UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

INGENIERÍA DE BIOSEPARACIONES

Nombre: Andrés Sánchez

Curso: 7mo Bioquímica Fecha: 04 – 07 - 2019

Tema: Métodos de purificación alternos a la cromatografía

Método de precipitación usando Método de precipitación usando

Sulfato de sodio (NH4)2SO4
Intervalos de saturación usados: 20%,
20% - 40%, 40% - 60%
Muestra permaneció en baño de hielo
por una hora a una hora y media a 0
grados centígrados y con agitación
Centrifugación: se realizó a 9000 rpm a
2 grados centígrados por 30 minutos.
Precipitados fueron resuspendidos en
5ml de tampón fosfato de sodio
Condiciones de resuspensión: pH 6 a
temperatura de -6 grados centígrados
Porcentaje de recuperación de la
actividad enzimática: 94,73%
Cantidad de proteínas remanentes:
4,5 +/- 0,006 mg/ml
acetona CH3(CO)CH3
Intervalos de saturación usados: 20% -
125% (v/v) de saturación.
Muestra permaneció en baño de hielo
por60 a 20 minutos a 0 grados
centígrados y con agitación
Centrifugación; se realizó a 9000 rpm a
2 grados centígrados por 30 minutos.
Precipitados fueron resuspendidos en
5ml de tampón fosfato de sodio
Condiciones de resuspensión: pH 6 a
temperatura de -6 grados centígrados
Porcentaje de recuperación de la
actividad enzimática: 86,25%
Cantidad de proteínas remanentes:
3.8 +/- 0,008 mg/ml

¿Cuál método es mejor?

Los dos métodos muestran eficiencia y facilidad de aplicación, pero así mismo cada uno tiene
sus ventajas, el método de precipitación usando acetona muestra un tiempo de
acondicionamiento mucho menor en el baño de hielo a comparación del otro método, y si se
desea rapidez en la producción y obtener gran cantidad de sustancia semipurificada en un corto
tiempo sería recomendable usar este método, sin embargo lo más importante en la industria es
la calidad del producto final razón por la cual el método de precipitación con sal de sulfato de
amonio resulta ser mucho más eficiente ya que recupera un porcentaje casi perfecto de la
actividad enzimática y además remueve una cantidad más alta de proteínas que pueden generar
contaminación e interferencias en el producto final, esto hace que este último método sea el
mejor.

Bibliografía

dos Santos, V, Mendonça, C. H, Mihos, F. C. S., Torres, A. G., & AM, K. P. Métodos De
Rompimiento Celular Y Purificación Parcial Para Extracción Y Concentración De Tirosinasa Desde
Agaricus Bisporus. Obtenido de: file:///C:/Users/delli5/Downloads/04a_1832_612.pdf