Metodología de la Investigación 2019

FORMULARIO

TESINA

I.-Identificación
Nombre alumno (s) Bárbara Díaz Fabres
Cristopher Jara Muñoz
II.-Título

Prevalencia de Endocarditis Infecciosa Canina Asociada a Bartonella spp en Temuco, Chile.

III.- Resumen (Como lo indica su nombre, el resumen debe incluir una síntesis muy acotada y clara de
cada una de las partes del trabajo, desde introducción a conclusiones. Extensión máxima, espacio asignado
en esta página)

Palabras clave: Endocarditis infecciosa, Prevalencia, Bartonella spp., Polymerase Chain Reaction.

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Curso Metodología de la Investigación para Medicina Veterinaria 2018
IV.- Introducción

Sisson y Thomas (1984) citado por Sirilak et al. (2014) mencionan que la endocarditis infecciosa (IE) es una
enfermedad de la válvula o del endomiocárdio causada por una infección bacteriana. Está asociada a una alta
mortalidad y morbilidad y puede tener graves consecuencias. (Santamarina. et al., 2011)
El diagnóstico de la endocarditis es particularmente desafiante por su variedad de presentaciones clínicas, su
rápida progresión y la carencia de técnicas diagnósticas que permitan confirmar definitivamente la
enfermedad en sus estadios iniciales (Santamarina, González-Martínez, Espino, 2011).
Las características clínicas y patológicas de la endocarditis en perros son muy similares a las anormalidades
observadas en pacientes humanos, en la cual la válvula aórtica se ve afectada con mayor frecuencia, lesiones
altamente vegetativas con calcificación acompañante y, en la mayoría de los casos, hay una infección
asociada a altos anticuerpos de Bartonella (Chomel et al., 2009). También se puede presentar el
desprendimiento de émbolos que viajan hacia cerebro, riñón y/o bazo (Santamarina et al., 2011).
En la antigüedad se pensaba que los agentes más comunes que provocaban EI eran Erysipelothrix
rhusiophatiae, Escherichia coli, Corynebacterium spp., Pseudomona aureginasa, Staphilococcus aureus y
Streptococcus spp. Luego de esto la EI se fue asociando al género Bartonella, para describirse finalmente
como agente causal de EI canina el año 1995. Las especies de Bartonella son proteobacterias alfa,
intracelulares y extracelulares, pleomórficas, gramnegativas, que son los agentes causantes de la fiebre de
Oroya, la fiebre de trinchera y la enfermedad por arañazo de gato. Actualmente, la familia contiene al menos
19 miembros; muchos de los cuales son patógenos humanos y caninos emergentes (Pesavento et al., 2005).
Aunque la prevalencia de esta enfermedad es baja (0.09% –6.6%) en perros es probable que la verdadera
prevalencia en la población general sea altamente subestimada debido a los signos clínicos no específicos y
la dificultad en el diagnóstico (MacDonald, 2010).
Según los últimos resultados del El Censo de Población y Vivienda 2017, ha habido un aumento de la
población en Chile, destacando la región de la Araucanía y principalmente la ciudad de Temuco (INE, 2018).
Esto podría tener una directa relación con el aumento en la tenencia de mascotas, perros mayoritariamente;
por lo tanto, se cree que este aumento en la población canina podría repercutir directamente con un aumento
en la presentación de Endocarditis Infecciosa Canina (EI) y según la revisión bibliográfica se estima que el
principal agente causal de esta enfermedad es la bacteria del género Bartonella, más no se tienen registros si
este es el principal agente causal de la EI en Chile.
Por ende, el objetivo de esta investigación es determinar la prevalencia de EI Canino en la ciudad de Temuco
y si existe alguna asociación entre el aumento de la población y la incidencia de esta enfermedad. Además
de identificar si Bartonella spp es el agente etiológico responsable de la presentación de la enfermedad o si
existe algún otro agente infeccioso asociado y si el tamaño del perro es uno de los tantos factores
predisponentes de esta enfermedad.

V.- Hipótesis

En la ciudad de Temuco, Chile el aumento de la población, ha repercutido con un aumento en la tenencia

de mascotas (perros principalmente) por lo tanto, se cree que podría haber un en la prevalencia de la EI por
Bartonella spp.

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VI.- Objetivos

General: Determinar la prevalencia de EI en caninos en la ciudad de Temuco, Chile.

Específicos:
● Identificar si Bartonella spp. es el principal agente etiológico responsable de la presentación de la
Endocarditis Infecciosa Canina.
● Resolver si hay alguna asociación en la presentación de esta enfermedad con el tamaño, raza, sexo
y edad del perro.

VII.- Materiales y Métodos

Se recogieron un total de 469 informes de necropsias de pacientes realizadas por distintas clínicas
veterinarias distribuidas por toda la ciudad de Temuco, estos informes van desde marzo del 2009 hasta junio
del 2019. Una vez analizados estos informes se procedió a medir la prevalencia de EI, la cual se calculó
dividiendo el total de casos de EI por el número total de evaluaciones de necropsia realizadas durante el
período de tiempo X100 (Sirilak et al. 2014). Se registraron todos los datos relevantes relacionados con cada
paciente que dió positivo a la EI (tamaño, raza, edad, sexo y los hallazgos clínicos).
Para identificar si el agente responsable de la EI canina era la bacteria del género Bartonella se recuperaron
diferentes cortes histopatológicos que comprenden lesiones vegetativas con la presencia de bacterias y/o
células inflamatorias dentro de las válvulas (aórtica principalmente) o en el endocardio propiamente tal, el
cual fue el criterio para diagnosticar la EI.
Se buscó dentro de los archivos de los pacientes, y se lograron recuperar 36 bloques de parafina de tejido
valvular aórtico o endomiocárdio que fueran de caninos positivos a EI y se enviaron a la Universidad
Católica de Temuco en la cual se procedió a realizar un PCR (Polymerase Chain Reaction) convencional
para detectar la presencia de Bartonella spp. El ADN total se extrajo de 200 µg de tejidos cardíacos
embebidos en parafina fijados con formalina de 14 muestras de válvulas y 22 muestras de miocardio
utilizando un kit comercialmente disponible (QIAamp DNA Mini Kit, QIAGEN Inc, Valencia, California).
Las amplificaciones por PCR se realizaron en 50 µl que contenían Tris 10 mM, pH 8,3, KCl 50 mM, MgCl2
3,5 mM, 200 mM cada dATP, dCTP y dGTP, dUTP 400 µM, 1 µM cada cebador y 2.5 unidades de Taq
polimerasa (AmpliTaq Gold DNA polimerasa, PE Applied Biosystems, Foster City, Calif). Las
amplificaciones se realizaron en un termociclador automático utilizando un protocolo que incluye 10
minutos de incubación a 20 ° C seguido de 2 minutos de desnaturalización a 95 ° C, luego 45 ciclos de 1
minuto a 95 ° C, 1 minuto a 60 ° C y 30 segundo a 72 ° C. Los productos de amplificación por PCR se
identificaron después de la electroforesis en geles de agarosa al 3%. Se incluyeron muestras positivas y
negativas como controles. La sensibilidad de este ensayo en la detección de Bartonella spp. fue el 100% de
las muestras de sangre con 50 a 100 UFC/ml, el 85% de las muestras de sangre con 30 UFC/ml y el 75% de
las muestras de sangre con 10 a 20 UFC/ml (Jensen et al., 2000).
El análisis estadístico de los resultados se realizó mediante el programa estadístico SPSS, para comparar la
presentación de la enfermedad con el tamaño, la raza y la edad de los individuos positivos a EI. Para
finalmente analizar los resultados del PCR y determinar si Bartonella spp era el principal agente causal.

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VIII.- Resultados (Debe resumir los resultados más relevantes del trabajo de manera escrita e incorporando tablas, figuras,
esquemas, fotografía etc. según corresponda. Máximo 2 páginas)

IX.- DISCUSIÓN (Incluye los aspectos más relevantes de la literatura relacionados a la problemática abordada en el
trabajo y los resultados obtenidos. Debe incluir las conclusiones. Máximo 3 páginas)

Referencias (debe incorporar todas las referencias citadas en el texto de acuerdo al formato definido)

FORMATO GENERAL: Letra TN Roman 11; Interlineado 1,15; TEXTO JUSTIFICADO

AL COMPLETAR EL FORMULARIO DEBE ELIMINAR TODOS LOS TEXTOS DESCRIPTIVOS QUE

APARECEN DESTACADOS EN AMARILLO.

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