ANÁLISIS INSTRUMENTAL 1

Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

1. Introducción teórica
En la cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de
columna utilizando un gas inerte como fase móvil. Actualmente hay desarrollados dos
tipos de cromatografía de gases:

-.gas-sólido
-.gas-líquido

No obstante es la cromatografía gas-líquido la que tiene un uso más extendido

debido a que la cromatografía gas-sólido presenta problemas de adsorción
semipermanente, lo cual origina colas en los picos.

La cromatografía G/S se basa en la distribución del analito entre una fase móvil
gaseosa y una fase estacionaria líquida inmovilizada sobre un soporte inerte.

Entre los múltiples gases que se utilizan los más frecuentes son el nitrógeno, el
helio o el hidrógeno. El gas debe ser inerte respecto al analito y a la columna.
Normalmente es el tipo de detector usado el que determina el gas a usar.

En el transcurso de esta práctica se va a usar una columna capilar, por lo que nos
centraremos en el estudio de las mismas. Se pueden distinguir dos tipos básicos de
columnas capilares, de pared recubierta y recubierta con soporte. EL primer tipo se
caracteriza porque la fase líquida se encuentra directamente sobre la pared interna del
capilar formando una fina capa, mientras que en el segundo caso la superficie interna
del capilar está recubierta de una capa delgada de material soporte como puede ser tierra
de diatomeas.

La ventaja de las columnas capilares recubiertas con soporte respecto a las de

pared recubierta es que las primeras presentan una mayor capacidad de carga aunque
por lo general las columnas de pared recubierta son más eficaces que las de soporte
añadido.

En la actualidad se usan columnas de pared recubierta fabricadas con sílice

fundida. Éstas columnas son mucho más flexibles, lo cual permite doblarlas de forma
helicoidal con un diámetro de algunos centímetros.

Puesto que la temperatura de columna es una variable critica para conseguir una
separación lo más exacta posible es necesario controlarla con una precisión de décimas
de grado por lo cual las columnas se fabrican para que puedan ser introducidas en
hornos termostatizados . La temperatura óptima de columna depende de del punto de
ebullición de la muestra y del grado de separación requerido.

En el caso de que los componentes de la muestra presenten un amplio intervalo

de temperaturas resulta conveniente utilizar una programación de la temperatura, con lo
cual se aumenta la temperatura ya sea de continuo o por etapas.
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En este caso se va a utilizar como detector un Detector de Ionización de Llama

(FID), que es uno de los más usados en cromatografía de gases.

En un quemador el efluente de la columna se mezcla con hidrógeno y con aire

para encenderlo eléctricamente. En este encendido eléctrico se origina una gran cantidad
de iones procedentes de la pirolización de los compuestos orgánicos a la temperatura de
la llama.

Aplicando una diferencia de potencial entre el extremo del quemador y un

electrodo colector situado por encima de la llama se genera una corriente que se dirige a
un amplificador operacional para su mediada.

Se ha determinado que el número de iones que se produce en la llama es

relativamente proporcional al número de átomos de carbono reducidos en la llama, es
decir el FID responde al número de átomos de carbono que entra en el detector por
unidad de tiempo.

Finalmente hay que decir que este detector es insensible a gases no oxidables
como son H2 O , CO2 , SO2 y NOx . Esto hace del detector de ionización de llama uno de
los más usados en el análisis de compuestos orgánicos, incluyendo aquellos que se
encuentran contaminados con agua o con óxidos de nitrógeno o azufre.
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Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

2. Descripción del procedimiento

El primer paso a realizar en la determinación de la mezcla de alcanos es realizar

la elección de un estándar interno. Para esta elección se han de realizar dos
cromatogramas distintos, el primero a partir de una disolución de alcanos 3 mg.g-1
preparar una disolución con una concentración aproximada de 250 µg.g-1, para ello se
realizan las siguientes pesadas en un vial de 4 ml:

Compuesto Masa (g)

Alcanos (3 mg.g-1) 0,1298
n-Hexano 1,4274
Total 1,5572

Aplicando:
Masa 1* Concentración 1 = Masa 2 * Concentración 2

Concentración alcanos = 250.06 µg.g-1

El segundo cromatograma que hay que realizar es el de una disolución con

posibles patrones internos que superpuesta sobre el anterior cromatograma nos
determinara qué compuesto es el mejor estándar interno, dicho compuesto se debe
encontrar diferenciado de los de la muestra de alcanos pero a la vez próximo. La
disolución formada también debe ser de aproximadamente 250 µg.g-1 de cada uno de los
posibles estándares internos. Se realizaron las siguientes pesadas en un vial de 4 ml,
obteniéndose las siguientes concentraciones:

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Isooctano 0.1377 281.14
Undecano 0.125 255.21
Tetradecano 0.1590 324.62
n-Hexano 1.0477
Total 1.4694

Al superponer los dos cromatogramas obtenidos elegimos como patrón interno

el undecano por estar entre medio de los compuestos a determinar y por no
superponerse con ninguno de ellos.

Posteriormente debemos proceder a la preparación de la recta de calibrado que

nos permitirá obtener la concentración de la muestra problema. En distintos viales se
preparan disoluciones con concentraciones de la muestra de alcanos entre 10 y 500
µg.g-1, en todas estas disoluciones debe añadirse aproximadamente la misma cantidad
de estándar interno (0,2 ml). Los pesos y concentraciones obtenidos son:
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Disolución 1

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1416 301.02
Alcanos 0.0357 75.89
n-Hexano 1.2339
Total 1.4112

Disolución 2

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1349 269.40
Alcanos 0.0956 190.92
n-Hexano 1.2717
Total 1.5022

Disolución 3

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1476 295.75
Alcanos 0.1370 274.51
n-Hexano 1.2126
Total 1.4972

Disolución 4

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1353 258.37
Alcanos 0.1856 354.42
n-Hexano 1.2501
Total 1.5710

Disolución 5

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1360 257.01
Alcanos 0.2698 509.86
n-Hexano 1.1817
Total 1.5875
 ANÁLISIS INSTRUMENTAL 5
Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

Por último solo nos queda realizar la determinación de la muestra problema, para
ello se procede a preparar la disolución de la muestra problema con las siguientes
pesadas:

Compuesto Masa (g) Concentración (µg.g-1)

Undecano 0.1404 266.13
Problema 0.4974 ¿?
n-Hexano 0.9449
Total 1.5827

A partir de los valores de las áreas obtenidos en los cromatogramas podremos

realizar la recta de calibrado en la que sustituyendo el valor del área obtenido en el
cromatograma de la muestra problema podremos determinar la concentración de ésta.

3.- Resultados
2.- Representar, en papel milimetrado o con ayuda de un ordenador, la recta de
calibrado obtenida (con estándar interno y sin él) y calcular la concentración de los
distintos compuestos que hay en la muestra.

Obtendremos una recta de calibrado por cada compuesto a determinar de la

mezcla de alcanos, a saber: octano (C8), nonano (C9), decano (C10), dodecano (C12) y
tridecano (C13). Para ello emplearemos dos métodos para cada uno: el de estándar
externo y el de estándar interno. Como estándar interno hemos seleccionado el
undecano (C11) en el apartado anterior.

(a) Método del estándar externo

Se representan los valores de áreas frente a concentración de analito para cada

uno de los compuestos de interés. De esta forma obtenemos las siguientes rectas con sus
correspondientes ecuaciones de ajuste:

C8
y = 59784.43x - 1496099.68
35000000
R2 = 0.97
30000000
25000000

20000000
Área

15000000

10000000
5000000

0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
conc. (ppm )
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Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

C9 y = 58739.10x - 1608493.56
R2 = 0.97
35000000

30000000

25000000

20000000
Área

15000000

10000000

5000000

0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
conc. (ppm )

C10 y = 60834.75x - 1645873.88

R2 = 0.97
35000000

30000000

25000000

20000000
Área

15000000

10000000

5000000

0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
conc. (ppm )

C12 y = 60633.88x - 1620463.81

35000000
R2 = 0.97
30000000

25000000

20000000
Área

15000000

10000000

5000000

0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
conc. (ppm )
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Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

C13 y = 60650.97x - 1660605.23

35000000
R2 = 0.97
30000000

25000000

20000000
Área

15000000

10000000

5000000

0
0.00 100.00 200.00 300.00 400.00 500.00 600.00
conc. (ppm )

Así, conocidas las áreas de los analitos en la muestra problema podemos calcular las
concentraciones de cada uno, teniendo en cuenta la dilución hecha con n-hexano. Los
resultados son los siguientes:

Compuesto Concentración (µg/g)

Octano (C8) 247,04
Nonano (C9) 273,23
Decano (C10) 251,02
Dodecano (C12) 250,38
Tridecano (C13) 264,44

(b) Método del estándar interno

En este método se representa el cociente entre la señal (área) del analito y del
estándar interno frente al cociente entre la concentración del analito y la concentración
del estándar interno. Las rectas junto con las ecuaciones de ajuste son las siguientes:

C8 y = 0.91x + 0.04
R2 = 1.00
2
1.8
1.6
1.4
1.2
S/Sstd

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
C/Cstd
 ANÁLISIS INSTRUMENTAL 8
Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

C9 y = 0.90x + 0.03
R2 = 1.00
2
1.8
1.6
1.4
1.2
S/Sstd

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
C/Cstd

y = 0.93x + 0.03
C10
R2 = 1.00
2
1.8
1.6
1.4
1.2
S/Sstd

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
C/Cstd

y = 0.93x + 0.03
C12
R2 = 1.00
2
1.8
1.6
1.4
1.2
S/Sstd

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
C/Cstd
 ANÁLISIS INSTRUMENTAL 9
Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

y = 0.93x + 0.03
C13
R2 = 1.00
2
1.8
1.6
1.4
1.2
S/Sstd

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
C/Cstd

Así pues, conocido el cociente de áreas y la concentración de estándar interno en

la muestra problema, podemos calcular la concentración de cada analito. Notar que el
coeficiente de ajuste r2 es mucho mejor en el caso de estándar interno que en el caso de
estándar externo. Los resultados son:

Compuesto Concentración (µg/g)

Octano (C8) 193,61
Nonano (C9) 227,90
Decano (C10) 198,00
Dodecano (C12) 197,36
Tridecano (C13) 215,80

3.- Representar, en papel milimetrado o con ayuda de un ordenador, la gráfica de la

relación de Oster.

La relación de Oster es adecuada para una determinación cualitativa de una

mezcla de alcanos en nuestro caso. Se representa el logaritmo neperiano del tiempo de
retención de cada compuesto menos el tiempo muerto frente al número de átomos de
carbono del alcano. Ha de obtenerse una recta a partir de la cual se puede identificar el
tipo de alcano, siempre que la separación cromatográfica se haya llevado en las mismas
condiciones.
Los datos y la gráfica son:

tm = 0,022 min
nº C tr (min) ln t'r
8 1,465 0,3667
9 2,640 0,9624
10 4,102 1,4060
12 7,181 1,9683
13 8,644 2,1543
 ANÁLISIS INSTRUMENTAL 10
Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

Relación de Oster y = 0.3466x - 2.2325

R 2 = 0.962
2.5

1.5
ln t' r

0.5

0
7 8 9 10 11 12 13 14
nº C

4.- Calcular el número de platos teóricos de la columna.

El número de platos se puede calcular a través de la expresión:

2
t 
N = 16 r 
W

donde tr es el tiempo de retención de cada compuesto y W es la anchura en la case del

pico. Se calcula el valor para cada uno de los compuestos y se obtiene el promedio:

nº C tr (min) W (min) N
8 1,465 0,078 5644
9 2,640 0,096 12100
10 4,102 0,109 22660
12 7,181 0,117 60272
13 8,644 0,120 83021
Nprom = 36739

5.- Calcular los factores de capacidad

El factor de capacidad de un compuesto se puede calcular como:

tr − tm
k' =
tm

y da una idea de la afinidad del compuesto por la fase móvil respecto a la afinidad por la
fase estacionaria. Los resultados son:
 ANÁLISIS INSTRUMENTAL 11
Determinación de una mezcla de alcanos por GC.

tm = 0,022 min
nº C tr (min) k'
8 1,465 65,6
9 2,640 119,0
10 4,102 185,5
12 7,181 325,4
13 8,644 391,9

4. Bibliografía
- Skoog, , Holler, Nieman, “Principios de Análisis Instrumental”, McGraw-Hill,
2001, Madrid