DETALLES

Clase/proyecto METABOLISMO BACTERIANO

Fecha/Hora/Ubicación 11/09/2019|1:00p.m|Universidad Nacional

Objetivo Utilizar las pruebas metabólicas para la identificación bioquímica

de cepas bacterianas.

Asistentes Luis Vega & Cristian Fonseca

Resumen

Todos los cambios que sufre una sustancia nutritiva a su entrada en un organismo vivo quedan
incluidos en el metabolismo. Es función del metabolismo microbiano extraer energía para poder
sintetizar los constituyentes macromoleculares de su estructura. La energía es transferida y
almacenada como moléculas de ATP. Las diferentes características bioquímicas de los
microorganismos permiten su clasificación. En la práctica utilizaremos cultivos de bacterias
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Los microorganismos pertenecientes a esta
familia son bacilos Gram negativos con una amplia gama de reacciones bioquímicas. Una
manera práctica de evaluar el metabolismo bacteriano es mediante las pruebas IMViC (indol,
rojo de metilo, Vogues-Proskauer y citrato). Otras pruebas: TSI y movilidad.

MATERIALES
Cultivos de Escherichia coli, Klebsiella sp. , Proteus sp. y Enterobacter sp.

Tubos con caldo Triptona

Tubos con caldo MR-VP.

Tubos con agar Citrato de Simmons.

Tubos con agar TSI.

Tubos con agar Motilidad.

Prueba de indol (Xilol, Kovacs o Erhlich)

Indicador de Rojo de Metilo

Prueba VP ( naftol y KOH)

PROCEDIMIENTO: Producción de Indol

1. Inocule cada microorganismo en el caldo Triptona

2. Incube a 35 ºC por 48 horas

3.Agregue a cada tubo 5 gotas de xilol, agite bien para extraer el indol de la fase acuosa y
deje que el xilol se estratifique

4.Agregue 5 gotas de reactivo de Kovacs, deslizándolo por la pared del tubo. Para que se
estratifique. La formación de un anillo de color rojo violáceo se considera como positiva.

PROCEDIMIENTO: Rojo de metilo

1.Inocule cada microorganismo en el caldo MR-VP.

2.Incube a 35 ºC por 48 horas.

3.Agregue a cada tubo unas 5 gotas de Rojo de Metilo. Si mantiene el color rojo, la prueba es
positiva.

PROCEDIMIENTO: Vogues Proskauer

1. Inocule cada microorganismo en el caldo MR-VP

2.Incube a 35 ºC por 48 horas

3.Agregue a cada tubo unas 12 gotas de alfa naftol y agite para oxigenar

4.Agregue 4 gotas de KOH, agite y deje en reposo por 1 hora, el desarrollo de un color rosado
es positivo.

PROCEDIMIENTO: Utilizando Citrato

1. nocule por rayado los tubos de agar citrato con cada microorganismo

2. Incube a 35 ºC por 48 horas

 3.Observe los resultados. Color azul: prueba positiva.

PROCEDIMIENTO: TSI

1. Inocule cada microorganismo en tubo de TSI introduciendo la aguja bacteriológica hasta

el fondo del tubo. Saque la aguja y raye el inclinado.

2. Incube a 35 ºC por 18 a 24 horas

3.Observe los resultados

PROCEDIMIENTO: Movilidad

1. Inocule el agar movilidad con los cultivos proporcionados con la aguja bacteriológica por
picadura.

2. Incube los tubos a temperatura ambiente por 48 horas

3.Observe los resultados

RESULTADOS
Número de cepa incógnita: 1
 Figura 1. Resultados de las pruebas TSI, Rojo de metilo,VP, citrato e indol de izquierda a
derecha, respectivamente.

Figura 2. Resultados de la prueba TSI y Rojo metilo de izquierda a derecha respectivamente.

Figura 3. Resultados de la prueba citrato.

Cepa Indol MR VP Citrato TSI

1 + + - - A/A
DISCUSIÓN
Al obtener los resultados de la cepa 1, se puede observar que dio positiva para indol. Lo que
quiere decir que esta bacteria posee la enzima triptofanasa que le permite hidrolizar y
desaminar oxidativamente el triptofano formando derivados del ácido indol pirúvico, como el
indol. La cepa dio positiva en MR-VP ya que mantuvo la coloración roja lo que indica que la
bacteria produjo ácido por este medio. En la prueba TSI obtuvimos A/AG+ esto significa que la
bacteria fermenta la lactosa o sacarosa o ambas, y su coloración amarillenta se debe a la
cantidad de ácido formado es tal que acidifica todo el tubo, haciendo virar el indicador a su
forma ácida, amarilla. El G+ se debe a la producción de gas por parte de la cepa.

Sistema API para la identificación bacteriana

Objetivo Identificar cepas bacterianas por medio de la utilización del

sistema API 20E

Resumen

Los sistemas API son sistemas miniaturizados de los procesos convencionales utilizados para
la identificación bacteriana. La interpretación puede hacerse con base a cuadros de
clasificación o automáticamente, mediante la base de datos API-LAB. 50 El método API para la
identificación bacteriana es muy útil debido a que se pueden montar diversas pruebas
metabólicas en un solo dispositivo sin la necesidad de preparar medios de cultivo.

MATERIALES
Cultivos de Escherichia coli, y Enterobacter sp.

Galerias API 20 E.

Mc Farland

Reactivos API

Solución salina

Aceite mineral
PROCEDIMIENTO

1. Con el asa bacteriológica tome un poco del cultivo y suspéndalas en el tubo con solución
salina para lograr una 0.5 McFarland.

2.Inocule con la pipeta pasteur la solución preparada en el API 20E tomando en cuenta:

3.Coloque el API 20E en su dispositivo plástico con un poco de agua e incube por 24 horas
a 35-37 ºC.

4.Revise los resultados de acuerdo con el cuadro proporcionado por la persona docente.

5. Utilice el libro proporcionado por la persona docente para determinar el género y la

especie de la bacteria inoculada.

RESULTADOS

Figura 1. Resultados de la prueba API

 Figura 2. Análisis de resultados de la prueba API

DISCUSIÓN
La prueba API, es sin duda la mejor manera de identificar una cepa bacteriana, no únicamente
por su fácil uso, poco tiempo, y facilidad de transporte, sino además porque nos asegura hasta
en un 99% los resultados de la cepa que se está utilizando y es, en comparación con el resto
de pruebas, la única que combina los resultados obtenidos con un nombre específico de cepa,
ya que tiene un libro con muchas cepas distintas y los resultados a las pruebas bioquímicas de
esta cepas. De acuerdo a los resultados del API, se obtuvo la identificación de ​E.Coli​ ​con un
96% d​ e seguridad.