TECNOLÒGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE

ECATEPEC
DIVISIÓN DE INGENIERÌA QUÌMICA Y BIOQUÌMICA

BIOQUÍMICA DEL NITROGENO Y REGULACIÓN GENETICA

PROF: CONSUELO MARTINEZ RUIZ

PRACTICA 1

Efecto de la leguminosa Lens culinaris como fijador biológico del nitrógeno en

el cultivo de jitomate, por el método Kjeldahl.

EQUIPO: 3

INTEGRANTES:

 Álvarez Pérez Laura Montserrat

 Bernal Morales Gissela Araceli
 Chávez Pérez Andrea Monserrat
 De la Cruz Pérez Jessica
 Sosa Herrera Sue Guadalupe

Fecha de entrega

22-MARZO-2019
 INTRODUCCIÓN
El nitrógeno (N) es un elemento esencial para las plantas, ya que forma parte
de compuestos tan fundamentales como proteínas, ácidos nucleicos y clorofila,
necesitándose principalmente en los tejidos vegetales en crecimiento (Cordova,
y otros, 2011).
La agricultura moderna utiliza plantas con potenciales productivos cada vez
mayores, demandando una elevada nutrición nitrogenada, la cual puede ser muy
superior al aporte de N del suelo. Por lo tanto, en la mayoría de los cultivos es
necesario suplementar con fertilizantes nitrogenados, sin embargo hay algunas
plantas capacitadas para realizar Fijación biológica del nitrógeno (FBN) que son
principalmente especies de leguminosas (Familia Leguminosae) que como todos
los vegetales absorben nitrógeno mineral del suelo, pero además pueden
obtener nitrógeno atmosférico (Urzúa, 2005).
Estas leguminosas son empleadas como abono verde reúnen varias ventajas,
pues además del aporte considerable de nitrógeno que realizan, también son
capaces de reciclar otros nutrientes y mejorar algunas propiedades físicas y
biológicas de los suelos (Martin, Rivera, & Mujica, 2007), Para esta práctica se
ha utilizado la leguminosa Lens culinaris (lenteja), como abono verde para el
crecimiento del jitomate.

Objetivo General

 Determinar el efecto del nitrógeno en el suelo, a través de la leguminosa

Lens culinaris.

Objetivos Específicos

 Comparar mediante dos biopilas la eficiencia de crecimiento del jitomate.

 Determinar las características del suelo, de cada biopila.
 Cuantificar el nitrógeno total a través del método Kjeldahl.
 MARCO TEÓRICO

Fundamentos de Fijación de nitrógeno.

El nitrógeno, después del agua, es el principal factor limitante para el desarrollo

de las plantas. La fijación biológica de nitrógeno representa una alternativa a la
fertilización nitrogenada ya que puede disminuir muchos de los efectos negativos
tanto a nivel medioambiental como sanitario.

El nitrógeno es el elemento más abundante de la atmosfera terrestre y sin

embargo es una fuente nutritiva muy escasa. Esto se debe a que el nitrógeno
atmosférico es inerte y no puede ser aprovechado por la mayoría de los seres
vivos. El nitrógeno únicamente se incorpora a los sistemas biológicos cuando ha
sido fijado o combinado con cierto elementos como el hidrogeno o el oxígeno, en
forma de nitrato o de amonio (Fernadez, Nuria, & de Felipe, 2002). La fijacion de
nitrogeno comprende de 4 fases.

Fijación:
La fijación biológica del nitrógeno consiste en la incorporación del nitrógeno
atmosférico, a las plantas, gracias a algunos microorganismos, principalmente
bacterias y cianobacterias que se encuentran presentes en el suelo y en
ambientes acuáticos. Esta fijación se da por medio de la conversión de nitrógeno
gaseoso (N2) en amoniaco (NH3) o nitratos (NO3-). Estos organismos usan la
enzima nitrogenasa para su descomposición. Sin embargo, como la nitrogenasa
sólo funciona en ausencia de oxígeno, las bacterias deben de alguna forma aislar
la enzima de su contacto

Amonificacion
Es el proceso por el cual los compuestos nitrogenados encontrados en el suelo,
productos de la descomposición de materiales orgánicos complejos tales como
proteínas, aminoácidos, ácidos nucleicos y nucleótidos son degradados a
compuestos simples por organismos que habitan el suelo, principalmente
bacterias y hongos. Estos microorganismos metabolizan estos compuestos y
liberan el exceso de nitrógeno en forma de amoníaco o ión amonio.

Nitrificación
La nitrificación es el proceso por el cual varias especies de bacterias comunes
en los suelos son capaces de oxidar el amoníaco o el ión amonio. Es un proceso
generador de energía, y la energía liberada es utilizada por estas bacterias como
fuente de energía primaria. Un grupo de bacterias oxida el amoníaco o ión
amonio a nitrito y luego otro grupo lo oxida a nitrato.
Desnitrificación
La reducción de los nitratos (NO3-) a nitrógeno gaseoso (N2), y amonio (NH4+) a
amoniaco (NH3), se llama desnitrificación, y es llevado a cabo por las bacterias
desnitrificadoras que revierten la acción de las fijadoras de nitrógeno, regresando
el nitrógeno a la atmósfera en forma gaseosa.
Fundamento del Método de kjendhal

Este método se basa en la descomposición de los compuestos de nitrógeno

orgánico por ebullición con ácido sulfúrico. El hidrógeno y el carbón de la materia
orgánica se oxidan para formar agua y bióxido de carbono. El ácido sulfúrico se
transforma en SO2, el cual reduce el material nitrogenado a sulfato de amonio.
El amoniaco se libera después de la adición de hidróxido de sodio y se destila
recibiéndose en una disolución al 2% de ácido bórico. Se titula el nitrógeno
amoniacal con una disolución valorada de ácido, cuya normalidad depende de la
cantidad de nitrógeno que contenga la muestra. En este método de Kjeldahl-
Gunning se usa el sulfato de cobre como catalizador y el sulfato de sodio para
aumentar la temperatura de la mezcla y acelerar la digestión. (NMX-F-068-S-
1980, s.f.)

El método Kjeldahl consta de tres etapas:

1. Digestión
El objetivo del procedimiento de digestión es romper todos los enlaces de
nitrógeno de la muestra y convertir todo el nitrógeno unido orgánicamente en
iones amonio (NH4 +). Durante la digestión, la espuma se descompone y
finalmente se convierte en un líquido claro que indica que la reacción química ha
terminado. Para ello, la muestra se mezcla con ácido sulfúrico a temperaturas
entre 350 y 380 ºC. Cuánto más alta sea la temperatura, más rápido será el
proceso de digestión (Chem, 2011)
2. Destilación
Durante el proceso de destilación los iones amonio (NH4+) se convierten en
amoniaco (NH) mediante la adición de un álcali (NaOH). El amoniaco (NH3) es
arrastrado al vaso receptor por medio de una corriente de vapor de agua.
3. Valoración
La concentración de los iones amonio capturados puede determinarse por medio
del ácido bórico como solución absorbente, posteriormente se lleva a cabo una
valoración ácido-base utilizando una solución estandarizada de ácido sulfúrico o
clorhídrico y una mezcla de indicadores. El rango de concentración de la solución
utilizada varía entre 0,01N a 0,5N dependiendo de la cantidad de iones amonio
presentes (Chem, 2011)

 En la etapa de destilación, el NH3 que se captura en ácido bórico al 4 %

va a contener de 6 - 7 gotas de indicador de Tashiro. Cuando el NH3
reacciona con el ácido bórico, la solución vira de rojo violeta a verde (pH
4,4-5,8) debido al cambio del indicador al pasar de la forma ácida a la
forma básica.
 En la etapa de valoración, se Valorará con HCl 0,25 mol/l hasta que la
solución tenga un ligero color violeta. · Con la concentración y el volumen
de HCl gastado en la valoración, podemos calcular el número de moles
de átomos de nitrógeno en la muestra.
El Nitrógeno presente en la muestra, expresado en por cierto se calcula mediante
la siguiente fórmula:

𝑉 × 𝑁 × 0.014 × 100
% 𝑑𝑒 𝑁𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 =
𝑚
En donde:
V = Volumen de ácido clorhídrico empleado en la titulación en cm3
N = Normalidad del ácido clorhídrico.
m = Masa de la muestra en g.
0.014 = Miliequivalente del nitrógeno (NOM-F-68-S-1980, s.f.)

Botánica del jitomate

El origen de la especie Solanum lycopersicum se ubica en la región Andina,

desde el sur de Colombia hasta el norte de Chile. Posiblemente desde allí fue
trasladada a América Central y México, donde se domesticó (Lopéz, 2017).

Tabla 1 Taxonomía del cultivo

Características botánicas del tomate

Tallo
Es grueso, pubescente, anguloso y de color verde. Mide entre 2 y 4 cm de ancho
y es más delgado en la parte superior (Figura 1). En el tallo principal se forman
tallos secundarios, nuevas hojas y racimos florales, y en la porción distal se ubica
el meristemo apical, de donde surgen nuevos primordios florales y foliares.
Inicialmente el tallo tiene una apariencia herbácea; está compuesto de epidermis
con pelos glandulares, corteza, cilindro vascular y tejido medular (Lopéz, 2017)
 Figura 1 Tallo del Tomate

Hoja
Espinada y compuesta. Presenta de siete a nueve foliolos peciolados que miden
4-60 mm x 3-40 mm, lobulados y con borde dentado, alternos, opuestos y, por lo
general, de color verde, glanduloso-pubescente por el haz y ceniciento por el
envés (Figura 2). Se encuentra recubierta de pelos glandulares y dispuestos en
posición alternada sobre el tallo. (Lopéz, 2017).

Figura 2 Características de la hoja de jitomate

Flor
El cáliz y la corola constan de cinco o más sépalos y de cinco pétalos de color
amarillo, que se encuentran dispuestos de forma helicoidal. Poseen cinco o seis
estambres que se alternan con los pétalos (Figura 3), formando los órganos
reproductivos
 Figura 3 Flor de jitomate

Fruto
Es una baya bilocular o plurilocular, subesférica globosa (figura 4) o alargada,
que puede alcanzar un peso que oscila entre unos pocos miligramos y 600 g. El
fruto está constituido por el pericarpio, el tejido placentario y las semillas. En
estado inmaduro es verde y, cuando madura, es rojo (Lopéz, 2017)

Figura 4 Fruto de jitomate

Desorden nutricional en el Jitomate a causa del nitrógeno.

Funciones
Da el color verde a las plantas, participando en la fotosíntesis. Las plantas bien
abastecidas de nitrógeno adquieren color verde-oscuro debido a la abundancia de clorofila.
Síntomas
La falta de nitrógeno da como resultado poco desarrollo vegetativo y clorosis (apariencia
verde-amarillenta) del follaje, pasando de un verde amarillento a una pigmentación
violácea . La deficiencia se manifiesta en las hojas básales (hojas más viejas),
clasificándose como un elemento móvil. Las hojas más viejas se tornan cloróticas y
pueden morir. La planta queda achaparrada con follaje verde claro, tallos raquíticos, hojas
pequeñas, como consecuencia producción de frutos de menor tamaño.
El exceso de nitrógeno provoca exceso de crecimiento vegetativo, retardando su
maduración, los frutos pierden calidad y los tejidos permanecen verdes y tiernos
más tiempo, por lo que aumenta la sensibilidad a las enfermedades y a las bajas
temperaturas. Cuando ocurre lo anterior, es importante considerar la dosis y fuente de
nitrógeno tratando de balancear la solución del riego.
METODOLOGÍA

Reactivos

Ácido sulfúrico concentrado

Hidróxido de sodio (32%)
Catalizadores
Ácido Bórico (2%)
Ácido Clorhídrico (0.1N)
Indicador Shiro Tashiro

Equipo

Digestor y destilador Kjendal

Balanza analítica

Materiales
-bureta de 50 ml
-espatula
-probeta de 100 ml
-vasos de precipitados de 100 y 250 ml
-5 perlas de ebullcion
-Matraz Erlenmeyer de 500 ml
Metodología experimental

efecto de una leguminosa como

fijador de nitrogeno en un cultivo
de jitomate

Germinar lenteja

Tamizar tierra.

Forrar dos charolas

paveras con una bolsa
negra.

En cada charola se le
agregaran 800 gr de tierra
previamente tamizada

En la primer charola se
le agregara una linea
de lenteja germinada y
una linea de semillas
de jitomate y asi
sucesivamente.

En la segunda charola se
le agregara varias lineas
solo de semilla de
jitomate.

a ambas se le
agregaron 250
ml de agua.

monitorear a
diario y tener
un riego
constante.

Realizar
metodologia
Kjendahl

disgestion

destilacion

valoracion.
 “Método de Kjeldahl”

Pesar 1 g de muestra e introducir

Añadir 4g de en un matraz de Kjeldahl
catalizadores 20 mL de
ácido sulfúrico Dejar transcurrir 5 a
concentrado. Colocar el matraz en el micro digestor kjeldahl
6 horas en el micro
digestor
Calentar hasta total destrucción
de la materia orgánica
Con una coloración
azul verdosa

Colocar la muestra en un frasco dejar enfriar

Adicionar en un matraz

La muestra y 60 ml de agua

Adicionar 80 ml de NaOH
(32%)

Matraz con 60ml de Ácido Colocar el sistema de destilación

Bórico más 3 gotas del
indicador Shiro Tashiro.
Alcanzar un volumen de destilado en el Cambiar de color violeta a
matraz Erlenmeyer de 120mL aprox. verde
Tono ligeramente violeta

Titular el destilado con ácido Clorhídrico

Realizar Cálculos % nitrógeno

Referencias

Chem, P. A. (2011). Obtenido de Determinacion de Nitrogeno por el metodo Kjendahl:

https://www.itwreagents.com/download_file/brochures/A173/es/A173_es.pdf

Cordova, S., Castelan, M., Salgado, S., Palma, J., J, V., Peña, J., . . . Cardena, R. (2011). Fijación
biológica de nitrógeno por tres fabáceas (Leguminosae) en suelos ácidos de Tabasco,
México. Avances en investigación agropecuaria, 20.

Fernadez, M., Nuria, M., & de Felipe, M. (2002). Fijacion Biologica del Nitrogeno: Factores
Limitantes. Ciencia y Medio ambiente.

Martin, G., Rivera, R., & Mujica, Y. (2007). ESTIMACIÓN DE LA FIJACIÓN BIOLÓGICA DEL
NITRÓGENO DE LA Canavalia ensiformis POR EL MÉTODO DE LA DIFERENCIA DE N
TOTAL. Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas, 5.

NOM-F-68-S-1980. (s.f.). Obtenido de Norma Oficial Mexicana NOM-F-68-S-1980:

http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=4858024&fecha=04/08/1980&print=true

Urzúa, H. (2005). Beneficios de la Fijación Simbiótica de Nitrógeno en Chile. Chile.