ASPECTOS SOCIALES Y LEGALES

Parámetros, métodos y
diseño de la validación
Parámetros de validación:

 no hay que confundirlos:

Ejemplo:
4 analistas de un laboratorio han valorado
la misma muestra 5 veces cada uno.
Parámetros de la validación:
…es un proceso continuo:
la revalidación

Criterios de revalidación:
• es necesario demostrar que el método validado
sigue siendo fiable:
 – Cuando se incorporan mejoras en el método,
modificándose algún parámetro del mismo
 – A lo largo del tiempo
 – Cuando se amplíe el alcance del método para
nuevas matrices
 – Si el control de calidad indique que el método
está cambiando con el tiempo
 – Si hay cambio de equipos y/o materiales.
 – Si se cambia de laboratorio
y con los métodos no analíticos?

 como ejemplo, una experiencia de

nuestro grupo de trabajo…..
Definiciones:

¿Qué entendemos por

VALIDAR

???
Definición de validación: según la RAE

• 1. f. Acción y efecto de validar (dar

fuerza o firmeza a algo, hacerlo válido).

• 2. f. Firmeza, fuerza, seguridad o

subsistencia de algún acto.
Definición de validación: según la AEFI

AEFI: Asociación Española de Farmaceúticos de

la Industria http://www.aefi.org

 • el establecimiento de la evidencia
documental de que un procedimiento
analítico conducirá, con un alto grado de
seguridad, a la obtención de resultados
precisos y exactos, dentro de las
especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecidos (AEFI, 2001).
Definición: según la ISO 17025

• Es la confirmación, a través del

examen y el aporte de evidencias
objetivas, de que se cumplen los
requisitos particulares para un uso
específico previsto.
Definición: según las BPLs

• Es la confirmación, mediante estudios

sistemáticos de laboratorio, que las
características técnicas de un método
o procedimiento de ensayo, cumplen
las especificaciones relativas al uso
previsto.
RAZONES PARA VALIDAR:
 • Demostrar que los métodos son adecuados a
los análisis propuestos en las condiciones
descritas. La validación es la herramienta que
permite obtener las pruebas documentales al
respecto.
 • Trabajar con métodos que ofrezcan confianza
y seguridad en los resultados, lo cual a su vez
minimizará el número de fallos y repeticiones
permitiendo un importante ahorro de costes.
RAZONES PARA VALIDAR:

• Trabajar con métodos validados permite

cumplir tanto con las exigencias legales
(cuando sea necesario) como con las
definidas por el sistema de calidad que
tengamos implantado.
• Es un requisito previo de los procesos de
transferencia de métodos analíticos, entre
laboratorios, entidades, etc.
Sin embargo…….
……Validar es un trabajo “extra”
…..complicado?
…..aburrido?
….más documentos?
….más tiempo?
….realmente, compensa?
……más evaluaciones?
…..
¿QUIEN indica que hay que VALIDAR?

• El sistema de calidad que tengamos

implantado:
– La ISO 17025 para laboratorios de
ensayo
– La ISO 15189 para laboratorios clínicos
– Las Buenas Prácticas de Laboratorio
– Las Normas de Correcta Fabricación
– La ISO 9001????
ISO 17025

 • El laboratorio debe aplicar métodos y

procedimientos apropiados para todos los
ensayos de su alcance.
 • El laboratorio debe utilizar los métodos de
ensayo que satisfagan las necesidades del
cliente.
 • Se deben utilizar preferentemente los métodos
publicados como normas internacionales,
regionales o nacionales.
 • El método desarrollado debe ser validado
adecuadamente antes de su uso.
ISO 15189
 El laboratorio debe utilizar solamente
procedimientos validados para confirmar que los
procedimientos analíticos son adecuados para
su utilización prevista.

 Los métodos y procedimientos seleccionados

deben evaluarse y demostrarse que dan
resultados satisfactorios antes de utilizarlos para
los análisis clínicos.
BPLs: Real Decreto 1369/2000

• Asegurar que se establecen y se siguen

procedimientos de trabajo apropiados y
técnicamente válidos.

• Asegurar que se han validado los

sistemas informatizados utilizados en el
estudio.
BPLs: Documentos de la Agencia
Española del Medicamento
Doc.1:
• Apartado Realización del estudio:
se deberá verificar que existen protocolos
por escrito y que dichos protocolos y la
ejecución del estudio se ajustan a los
principios BPL.
BPLs: Documentos de la Agencia
Española del Medicamento
Doc.5:
 • El método de análisis utilizado deberá de estar
validado en las condiciones de trabajo del
laboratorio donde se lleva a cabo el análisis del
especimen, así como para cada sustancia y
matriz biológica.
 • Cada laboratorio deberá establecer mediante
PNT, la metodología y criterios de aceptación de
los parámetros de validación.
NCFs

• Los métodos analíticos deberán estar

validados. Todas las operaciones de
control descritas en la autorización de
comercialización deberán realizarse con
arreglo a los métodos aprobados.
ISO 9001

• Validación del diseño y desarrollo: se

debe realizar la validación del diseño y
desarrollo de acuerdo con lo planificado
para asegurarse de que el producto
resultante es capaz de satisfacer los
requisitos para su aplicación especificada
o uso previsto.
ISO 9001
• Validación de los procesos de
producción y de la prestación del servicio:
la organización debe validar aquellos
procesos de producción y de prestación
del servicio donde los productos
resultantes no puedan verificarse
mediante actividades de seguimiento o
medición posteriores. La validación debe
demostrar la capacidad de estos procesos
para alcanzar los resultados planificados.
EL LABORATORIO DEBE VALIDAR:

• Los métodos no normalizados

• Los métodos que diseña o desarrolla
• Los métodos normalizados empleados
fuera del alcance previsto
• Ampliaciones y modificaciones de los
métodos normalizados
Y para los métodos normalizados?....
 • Si bien parece no necesario validar métodos
normalizados, sí se deberán obtener datos
sobre el rendimiento de su propio uso, es decir:
siempre resulta apropiado contar con algún
grado de validación.

 • Con frecuencia se asume que los métodos

normalizados se pueden aplicar directamente y
que se alcanzarán los niveles de rendimiento
publicados por quienquiera que utilice el
método, pero esto no es un supuesto seguro.
Entonces?....

Para métodos normalizados debe

verificarse si la información existente
sobre su validación es adecuada para el
propósito requerido y si el laboratorio es
capaz de alcanzar el nivel de rendimiento
que se reporta como posible.
DISEÑO DE LA VALIDACIÓN
 • Toda validación comienza a partir de un
método puesto a punto y ajustado.

 • La validación trata de demostrar con un

número mínimo de ensayos que tanto el método
de análisis como su sistema analítico asociado
producirán resultados adecuados a las
exigencias preestablecidas.

 • Dicha demostración debe ser siempre

documentada de acuerdo al siguiente esquema:
ESQUEMA DE LA VALIDACIÓN

• 1. Protocolo de validación
• 2. Realización de validación
• 3. Evaluación de resultados analíticos
• 4. Informe de validación
• 5. Certificado de validación
1.- Protocolo
 • Se trata de un documento que ha de recoger:
 el objetivo,
 la definición del sistema a validar,
 la identificación de los parámetros,
 el diseño del plan experimental y,
 los criterios de aceptación.
 • Además se incluirán:
 responsables,
 equipos y
 métodos analíticos.
2.- Realización

Seguridad
Esfuerzo
Costes
3.- Evaluación

Se comprobará si cumplen los requisitos

especificados, en cuyo caso se
establecerán las comprobaciones de
control periódico que deben realizarse
sobre el método para confirmar que se
siguen manteniendo los requisitos
establecidos en el momento de la
validación.
4.- Informes
Referencia al PNT en el que se describe
el método a validar.

• Resultados de las determinaciones de

cada parámetro incluyendo todos los
datos primarios.
4.- Informes

• Referencias de:
 la calibración y
 la cualificación de los instrumentos
utilizados y
 resultados de la verificación de los
parámetros de idoneidad antes de
iniciar el estudio de validación.
4.- Informes

• Discusión de los resultados y

conclusiones. Se indicará la
aceptación o no de la validación del
método analítico. También se puede
aceptar un método analítico con
limitaciones para un tipo de muestras
concreto.
5.- Certificación

Es un documento formal de aprobación

que emite el laboratorio con los resultados
obtenidos para cada parámetro
Se emitirá para métodos aceptados y
Deberá ser firmado por las personas
responsables (autorizadas)
Otros aspectos a validar:

 Aquellos casos en que el ámbito/alcance

de la certificación/acreditación incluya el
muestreo.

-BPLs / certificación / ámbitos

-ISO 17025 / acreditación / alcance
- La validación determinará “el
funcionamiento de mi método”, pero
normalmente “no se va a ciegas”.

 Existe información preliminar que orienta en la,

aportada por:
 -las normas
 -los posibles materiales de referencia
 -los resultados de otro(s) método(s)
 -los resultados de otro(s) laboratorio(s)
 -etc…
Grado de validación (I)

• Es un concepto abstracto

• con objeto de definir:

 – cómo valido yo mi método
 – cuanto de exhaustiva será la
validación
 • Viene definido por los parámetros de
validación que se determinen
Grado de validación (II)
Un laboratorio debe establecer el grado de
validación requerido y los parámetros los
calculará, de acuerdo con:
 – las necesidades del cliente,
 – con las políticas de calidad,
 – con la naturaleza de los cambios realizados a
un método previamente validado,
 – con las metas de calidad que se haya trazado
Grado de validación (III)

El laboratorio debe decidir qué parámetros

de rendimiento del método debe
caracterizar, teniendo en cuenta:
– las limitaciones de tiempo y costos,
– los requerimientos del cliente,
– la experiencia con el método
– y si el método será de aplicación
rutinaria o no.
Grado de validación (IV)
• No todos los parámetros son aplicables para
todos los métodos.
– Por ejemplo, para validar métodos normalizados
en las condiciones de un laboratorio que no lo
va a aplicar para matrices complejas, pueden no
ser de interés parámetros como la selectividad y
la especificidad, ya que quienes han
desarrollado el método ya han hecho un trabajo
exhaustivo previo acerca de las interferencias y
la manera de eliminarlas.
 Calibration curve

1,8
1,6 y = 1,037x + 0,0602
1,4 R2 = 0,9964
1,2

1
0,8

0,6
0,4

0,2
0
0 0,5 1 1,5
Pig-MAP ug/mL

Linear range: 0,03-1,5 ug/mL

 Linearity analysis
2,5

s1: 4.5 mg/mL

2
s2: 2mg/mL

1,5

0,5

0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
Dilution
sample1 sample 2
dil obt ained expecte d %rec dil obt ained expecte d % rec
1/ 2 2 .2 2 .2 5 98 1/ 2 0 .9 9 1 1 01
1/ 3 1 .5 6 1 .5 1 04 1/ 3 0 .6 7 0 .6 6 1 01
1/ 4 1 .1 1 .1 2 98 1/ 4 0 .4 9 0 .5 98
1/ 6 0 .7 9 0 .7 5 1 05 1/ 6 0 .3 5 0 .3 3 1 06
1/ 8 0 .5 7 0 .5 6 1 02 1/ 8 0 .2 6 0 .2 5 1 04
1/ 16 0 .3 5 0 .2 8 1 25 1/ 16 0 .1 1 0 .1 25 88
1/ 32 0 .1 6 0 .1 4 1 14 1/ 32 0 .0 7 0 .0 62 88
1/ 64 0 .0 77 0 .0 7 1 09
 Precission of the assay

Intra-assay coefficient of variation

Samp le me an higher- lowest valu e sd CV( %)
1 2 .6 5 2 .8 8 /2 .4 0 .1 8 6 .8
2 1 .9 2 2/ 1. 86 0 .0 5 2 .5
3 1 .1 1 .2 / 0 .1 0 .0 8 7 .2

Inter-assay coefficient of variation

Samp le me an higher- lowest valu e sd CV( %)
1 4 .3 4 .8 7 /4 0 .3 7
2 1 .9 7 2 .2 3 /1 .8 5 0 .1 5 7 .6
3 1 .0 5 1 .1 2 /0 .9 5 0 .0 6 5 .7