Medicamentos Biológicos-

Aspectos científicos, técnicos y

reguladores
proteína microheterogeneidad

Fármacos de Medicamento
moléculas Proteíco
pequeñas
Fabricación de productos biotecnológicos

• MCB, WCB
(establecimiento de célula maestra únicas y los bancos de
células de trabajo adecuados para la fermentación a gran
escala)
ATG

DNA Vector Stop

Banco de células Banco de célula maestra amplificación

de trabajo
Fabricación de productos biotecnológicos
• Fermentación
• (A lo largo de cultivos celulares el volumen del cultivo se
expande de ml a miles de litros y las células segregan el
producto en el medio)

Célula CHO Banco de células de trabajo Spinner Cultures

Tren de producción de 20-12,000 L Cosecha por centrifugación

Fabricación de productos biotecnológicos
Fabricación de productos biotecnológicos
• Transformación posterior (Purificación)
(Incluye la eliminación de células-, eliminación de virus, Componentes del
medio, eliminación de las sustancia relacionadas (oxidados-, agregadas-,
desaminados- y formas truncadas, pasos de concentración , intercambio
de búfer.)
Libre de células sobrenadantes

Filtración profunda Columna1 Columna2 Columna3

Fabricación de
Fármacos

Ultrafiltratición Relleno masivo

El Sistema de Calidad Biotecnológico

El proceso es el producto

Métricas de complejidad / Molécula pequeña Proteína

Lote
Número de registros de los < 10 > 250
lotes
Pruebas de calidad del < 100 > 2,000
producto
Etapas críticas del proceso < 100 > 5,000

Proceso de entradas de datos < 4,000 > 60,000

R. Garnick, Genentech
Fabricación de productos biotecnológicos

Conclusión: El proceso de fabricación de productos

biotecnológicos es una compleja secuencia de los pasos
críticos que requieren conocimientos específicos,
experiencia y cumplimiento estricto de cGMP.
 inoculum density, 
   t , cell density, cell viability, 
TiterUSP  f  bioreactor
,  
 f   dt

  2 L  10 K ,   time  volume productivity,  
  SUB / SSB ,   0t
   
 
 
 
 Viable cell  f  cell metab . , culture medium , process param . 
      
density   pCO2 , pH , pO2 ,   Composition  Tempeature, feed rate


& mode, P / V , pO2 , 
  Osmolality,   basal medium/ feed,  
  raw materials,variabilit
y,
 

Yield DSP   columns / filter  f selectivity, impurity, aggregation, 

 shear stress, temperature, 
 
 AggregationAPI  f  salt, impurities,  
    
 NaCl, HCP, DNA, 
 hydrophobicity, 
 Impurity removal   columns / filter  f  
 IEP , size,  

 
  Structure
 
Analysis of  f  primary , secondary, tertiary, glycosylation, 
     
Structure Integrity API  PepMap, FTIR, Bioassay, Mass Spec., 
 Biacore, 
“Genzyme dice que la aprobación reglamentaria de las
Impacto de los cambios de fabricación
instalaciones de fabricación de Massachusetts le
permitirá aumentar la producción de Myozyme.”
Reportes de El Wall Street Journal (02/12/2009, Armstrong

"Genzyme Corp. dijo que espera resolver un difícil

problema de fabricación biológica con su tratamiento
prometedor y costoso para la enfermedad de Pompe para
el final del mes, un desarrollo que la empresa estima
producirá un salto dramático en las ventas este año”
Genzyme dijo que “espera que La Food and Drug
Administation apruebe una nueva instalación de fabricación
en Framingham MA, para servir al mercado estadounidense
a finales de febrero, permitiendo que esto aumente la
producción de su tratamiento para el desorden enzimático
raro y a veces mortal.” La compañia “ha luchado por
más de un año para empezar de forma interna Myozyme
Estudio de caso:
La complejidad de la fabricación de productos biológicos

Myozyme®: FDA rechaza Genzyme’s own scaled-up version

FDA rechaza la solicitud

de Genzyme para
aumentar la producción
de Myozyme ® a partir
de la instalación de 160
litros a la instalación de
2.000 litros

La FDA estaba preocupada por las diferencias en la estructura de los hidratos de

carbono de los productos fabricados en cada instalación, por lo que se estipula que
el producto de 2.000 litros requiere una licencia biológica nueva
Estudio de caso:
La complejidad de la fabricación de productos biológicos

Myozyme®: FDA rejects Genzyme’s own scaled-up version

30%  biodisponibilidad
28–81%  captación
hepática
20–65%  captación
muscular

Myozyme® producida en la instalación de 2.000 litros de escala tiene menor

biodisponibilidad, mayor captación hepática e inferior del músculo (sitio de acción)
en comparación con la absorción de Myozyme® producida en la aprobación de 160
litros escala instalación
 El tratamiento con Raptiva (efalizumab)

• Raptiva (efalizumab) fue fabricado originalmente

por XOMA y se utiliza en la fase I / II de los ensayos y
hasta a la Fase III. La manufactura fue trasladada a
Genentech (con toda la información).

• Diferencias en los análisis y la formulación que se

esperaban que fueran intranscendentes fueron
observados (los cambios en la heterogeneidad de carga,
el incremento en el C-terminal de procesamiento, niveles
más altos de las formas ácidas, mayor galactosilación)
Source: W.F. Bennett,
Genentech
 El tratamiento con Raptiva (efalizumab)
•En un estudio de bioequivalencia, se observaron algunas
diferencias en los parámetros farmacocinéticos :

Xom GNE Ratio

a (G:X)
AUCinf 27.9 36.9 1.324
AUCt 26.9 35.6 1.324
Cmax 3.59 4.22 1.175
Sin embargo debido a la naturaleza impredecible de estos
cambios de PK una fase III adicional fue realizada para determinar
la seguridad y eficacia del material de Genentech.
Source: W.F. Bennett,
Genentech
El tratamiento con Raptiva (efalizumab)
Tendencia de menor respuesta PASI * a Raptiva (efalizumab) a pesar
de altas concentraciones de drogas periféricas
45%
Percentage of Subjects

40%
35% 38.9%
30%
25% 26,6% improved 75%
20% Mejoradas > 75%
15%
10%
5% 2.4%
0%
Placebo 1.0 1.0
(n=170) mg/kg/wk mg/kg/wk
*PASI = Psoriasis Area and
XOMA GNE Severity Index
material material
(n=162) (n=369)
Los cambios que se creían no afectarían las propiedades de la proteína
resultaron en claras diferencias en la farmacocinética. Dado a la complejidad
de proteínas terapéuticas, el impacto de cambios farmacocinéticas y,
probablemente, la farmacodinamia) sobre seguridad y eficacia no se puede
predecir de forma fiable. Source: W.F. Bennett, Genentech
 Los productos biotecnológicos
• Los productos biotecnológicos son mezclas
heterogéneas de moléculas de proteínas
muy complejas y sensibles.
• Cada entidad molecular de esa mezcla se
caracteriza por específicas propiedades
físicas, químicas y biológicas.
• Cualquier cambio en la composición de la
mezcla va a afectar potencialmente la
seguridad del paciente y la probabilidad de
curación.
Consideraciones
reguladoras para los
biosimilares
Requerimientos Regulatorios Globales reflejan la
complejidad de los productos biológicos
• La industria farmacéutica es la segunda industria más
regulada en el mundo seguida por la aviación
• Los fabricantes de productos biológicos deben cumplir
con un amplio conjunto de normas y documentos de
orientación para asegurar la calidad y la seguridad de los
productos biológicos.Regulations and Guidance for
Development and Manufacture of Biological Products
– US FDA
• (9) Reglamentos y normas propuestas;
• (6) Puntos a tener en cuenta los documentos;
• (22) Documentos de orientación
– EMA
• (18) Directrices
– ICH
• (10) Documentos de orientación
Copias/Biosimilares de productos biotecnológicos
destinados a diferentes usos por el fabricante…

La célula
Secuencia del ADN purificaci
huésped de fermenta ón
gen humano vector expresión ción

ATG

DNA Vector Stop

Tal vez la misma Probablemente Una célula Un proceso de Un protocolo

secuencia un vector de ADN diferente fermentación posterior
genética diferente producción diferente diferente
recombinante
 Directrices de la UE biosimilares
CHMP/437/04 y EMEA/CHMP/42832/05

•Se debe reconocer que, por definición,

medicamentos biológicos similares no son
medicamentos genéricos, ya que se podría
esperar que puede haber diferencias sutiles
entre medicamentos biológicos similares de
diferentes fabricantes o en comparación con
productos de referencia
•Medicamentos biológicos similares son
fabricados y controlados de acuerdo a su propio
desarrollo. Un ejercicio de comparación
apropiada será necesaria para demostrar que los
productos biológicos similares y medicamentos
 La similitud y la comparabilidad son
conceptos diferentes

Pruebas de comparabilidad Prueba de similitud

• El enfoque de la • El enfoque de similitud se

comparabilidad se utiliza
para confirmar la
calidad de la seguridad
y la eficacia de un
producto biotecnológico
establecido en una
experiencia de pleno
desarrollo usando la
utiliza para establecer la
seguridad de la calidad y
la eficacia usando un
producto de referencia
aprobado , ya no protegido
por la exclusividad de los
datos y la vinculación de
los atributos de los 20
productos biosimilares a la
Heterogeneidad molecular entre los productos disponibles de
epoetina-a fabricados en Asia y América del Sur

Isoelectric focusing: isoform distribution of each sample is shown. E is the control.

Nephrol Dial Transplant 2005 (20), Suppl 4, 31-36.
El enfoque isoeléctrico EPO
El Erythropoetins producidos por diferentes fabricantes son
esencialmente diferentes

Source: H. Schellekens, Biosimilar therapeutics—what do we need to consider? NDT Plus (2009) 2 [Suppl 1]:
Copias/ biosimilares de
productos biotecnológicos:
Revisión de la realidad
Biosimilars en EU
El problema de la intercambiabilidad /
Sustitución
Biosimilares en EU
Intercambiabilidad / Sustitución
Biosimilares en la EU (Alpheon, BioPartners)
 Pegaferon

• Nombre : Pegaferon
• Lote: 07-B
• MFD: 06 / 2007
• Fecha exp. 06 / 2009
Resultados Analíticos de Pegaferon
(Análisis rutinario de medicamentos)
Prueba PEGAFERON

pH Similar a Pegasys
Contenido de Similar a Pegasys
Peginterferón alfa-2a
Actividad biológica especifica Similar a Pegasys
(AVA)

Contenido de alcohol Similar a Pegasys

bencílico
El contenido del Polisorbato 6 x mayor comparado
80 a Pegasys
Agregados Similar a Pegasys
SDS-PAGE Silver Stain reducido
Caracterización extendida

Reduced Gel

66.3 12.4 kD
55.4 CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGF
PQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWD
ETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSIL
AVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNL
QESLRSKE
21.5

14.4
7.1 kD
6.0 CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGF
PQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAW
3.5 DETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKED
SILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFS
LSTNLQESLRSKE

•Los clipping sites siguientes estan caracterizados por ESI-MS and

MALDI-MS/MS
90 112
… QQLNDLEACVIQGVGVTETPLMK …
IE-HPIE-HPLC (Sustancia de rutina de análisis
de drogas)
Separación de los diferentes isómeros de
PEG-IFN en Pegaferon
2
4
6 7

1 8
3 9
5
1011
Isomer Profile of Pegaferon

•La composición de isómeros de posición, cualitativa y cuantitativa, en

Pegaferon es completamente diferente en comparación con Pegasys.
Dos isómeros posicionales adicionales están presentes en Pegaferon y
no están presente en Pegasys.
Pegaferon: Los resultados del análisis
Conclusiones sobre la base de datos disponibles

Las diferencias entre Pegaferon y Pegasys

indican potencial de diferencias en:
• Estabilidad
– in vivo actividad de bio-
– La inmunogenicidad
– Perfil-PK
– Perfil de toxicidad
Estas diferencias pueden resultar en un
perfil diferente de eficacia y seguridad de
Pegaferon en comparación con Pegasys.

Caracterización significativa, los datos pre-

clínicos y clínicos son necesarios para
demostrar “similitud” entre los dos
interferones pegilados.
Los productos aprobados de acuerdo con las
directrices de la UE: Que significa similar?
Suficientemente similar?
Biosimilares en la EU
Epoetin alfa: Binocrit®, Epoetin alfa Hexal®, Abseamed®
•Un estudio de seguridad que duro un año con la participación de
300 pacientes sufriendo de una enfermedad renal crónica a
punto de iniciar la diálisis, la comparación de la OEP Hexal vs
Johnson & Johnson Erypo, se ha suspendido; este estudio fue
diseñado para evaluar la seguridad de la administración de EPO
sub-cutánea, en lugar de por vía intravenosa
•El 05 de agosto 2009, BfArM de Alemania (Bundesinstitut für
Arzneimittel und Medizinprodukte) confirmó que el juicio fue
suspendido debido a las preocupaciones de seguridad,
específicamente un caso de aplasia pura de células rojas (APCR)
en un paciente incluido en un estudio en Alemania, y un caso de
anticuerpos neutralizantes de EPO en un paciente incluido en un
estudio en Rusia
•En el comunicado, BfArM comentó que "... después de la