Universidad Rafaél Landivar José Fernando Moreno Camey

Facultad de Ingeniería Carné: 1198814

Microbiología Fecha: 27/10/2018
Licda. Sandra Patricia Lima sábado de 07:30am-09:00am

Práctica No.6 MICROBIOLOGIA DEL AGUA

INTRODUCCIÓN
El día sábado 6 de octubre se llevó a cabo la práctica de laboratorio no.6 del curo de
microbiología, la cual tuvo por objetivo general determinar la presencia de bacterias
fecales y entero bacterias presentes en muestras de agua. Como objetivos específicos
la práctica busco determinar el número más probable de bacterias E. Coli por medio del
método de tubos múltiples de fermentación en caldo fluporocult en concentraciones de
1/10, 1/100 y 1/1000, otro de los objetivos específicos fue determinar la presencia de
coliformes totales, coliformes fecales y E. Coli en una muestra de agua, también se tuvo
como objetivo específico determinar la potabilidad del agua en base a las normas
Coguanor.

Para llevar a cabo la práctica se comenzó por llenar tomar 9 tubos con caldo fluorocult,
de los cuales 3 fueron rotulados para concentración de 1/10, otros 3 como concentración
de 1/100 y los últimos 3 como concentración de 1/1000. Se agregó 1mL de la muestra
de agua en cada uno de los tubos rotulados de concentración 1/10, luego de estos se
tomó 1mL para agregarlo en los tubos de concentración 1/100 y por último se tomó 1mL
de estos tubos para colocarlo en los tubos de concentración de 1/1000.
Luego de una semana se evalúo la presencia de E.coli en cada uno de los tubos al
agregar reactivo de cobax en cada uno se los tubos de caldo fluorocult.

En la práctica también fue realizado un proceso de filtración al vacío, del cual se utilizó
el papel filtro aplicado en la filtración para colocarlo en un medio de cromocult y evaluar
asi el crecimiento de bacterias coliformes, entero bacterias y E. Coli.

Se encontró que para la muestra de agua el número más probable de E. coli presente
fue de menos de 1.8/100mL de agua, lo cual indica que el agua era potable. Por el
método de filtración se encontró que la muestra de agua tenía presencia de E. coli, pero
al no concordar con los resultados de los tubos con caldo fluorocult se concluyó como
negativa la presencia de E. coli.

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 OBJETIVOS

1. Determinar el número más probable de bacterias Escherichia Coli por medio del
método de los nueve tubos múltiples de fermentación en caldo flurocult con
concentración de 1/10, 1/100, y 1/1000.
2. Determinar la presencia de coliformes totales, coliformes fecales, Escherichia Coli
en una determinada muestra de agua.
3. Determinar la potabilidad del agua según la norma COGUANOR 29001.

METODOLOGÍA
INSTRUMENTOS UTILIZADOS
 Tubos de ensayo
 Mechero
 Medio de cultivo agar cromocult
 Medio de cultivo caldo flurocult
 Pipeta automática

DIAGRAMA DE FLUJO
Diagrama de flujo No. 1 Procedimiento realizado en la práctica
INICIO

Se inició la práctica con 9 tubos de ensayo que

contenía 9 ml de medio de cultivo flurocult cada
uno. Para empezar, se agregó 1 ml de la muestra de
agua en cada uno de tres tubos de ensayo, siendo
esta la dilución 1/10. Luego, se agregó otro ml de la
muestra en un tubo de ensayo que contenía 9 ml de
agua peptonada, y de esta dilución se agregó 1 ml en
cada uno de tres tubos de ensayo, esta es la dilución
1/100. Y por último, se agregó 1 ml, de la dilución
preparada anteriormente en el tubo con agua
peptonada, y se agregó en otro tubo de ensayo con
agua peptonada, nuevamente, se agregó 1 ml de
esta solución en tres tubos de ensayo con agua
peptonada y esto será la dilución del 1/100..

Por último, se realizó un proceso de filtración al vacío de

100 ml del agua que se utilizó como muestra y el papel
filtro esterilizado en donde se realizó la filtración se
colocó sobre el medio de cultivo cromocult

FIN

2
 Resultados
Tabla No.1: Resultados obtenidos del método de tubo múltiples de fermentación
utilizando nueve tubos de ensayo con caldo flurocult para la determinación del número
más probable de bacterias.
No Medio de Muestra Observacion Resultado Fotografía
. cultivo es
1 Caldo Agua Todos los Negativo
fluorocult purificada del tubos de para
de bebedero del ensayo con presencia
distintas edificio TEC caldo de E. coli o
concentrac de la URL fluorocult se bacterias y
iones veían coliformes.
idénticos que
antes de NPM :
adicionar la menor a
muestra de 1.8/ 100mL
agua, no se
observó
ningún
cambio
visible

Tabla No.2: Resultados obtenidos por el método por membrana de filtración

Resultados obtenidos Imagen

Se observo la presencia de las bacterias:
1) E. Coli (UFC color violeta)
2) Coliformes (UFC color rojo asalmonado)
3) No coliformes (UFC color turquesa)

Discusión de Resultados

Se realizo un estudio de agua para un agua purificada mediante luz UV para determinar
si esta es calificada como agua potable según las normas COGUANOR 29001Este
estudio fue realizado debido a que este se cree como un método satisfactorio para la
3
purificación de agua para que esta pueda ser potable para el consumo humano. De esta
manera se podrá determinar si este método es satisfactorio o no.

Con base en (COGUANOR, 2015) el agua potable se define como aquella agua que por
sus características de calidad es adecuada para el consumo humano. Con los resultados
obtenidos con el método de los tubos múltiples de fermentación (Método de los nueve
tubos con Flurocult) se obtubo como resultado 3 tubos con flurocult 1/10 negativo; 3 tubos
con flurocult 1/100 negativo; y 3 tubos de flurocult 1/1000 negativo. Con lo que en base
a la tabla no. 2 en el marco teórico se puede determinar que el número más probable
(NMP) de bacterias de E Coli es menor a 1.8/100mL. El LMP (Límite máximo permisible)
para el agua potable según la COGUANOR 29001 cuando se examinan porciones de
10mL debe ser como máximo de 3 lo que permitirá hasta un máximo de NMP de 23. Por
lo que se llega a determinar que el agua si es potable. .

El caldo flurocult en donde fueron realizado las nueve pruebas 1/10, 1/100 y 1/1000 para
la determinación del número más probable de bacterias de E. Coli fue utilizado debido a
que este medio tiene como función poner en evidencia la enzima beta-
dextrogalaturonidasa. E Coli es una bacteria, la más importante de las entero bacterias,
que se utiliza como indicador de la contaminación de heces fecales en los alimentos. La
E Coli tiene una enzima que se llama beta-dextrogalacturonidasa y otra que se llama
beta-dextrogalactosidasa, las cuales se consideran características de E Coli. Es por esto
que para la identificación de la misma en alimentos lo que se hace es poner en evidencia
alguna de esas enzimas. La E Coli es la única bacteria que tiene la beta-
dextrogalacturonidasa pero las demás enterobacterias tienen también beta-
dextrogalactosidasa. Lo que sucede con este medio es que el mismo contiene ácido
glucorónico el cual reacciona con la E coli dentro del flurocult causando una
transformación, en donde el color amarillo-transparente del medio cambia a celeste y
además tiene fluorescencia observable con luz UV. Este medio también posee en su
composición química triptófano, el cual reacciona con E Coli y lo transforma a indol. Para
poner en evidencia el indol formado, se agrega al medio unas cuantas gotas de reactivo
de Kovacks. Si al agregarlo se forma un anillo de color rojo en el medio, se dice que se
tiene indol positivo y se confirma la presencia de E Coli. Por lo que se dice que este
medio es específico para E Coli. (Cavallini; 2005)

Con base en (COGUANOR, 2015) el método de la membrana de filtración, se realiza con

filtrando el agua en ul filtro especializado capaz de filtrar las bacterias presentes. Este se
debe de realizar en un mínimo de 100mL de muesra de agua. Para que determinada el
agua como potable por medio de este método debe tomarse como límite máximo una
colonia de coliformes totales y ausencia de Escherichia coli en 100mL de agua. La
ausencia de coliformes se interpreta como que esa muestra aislada satisface con la
norma de calidad y el agua es adecuada para el consumo humano. Para realizar esta
prueba fue utilizado como medio de cultivo el agar cromocult, el cual es especializado
para la detección y enumeración simultanea de bacterias coliformes y E. Coli en agua la
cual es recomendada según la ISO 9308-1 (2014). En la nueva ISO 9308 Parte 1 (2014)
se describe la técnica de filtración por membrana e incubaciónen agar cromogénico para
coliformes para el recuento de Escherichia coli y de bacterias coliformes en: Agua
potable; Agua de piscina desinfectada; Agua potable procedente de plantas de
tratamiento de aguas. El medio cromocult es un medio que en un plazo de 24 horas
permite la detección, la diferenciación y la enumeración simultanea de E. Coli y bacterias
coliformes en el agua potable. Este recuento se basa en la detección de la enzima B-D-
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galactosidasa, la cual es una enzima característica de las bacterias coliformes, para
incidir en el sustrato Salmon-Gal. La reacción de esta enzima produce color rojo
asalmonado. Mientras que para la E. Coli se basa en una reacción combinada, ya que
esta consta tanto de la enzima B-D-galactosidasa, como las coliformes, lo que le da la
misma reacción. Pero también posee la B-D-glucoronidasa lo que reacciona con los
sustratos X-glucurónidos lo que le da como color definitivo el color azul oscuro o violeta.
Y cuando hay presencia de bacterias no coliformes se puede determinar que el color de
las colonias puede ser incoloras o en baja frecuencia turquesa.

Medinte los resultados obtenidos en la tabla no. 2 de resultados se puede determinar la

presencia de E. Coli por varias colonias de color violeta; presencia de bacterias
coliformes por la observación de varias colonias de color rojo asalmonado, y la presencia
de UFC bacterias no coliformes por la observación de colonias de color turquesa, pero
debido a los resultados de los caldos fluorocult se encuentra que estos resultados no son
ciertos, por lo cual se puede pensar que los resultados de la tabla no.2 se debiera a una
posterior contaminacion de la muestra o por la posible presencia de enterobacterias en
el filtro utilizado durante la practica. Por lo que es posible determinar que el agua si es
potable según las normas COGUANOR.

Conclusiones

1. Fue determinado que el número más probable de Escherichia Coli por medio del
método de los nueve tubos de ensayo fue menor a 1.8/100mL , teniendo como
límite máximo permisible un NMP de 23 lo que por la presencia máxima de hasta
3 positivos en las muestras de 1/10 según las normas COGUANOR 29001 se
determina que el agua es potable.

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 2. Fue determinada la presencia de Escherichia Coli, bacterias coliformes y bacterias
no coliformes por medio del método de membrana de filtración, pero al no haber
concordancia con las pruebas fluorocult se consideró que este resultado es falso,
determinándose que el agua estudiada si es potable.

3. Se determina que el agua estudiada purificada por un proceso de luz Uv si es

en efecto potable, comprobando la eficacia del método de luz UV para la
purificación del agua.

Bibliografía
1. (1999). COGUANOR 29002. Guatemala: Ministerio de economía.

2. Guatemala, G. d. (2005). Ministerio de Economía . Obtenido de Comisión Guatemaltecas de normas:

http://coguanor.gob.gt/index.php?id=23

3. Monroy García, E. M. (2012). DIAGNÓSTICO DE LA CALIDAD FÍSICOQUÍMICA Y MICROBIOLÓGICA EN

AGUA DE SUMINISTRO POTABLE PARA 6 ALDEAS Y CABECERA MUNICIPAL EN EL MUNICIPIO DE
SAN VICENTE PACAYA, ESCUINTLA CONFORME A LA NORMA COGUANOR NGO 29001:99 .
Guatemala: Universidad San Carlos de Guatemala.

4. Normas, C. G. (2015). COGUANOR NGO 29 001:99 1era revisión. Guatemala : COGUANOR .