso de Bacteriología
PRUEBA RAPIDA DE
HIDROLISIS DEL HIPURATO
 MATERIAL NECESARIO
 Hipurato de sodio al 1% en H2O
 Ninhydrina al 3.5% en butanol acetona (1:1)
preparación fresca, cada semana.

Hipurato de sodio (0.1%)


 Dispensar 0.4 mL de la solución de hippurato
de sodio en tubos de 10 x 75 mm
 Mantener los tubos tapados y congelados
(-20°C) hasta su uso.
 Los tubos Antes de ser usados, deben ser
descongelados y puestos a temperatura
ambiente.
Curso de Bacteriología
PRUEBA RAPIDA DE
HIDROLISIS DEL HIPURATO

PROCEDIMIENTO
 Colocar una pequeña asada de cultivo de 24 a 48 Hrs. en el tubo con
la solución de hipurato de sodio.
 Mezclar bien e incubar por 2 horas a 37°C en baño maría.

 Luego, lentamente se agrega 0.2 mL del reactivo nynhidrina.


NO SE DEBE MEZCLAR, reincubar por otros 10 minutos y leer.

 Un color púrpura intenso (similar al cristal violeta) representa una


reacción positiva y la ausencia de color o un color púrpura tenue indica
una prueba de hidrólisis del hipurato negativa.
Controles : + C. jejuni LIO 6;
- C. coli LIO 8

•Lior, H. 1984. New extended Biotyping Scheme for Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, and “Campylobacter laridis” J. Clin. Microbiol. 20:636-640
•H. wang, M.N. 1975. Rapid hippurate hydrolysis method for presumptive identification of Group B Streptococci. J. Clin. Microbiol. 1:114-115

Curso de Bacteriología
PRUEBA
RAPIDA DE
HIDROLISIS
DEL
HIPURATO
Hidrólisis del Hipurato positivo Hidrólisis del Hipurato negativo

Curso de Bacteriología
Curso de Bacteriología
PRUEBA RÁPIDA DE H2S

Curso de Bacteriología
Prueba Rápida de H2S
MATERIAL NECESARIO
El medio FBP Agar ha sido modificado como sigue
A : Caldo Brucella (GIBCO) 2.9 g
Na2HPO4 (anhidro) 0.118 g
K H2PO4 (Anhidro) 0.023 g
Agar (L28-Oxoid) 0.2 g
H2O 97 mL
Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 lb y dejar enfriar a 45°C.

Prepare separadamente las siguientes soluciones en agua destilada y


esterilice con filtro:
B Sulfato ferroso 7H2O 10%
C Metabisulfito de sodio 10%
D Piruvato de sodio 10%

Curso de Bacteriología
Preparación del Medio FBP Agar
modificado
Mezcla B+C+D
1 mL sol B
+
1 mL sol C
1 mL sol B

A Medio base
Caldo Brucella (GIBCO) 2.9 g
Na2HPO4 (anhidro) 0.118 g
K H2PO4 (Anhidro) 0.023 g
Agar (L28-Oxoid) 0.2 g
H2O 97 mL

1 mL
sol B
+
Medio
1 mL
1 mL
sol B
sol C Base
Mezclar +
+
1 mL
bien 1 mL
sol D
A
1 mL B Sulfato ferroso 7H2O 10%
sol B sol C C Metabisulfito de sodio 10%
D Piruvato de sodio 10%

1 mL 1 mL 1 mL
sol B sol C sol D

Ajustar el pH a 7.3, dispensar asepticamente 3 mL en tubos estériles 13x100 con tapa


rosca. Preparar medios frescos cada dos semanas.

Curso de Bacteriología
Prueba Rápida de H2S
PROCEDIMIENTO
 Coloque un inóculo grande semejante a una bolilla (con un asa de 5
mm de diámetro) de un cultivo de 24 horas en el tercio superior del
medio de cultivo. NO MEZCLE.

 Incube en bañomaría a 37°C por 2 horas.

 El ennegrecimiento alrededor de la masa bacteriana representa una


reacción positiva, usualmente comienza aparecer entre los 30-45
minutos.

 USE SOLO CULTIVOS DE 24 HORAS. La reproducividad con cultivos


de 48 horas es muy pobre.

Controles : + C. jejuni LIO 6;


- C. jejuni LIO 1

Lior, H. 1984. New extended Biotyping Scheme for Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, and “Campylobacter laridis”. J. Clin. Microbiol. 20:636-640
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H2S negativo H2S positivo

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HIDRÓLISIS DEL DNA

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DNasa
Ácido Desoxyrribonucleico DNA depolimerizado

zonas claras alrededor


de la siembra

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Prueba de Hidrólisis del DNA

MATERIAL NECESARIO
 Agar DNA Azul de toluidina Modificado
Ácido Desoxyrribonucleico (DIFCO DNA Cat#3321-12-1) 0.3 g
0.01 M Cloruro de Calcio 1 mL
Cloruro de sodio 10.0 g
Agar Oxoid L 28 6.5 mL
0.05M Buffer TRIS pH 9.0 * 1000 Ml

 Coloque todos los ingredientes en un matraz y caliente hasta que el


DNA y el agar estén completamente disueltos
 Enfríe a 50°C y agregue
Azul de toluidina "O" al 3% 2.5 mL
(Fisher Scientific Certified Stain CAT# T-161)
 Mezcle bien y distribuya en placas Petri 25 mL en cada una
NO REQUIERE ESTERILIZACION.

Curso de Bacteriología
Prueba de Hidrólisis del DNA
PROCEDIMIENTO
 En la placa de Agar DNA- Azul de Toluidina modificado*
 Se inocula con un asa de 3 mm de diámetro y en un área circular
pequeña, a partir de cultivos de 24 - 48 horas.
 Incubar 43°C bajo condiciones de atmósfera de mezcla de gases
recomendado para Campylobacters por 24 a 48 horas.
 Una zona clara incolora o algo rosada alrededor del inoculo es
considerado una reacción positiva.
 En una placa se pueden probar varios cultivos y se debe incluir
controles, positivo y negativo.
 Control Positivo = C. jejuni LIO 36

Curso de Bacteriología
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Curso de Bacteriología
SEROTIPIA DE
Campylobacter

Curso de Bacteriología
Esquemas de Serotipia de
Campylobacter
 Sistema Penner y Hennessy: detecta antígenos somáticos
termoestables; puede identificar 60 serotipos de C. jejuni y C.
coli.
 Penner, J.L., Hennessy, J.N. 1980. Passive hemagglutination technique for serotyping Campylobacter fetus subsp.
jejuni on the basis of soluble heat-stable antigens. J. Clin. Microbiol. 12: 732-737

 Sistema Lauwers S., Vlaes L. and Butzler J.P.: detecta antígenos


somáticos termoestables; puede identificar 42 serotipos de C.
jejuni y C. coli.
 Lauwers S., Vlaes L. and Butzler J.P. 1981 Campylobacter serotyping and epidemiology, Lancet, 1,158

 Sistema Lyor: detecta antígenos flagelares termolábiles; puede


identificar más de 100 serotipos de C. jejuni, C. coli y C. lari.
 Lior, H.D. et al. 1982. Serotyping of Campylobacter jejuni by slide agglutination based on a heat-labile antigenic
factors.
 J. Clin. Microbiol. 15: 761-768.

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SEROTIPIA DE Campylobacter jejuni y
Campylobacter coli

MATERIAL NECESARIO
 DNasa (10 mg /vial DNasa Bovina pancreática Grade II N° de Catalogo 104 159
(EC3.1.21.1)
 Boehringer Mannheim, Alemania)
 Solución Stock DNasa – PBS 0.1%
 Agregar asépticamente 10 mL de PBS al vial, mezclar bien y
dispensar en tubos de tapa rosca alícuotas de 1 mL,
mantener congelado a -20°C.
 Solución de trabajo DNasa -PBS
 Diluir 1 mL de la solución stock con 4 mL de PBS
 Dispensar alícuotas de 0.5 mL en tubos con tapa rosca
 Los tubos que no están en uso se deben mantener
congelados a -20°C

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 MATERIAL NECESARIO
 Buffer Fosfato Saline 0.01M , pH 7.2 (PBS).
 PBS-Merthiolate 1:10,000
 NaCl al 2%
 Láminas de vidrio (300 mm x 150 mm x 3 mm)
 Placas de Petri 90 x 15 mm
 Asas de siembra de 2 mm de diámetro
 Mezcla de gases 5% O2, 10% CO2, 85 % N2
(Skirrow)
 Medio de cultivo: Mueller Hinton con 5% de sangre
de carnero en placas de Petri

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PROCEDIMIENTO
 Previamente antes de realizar la serotipia:
 Los cultivos deberán ser sembrados en placas de
Mueller Hinton sangre (frescas y húmedas) e incubadas
a 37°C por 48 horas en atmósfera de mezcla de gases
recomendado para Campylobacters.

Curso de Bacteriología
Campylobacter en Mueller Hinton sangre 5%

Curso de Bacteriología
Campylobacter en Mueller Hinton sangre 5%

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SEROTIPIA DE Campylobacter jejuni y C. coli
POR AGLUTINACIÓN EN LÁMINA
1. Verificar que el cultivo no este rugoso
En una lámina colocar una gota pequeña (10-20 mL) de DNasa y hacer una
suspensión bacteriana con el cultivo. Agregar 1 gota (50 ml) de ClNa al 2% y
chequear si autoaglutina o no.
Si el cultivo esta rugoso, resembrar y volver a probar.
2. Si el cultivo esta liso se procede de la siguiente manera:
 Colocar una gota pequeña (10-20 µl) de DNasa-PBS en cada uno de 5
rectángulos en la lámina.
 Emulsificar una pequeña asada del cultivo con DNasa-PBS.
 Agregar (50 µl) de cada pool (1-4) de antisueros y con un mondadiente o
con el asa mezclar bien en sentido longitudinal.
 Mover lámina con movimientos de vaivén por 45 segundos.
 LEER LA PRUEBA DE INMEDIATO
 Los resultados obtenidos después de 1 minuto o las reacciones débiles,
podrían representar reacciones cruzadas.
 Si no se observa aglutinación con los pools 1 a 4, repetir el procedimiento
con los pools remanentes (5 a 16)

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3. Lectura de Resultados
Utilizando iluminación indirecta sobre un fondo negro, registre el grado de aglutinación como
sigue:
± = ligera aglutinación y el fluido turbio
1+ = cerca del 25% de células aglutinadas y el fluido turbio.
2+ = cerca del 50% de células aglutinadas y el fluido es moderadamente turbio.
3+ = aproximadamente el 75% de las células aglutinadas y el fluido es ligeramente turbio.
4+ = todas las células están aglutinadas y el fluido es claro.

El título del antisuero en los pools es usualmente definido como una dilución menor que la
dilución más alta que muestre 3+ o una aglutinación más fuerte en 1 minuto.

4. INTERPRETACION DE RESULTADOS
 Los antisueros no absorbidos en los pools, contienen aglutininas para antígenos heterólogos de
Campylobacter jejuni y C. coli.
 Podrían producir reacciones de aglutinación en más de un pool.
 Los pools estan diseñados solo para screening.
 Los serogrupos son identificados con antisueros monovalentes y confirmados por antisueros
absorbidos.
 Los antisueros han sido agrupados en lo posible para reducir la ocurrencia de reacciones en varios
pools.
 A veces las reacciones en más de un pool podría deberse a la presencia de más de un serotipo en
el mismo cultivo. Esto se puede resolver haciendo la serotipia a partir de una clona de colonias
individuales.

Curso de Bacteriología
Esquema de la Serotipia de
Campylobacter
Serotipo LIO 36

DNasa DNasa DNasa DNasa DNasa


- PBS - PBS - PBS - PBS - PBS

Curso de Bacteriología

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