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[Tecnología]
[ SEMILLAS HORTÍCOLAS ]
[Tecnología]
Desde el punto de vista agronómico, se
considera que una semilla ha germina-
do cuando a partir de ella se origina una
planta adulta capaz de alcanzar la fase
reproductora; es decir, capaz de produ-
cir nuevas semillas (Durán y Pérez,
1984). La International Seed Testing
Asociation (ISTA), asociación interna-
cional de entidades relacionadas con el
análisis de semillas cuya actividad prin-
cipal consiste en desarrollar métodos y
servicios para dicho fin, considera el
proceso de germinación de una semilla
como el establecimiento de un estado
metabólicamente activo, manifestado fi-
siológicamente por la división celular y
por la diferenciación (ISTA, 2003). La
primera expresión de este proceso es la
emergencia de la radícula.
Foto 2. Semillas y plántulas de lechuga (Lactuca sativa L.) durante un ensayo de
germinación: a, semillas colocadas sobre papel de filtro el día de la siembra; b,
Los test o ensayos de germinación plántulas tres días después de la siembra; c, cinco días después de la siembra y d,
permiten determinar el potencial siete días después de la siembra.
de germinación máximo de un lote
de semillas (ISTA, 2005) y estimar su terior de una caja de vidrio o plástico un ensayo de germinación, el analista
valor potencial para la siembra en transparente, sobre un soporte que puede encontrar semillas que germinan
campo. Estos test de germinación permita una rápida y abundante re- perfectamente, dando lugar a plántulas
realizados en laboratorio ofrecen tención de agua, como por ejemplo normales, otras que al desarrollarse
una primera información respecto papel de filtro, arena o medios gelifi- presentan alguna anomalía y aquellas
a la calidad de las semillas. Sin em- que al finalizar el ensayo no han sido
cados a base de agar, (ver Foto 1).
bargo, hay que señalar que, en mu-
Se suele considerar que una semilla capaces de germinar.
chos casos, los resultados que se
ha germinado cuando la radícula al- La representación del número total o
obtienen en condiciones controla-
canza una longitud mayor de 3 mm más frecuentemente del porcentaje de
das de laboratorio difieren de los
obtenidos en el campo. (ISTA, 2005). Para controlar las con- semillas germinadas, frente al tiempo
diciones de humedad, temperatura e transcurrido desde la siembra, consti-
iluminación durante la incubación, tuye una curva de germinación. Estas
Preparación del ensayo las cajas de germinación se introdu- proporcionan toda la información que
cen en germinadores termostatizados, es posible solicitar una vez realizado un
El test de germinación estándar reco- que permiten regular estos paráme- ensayo de germinación, (ver Figura 1).
ge el porcentaje de plántulas normales tros según las exigencias específicas Sin embargo, para expresar los re-
obtenido tras un análisis germinación. de cada especie. sultados obtenidos lo más frecuente
Es una prueba que informa sobre las Las temperaturas más corrientemen- es recurrir al cálculo de índices de
semillas que más rápidamente han rea- te utilizadas oscilan entre 10 y 35 ºC. germinación, que nos permiten esti-
nudado la actividad metabólica y el cre- Cuando se utilizan temperaturas alter- mar la calidad del lote y comparar
cimiento propios de la germinación nas dentro del ciclo diario, se recomien- cuantitativamente diferentes lotes de
(Peretti, 1994). da que la oscilación térmica no sea infe- semillas o muestras sometidas a dife-
Consiste básicamente en colocar las rior a 10 ºC, coincidiendo la temperatu- rentes tratamientos.
semillas sobre un sustrato adecuado, ra más elevada con el período de luz en A continuación se describen algunos
humedecerlas, y controlar las condi- el caso de utilizar cámaras con ilumina- de los índices más comúnmente emple-
ciones de incubación durante un cier- ción. La ISTA establece una serie de re- ados para la expresión de los resultados
to período de tiempo, durante el cual comendaciones para cada especie sobre de los ensayos de germinación:
se realizan conteos de germinación, el sustrato a utilizar, la temperatura de
observando el número de semillas que germinación, los días de conteo y, en al- • Poder germinativo: es el porcentaje
han germinado. Se pueden evaluar gunos casos, otras recomendaciones de de semillas que germina en las con-
también las plántulas obtenidas, iden- tratamientos específicos para favorecer diciones más favorables (Côme,
tificando el número de plántulas nor- la germinación, (ver Foto 2). 1970). Se dice que una semilla ha
males y anormales. perdido su poder germinativo cuan-
Los ensayos de germinación pueden Curvas e índices de germinación do es incapaz de germinar, cualquie-
realizarse utilizando innumerables ra que sean las condiciones de germi-
métodos y condiciones. Uno de los Frente a la sencillez que supone colo- nación y los tratamientos realizados.
procedimientos más habituales a la car a germinar un lote de semillas, la Por lo tanto, se trata del porcentaje
hora de realizar un ensayo de germi- expresión de los resultados que se ob- de semillas vivas. Este concepto es
nación es colocar las semillas en el in- tienen es mucho más complicada. Tras sumamente importante en la prácti-
[Tecnología]
considerando:
J=D-1
donde N i y D i tienen el mismo
significado que para Vg.
T = Último día de conteo de ger-
minación (según especies, ver Ta-
bla 1).
• El coeficiente de uniformidad
(Cu) queda definido por la ecua-
ción (DURÁN y PÉREZ, 1984):
donde:
N i = Número de semillas germi-
nadas el día Di.
D i = Número de días transcurri-
ca, especialmente cuando se trata de • Coeficiente de velocidad de germina- dos desde la siembra.
determinar el valor comercial de un ción (Vg): Queda definido por la integra- D = Número de días después de
lote de semillas. No obstante, el po- ción de los tiempos de germinación de ca- la siembra elegido para calcular
der germinativo resulta muchas ve- da semilla y se calcula mediante la siguien- la uniformidad de germinación.
ces muy difícil de determinar con ab- te fórmula:
soluta precisión, ya que las mejores La velocidad de germinación y el
condiciones de germinación, además T50 son los índices más utilizados.
de poder variar de un lote a otro, ja- La interpretación de un ensayo de
más pueden ser conocidas a priori. germinación es la principal tarea
Precisamente por este motivo se pre- del analista de semillas. Un ensayo
fiere muchas veces hablar de capaci- Ni = Número de semillas germina- de germinación no es solo concluir
dad de germinación. das el día Di. un porcentaje de germinación al
• Capacidad de germinación: es el D i = Tiempo transcurrido desde la final del ensayo. Hoy en día, las
porcentaje de germinación máximo siembra, en días. formulas e índices descritos per-
que se obtiene en unas condiciones La velocidad de germinación co- miten describir de forma muy pre-
previamente definidas (Durán y rresponde al inverso del tiempo me- cisa la dinámica de germinación,
Pérez, 1984). dio de germinación multiplicado por permitiendo conocer de una mues-
• Velocidad de germinación: Côme 100. tra de semillas.
(1970) define la velocidad de germi-
nación como el tiempo que necesi-
Tabla 1:
tan las semillas para germinar. De
Métodos de germinación recomendados por la ISTA (2005) para
acuerdo con diversos autores, la ve-
las especies hortícolas de mayor importancia económica en España.
locidad de germinación puede ex-
Sustrato: A, arena; EP, entre papel; PP, papel plisado y SP, sobre
presarse con diferentes índices:
papel
- Porcentaje de germinación: Por-
centaje de semillas germinadas has-
ta un momento determinado. NOMBRE RECOMENDACIONES ISTA
- Período de latencia: Tiempo nece- FAMILIA
BOTÁNICA
sario para que se produzca la ger- CONTEOS TRATAMIENTOS
COMÚN CIENTÍFICO ºC SUSTRATO
minación de la primera semilla des- (DÍAS) ESPECÍFICOS
de la siembra.
- Tiempo de germinación: Tiempo Cebolla Allium cepa L. Asteraceae 20; 15 SP, EP y A 6 y 12 Preenfriamiento
necesario para conseguir un porcen- Lechuga Lactuca sativa L. Asteraceae 20 SP, EP 4y7 Preenfriamiento
taje de germinación determinado.
Melón Cucumis melo L. Cucurbitaceae 20-30; 15 PP, EP y A 4y8 -
Por ejemplo, el tiempo necesario pa-
Capsicum KNO3
ra alcanzar el 50 % (T 50 ) ó 25 % Pimiento Solanaceae 20-30 PP, EP y A 7 y 14
annuum L.
(T25) de la capacidad germinativa.
Lycopersicum KNO3
- Tiempo medio de germinación Tomate Solanaceae 20-30 SP, EP y A 5 y 14
lycopersicum L.
[Tecnología]
El test del Tetrazolio, so bajo condiciones no favorables. El cha o al transporte, por frío o ata-
análisis de viabilidad y vigor se puede definir como el poten- ques de insectos, entre otros).
vigor cial o capacidad de la semilla durante
la germinación y emergencia de la Fundamento
El hecho de que una semilla no ger- plántula. Las semillas de alto vigor se
mine no siempre quiere decir que se conservan más tiempo, germinan más Para llevar a cabo la prueba de viabi-
trate de una semilla muerta. A me- rápido y resisten condiciones adver- lidad, las semillas se tratan con una
nudo, en semillas hortícolas, se re- sas de germinación. disolución de cloruro o bromuro de
curre a ensayos de germinación para El ensayo del TZ es útil para deter- 2,3,5-trifeniltetrazolio, de modo que
determinar la viabilidad de un lote minar, tras haber realizado una penetre en las células y reaccione con
de semillas, pero, en realidad, los re- prueba de germinación, la causa que las enzimas hidrogenasas implicadas
sultados de estos ensayos pueden explica por qué una muestra presen- en la respiración celular que tiene lu-
conducirnos a conclusiones equívo- ta un alto porcentaje de semillas que gar en los tejidos vivos. Como conse-
cas cuando lo que queremos averi- no son capaces de germinar. Permite cuencia de la reacción, el tetrazolio se
guar es si la semilla es viable o no. conocer si las semillas presentan transforma en un compuesto de color
Esto se debe a que existen semillas dormición, si están inhibidas o si es- rojo, el formazán, insoluble en agua,
viables que pueden estar afectadas tán deterioradas y no van a ser capa- estable y no difusible, de modo que
por algún tipo de dormición que im- ces de germinar. Para analizar el vi- aquellas zonas donde ha habido reac-
pida su germinación gor de un lote mediante el TZ, se re- ción permanecerán teñidas de color
quiere disponer de un patrón de tin- rojo; por lo tanto la tinción con tetra-
¿Qué es? ción de las estructuras vitales de la zolio permite diferenciar las células
semilla por el tetrazolio. vivas por su actividad respiratoria.
En 1949, Lakon sugirió por primera Las aplicaciones del ensayo del TZ Aquellas células que quedan débil-
vez un ensayo directo para determi- han sido ampliadas recientemente mente coloreadas (tonalidad rosada),
nar la viabilidad de las semillas de más allá de la determinación de la son células que tienen disminuida su
maíz. se trataba del ensayo topográfi- viabilidad o vigor de las semillas. actividad respiratoria y por consi-
co al tetrazolio, comúnmente llamado Ayala et al. (2002) extendieron este guiente menor actividad hidrogenasa.
ensayo del TZ o TZ test. Un año más método para estimar la contamina-
tarde, el mismo autor extendía esta ción de semillas de arroz por semi- Metodología
técnica a la determinación del vigor llas transgénicas. Se utiliza también
en semillas de cereales como el trigo, en leguminosas para diagnosticar la El ensayo del tetrazolio requiere
el arroz, la cebada o la avena. causa del deterioro de las semillas seguir varios pasos, imprescindibles
El ensayo topográfico al tetrazolio (daños mecánicos debidos a la cose- para todos los ensayos de viabilidad,
es un análisis bioquímico basado en
las reacciones de oxidación-reduc-
ción que se producen en las células Figura 2:
vivas del embrión u otros tejidos de Esquema de los cortes realizados para preparar las semillas de
la semilla al entrar en contacto con cebolla (Allium cepa L.) para la tinción al tetrazolio (TZ): 1, corte
la sal de tetrazolio. Las células vivas longitudinal, en su totalidad y casi completamente en las proximida-
poseen unas enzimas, denominadas des de la superficie plana; 2, corte de los extremos de la semilla, sin
hidrogenasas, que están implicadas dañar la radícula o los cotiledones y 3, corte lateral, en toda su pro-
en la respiración celular, y son capa- fundidad desde el centro de la semilla hacia afuera, hasta la zona
ces de reaccionar con la solución de situada entre la radícula y los cotiledones.
tetrazolio, formando un compuesto
insoluble de color rojo (formazán)
que permite identificarlas, diferen-
ciándolas de las células muertas que
pueden encontrarse en la semilla
(ISTA, 2004).
Se trata de un método rápido que, en
menos de 48 h, permite obtener resul-
tados sobre la viabilidad de las semi-
llas, pudiéndose obtener un avance de
tales resultados en menos tiempo (24
h) si las semillas se incuban a mayor
temperatura (ISTA, 1993).
Vigor y viabilidad
[Tecnología]
[Tecnología]
Semillas viables =
Semillas germinadas +
Semillas latentes