Medios de cultivo y

aislamiento de
bacterias a partir de
productos biológicos
Equipo 7 - Laboratorio 3.
Arévalo Jiménez Eva María.
Rivera Olvera Sheila Monserrat.
Equipo 1 - Laboratorio 4.
Hernández Salazar Daniela.
García Pérez Angel Eduardo.

09/Oct/2019
Objetivos
General: conocer las técnicas y medios de cultivo para el aislamiento y
cultivo de microorganismos a partir de productos biológicos.

Particulares

● Analizar los medios de cultivo que se emplean en la práctica, cuáles

son sus componentes y las características que lo definen.
● Recopilar los resultados obtenidos y evaluarlos con criterio, en base a
pruebas positivas y/o negativas.
Introducción
El término microbiota
normal se emplea para
referirse al conjunto de
microorganismos que se
encuentran, en el conjunto
de los individuos sanos de
la población
En individuos sanos NO hay microorganismos en zonas
específicas...
Líquidos corporales (sangre, linfa , LCR)

Órganos ( cerebro, hígado, riñones , páncreas,

pulmones, bazo)

Tráquea y bronquios

Vejiga (orina)

Trompas de falopio, útero

Oído medio e interno

Senos nasales y paranasales

Medio de cultivo
El micólogo Brefeld
consiguió aislar y cultivar
esporas de hongos en medio
sólido a base de gelatina.

Brooks, G. (2011)
 Clasificación de medios de cultivo por su...

Modificado de:
http://depa.fquim.unam.mx/am
yd/archivero/8Nutricionmicrobi
ana_27339.pdf
UNAM, s/a. (2014).
Fermentación láctica.
Lactosa como fuente de carbono.

Ruta metabólica anaerobia para obtención de energía, generando como productos

2 moles de ácido láctico, o en su forma ionizada, el lactato. Brooks, G. (2011)
Procedimiento experimental
Aislamiento a partir de materia fecal

Aislamiento a partir de orina

Procedimiento experimental (continuación)
Aislamiento a partir de exudado faríngeo

Aislamiento a partir de orina

Procedimiento experimental (continuación)
Aislamiento a partir de exudado nasofaríngeo
Resultados
Agar cerebro corazón (BHI)
Según su Complejo
composición
Tipo de medio Rico
Componentes Infusión de cerebro y
relevantes corazón (C, N y
vitaminas)
Crecimiento Apropiado para el cultivo
de bacterias y hongos
incluyendo los de difícil
crecimiento. Recuperado de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/pr
oductos/upl_5a281eacb5ee1.pdf
Resultados
Foto 1. Solo un
Foto 2 y 3. se observan 2
morfotipo presente.
morfotipos diferentes.
Morfología Colonial en BHI
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 1 Colonia 2

Tamaño 2 mm 3 mm Luz Transmitida translúcido translúcido

Color beige Amarillo Luz Reflejada brillante Mate

Forma circular circular Aspecto Húmedo Húmedo

Bordes entero Irregular Consistencia Suave Butirosa

Elevación plana Convexo Efecto sobre el N/A N/A

medio.

Superficie lisa Lisa

Gelosa sangre Medio rico Permite el crecimiento
de variedad de
microorganismos

alfa-hemolíticos

beta-hemolíticos

Gelosa
gamma-hemolíticos
sangre sin
inocular. Laboratorios Britania. (2015).
Madigan, M & Col. (2004).
 Crecimiento colonial
Resultados blanco
Reacciones de hemólisis. (gamma-hemólisis)

Ruptura de los eritrocitos que Colonia

conlleva a la liberación de
hemoglobina.

● Alfa-hemólisis: lisis
parcial de eritrocitos.
Colonias color verde (por
la metahemoglobina).
● Beta-hemólisis: halo de Halos transparentes
hemólisis completamente (beta-hemólisis)
claro.
● Gamma-hemólisis: Géneros de bacterias beta-hemolíticas:
ausencia de hemólisis. Neisseria al igual que Streptococcus Laboratorios Britania. (2015).
(también gamma-hemolíticos) Torres, M. (2002).
Morfología colonial en gelosa sangre Colonia
seleccionada
Tamaño: 2mm Luz reflejada: brillante

Color: blanca Luz transmitida:

traslúcida
Forma: circular
Producción de
Bordes: enteros
pigmento: ninguno
Elevación: convexa
Consistencia:
Superficie: lisa suave-friable

Aspecto: húmedo
 Agar Eosina-Azul de metileno (EMB)

Recuperado de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28240e1c004.pdf
Resultados

Lac y/o Sac +: Colonias Lac y/o Sac +: Colonias Gram

Gram Negativo/ negras con Negativo/ negras con brillo
brillo metálico verde metálico verde
Lac - : Colonias Gram
Negativo - incoloras.
Morfología Colonial EMB
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 1 Colonia 2

Tamaño 3 mm 2 mm Luz Transmitida Opaca Opaca

Color Morada Negra Luz Reflejada Brillante Brillante

Forma Circular Circular Aspecto Húmedo Húmedo

Bordes Entero Entero Consistencia Butirosa Butirosa

Elevación Plana Plana Efecto sobre el Lac + Lac +

medio.

Superficie Lisa Lisa

Agar Salmonella
-Shigella

MEDIO COMPLEJO, SELECTIVO Y

DIFERENCIAL

Selectivo por: Sales biliares,

SS
verde brillante

Diferencial por: Lactosa, rojo

neutro, tiosulfato sódico,
citrato férrico
•Verde brillante
•Citrato sódico
Recuperado de: •Sales biliares
https://www.bd.com/resource.aspx?idx=8779 GRAM +
Resultados Lac (+): Colonias
rosas o rojas.
Foto 2. Agar SS con muestra de
materia fecal.

Lac (-): Colonias

incoloras.

H2S (+): Colonias

con centro negro.
Foto 1. Agar SS con muestra de
SOLO PERMITE EL CRECIMIENTO DE BACTERIAS GRAM (-)
materia fecal.
Foto 3. Agar SS con muestra de
exudado faríngeo.
Morfología Colonial Característica Colonia Característica Colonia

Tamaño 3 mm Luz transm. Translúcida

Color Rosa claro Luz reflejada Brillante

Forma Irregular Aspecto Húmedo

Bordes Irregulares Consistencia Suave

lobulados mucoide

Elevación Convexa Efecto sobre Acidificación

el medio

Superficie Lisa
Foto 4. Agar SS con muestra de
materia fecal.
 Agar MacConkey Medio selectivo y diferencial.

Selectivo por: cristal violeta y

sales biliares.
Diferencial por: lactosa.

Placa de agar MacConkey sin

Recuperado de: inocular.
bd.com/resource.aspx?IDX=87
70.
*Específico para la familia
Becton Dickinson (2014). Enterobacteriaceae.
Resultados
Prueba positiva:
Colonias rosadas o
rojas (Lactosas
positivas)*.

Prueba negativa:
Colonias transparentes
Colonias con
o incoloras (Lactosas
Lactosas (+)* diferentes
negativas). características,
obtenidas de
*Por el vire del rojo
Lactosas (-) materia fecal
neutro en medio ácido en agar McC.
a rojo/rosa.
Becton Dickinson. (2014).
Identificación presuntiva.

Modificado de:
Madigan, M & Col.
(2004).
 Morfología colonial en agar McC
Tamaño: 4mm Luz reflejada: brillante

Color: rosa intenso Luz transmitida:

traslúcida
Forma: circular
Producción de
Bordes: filamentosos
pigmento: ninguno
Elevación: pulvinada
Consistencia:
Superficie: lisa suave-friable

Aspecto: húmedo Colonia

seleccionada
 Agar Sal y Manitol
Medio selectivo y diferencial.
Selectivo por: Alta concentración
de NaCl
Diferencial por:
Manitol y Rojo de fenol

Placa de agar Sal y Manitol sin inocular

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2ed6c53aed1.pdf
Resultados
Interpretación de Resultados

PRUEBA POSITIVA
Microorganismos
fermentadores de manitol :
Colonias amarillas con un
halo amarillo

PRUEBA NEGATIVA
Microorganismos no
fermentadores de manitol:
Colonias transparentes.
Agar Baird Parker
Medio selectivo y diferencial.
Selectivo por: Telurito de potasio y
cloruro de litio.
Diferencial por:
● Yema de huevo (Permite demostrar
la actividad lecitinásica)
● Telurito de potasio

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2819b9bf9 Placa de agar Baird Parker sin inocular

3d.pdf
Resultados
Interpretación de Resultados
Bacterias que reducen el telurito
de potasio. Colonias color negro

Bacterias que no reducen el

telurito de potasio: Colonias
transparentes.

Bacterias con actividad

lecitinásica: Halo claro alrededor de
la colonia.

Bacterias sin actividad lecitinásica:

Ausencia de halo alrededor de la
colonia
Morfologías microscópicas
 PRESENCIA
FORMA AGRUPACIÓN TAMAÑO GRAM
MORFOLOGÍA DE ESPORAS
MICROSCÓPICA COCOS RACIMO 0.6-0.8µm POSITIVO NO

Observado a 1000x
 PRESENCIA
FORMA AGRUPACIÓN TAMAÑO GRAM
MORFOLOGÍA DE ESPORAS

MICROSCÓPICA BACILOS AISLADOS CORTOS POSITIVO NO

1.0-1.5µm

Se sospecha la presencia del

género Corynebacterium de
carácter saprófito en faringe.

● Bacilo
● Gram positivo
● Se localizan en aguas,
suelos e incluso en piel
y mucosas del hombre y
animales
Torres, M. (2002).
 PRESENCIA
FORMA AGRUPACIÓN TAMAÑO GRAM
MORFOLOGÍA DE ESPORAS
MICROSCÓPICA CORTOS (1.0
BACILOS AISLADOS NEGATIVO NO
µm)

*Se describe un solo

morfotipo, debido a la
presencia de
pleomorfismo.

Observado a 1000x
 PRESENCIA
FORMA AGRUPACIÓN TAMAÑO GRAM
MORFOLOGÍA DE ESPORAS
MICROSCÓPICA BACILOS
AISLADOS 1.0µm NEGATIVO NO
CORTOS

Frotis de colonia de
medio EMB.

Observado a 1000x
Cuestionario
 2. ¿Qué características en común
Cuestionario tienen los medio de cultivo usados
para cada muestra? ¿por qué cree
1. ¿Tienen alguna importancia para que se seleccionaron en particular
su carrera o desarrollo profesional para cada muestra?
éstas técnicas? Explique.

La toma de muestras biológicas es

indispensable en el campo del
diagnóstico clínico, una de las
orientaciones que puede tener la
carrera de QBP.
Cuestionario
2. ¿Qué características en común tienen los medio de cultivo usados para cada
muestra? ¿por qué cree que se seleccionaron en particular para cada muestra?

Todos los medios utilizados son complejos, es decir, no se conoce exactamente la

composición del medio. Tienen todo lo que un microorganismo requiere para
crecer y un poco más.

Ya que cada uno de ellos contiene factores que permiten el crecimiento de los
microorganismos que podemos encontrar en cada muestra biológica.
Referencias bibliográficas
Referencias bibliográficas y fuentes de información
● Barrero-Cuevas, L. (n.d) .Microbiología clínica. Recuperado el 3 de octubre de
https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf
● Becton Dickinson. (2013). BD Salmonella Shigella Agar. Alemania. Recuperado el 04 de
https://www.bd.com/resource.aspx?idx=8779
● Brooks, G & Col. ( 2011). Microbiología médica; 25a ed. E.U.A: McGraw-Hill.
● Madigan, M & Col. (2004). Brock. Biología de los microorganismos; 10a ed. México: Pearson.
● Laboratorios Britania. (2015). Sangre agar base. Argentina. Recuperado el 04 de octubre de 2019 de:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/StreptococcusyEnterococcus.pdf
● Torres, M. (2002). Relación huésped parásito: flora humana normal. Uruguay. Recuperado el 04 de octubre de 2019 de:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2013.pdf
● Becton Dickinson. (2014). BD MacConkey II agar. Alemania. Recuperado el 04 de octubre de 2019 de:
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8770
● Universidad Nacional Autónoma de México (s/a). (2014). Nutrición microbiana. México. Recuperado el 01 de 2019
de: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/8Nutricionmicrobiana_27339.pdf
● Rodríguez, G. (2008). Géneros Streptococcus y Enterococcus. Uruguay. Recuperado el 04 de octubr de 2019 de:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/StreptococcusyEnterococcus.pdf