Título

Electroforensis de las proteínas

Resumen
La electroforesis es una técnica utilizada para separar ácidos nucleicos por medio de su
tamaño y su carga eléctrica. Se colocan muestras en los pocitos creados en un gel, en este
caso el gel de agarosa, luego se someterá a corriente eléctrica y esto realizará la separación
del ácido nucleico. En este caso se utilizó un ADN bacteriano, este presenta una carga
negativa gracias al grupo fosfato entonces, sus moléculas migrarán hacia el lado positivo.
Palabras clave: Ácidos nucleicos, ARN, ADN, Agarosa, Electrodos, marcadores de peso
molecular.
Introducción

La electroforesis es utilizada para demostrar la migración de una molécula, ya sea de

proteínas o ácidos nucleicos cargada bajo la influencia de un campo eléctrico.

Los ácidos nucleicos son de las moléculas más biológicamente importantes, estas poseen
unos grupos ionizables que pueden ser cationes o aniones. Estas partes cargadas son las que
se van a separar dependiendo de su carga al momento de aplicar un voltaje por medio de los
electrodos.

La electroforesis de ácidos nucleicos se lleva a cabo en geles de agarosa y es considerada uno

de los métodos más sencillos y eficientes para separar fragmentos de ADN, el cual una de
sus características es que tienen carga negativa gracias a su grupo fosfato y una vez que es
expuesto a un campo eléctrico y en una solución buffer, migrará hacia el lado positivo.

Después de realizada la electroforesis los resultados podrán observarse utilizando la

fluorescencia. El bromuro de etidio o el SYBR Safe son los colorantes más utilizados ya que
se intercalan en la base de los ácidos nucleicos y emiten fluorescencia.

El uso de este compuesto debe ser manejado con mucho cuidado y con el cumplimiento
riguroso de los protocolos de bioseguridad de los laboratorios debido a que se considera un
agente altamente cancerígeno.
5. Desarrollo experimental

6. Resultados y discusión

En la práctica de laboratorio se realizó la electroforesis de un ADN bacteriano. La

electroforesis es una técnica de separación de moléculas en una mezcla por aplicación de un
campo eléctrico en gel de agarosa este “es un polisacárido extraído de un alga marina; se
disuelve con un amortiguador caliente, se vierte en un molde y se gelatiniza con el simple
descenso de temperatura”.

Como se puede observar en la (figura 3) en el gel de agarosa tenemos 12 pozos de los cuales
solo se utilizaron 6, los pozos número 3, 5, 7, 9 que contienen 10µl de ADN bacteriano con
5µl de TAE, “El buffer TAE (tris-acetato-EDTA) es usado principalmente para electroforesis
de agarosa debido a que permite una amplia resolución del peso molecular de DNA”. Los
pozos de las esquinas contienen 7 µl de marcador de peso molecular (Ladder) que funcionan
como un patrón para comparar el resultado de los pares de base de la muestra, “contiene 11
fragmentos de ADN desde 100 a 1,500 pares de bases. Este marcador es ideal para la
determinación del tamaño de fragmentos de ADN”

Como se puede observar en la (figura 6) las sustancias que se encontraban en los pozos
migraron luego de aplicarle fuerza eléctrica, la muestra migra hacia el lado positivo de la
cámara debido a los grupos fosfatos que le dan una carga negativa al ADN haciendo que
migre hacia el ánodo de la cámara. La concentración de la agarosa es de 2% “La resolución
y velocidad de separación de fragmentos de ADN por electroforesis son reguladas a través
de la concentración de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la
electroforesis” debido a esto las moléculas con menor tamaño migran con mayor rapidez
hacia el polo positivo de la cámara, y al aumentar la concentración de agarosa (poro pequeño)
es más difícil el movimiento a través del gel de esta manera se pueden identificar los
fragmentos con bajo peso molecular. Y gracias al SYBER sabe que sirve como colorante se
puede visualizar y comparar con el marcador de peso molecular al colocar en el
transluminador.

Como se puede observar en la (figura 6) el poso numero 6 contiene ADN con mayor cantidad
de pares de bases debido a que a este poso se le aplico mayor cantidad de ADN, sin embargo,
todos los pozos contienen la misma cantidad de pares de bases que es de aproximadamente
900 pares de bases, “Cuando se extrae el DNA plasmodio de las bacterias, obtenemos algo
que consideramos un producto purificado, pero habitualmente habrá moléculas de plásmido
en dos o tres conformaciones, formas topológicamente diferentes. Conocidas como superen
rollada, relajada y lineal de longitud completa, corresponden a la misma molécula y tienen
todas el mismo número de pares de bases (o “longitud” de la molécula), pero tienen diferente
forma, por lo que ocupan un volumen efectivo diferente y avanzan por el gel a distinta
velocidad”. El ADN superen rollado viaja más rápido por el gel de agarosa que el ADN
relajada y lineal de longitud completa.

7. Conclusiones

 La electroforesis en gel de agarosa es una de las técnicas más adecuadas para la

visualización del ADN ya que además de ser de fácil preparación, los colorantes como
el SYBR Sabe permiten su observación al someterse a luz fluorescente.
 Una preparación no inadecuada del gel de agarosa hace que la resolución de las
bandas obtenidas sea más difícil de observar y analizar.

 El volumen de ADN y de buffer de carga debe ser exacto (15µl) si esto no ocurre la
práctica no podrá realizarse con éxito ya que impedirá una adecuada observación de
los resultados finales
Bibliografía

Lodish Harvey, Berk Arnold, Matsudaira Paul, Kaiser Chris, Monty Krieger,
Scott Matthew, Zipursky Lawrence, Darnell James.Biologia Celular y Molecular, 5ª edición,
editorial médica panamericana,2005.

Karp Gerald. Biologia celular y molecular conceptos y experimentos, 7a

edición, editorial Mc Graw Hill education, 2002.

https://www.velaquin.com.mx/products/buffers-para-electroforesis? variant=37791147777

http://www.tnt-lab.com.ar/productos_ladders.htm
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-
electrophoresis/a/gel-electrophoresis

http://biomodel.uah.es/an/plasmido/2/1-topo.htm