Nombre: Milton Paúl Márquez Cadena

NRC: 5682

Fecha: 21/06/2018

Título: Preparación de siembras bacterianas en el laboratorio.

Palabras clave: Medio sólido, medio líquido, S.I.M.

Resumen: La preparación de siembras bacterias es una técnica usada en el laboratorio

para la observación del crecimiento del cultivo en sus diferentes formas, también es un
paso anterior al aislamiento de colonias bacterianas y el uso de los mismo para generar
cultivos puros. Esta metodología puede ser usada en diferentes medios, ya sea en un
medio sólido, liquido o semisólido; en tubos de ensayo. En cajas Petri únicamente el
medio sólido. Las diferencias de los métodos están en que cada uno sirve para explorar
la visualización de los tubos de ensayos observando cada detalle que puede indicarnos
alguna característica en particular de la bacteria.

Introducción:

Antecedentes: Sara Cano Ruera, como investigadora-consultora de calidad, en 2006

realizó siembras bacterianas en el laboratorio dentro de las cuales están Escherichia coli
Y Staphylococcus aureus en el cual utilizó agar sólido, líquido y S.I.M. para la realización
de este informe. En el observaron el crecimiento de las siembras después haber sido
llevadas a la incubadora donde analizo la fase estacionaria, las cajas Petri, en la que estuvo
el cultivo. En los tubos de ensayos observó cómo se desarrolló de diferente manera
dependiendo del medio en el que se encontró (Cano, 2006).

Justificación: La preparación de medios de cultivos es antesala a la ejecución de un

aislamiento de bacterias, después de haber conocido el mecanismo para la realización de
medios de cultivos la posterior practica de aislamiento generara una diferenciación entre
la siembra bacterias para observación de la misma y la siembra en la cual se aísla colonias.
En el aislamiento de colonias bacterianas es posible obtener un cultivo puro de la bacteria
para luego proceder a una siembra en tubos de ensayos o cajas Petri tanto para un nuevo
aislamiento o para la observación de los mismos (Santambrosio, 2009).

Objetivo general: Preparar siembras bacterianas en el laboratorio.

Objetivo específico: - Ejecutar una siembra tubo a tubo.

- Efectuar una siembra tubo a caja Petri.

Hipótesis: La siembra en los tubos serán puros con crecimiento masivo, mientras que en
las cajas Petri se observará cultivos aislados sin embargo el crecimiento masivo está
presente.

Marco Teórico: Una siembra bacteriana es la introducción de forma artificial y

provocada a un medio de cultivo de una porción de muestra con el fin de iniciar el ciclo
de reproducción bacteriano (Santambrosio, 2009). Existen reglas a seguir mientras se
realiza una siembra bacteriana, las cuales consistente en: que se ejecute de forma aséptica,
que el medio y material de trabajo estén esterilizados, que se realice la manipulación de
objetos dentro del rango del mechero (Facultad de Ciencias Bioquímicas de la
Universidad de Rosario-Argentina, 2017).

La siembra tubo a tubo se la realiza usando ansa, hilo, hisopo o pipeta estéril; la cual se
realiza con el mechero junto al lugar de trabajo. En el caso de las caja Petri se realiza una
siembra de la bacteria mediante agotamiento de ansa, este método consiste en que se
flamea el ansa, se la enfría y después de obtener muestra del cultivo se realiza
estriamientos largos hasta el final de la caja (Facultad de Ciencias Bioquímicas de la
Universidad de Rosario-Argentina, 2017).

Materiales y métodos:

En la preparación de siembra bacteriana de tubo a tubo hubo tres tipos de procedimiento

ya que había tres medios de cultivos en diferentes estados. En el medio sólido se utilizó
un asa para la extensión de la bacteria desde el cultivo líquido, procediendo así a utilizar
el mechero como protección de contaminación del ambiente y esterilizando el asa al
terminar de usarla. En el medio liquido se usó el asa para la obtención de la muestra y
actuando con el mechero como antes mencionado se introdujo el asa en el medio y se
agitó. En el medio SIM, es decir, semisólido se efectuó una estocada con una aguja hasta
casi el final del tubo. En las cajas Petri se realizó una inoculación mediante el asa con el
rayado de la caja Petri por agotamiento en dos diferentes cajas; con el uso del mechero y
la esterilización del asa bacteriana en los momentos requeridos (Koch, 2017).
Resultados: Los medios de cultivos se encontraron listos para la incubación mediante el
instrumento de laboratorio que es la incubadora, luego de ello se esperó la semana
respectivamente para observar que los medios de cultivos se encontraron listos para la
realización posterior de siembra bacterianas. Los tubos de ensayo no presentaron
contaminación alguna ni muestras de daño en los mismos. Los medios presentaron un
color claro antes de la incubación del mismo.

Muestra en medio sólido Muestra en medio Muestra en medio

de Bacillus subtilis. En líquido de Bacillus semisólido de Bacillus
tubo de ensayo. subtilis. En tubo de subtilis. En tubo de
ensayo. ensayo.

Muestra #1 en medio sólido Muestra #2 en medio sólido

de Bacillus subtilis. Técnica de Bacillus subtilis. Técnica
en zigzag. En caja Petri. en zigzag. En caja Petri.
Discusión: En el tubo en medio sólido, en pico de flauta, se observa un crecimiento
masivo ya que no existe espacio para el crecimiento en forma de zigzag por más que la
técnica fue así. En el tubo en medio liquido se mira que en el fondo existen las bacterias
y al agitar estas en forma de una sola más se eleva, las bacterias no tuvieron el soporte
necesario encima del medio así se hundieron y se reprodujeron en la parte de abajo. En el
tubo en medio semisólido con la estocada se visualiza que alrededor de la estocada y en
la parte superior del medio existen bacterias adicionalmente se observa que las bacterias
son motiles ya que se existe una especie de nube que indica su movimiento (García, 2009).

En el caso de las cajas Petri la primera caja en zigzag muestra en su resultado la

observación de las bacterias en esa misma forma, pero en los costados un crecimiento
masivo. Por otro lado, la otra caja se encuentra muy contaminada y puede ser debido a
que el parafilm utilizado no cubrir completamente a la caja Petri con su tapa ya que
estaban de diferente tamaño (Hilije, 1996).

Conclusiones: -Funcionó correctamente la siembra bacteriana tanto en cajas Petri y en

los tubos de ensayo en los diferentes medios.

-Se ejecutó correctamente el proceso de normas de bioseguridad para la

realización de la siembra bacteriana.

Bibliografía:

Cano, S. (5 de Abril de 2006). MÉTODOS DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO.

Obtenido de analizacalidad.com:
http://www.analizacalidad.com/docftp/fi148anmic.pdf
Facultad de Ciencias Bioquímicas de la Universidad de Rosario-Argentina. (2017).
SIEMBRA, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS.
Obtenido de http://www.fbioyf.unr.edu.ar/:
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/152380/mod_resource/cont
ent/1/2018%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
García, E. (2009). Microbiología. Obtenido de uib.cat:
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf
Hilije, L. (1996). Metodologías para el estudio y manejo de moscas blancas y
geminivirus. Turrialba-Costa Rica: CATIE. Obtenido de Metodologías para el
estudio y manejo de moscas blancas y geminivirus.
Koch, A. (2017). Manual de Laboratorio. Obtenido de Universidad de las Fuerzas
Armadas "ESPE".
Santambrosio, E. (2009). Siembra y recuento de microorganismos. Obtenido de
Universidad de Rosario-Argentina. Facultad de Ingenieria Química:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/p
racticoIII.pdf