Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales.

Proyecto Curricular de Ingeniería Ambiental.

Asignatura: Microbiología
Docente: Lena Carolina Echeverry, MSc.

Guía de Laboratorio No. 04.- Identificación bioquímica de

bacterias.

Las pruebas bioquímicas consisten en distintas pruebas químicos aplicados a medios

biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos
microorganismos presentes. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en
determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un
medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no. Para realizar las pruebas
bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo con las
exigencias del microorganismo en estudio.

MATERIALES

1. Cultivo puro bacteriano

2. Colorantes para realizar tinción de Gram
3. Set de pruebas bioquímicas:
a. Citrato
b. Triple azúcar hierro
c. Oxidación – Fermentación
d. Gelatina
e. Sulfuro – Indol – Motilidad
f. Urea
g. Nitrato
h. Rojo de metilo – Voges Proskawer
i. Oxidasa
j. Catalasa
4. Asa bacteriológica redonda
5. Asa bacteriológica recta
6. Mechero
7. Incubadora a 37°C
8. Aceite mineral
9. Peróxido de hidrógeno
10. Microscopio
11. Reactivo rojo de metilo
12. Reactivos A y B de Barrit
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13. Reactivo de Kovacs

14. Bandeja de incubación
15. Bandeja para descontaminación

PROCEDIMIENTO

1. Antes de realizar la siembra de la batería de bioquímicas debe realizar la tinción de Gram

de una UFC del cultivo en el medio nutritivo para el proceso de identificación.
2. Montar al microscopio la tinción, observar en 100X y verificar morfología, clasificación
y pureza.
3. Realizar las respectivas siembras de la batería bioquímica conforme a la explicación del
docente.
4. Marcar el material, envolver con papel plastificado y dejar en la bandeja de incubación.
5. El cultivo bacteriano empleado para la siembra de la batería bioquímica depositarlos en
la caja para descontaminación.
6. Apagar el mechero, desinfectar el área de trabajo, retirarse el material de protección
depositando en caneca roja los guantes, tapabocas, gorro desechable, toallas desechables
y lavarse las manos antes de retirarse del laboratorio.
7. En la siguiente sesión realizar la lectura de cada prueba bioquímica empleando las claves
de identificación bacteriana del manual de Bergey y clasificar el microorganismo de
evaluación.

RESULTADOS

PRUEBA DEL CITRATO

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ANTES DESPUES ________________________________________________________
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PRUEBA DEL TRIPLE AZUCAR HIERRO

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ANTES DESPUES ________________________________________________________

PRUEBA DE SULFUROS – INDOL - MOTILIDAD

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ANTES DESPUES ________________________________________________________
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PRUEBA DE OXIDACION
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ANTES DESPUES ________________________________________________________

PRUEBA DE FERMENTACION
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PRUEBA DE UREA
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ANTES DESPUES ________________________________________________________

PRUEBA DE ROJO DE METILO

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PRUEBA DE VOGUES - PROSKAWER

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ANTES DESPUES ________________________________________________________

PRUEBA DE NITRATO
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ANTES DESPUES ________________________________________________________

PRUEBA DE LA CATALASA

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TINCIONES DE GRAM
1. Inicio de la identificación

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V.B. PROFESOR: ______________

2. Lectura pruebas bioquímicas

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V.B. PROFESOR: ______________

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IDENTIFICACION CON TABLA – MANUAL DE BERGEY

Posible microorganismo identificado:

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ANEXO
Tabla de identificación bioquímica.
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DISCUSIÓN.
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CONCLUSIONES.
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REFERENCIAS.