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CUANTIFICACIÓN PROTEICA POR EL MÉTODO DE BRADFORD
INTRODUCCIÓN
OBJETIVO
Que el alumno analice y aplique el fundamento de la técnica de la determinación cuantitativa de
proteínas Bradford, además de cuantificar la cantidad de proteína en un extracto crudo y se familiarice
con la elaboración de una curva patrón.
PROCEDIMIENTO:
Adicionar al tubo 1, 800µL de solución patrón SAB y 800 µL de NaCl 0.15 M, agitar y tomar de este tubo
800µL y adicionarlo al tubo 2, al cual se le adicionaran 800 µL de NaCl 0.15 M, agitar. Efectuar este
proceso hasta el tubo número 11 del cual se desecharan 800µL. Por otro lado tomar 800µL de la
solución de hongos y efectuar 2 diluciones más.
Tubo Sol. albumina (µL) NaCl 0.15M (µL) Vol. Total (µL) Albumina
[mg/mL]
0 0 800 800
1 800 800 800
2 800 800 800
3 800 800 800
4 800 800 800
5 800 800 800
6 800 800 800
7 800 800 800
8 800 800 800
9 800 800 800
10 800 800 800
11 800 800 800
Una vez efectuadas las diluciones, se adicionan 200µL de Reactivo de Bradford a todos los tubos y
después de 10 minutos. Tomar el tubo No 6 y mediante la comparación de un blanco (tubo 0), efectuar
un barrido espectrofotométrico desde una longitud de 400 a 700 nm. Posteriormente tomar la lectura
de la absorbancia de cada uno de los 11 tubos en la longitud, de onda de 595 nm, previamente
ajustando el espectrofotómetro con el blanco preparado con solución de NaCl (tubo 0). Después tomar
la absorbancia de las soluciones de hongos, previamente con el tratamiento del Reactivo de Bradford a
595 nm.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
o Reportar una tabla con los datos de las absorbancias, el promedio, la desviación estándar y el % de
error grupal. Graficar los promedios de la absorbancia contra la concentración y calcular por
regresión lineal el coeficiente de correlación, la pendiente y la ordenada al origen de la recta del
equipo y grupal. Calcule además por intrapolación la concentración proteica en mg/L y en mg/g
hongo de las soluciones de hongos.
CUESTIONARIO
BIBLIOGRAFÍA
Bradford M. M. (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of
protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72: 248-254.