CO2 supercrítico, extracción de componentes con pigmento de importancia farmacéutica de

Chlorella vulgaris

Antecedentes: La Chlorella vulgaris es una microalga verde que contiene diversos componentes
del pigmento de carotenoides y clorofila. CO2 supercrítico es ampliamente utilizado para la
extracción de compuestos farmacéuticos porque no es ï¿y fácilmente separada de material
extraído por el simple hecho de despresurización. En este trabajo, compuestos farmacéuticos de
Chlorella vulgaris se han extraído mediante el CO2 supercrítico con o sin implicar a diferentes
condiciones de extracción.

Resultados: Basado en cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) análisis, los extractos que
figuran componentes del pigmento, como luteína, β-caroteno, clorofila a y b. La presión y la
temperatura de extracción superior promovido más luteína extracción con CO2 supercrítico. La
presión y temperatura óptima para la extracción fueron obtenidos de 50 MPa y 80 ◦C. el etanol
como un implicar fue más efectiva que la acetona para la extracción de componentes del
pigmento. Componentes del pigmento en el extracto obtenido por CO2 supercrítico con y sin
implicar fueron comparados con el extracto obtenido por un método de extracción
convencionales.

CONCLUSIÓN: el CO2 supercrítico se ha aplicado con éxito para la

extracción de los componentes del pigmento del Chlorella vulgaris. el
CO2 supercrítico de
permitió la alta selectividad para la extracción de la luteína; sin embargo,
el rendimiento de la luteína fue menor que el obtenido por extracción de
utilizando CO2 supercrítico con etanol y Soxhlet
introducción

La Chlorella es una microalga verde que contiene altas concentraciones de clorofila. Se ha

documentado que la Chlorella tiene efectos biológicos en estudios en animales y en seres
humanos. 1 – 5 un extracto de Chlorella vulgaris del agua caliente de
se ha demostrado para exhibir varias actividades del inmunoestimulante.
El extracto ejerce un efecto antitumoral indirecto 4, 5 y un efecto
protector sobre las bacterias. 6-8 de Chlorella vulgaris también se sabe
que contienen una gran cantidad de carotenoides,9 - 12, que es un
productor de astaxantina, cantaxanthin, así como, en menor medida, el
beta-caroteno y luteína,11 las propiedades colorantes de carotenoides en
C. . Vulgaris ya han sido probados con éxito como un pigmento de origen
para los productos de granja13 - 14 con actividad funcional (por ejemplo,
como antioxidantes).Un 12,15 La luteína es uno de los carotenoides más
abundantes en la dieta y en la sangre humana. La luteína de la microalga
C. vulgaris se extrajo correctamente y purificada mediante un método
convencional por Li et al.10 informaron que la pureza final de luteína
obtenida fue del 90-98%. Desarrollo de una técnica de extracción
eficiente es necesaria para la separación y el aislamiento de compuestos
farmacéuticos a partir de los recursos naturales. La extracción de líquidos
supercríticos, un método ' natural y verde ' de extracción de productos. ha
recibido una mayor atención como una alternativa importante a los
métodos convencionales de separación. porque es más simple, más
rápido, eficiente y evita la consumo de grandes cantidades de disolvente
orgánico, que a menudo son costosos y potencialmente dañinos. El CO2
supercrítico presenta
algunas características únicas como solvente, puesto que no es tóxico.
podría ser un buen candidato para la extracción de carotenoides de las
microalgas de C. vulgaris, como fue realizado con éxito por Mendes
et al. 9, 11 y Gouveia et al. 12 sin embargo, no analizaron los
carotenoides específicamente y el la extracción se realizó a baja
temperatura y presión. Este estudio investigó la aplicación de
de CO2 supercrítico para extraer compuestos farmacéuticos de
componentes de pigmento de C. vulgaris. El CO2 supercrítico se
considera generalmente seguro y ambientalmente benigno y puede ser
utilizado en alimentos y productos farmacéuticos relacionados con los
procesos de extracción. Etanol o acetona también fue agregado al CO2
supercrítico para mejorar el rendimiento de extracción. Componentes del
pigmento extraído mediante el CO2 supercrítico fueron comparados con
aquellos obtenidos por métodos de extracción convencionales.

Materiales y métodos

materiales y sustancias químicas

una muestra seca por aspersión de C. vulgaris fue suministrada por

Chlorella
Industry Co., Ltd, Japón. Para evitar la degradación, las muestras
se almacenaron a 0 ◦ C en una bolsa de aluminio herméticamente sellada
hasta su uso. El contenido de humedad de la muestra fue inferior al
5%.Luteína estándar(70% de pureza), β-caroteno (80% de pureza),
clorofila a (90% de pureza)y la clorofila b (80% de pureza) grado HPLC,
etanol, acetona,metanol y THF utilizados para el análisis fueron
adquiridos de WakoPure Chemical Industries, Ltd., Japón. El CO2 se
obtuvo de Uchimura Co., Japón.

Extracción supercrítica de CO2

los experimentos de extracción

se realizaron con el aparato experimental
que se muestra en la Fig. 1. El aparato incluye un refrigerador (Sibata,
coolen C-560, Japón), implicar una bomba (bomba inteligente Jasco PU-
1580, Japón), una cámara de calefacción (ST-110, espec., Japón),un
recipiente de extracción 10 mL (Thar Tech, Inc., EE.UU., 10 mL de
volumen), elregulador de contrapresión (AKICO Co., Japón), recopilación
de una serie de viales, y un contador de gas húmedo (Sinagawa Co.,
Japón)
La luteína, β-caroteno, clorofila a y clorofila b fueron extraídos de C.
vulgaris a temperaturas entre 60 y 80 ◦C y presiones de 20 a 50 MPa,
caudal de CO2 2,5 mL min-1, e implicar la concentración (E/S) 7,5%
(basado en el volumen del caudal de implicar y CO2) con el fin de
determinar el efecto de la temperatura y la presión sobre el rendimiento
de los componentes extraídos. En este estudio, se utilizó etanol o
acetona como implicar y se eligió 7,5% de volumen de implicar la
concentración fue elegida debido a la limitación de la bomba, sin
embargo, las concentraciones más altas de entreno podrían causar una
disminución en el rendimiento de la extracción. 16 específicamente, el el
rendimiento de los componentes extraídos de se describe como la masa
de los componentes extraídos divididos por la masa de la muestra seca.
En cada experimento, aproximadamente 3 g de C. vulgaris se cargó en el
recipiente de extracción y el volumen restante se llenó con perlas de
vidrio en la parte superior e inferior de la celda. La celda estaba colocado
en la cámara de calefacción para mantener la temperatura de
funcionamiento. El extracto se recoge en un recipiente de recogida cada
30 a 60 minutos durante 3 a 6 h, y almacenados a -20 ◦C en la oscuridad
hasta su análisis. A fin de investigar los componentes extraídos obtenidas
por el método convencional, 7 g de C. vulgaris fue extraída con 200 mL
de disolvente orgánico utilizando un aparato de Soxhlet durante 5 h hasta
el color de condensación de solvente en la parte superior del aparato era
clara. El THF fue utilizado como disolvente de extracción Soxhlet pueden
causar el licopeno extraído de rendimientos obtenidos por el THF fue
mayor que la obtenida por otros disolventes (1.16 y 0.98 mg g-1 muestra
por etanol y acetona,respectivamente).

Análisis HPLC

Análisis de β-caroteno, luteína, clorofila a y clorofila b extraído por CO2

supercrítico se llevó a cabo mediante cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC) equipado con un inteligente detector UV/visible (UV-
970, Jasco, Japón). Extracto disuelto en solvente mezcla compuesta de 1
: 2 : cloroformo acetona fue inyectado a través de un bucle de 20 µL y
separados por un STR ODS-II (columna 5 µm; 4,6 × 250 mm; Shinwa
Chemical Industries, Ltd., Japón) a 30 ◦C. La fase móvil es un disolvente
binario compuesto de 1 : 9 THF : metanol que fluye con un caudal de 1,5
mL min-1. La separación de clorofila a fue monitoreado en 428 nm,
mientras que la luteína, β-caroteno y clorofila b fueron monitoreados a
450 nm. Las señales del detector se registraron en BORWIN software de
cromatografía. Identificación de los picos de la luteína, β-caroteno,
clorofila a y clorofila b perfiles se basa en la comparación de los tiempos
de retención y espectros escaneadas de estándares. Pesos de la luteína,
β-caroteno, clorofila a y clorofila b en el extracto se calcularon mediante
la comparación de las áreas de los picos con las áreas de los picos y los
pesos de sus estándares. Todos los extractos fueron analizados por
duplicado. Los pesos de la luteína, β-caroteno, clorofila a y clorofila b en
el extracto se citaron como media desviación estándar.

Resultados y Discusión

Efecto de la presión

Inicialmente, el CO2 supercrítico se realizó la extracción sin implicar.

Basado en el análisis HPLC, los componentes extraídos obtenidos por
CO2 supercrítico, compuesto principalmente de la luteína. Con CO2
supercrítico con implicar, los componentes extraídos contenían
principalmente luteína, clorofila y pequeñas cantidades de Β-caroteno y
clorofila b, como se muestra en la Tabla 1. En este trabajo,el efecto de la
presión sobre los rendimientos de la luteína, fue estudiada en una
temperatura de 70 C y CO2 ◦ un caudal de 2,5 mL min-1 a 300 min. La
figura 2 muestra el efecto de la presión sobre el rendimiento de
luteína.Como se muestra en la Fig. 2, la luteína, el rendimiento aumentó
significativamente con el aumento de la presión. Una dependencia de
presión se espera que aumenta la densidad de CO2 a alta presión y, por
tanto, la solubilidad de la luteína en CO2 supercrítico aumenta. El
aumento de la solubilidad de la luteína en CO2 supercrítico se muestra
en la Fig. 3 a una temperatura constante de 70 ◦ C. La solubilidad de
luteína en CO2 supercrítico se muestra en la Fig. 2 como la pendiente de
la primera tasa de extracción. Aunque el total de luteína extraída a 40
MPa era inferior a 30 MPa, la solubilidad de la luteína en CO2
supercrítico a 40 MPa era superior a 30 MPa (Fig. 3) En este caso un
crossover de presión fue demostrado, indicando que en el proceso de
extracción de 40 MPa fue controlado por difusión limitación, lo que limita
la tasa de extracción. Este resultado está de acuerdo con trabajos
previos,17,18 donde, a temperatura constante, el rendimiento de
extracción y la solubilidad de la luteína se incrementaron con el aumento
de la presión.

Efecto de la temperatura

La figura 4 muestra el efecto de la temperatura sobre el rendimiento de la

luteína extraída. El efecto de la temperatura fue investigado a una
presión de 30 MPa, CO2 un caudal de 2,5 mL min-1 a 300 min. La
luteína, el rendimiento aumentó significativamente con el incremento de
la temperatura; sin embargo, el aumento de temperatura de 60 a 70 ◦C
había casi no tiene efecto