Nombre: Milton Paúl Márquez Cadena

NRC: 5682

Fecha: 14/06/2018

Título: Preparación de medios de cultivos usando normas de bioseguridad en el

laboratorio.

Palabras clave: Agar, estéril, medio de alimentación.

Resumen: La preparación de medios de cultivos es una técnica que se usa como materia
prima para la realización de técnicas de laboratorio. El uso de este procedimiento nos
permite realizar la siembra de cultivos bacterianos en una caja Petri, esto a su vez otorga
la capacidad para realizar un aislamiento bacteriano para obtener un cultivo puro de una
bacteria requerida. El cultivo puro de bacterias faculta el trasladar el cultivo puro hacia
un tubo de ensayo para continuar el ciclo una vez más o ver bacterias a través del
microscopio.

Introducción:

Antecedentes: En la Universidad Tecnológica Nacional de Rosario-Argentina en el 2009

un grupo de investigadores del departamento de Biotecnología realizaron varias
preparaciones de medios de cultivos. Este procedimiento fue realizado en medio líquido,
sólido y semisólido(SIM), los cuales fueron incubados para el posterior uso de cultivos
puros de una bacteria (Santambrosio, 2009).

También en Caracas-Venezuela en el 2008 un grupo de profesores de la Universidad de

Caracas realizaron específicamente medios de cultivos sólidos que fueron puestos en la
incubadora y luego en refrigeración con una temperatura entre dos y ocho grados
centígrados para que la técnica pueda ser preservada durante una semana (Guitiérrez,
2008).

Justificación: Los medios de cultivos son usados para realizar un cultivo puro de
bacterias. Primero se realiza la incubación por separado de lo preparado si son tubos de
ensayo, en el caso de que sean cajas Petri se debe encubar todo el frasco que tenga el
medio. Un medio de cultivo proporciona los nutrientes para la alimentación de bacteria y
así produciendo el crecimiento del mismo (Guitiérrez, 2008).
Objetivo general: Preparar medios de cultivo usando normas de bioseguridad en el
laboratorio.

Objetivo específico: - Ejecutar una medición de las sustancias base agar.

- Efectuar una disolución de la sustancia en agua destilada.

- Realizar el vertido del agar en los tubos de ensayo.

Hipótesis: El agar que según su fecha de caducidad ya estaba expirado no funcionara

adecuadamente para realizar siembra de cultivo puros.

Marco Teórico: Un medio de cultivo es una combinación de sustancias que

químicamente poseen o no elementos de gelificación de altas cantidades (Berrios &
Berthouly, 1987). Otra definición de medio de cultivo es el lugar donde se adaptan
condiciones con la adición de nutrientes sintéticos para el crecimiento de bacterias fuera
de su habitad natural, esta técnica permite el soporte de las bacterias para su proliferación
y consecuentemente su observación (De la Rosa & Prieto, 2003).

Al conjunto de características y condiciones necesarias para que se genere la reproducción

de las bacterias se lo denomina incubación (De la Rosa & Prieto, 2003). Este proceso es
realizado de forma artificial hecho mediante sustancias químicas, condiciones físicas o
instrumentos de laboratorio (Berrios & Berthouly, 1987).

Las condiciones generales para el cultivo de microorganismos consisten en la

disponibilidad de nutrientes dependiendo del microorganismo, en la consistencia del
medio, presencia o ausencia de oxígeno, condiciones de humedad, luz ambiental, pH,
temperatura y esterilidad del medio (Departamento de Química Biológica de la
Universidad de Buenos Aires, 2016).

Materiales y métodos:

Para la preparación de agar nutriente en tubos de ensayo, de acuerdo a los cálculos

previamente realizados, en una balanza se pesaron 1,38g de agar Neogen y se diluyeron
en 60mL de agua destilada en un frasco refractorio. Se hizo hervir la disolución en la
plancha de calentamiento por un minuto con agitación magnética constante. Una vez tibio
se colocó 5mL de la disolución de agar nutriente en 10 tubos de ensayo y se llevaron a
autoclavar colocando en uno de los tubos 1cm de cinta de autoclave.
Para la preparación de agar nutriente en cajas Petri, se calculó la cantidad de agar nutriente
necesario para 300mL de agua destilada. se mezcló 6,9g de gar nutriente con agua
destilada en un vaso refractario de 1L e hirvió la mezcla por un minuto sobre la plancha
de calentamiento con agitadores magnéticos. Se dejó enfriar la solución y distribuyó la
misma en 10 cajas Petri respectivamente enmarcados, se sellaron con cinta parafilm y
envolvieron en grupos de cuatro con papel de empaque colocando sobre este 1cm de cinta
de autoclave.

Para la preparación de caldo nutriente se pesaron 0,5g de caldo nutriente y se disolvieron

en 60mL de agua destilada mientras se calentaba por un minuto en una plancha de
calentamiento con agitadores magnéticos, una vez que el agua hirvió, se colocaron en 10
tubos de ensayo marcados respectivamente 5mL de la solución y se taparon sin cerrarlos
completamente. Se colocó en uno de ellos la cinta de autoclave y se los llevo a autoclavar.

Para la preparación de un medio de cultivo semisólido, en un vaso refractorio se colocaron

1,8g de OXOID con 60mL de agua destilada previamente medidos y se colocó este en
una plancha de calentamiento con agitadores magnéticos hasta que se disuelva por
completo. Luego se colocó la dilución en 20 tubos de ensayo hasta llegar
aproximadamente a 3cm de largo del tubo.

Ejemplo de una etiqueta del frasco que se realizó el agar tipo SIM.

OXOID
CMO 435.
S.I.M.
MEDIUM
IVD
500gr. Hacen 16.6 Litros (g/L) pH 7.3 ± 0.2 a 25°C
Fórmula Típica
Triptona20.0(l); Reptone 6.1;
Sulfato ferroso de amonio 0.2:
Tiosulfato de Sodio 0.2; Agar 3,5.
Mantenerlo bien cerrado, lejos de luz brillante.
Lot 1641071 Fecha de caducidad 20/20/03
 500 gramos
OXOID LTD., Basing stoke, Hampshire, England.

Instrucciones
Añadir 30g en un litro de agua destilada y hervir hasta disolver el medio
completamente. Distribuir en los recipientes finales y esterilizar por autoclave durante
15 minutos a 125°C

Resultados: Los medios de cultivos se encontraron listos para la incubación mediante el

instrumento de laboratorio que es la incubadora, luego de ello se esperó la semana
respectivamente para observar que los medios de cultivos se encontraron listos para la
realización posterior de siembra bacterianas. Los tubos de ensayo no presentaron
contaminación alguna ni muestras de daño en los mismos. Los medios presentaron un
color claro antes de la incubación del mismo.
Discusión: El mechero es fundamental en el laboratorio tanto en la preparación de
medios de cultivo y en el cultivo de bacterias ya que realizar una capa protectora con el
calor así evitando la contaminación en los tubos de ensayos (Alvarado, 2000).

Los medios no fueron calentados en exceso ya que esto provoca que el medio se vuelva
turbio y en ocasiones se oscurezca; es necesario una agitación vigorosa en los medios
gelificantes y completar con un enfriamiento oportuno del medio, estas condiciones
generan que el medio quede grumoso y con falta de solidez (Universidad de Las Palmas
de Gran Canaria, 2008).

Conclusiones: -Funcionó correctamente la técnica para realizar medio de cultivo.

-Se ejecutó correctamente el proceso que muestran las etiquetas para la

realización del medio de cultivo.

Bibliografía:

Alvarado, Y. (2000). Control y prevención de la contaminación microbiana en la

micropropagación. CENIC, 31(2), 87-91.

Berrios, A., & Berthouly, M. (1987). Tecnologia del cultivo de tijdos de cafe (coffea
arabica). Mexico: Instutito Interamericano de Cooperacion para la Agricultura.

De la Rosa, M., & Prieto, J. (2003). Microbiología en ciencias de la salud: Conceptos y

aplicaciones (Vol. 9no). España: ELSEVIER.

Departamento de Química Biológica de la Universidad de Buenos Aires. (2016). Los

medios de cultivo en microbiología. Obtenido de microinmuno.qb.fcen.uba.ar:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

Guitiérrez, S. (2008). PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. Obtenido de ucv.ve:

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_P
reparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf

Santambrosio, E. (2009). Preparación de medios de cultivo. Obtenido de frro.utn.edu.ar:

https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/p
racticoI.pdf

Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. (2008). Protocolo. Obtenido de

webs.ulpgc.es: http://www.webs.ulpgc.es/hbg/PRACTICAS/PROTOCOLS.pdf