PEDRO MENGOLÉ AMAYA

CITOLOGÌA SANGUÍNEA

1. Cámara de Neubauer:

CUADRÍCULA DE LA CÁMARA DE NEUBAUER

La altura entre el cubreobjetos y la lámina portaobjetos es de 0,1 mm.

Cada cuadrícula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados
grandes.
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Cada uno de los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se subdivide

a su vez en 16 cuadrados medianos. El cuadrado grande central se
divide en 25 cuadrados pequeños y cada uno de ellos en 16
cuadraditos. Cada cuadrado pequeño mide 0,2 mm de lado (0,04
mm2 de superficie), y cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025
mm2 de superficie).

I. INTRODUCCION
Los hematíes cumplen una función muy especial en el organismo: la
respiración celular. Para ello dependen del contenido de hemoglobina y del
número de células.
El recuento de hematíes adquiere entonces un valor especial ya que su
disminución afectará directamente en su función.
Si bien el procedimiento manual está expuesto a errores, éstos se pueden
superar mediante un conocimiento cabal del proceso que abarca la fase
pre analítica (obtención de la muestra, uso correcto de los instrumentos,
preparación de la dilución) y la fase analítica (conteo en cámara).

La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar claramente los

hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara de Neubauer con la
ayuda de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan en el
microscopio a un objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos rojos
por mm3.

II. OBJETIVO
 Realizar el recuento de Hematíes en cámara de Neubauer y Velocidad
de sedimentación Globular
 La Velocidad de Sedimentación Globular es una sencilla prueba
empleada universalmente como índice de la presencia de
enfermedades activas de muchas clases, tiene por tanto un alto valor
pronóstico.

III. COMPETENCIAS
 Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
 Prepara las diluciones y realiza el recuento de hematíes
 Calcula el número de hematíes a partir de los valores obtenidos
 Interpreta los valores obtenidos
 Aplica medidas de Bioseguridad durante el proceso.

IV. CONTENIDOS
Preparación de las diluciones para el recuento de hematíes.
Recuento de hematíes en cámara de Neubauer.
Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
Prueba de Velocidad de Sedimentación globular.
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V. METODOLOGIA

Materiales, Equipos y Reactivos requeridos

 Microscopio.
 Equipo de toma de muestra
 Tubos al vacío con EDTA
 Cámara de Neubauer
 Diluyente de Glóbulos rojos
Cloruro de Sodio al 0,9%:
Cloruro de Sodio………0.9 g
Agua destilada…………100 ml.
Diluyente de Hayem:
Cloruro mercúrico……. 0.5 g
Sulfato de sodio……. …5.0 g
Cloruro de sodio……….1.0 g
Agua destilada…………200 ml
Disolver y filtrar.
Procedimiento
1. Con la pipeta automática, se toma 10 ul (0.01 ml) de sangre total con
anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que
contenga 2 mL de solución de Hayem (dilución de 1:200).
2. Se homogeniza sin agitar y se deja reposar aproximadamente 5 minutos
para que las células sedimenten y se procede a cargar la cámara con la
misma pipeta usando 10ul.
3. Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre
el cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños:
uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).
4. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o
por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado
pequeño de recuento y no se consideran los correspondientes a los
límites inferior y derecho del cuadrado que se está contando. Se hace
el recuento en los puntos ABCD y E.
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El recuento de hematíes se realiza en el cuadrado central, se eligen 5 de

los cuadrados que se encuentran subdivididos en 16 cuadrados
pequeños, como se muestra a continuación:

Causas de error en el recuento en cámara de Neubauer.

1. Errores de extracción: dilución o hemoconcentración. Coagulación parcial. Hemólisis.
2. Mala homogeneización por agitación insuficiente de la sangre.
3. Utilización de material sucio o húmedo.
4. Cámara cuentaglóbulos mal ajustada, sucia o mojada.
5. Llenado incompleto o mal llenado de la cámara (se requiere 10 ul)
6. Empleo de cubreobjetos común deformable, no rígido.
7. Errores del operador al realizar el recuento.
8. Errores al efectuar los cálculos.

Resultados
N° de g. rojos x mm3= N° de g. rojos en 5 cuadrados pequeños
Área contada x altura de la cámara x dilución de la sangre
= Glóbulos rojos contados
1/5 x 1/10 x 1/200

N° de glóbulos rojos x mm3 = N° de glóbulos rojos contados x 10,000

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Valores de referencia
(Unidades convencionales: millones de células / mm3).

Hombres: 4’500,000 – 5’500,000

Mujeres : 4’000,000 – 5’000,000
Niños (4 años) 4’200,000 – 5’200,000
Lactantes (1 - 6 meses): 3’800,000 – 5’200,000
Recién nacidos 5’000,000 – 6’000,000

(Unidades Internacionales)
Edad Sexo Intervalo de referencia
Recién nacidos ambos 4,7x1012/L - 6,3x1012/L
Niños (2-12 años) ambos 4,0x1012/L - 5,3x1012/L
Adultos jóvenes (12-18 años) mujeres 4,1x1012/L - 5,1x1012/L
hombres 4,5x1012/L - 5,3x1012/L
Adultos jóvenes (19-60 años) mujeres 4,1x1012/L - 5,2x1012/L
hombres 4,6x1012/L - 5,9x1012/L

En consecuencia, en 1 mm3 (1ul) de sangre total habrá A x 104 eritrocitos. El

número (N) de eritrocitos que hay en un litro (L) de sangre total se calcula
multiplicando A x 1010.
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Histograma de hemograma automatizado

1. Breve descripción de los 8 parámetros del histograma

2. Explique la relación entre los 8 parámetros que muestran los resultados
del hemograma automatizado
3. interpretación de los resultados, tomando como referencia el rango para
cada caso.
4. Halle la relación matemática entre:
a. VCM
b. HVM
c. CHCM
Tomando como referencia los valores de RBC, BGG HCT.
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CITOMETRIA HEMÁTICA - RECUENTO DE LEUCOCITOS

I. INTRODUCCION
Si bien es cierto los anticoagulantes tienen como función evitar la
coagulación, su uso inadecuado puede provocar una serie de alteraciones
en los elementos sanguíneos generando apreciaciones microscópicas
alteradas en la morfología celular. Por tanto, es importante conocer las
ventajas y desventaja de su uso y la relación exacta entre anticoagulante y
sangre.
Con respecto a las coloraciones empleadas, todas muestran bondades
policromatófilas permitiendo describir numerosas características en las
células, pero debemos igual establecer tiempos y equilibrios adecuados para
obtener los tonos adecuados que favorezcan la visualización de las células
y por ende el diagnóstico microscópico.

II. OBJETIVO
Realizar el recuento de Leucocitos en cámara.

III. COMPETENCIAS
 Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
 Prepara las diluciones y realiza el recuento de leucocitos.
 Calcula el número de leucocitos a partir de los valores obtenidos
 Interpreta los valores obtenidos
 Aplica medidas de Bioseguridad durante el proceso.
IV. CONTENIDOS
1. Preparación de las diluciones para el recuento de leucocitos.
2. Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer.
3. Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del
caso.

V. METODOLOGIA

Materiales y equipos requeridos

RECUENTO LEUCOCITARIO

Principio
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido hipotónico que permite
evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos
son hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se
expresa por mm3 (milímetro cúbico).

Materiales, Equipos y Reactivos requeridos

 Microscopio.
 Tubos con EDTA
 Agujas y holder
 Equipo de toma de muestra
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 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).

 Pipeta de glóbulos blancos (de Thoma): Presenta cerca del extremo superior
una marca de 11, inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que
contiene una perla de color blanco mezcladora, luego sigue el tallo (extremo
más largo), el cual está dividido en 10 partes con 2 marcas: 1 acabando el
bulbo y 0,5 a la mitad del tallo.
 Boquilla para aspirar.
 Diluyente de Glóbulos blancos:
Solución de Turk
Ácido Acético Glacial…………..2.0 ml
Agua destilada…………csp…..100 ml.
Azul de metileno……………….. 1.0 ml

Procedimiento
1. Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, se
procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca
de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.
2. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta
la marca de 11 (no debe haber burbujas).
3. Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente (agitar
vigorosamente para provocar hemólisis) o en un rotador automático por 2 ó
3 minutos.
4. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia
y seca.
5. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una
gota pequeña de esta solución en la cámara.
6. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
7. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.

Opcional:

1. Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 uL (0,02 mL) de sangre total

con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo
que contenga 380 mL de solución de Turk (aquí tenemos una dilución 1:20).

2. Se deja reposar 3 minutos para que las células sedimenten y se procede a

cargar la cámara con la misma pipeta usando 10ul.
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La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura.

1 3

7 9

Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se

deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea
horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos,
adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior.
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Causas de error en el recuento en cámara de Neubauer.

El recuento manual de eritrocitos tiene un error del 7 - 10%, el cual puede
deberse a:
1. Errores de extracción: dilución o hemoconcentración. Coagulación parcial.
Hemólisis.
2. Mala homogeneización por agitación insuficiente de la sangre.
3. Utilización de material mal calibrado, sucio o húmedo.
4. Falta de suficiente agitación de la sangre diluida.
5. Cámara de Neubauer mal ajustada, sucia o mojada.
6. Llenado incompleto de la cámara de Neubauer.
7. Empleo de cubreobjetos deformable, no rígido.
8. Células mal distribuidas en el fondo de la cámara.
9. Errores del operador al realizar el recuento.
10. Errores al efectuar los cálculos.

Resultados

Nº de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos

altura x dilución x área

Reemplazando = leucocitos contados en 4 campos

1/10 x 1/20 x 4

N° de glóbulos blancos x mm3 = Nº leucocitos contados x 50

En consecuencia, en 1 mm3 (1ul) de sangre total habrá B x 50 leucocitos.

El número (N) de leucocitos que hay en un litro (L) de sangre total se calcula
multiplicando B x 5 x 107.

VALORES NORMALES DE LEUCOCITOS POR EDAD

GRUPO DE EDAD Leucocitos/mm3
Hombres y mujeres 4,000 – 10,000
Niños de 10 años 4,000 – 10,000
Niños de 03 años 4,000 – 11,000
Niños de 3 – 9 meses 4,000 – 15,000
Recién nacidos 10,000 – 12,0000

Corrección de valores para restar eritrocitos nucleados

Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto,
pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los
leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente fórmula:

Cálculo:
La concentración del número de normoblastos (por litro) es:
Número de normoblatos contados x número de leucocitos
100 + Nº de normoblastos contados
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Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es
16 x 109 /L, la concentración del número de normoblastos será:
50 x 16 = 5,3 x 109 /L
100 + 50
y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 109 /L

En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se

expresan por milímetro cúbico. En tales unidades el cálculo correspondiente al
ejemplo que se ha dado sería:

50 x 16 000 = 5300 / mm3

100 + 50
Recuento corregido de leucocitos = 16 000 - 5300 = 10700 / mm3.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La disminución de leucocitos se denomina leucopenia y se presentan en
algunas enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o
granulocitopenia idiomática; también en algunos casos de anemia perniciosa,
clorosis, mal nutrición, fiebre tifoidea, fiebre de malta, etc.
El aumento en el número de leucocitos se denomina leucocitosis, que se debe
a la quimiotaxis y al estímulo de los órganos hematopoyéticos. La leucocitosis
es normal después de ejercicios violentos, emociones intensas, al final del
embarazo. En condiciones patológicas, se observa en las infecciones generales,
la virosis, necrosis, enfermedades del metabolismo, hemopatías, etc.

1. APLICACIÓN PRACTICA
1. Realizar cada uno de los alumnos el recuento de leucocitos de un paciente
en simultáneo (ambas cuadrículas) y comparar los valores obtenidos.
2. Interpreta los valores obtenidos.
3. Identificar los errores procedimentales y proponer soluciones.

2. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de leucocitos automatizado, establezca
los beneficios diferenciales con el método manual.
2. Explique la forma como se presenta el estudio de leucocitos en los
procedimientos automatizados.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3ra ed. Madrid: Thomson;
2007.
 Gomes O. Hemograma: cómo hacer e interpretar. 1 ra ed. Sao Paulo:
AMOLCA; 2011
 Vives, Joan. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.
Barcelona. 4ta edición. Editorial Masson, 2000.
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Interpretación de los resultados