1.

IDENTIFICACIÓN

NOMBRE DEL PROYECTO FUNGIDEGRADACIÓN

ESTADO ANTEPROYECTO X PROYECTO
Vereda Ancón II – Copacabana – Antioquia
LUGAR Y FECHA
octubre de 2018.
PALABRAS CLAVES Asperguillus sp, plástico, degradación
REGIONAL Antioquia
Centro para el Desarrollo del Hábitat y la
CENTRO/COMPLEJO
Construcción/Complejo Norte Barrio Pedregal.
INSTITUCIÓN EDUCATIVA I.E.R. Granjas Infantiles
ÁREA DE FORMACIÓN Manejo ambiental
PROGRAMA DE FORMACIÓN Técnico en manejo ambiental
FICHA DE
1610841
CARACTERIZACIÓN
DATOS DE CONTACTO DEL NOMBRE: Zefirelli Cuesta Martínez
RECTOR Y/O CARGO: Rectora
COORDINACION DE LA I. E TELEFONO: MOVIL: 3113546103
CORREO: zefirelliCM@hotmail.com
DATOS DE CONTACTO DEL NOMBRE: Zurich Vilayne Franco Senior
DOCENTE DE LA IE CARGO: Docente asesor
RESPONSABLE DEL TELEFONO: MOVIL:3127565687
PROYECTO CORREO: zurichf@hotmail.com
NOMBRE: Laura Elena Álvarez
DATOS DE CONTACTO DEL
CARGO: Instructora SENA
INSTRUCTOR SENA
TELEFONO: MOVIL: 3147357289
RESPONSABLE DEL
CORREO: lealalvarez444@misena.edu.co
PROYECTO
APRENDICES
PARTICIPANTES DEL DIRECCIÓN ELECTRÓNICA MÓVIL
PROYECTO
Anel Xiomara Rojo Hernández xiomararojo8@gmail.com 3206520604
Estefanía Paternina Gómez tefaniapaternina2003@gmail.com 3215645432
María Isabel Salgado Miranda lsalgadomirandam@gmail.com 3007526439

ROLES DEL EQUIPO DE TRABAJO

1.1. Nombre del participante Responsabilidades (tareas

asignadas)
 - Estefanía Paternina Gómez (líder) - Revisión bibliográfica.
- Aislar y replicar el hongo.
- Registro en bitácora.

- Anel Xiomara Rojo Hernández - Revisión Bibliográfica.

(equipo de apoyo) - Bioensayos.

- María Isabel Salgado Miranda - Revisión bibliográfica.

- Redacción del proyecto.

ORGANIZACIÓN DEL PROYECTO (Estructura de la propuesta para desarrollar

etapa práctica
BENEFICIARIOS DEL PROYECTO (Enliste a quiénes está afectado el problema
que usted evidencio o la necesidad que usted piensa y beneficiara este proyecto.
Si existe beneficiarios indirectos, enliste quienes son.)
Si los resultados obtenidos son los esperados se tendría:
- Beneficiarios Directos: La comunidad escolar de la I.E.R Granjas Infantiles y la
población del Hogar Jesús Obrero.
- Beneficiarios Indirectos: Todas las personas que puedan acceder a la técnica
en manejo ambiental brindada en la Institución.

2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA realizar una las estrategias del marco

lógico que están dentro del paréntesis para identificar el problema central que
se piensa subsanar o mejorar de la situación actual. (¨Lluvia de ideas¨,
¨Espina de pescado¨, ¨Árbol de problema¨, etc.)
Lluvia de ideas.
2.1.Realice un Resumen que describa la situación actual, incluyendo los
antecedentes y la propuesta en general del proyecto. Incluya el
Marco Teórico (Esto consiste en buscar documentos que contengan
información relevante que permitan detectar, extraer y recopilar
información de interés y relacionado a los problemas)
En este trabajo se pretende evaluar la capacidad de biodegradación del hongo
Aspergillus sp, sobre algunos tipos de bolsas plásticas que se generan a diario en
nuestra institución. (Anexo 1), para ello, hemos decidido aislar el hongo de una
muestra de pulpa de café, donde se ha demostrado que Aspergillus sp crece de
manera silvestre; el hongo será aislado de los residuos de pulpa de café en agua
(Anexo 2), agitando durante 2 horas, se harán disoluciones y se inoculará en cajas
Petri sobre extracto de pulpa de café-agar al 10% (Pandeya, y otros, 2000) en
(Franco Senior, 2018). A partir de los aislamientos primarios, se harán repiques en
un medio de cultivo sólido, que contiene pulpa de Café como material de
enriquecimiento o fuente de hidratos de carbono (Anexo 3), los cultivos, se
incubaran en posición invertida por un periodo de 8-10 días, a temperatura
ambiente en un lugar oscuro, posteriormente, se evaluará la capacidad de
biodegradación por medio de la fermentación en estado sólido, donde el sustrato
libera sus ácidos al igual que el hongo, esperando que estos actúen sobre el
plástico y aceleren su degradación, se registraran las variables pH, % humedad,
aireación y el tiempo de incubación del hongo.

Los productos plásticos tienen cualidades muy versátiles, entre las que destacan
su durabilidad y resistencia a la degradación (Fig 1) por lo que tienen un uso
extendendido en la manufactura de una amplia variedad de productos, los cuales
resultan imprescindibles para el estilo de vida actual (Khanna y Srivastava 2005).

Figura 1. Tiempo de Biodegradación de productos plásticos

Fuente: NOAA/Woods Hole Sea Grant.

Estos productos son también parte esencial de todas las industrias y en muchos
casos han reemplazado el uso de vidrio y papel como materiales de empaque. Su
consumo anual se ha incrementado de 5 millones de toneladas, en 1950, a cerca
de 200 millones de toneladas al año actualmente. Sin embargo, al ser resistentes
a la degradación, su uso extensivo genera desechos que se acumulan en el
ambiente a una tasa de 25 millones de toneladas al año, 40 % de las cuales son
dispuestas en rellenos sanitarios, mientras que cientos de miles de toneladas son
arrojadas a ambientes marinos. Este hecho ocasiona graves problemas, entre los
que destacan el requerimiento de grandes espacios para su disposición,
contaminación visual y muerte de animales que los ingieren accidentalmente, entre
otros (Reddy et al. 2003, Salehizadeh y Van Loosdrecht 2004) en (Gonzáles
García , Meza Contreras, González Reynoso , & Córdova López, 2013).
Se ha intentado atacar la problemática de la acumulación de plásticos en el
ambiente a través de procesos de incineración 12%, reciclaje 9% y el 79% es
acumulado en basureros o entornos naturales (Fig. 1). Sin embargo, estas medidas
presentan desventajas por lo que no se consideran como soluciones 100%
efectivas. Por ejemplo, durante el proceso de incineración se puede desprender
ácido cianhídrico y ácido clorhídrico con potenciales daños para la salud. En el
caso del reciclaje, este es complicado y consume mucho tiempo, además de que
la presencia de muchos aditivos en los plásticos, como pigmentos y cubiertas,
limita el proceso (Khanna y Srivastava 2005) en (Gonzáles García , Meza
Contreras, González Reynoso , & Córdova López, 2013). Por todo lo anterior nos
parece pertinente nuestro trabajo de investigación.

Figura 1. Relación produción mundial de plástico y generación de residuos.

Fuente: Science Magazine

2.MARCO TOERICO

2.1 Aspergillus sp, hongo filamentoso, con muchas especies ampliamente

distribuidas en la naturaleza, presente en frutas, vegetales y otros sustratos
(Murthy & Madhava, 2010) como la pulpa de café. Diferentes especies del género
Aspergillus sp, tienen mucha importancia económica porque se usa en muchas
industrias de la fermentación, ofrecen oportunidades potenciales para ser
utilizados en bioprocesos gracias a su capacidad biotransformadora al utilizar
residuos agroindustriales como soporte y sustrato para su crecimiento (Franco
Senior, 2018).

Gran parte de los hongos del género Aspergillus son saprófitos de vida libre,
capaces de utilizar una gran variedad de materiales en descomposición como
fuentes de carbono y nitrógeno. Estas características han sido explotadas por las
que actualmente poseen particular importancia en el desarrollo de procesos
biotecnológicos (Tekaia et al., 2005). Algunos procesos que involucran cultivos de
hongos incluyen la producción de ácidos orgánicos (Witteveen et al., 1995) en
(Murthy & Madhava Naidu, 2012).

2.1.1 Taxonomía de Aspergillus niger

Reino: Fungi
División: Mycota
Subdivisión: Eumycota
Clase: Deuteromycetes
Subclase: Plectomycetidae
Orden: Eurotiales
Familia: Eurotiaceae
Género: Asperguillus
Fuente: (Useche Y., Peña Venegas C., Cardona Vanegas G, 2007).

2.2 PULPA DE CAFÉ, principal subproducto del café, es esencialmente rica en

hidratos de Carbono, proteínas y minerales (especialmente potasio) y también
contiene cantidades apreciables de taninos, sustancias pécticas, azúcares
reductores, azúcares no reductores, cafeína, ácido clorogénico, y el ácido cafeíco.
Por cada dos toneladas de fruto de Café procesado, se produce una tonelada de
este residuo, se obtiene durante el procesamiento por vía húmeda generando
inconvenientes para su disposición final por el alto contenido de humedad y
sustancias tóxicas (Murthy & Madhava, 2012), (Franco Senior, 2018).
 La Pulpa de Café es un sustrato ideal para procesos microbianos (bioprocesos);
por su composición química, ofrece oportunidades potenciales para ser utilizada
en la producción de enzimas, ácidos orgánicos (Pandeya, y otros, 2000) y (Murthy
& Madhava Naidu, 2012); así mismo, se emplea para la recuperación de productos
químicos (ácido clorogénico y polifenoles) por métodos químicos y/o
biotecnológicos (Antier, Minjares, Roussos, & Viniegra-Gonzalez, 1993a) y
(Kashyap, Vohora, Chopra, & Tewari, 2001) en (Franco Senior, 2018).

2.2. Pregunta problematizadora - (Redacte una pregunta que contenga o

mencione el problema central que se detectó)

¿Existe un método biológicamente que pueda reducir el tiempo estipulado

para la degradación del plástico?

3. JUSTIFICACIÓN

3.1. NECESIDADES
(La razón de este punto es Indicar las razones y el por qué se va a realizar el
proyecto, cuáles son los requerimientos generales de la I.E, la empresa o el área a
mejorar.
Debe detallar-escribir en una lista cuáles son las necesidades que busca mejorar
con el proyecto, cuáles son los puntos en donde la organización eta fallando o le
falta mejorar)

- Se necesita reducir el impacto ambiental que genera la cantidad de bolsas

plásticas, bolsas de empaques de dulces y demás plásticos en la institución
- En el colegio diariamente se generan una gran cantidad de bolsas plástica
(Policloruro de vinilideno (PVDC) a las que no se le da un buen
aprovechamiento.
- Mejorar el aspecto físico de la institución
‘’
3.2. OBJETIVOS GENERAL (Cuál es la necesidad que va a cubrir el proyecto,
este ítem debe ser desarrollado describiendo la acción que se va a realizar,
la descripción debe comenzar con un verbo en infinitivo y no debe tener
más de 10 líneas)

Analizar la capacidad de biodegradación del hongo Aspergillus Sp sobre las

distintas bolsas de plástico utilizadas en la Institución Educativa Rural Granjas
Infantiles.
 3.3. OBJETIVO ESPECÍFICO DEL PROYECTO (Escriba en orden las acciones
que se van a realizar para desarrollar el objetivo general, redactándolas con
un verbo en infinitivo, guiarse de los procesos que tiene que hacer para
completar/lograr el objetivo general, basado en el ciclo PHVA -
Cronológicamente).
- Aislar el hongo de la pulpa de café
- Establecer el cultivo del hongo
- Realizar ensayos de biodegradación

4. DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO

4.1 CONSIDERACIÓN TÉCNICAS (resuelva los siguientes puntos relacionados con

los requerimientos y detalles del negocio, producto o servicio)

4.1.1 Descripción del o de los servicios (Que se va a obtener del proyecto; enliste cual
o cuales van a ser los productos, Servicios o el negocio que va a obtener después de
terminar el proyecto y describa brevemente cada uno de estos)

- Se pretende aislar una cepa del hongo que sea capaz de biodegradar los
empaques de plástico que se generan en la institución. Si se logra obtener esto
se podría implementar esta técnica en los lugares más contaminados en el
mundo.
4.1.2 Infraestructura (Describa que infraestructura o ambiente requiere para
desarrollar su producto o servicio)

- El proyecto se va a desarrollar en la institución, especialmente en el

laboratorio.
4.1.3 Localización (Escriba donde va a ser la ubicación del proyecto, donde va a
quedar ubicado el negocio, donde se va a prestar el servicio o si es un
producto escriba donde se va a entregar, distribuir o vender el producto)

- El proyecto será desarrollado en el municipio de Copacabana, exactamente en

la Institución Educativa Rural Granjas Infantiles ubicada en la vereda Ancón II,
Autopista norte Km 18 Copacabana, Antioquia
4.1.4 Valor agregado (Escriba cuales son las características que diferencian su
negocio, producto o servicio de otros)
El valor agregado de este proyecto, es el aprovechamiento de un hongo en el proceso
de degradación del plástico, el cual será aislado del residuo agroindustrial pulpa de
café, la cual será usada como sustrato para el hongo el proceso.
5. PRESUPUESTO DEL PROYECTO (Enliste los recursos necesarios para realizar el
producto, servicio o negocio, escriba la cantidad y el valor de estos. Adicionalmente
señale si es necesario adquirir el recurso o la I.E, Empresa ya lo tiene. Los valores
de los recursos que SI se necesitan adquirir se suman para conocer el Total de la
inversión necesario.)
Ítem Descripción Unid. de medida Cantidad Valor Total
Contrapartida
MATERIA PRIMA (Enliste las gr de pulpa L 1000
caficultora 0
materia prima e insumos
55 gr
necesarios para la
gr de gelatina (2 cajas) 7.000
elaboración del proyecto):
1 1a
Pulpa de café
Caja
Gelatina sin sabor 1 7.800 c/u
(100 unidades)
Guantes
Caja
Tapabocas 1 5.600
(100 unidades)
MAQUINARIA (Enliste la contrapartida
No de Tubo de
maquinaria, equipos y 6 I.E.R. Granjas
ensayo
herramientas necesarias para infantiles
la elaboración del proyecto: Contrapartida
Tubos de ensayo No de cajas Petri 3 I.E.R. Granjas
Cajas Petri infantiles
Biorreactores No de Elaborados con
02 Bombas de aire 3
biorreactores material reciclado
Microscopio. Contrapartida
No bombas de aire 3 Docente
Coinvestigador
contrapartida
Microscopio 1 I.E.R. Granjas
infantiles
-
Talento Humano - Número de contrapartida
(enliste el tipo de docente 1 I.E.R. Granjas
talento humanos Asesor infantiles
necesario para la
elaboración del
proyecto)
3
- Docente
- Número de
Coinvestigador y 3 0
estudiantes
asesor.
- Estudiante líder
- Estudiantes equipo de
apoyo
TOTAL, INVERSIÓN 20.400
6. ALCANCE

ALCANCE (Describa en detalle el entregable final, delimitando hasta donde abarca el

proyecto y teniendo en cuenta las restricciones y supuestos que se han podido
apreciar.)

- Aislar un hongo que contribuya a reducir el tiempo de degradación de las

bolsas plásticas de Policloruro de vinilideno (PVDC).

7. IMPACTO (describa como impacta su proyecto en siguientes aspectos)

7.1. Económico: reducir gastos en el procesamiento de residuos de bolsas

plásticas (Policloruro de vinilideno (PVDC).
7.2. Social: Mejorar el entorno en la institución y la relación con el ambiente.
7.3. Ambiental: reducir el tiempo de descomposición de las bolsas de plástico,
bolsas de empaques de dulces y todo plástico delgado de esta manera
disminuir el impacto que este genera en el ambiente.

7.4. Otros: Motivar en la comunidad educativa para que se vinculen a realizar

proyectos como este.

8. REFERENTES BIBLIOGRÁFICOS

Describa en detalle el material bibliográfico o cibergráfico utilizado como soporte

en el desarrollo del proyecto.

Franco Senior, Z. V. (2018). La biotecnología como estrategia de enseñanza-aprendizaje

de las ciencias naturales en la básica secundaria. Medellín Antioquia:
Universidad Pontificia Bolivariana.
Gonzáles García , Y., Meza Contreras, J. C., González Reynoso , O., & Córdova López, J.
A. (2013). Síntesis y biodegradación de polihidroxialcanoatos: plásticos de origen
microbiano. Revista internacional de contaminación ambiental.
Murthy, P. S., & Madhava Naidu, M. (2012). Sustainable management of coffee industry
by-products and value addition—A review. Resources, Conservation and
Recycling, 45– 58.
Murthy, P., & Madhava, N. M. (2010). Protease production by Aspergillus oryzae in solid
state fermentation utilizing coffee by-products. . World Applied Science Journal,
199–205.
Pandeya, A., Soccol, C. R., Niga, P., Brand, D., Mohan, R., & Roussos, S. (2000).
Biotechnological potential of coffee pulp and coffee husk for bioprocesses.
Biochemical Engineering Journal, 153–162.

NOTA: La bitácora número 7 es la entrega final del proyecto con el producto o

servicio materializado, acompañado de las evidencias recogidas en cada fase, con
el propósito de emitir el juicio (aprobado o no aprobado) por el evaluador
asignado, quienes no deben ser los responsables del proyecto (instructor Sena y/o
docente IE).

Las bitácoras se tomarán trimestralmente de la siguiente forma:

Grado 10: Bitácoras 1, 2, 3 y 4

Grado 11: Bitácoras 5, 6 y 7

DESCRIPCIÓN ENTREGA DE BITÁCORAS

FASE DEL EVIDENCIA TIPO DE EVIDENCIA FECHA

PROYECTO BITACORA LIMITE DE
ENTREGA
NÚMERO 1 Conformación del equipo Mayo 31
de trabajo (Grado 10).
PLANEAR NÚMERO 2 Organización del proyecto Agosto 31
(incluye planteamiento del
problema, justificación y
objetivos) y entrega del
modelo Gantt. (Grado 10).
NÚMERO 3 Descripción del producto. Noviembre 15
HACER (Grado 10).
NÚMERO 4 Presupuesto del proyecto Marzo 31
(Grado 10).
VERIFICAR NÚMERO 5 Alcance Mayo 31
(Grado 11).
ACTUAR NÚMERO 6 Impacto Agosto 15
(Grado 11).
FACE FINAL NÚMERO 7 Entrega del proyecto Octubre 20
(Grado 11).
ANEXO 1
Árbol de problemas- 09 de Julio del 2019

Fuente: Estefania Paternina Gómez, Anel Xiomara Rojo Hernández, María Isabel
Salgado Miranda
ANEXO 2
Código 009 Versión 2 Página 1 de 3
GUIA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
TEMÁTICA: AISLAMIENTO DE Aspergillus Sp DEL RESIDUO PULPA DE CAFÉ
Estándares Básicos de Competencias Grados Sexto a Noveno.
Me aproximo al conocimiento como científico natural:
 Realizo mediciones con instrumentos y equipos adecuados a las características y magnitudes de
los objetos y las expreso en las unidades correspondientes (MEN, 2004).
 Identifico condiciones que influyen en los resultados de un experimento y que pueden permanecer
constantes o cambiar (variables) (MEN, 2004).
Entorno vivo:
 Comparo mecanismos de obtención de energía en los seres vivos (MEN, 2004).
Ciencia, tecnología y sociedad:
 Indago acerca del uso industrial de microorganismos que habitan en ambientes extremos (MEN,
2016).
Desarrollo compromisos personales y sociales:
 Cumplo mi función cuando trabajo en grupo y respeto las funciones de las demás personas
RESUMEN
En esta experiencia se propone aislar el hongo Aspergillus Sp, del residuo Pulpa de Café, El hongo
será aislado de los residuos de pulpa de café en agua, agitando durante 2 horas, se harán diluciones
y se inoculará en cajas Petri sobre extracto de pulpa de café-agar al 10% (Pandeya, y otros, 2000).
A partir de los aislamientos primarios, se harán repiques en un medio de cultivo que contiene pulpa
de Café, Los cultivos, se incubaran en posición invertida por un periodo de 8-10 días, a temperatura
ambiente.

PALABRAS CLAVE: Pulpa de Café, Aspergillus Sp, aislamiento, diluciones, repiques.

Aspergillus Sp, es un hongo filamentoso, con muchas especies ampliamente distribuidas en la
naturaleza, presente en frutas, vegetales y otros sustratos como la pulpa de café y es utilizado en
procesos fermentativos en estado sólido (Murthy & Madhava, 2010). Hongos pertenecientes a la
clase Deuteromycetes, su taxonomía se describe en la Tabla 1.

Tabla 1. Taxonomía de Aspergillus sp

Reino: Fungi
División: Mycota
Subdivisión: Eumycota
Clase: Deuteromycetes
Subclase: Plectomycetidae
Orden: Eurotiales
Familia: Eurotiaceae
Género: Asperguillus
Fuente: Adaptada de (Useche Y., Peña Venegas C., Cardona Vanegas G, 2007)

Diferentes especies del género Aspergillus sp, tienen mucha importancia económica porque se usa
en muchas industrias de la fermentación, ofrecen oportunidades potenciales para ser utilizados en
bioprocesos gracias a su capacidad biotransformadora al utilizar residuos agroindustriales como
soporte y sustrato para su crecimiento. Son capaces de degradar compuestos ligninolíticos y de
celulosa; sus productos son generalmente considerados GRAS (generally regarded as safe), lo que
permite su aplicación en la industria de alimentos tanto para animales como el hombre (de Vries R.
y Visser, J. 2001).
MATERIALES  Biorreactores
 Pulpa de café  Algodón o gasa

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
  Matraz
 Agar o gelatina sin sabor
 Cajas Petri o botellas transparentes
planas de vidrio
 Asa para hongos o un pedazo de
alambre dulce
 Pedazo de malla metálica
PROCEDIMIENTOS
1. AISLAMIENTO PRIMARIO DEL
MICROORGANISMO
En un matraz colocar una cantidad
determinada de agua.
Agregar en un 10% pulpa de Café.
Agitar durante casi dos horas. Diseña una
estrategia para agitar.
1. INOCULACIÓN O SIEMBRA
 Limpiar el mesón con agua y luego con
alcohol.
 Usar tapabocas y guantes.
 Encender dos o tres mecheros sobre el
mesón limpio.
 En medio de los mecheros colocar una
caja Petri que contenga medio de cultivo
previamente preparado y esterilizado.
 Rápidamente adicionar la dilución
seleccionada sobre el medio de cultivo.
 Incubar dentro de una caja de cartón.
 Observar todos los días.
 Anotar las observaciones.
 Realizar registro fotográfico.
3. RECONOCIMIENTO MACROSCÓPICO
DE LAS COLONIAS DE Aspergillus sp
Hacer el reconocimiento macroscópico de las
colonias teniendo en cuenta las siguientes
características.
 Tamaño: Grande, mediana, pequeña.
 Color: Ver en la superficie, al reverso de
la caja Petri o por difusión al medio.
 Consistencia: Viscosa, mantecosa,
friable, dura.
Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
 Papel plástico para envolver alimentos
 Estufa o mechero con trípode
 Col morada
 Alcohol
 Limpión o servilletas
 Hojas de papel reciclado
 Olla a presión
2. PREPARACIÓN DE DILUCIONES
Realizar diluciones hasta 10-8 de la solución inicial,
utilizando 9 ml de agua y un ml de solución como se
muestra en la Figura 1.
Figura1. Diluciones.
Fuente: Zurich Vilayne Franco Senior.
2. REPLICA DEL MICROORGANISMO
 Tomar la caja Petri con el cultivo inicial.
 Seleccionar las mejores colonias (menos
contaminadas, donde el hongo se desarrolló
mejor).
 Limpiar el mesón con agua y luego con alcohol.
 Usar tapabocas y guantes.
 Encender dos o tres mecheros sobre el mesón
limpio.
 En medio de los mecheros colocar una caja Petri
que contenga medio de cultivo previamente
preparado y esterilizado.
 Colocar el asa en el mechero para esterilizar.
 Enfriar en el medio.
 Tomar una muestra de las colonias
preseleccionadas.
 Sembrar en el medio.
 Quemar el asa para matar restos del hongo.
 Marcar la caja Petri.
 Incubar invertido.
4. RECONOCIMIENTO MICOSCÓPICO
En un portaobjeto colocar una gota de agua y con la
ayuda de un asa tomar una muestra, colocarla en el
agua y colocar un cubreobjetos encima. Observar al
microscopio en 10X y 40X esto nos permite ver al
hongo en estado vivo, repetir el procedimiento con
una gota de glicerina y observar en 100X hacer el
reconocimiento microscópico del conidióforo liso,
vesícula subesférica, cabezuelas radiadas, conidios
  Superficie: Brillante, lisa, granular, ornamentadas con verrugas y crestas, esféricas.
rugosa, aterciopelada, terrosa, Figura 2.
algodonosa. Realiza registro fotográfico.
Realiza registro fotográfico.
Registrar los resultados en la Tabla 2. Figura 2. Hongo Aspergillus sp

Tabla 2. Características macroscópicas de

las colonias.
Características
observadas
Tamaño
Color
Consistencia
Superficie

Tomado de (Useche Y., Peña Venegas C.,

Cardona Vanegas G, 2007).
ACTIVIDADES
1. Buscar en internet fotografías de colonias de Aspergillus sp para realizar la identificación del
hongo.
2. ¿Por qué es recomendable hacer diluciones de la solución inicial donde se aisló Aspergillus
sp?
3. ¿Para qué se realizan repiques del cultivo inicial?
4. ¿Por qué crees que se preparó un medio de cultivo enriquecido con pulpa de Café para aislar
y cultivar al hongo?
BIBLIOGRAFÍA

 MEN. (2004). Estandares básicos de competencias en cienicas Naturales. Formar

en Cienicas el Desafio , 18-21.
 MEN. (Noviembre de 2016). Derechos Básicos de Aprendizaje de Ciencias
Naturales. Obtenido de www.santillana.com.co:
http://www.santillana.com.co/www/pdf/dba_cie.pdf.
 Murthy, P., & Madhava, N. M. (2010). Protease production by Aspergillus oryzae in
solid state fermentation utilizing coffee by-products. . World Applied Science Journal,
199–205.
 de Vries R. y Visser, J. 2001. Microbiol. & Molecular Biology Reviews. 65:4, 497-
522.

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
ANEXO 3
Código 007 Versión 1 Página 1 de 3
GUIA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
TEMÁTICA: PREPARACIÓN UN MEDIO DE CULTIVO MICROBIANO CON PULPA DE CAFÉ
Estándares Básicos de Competencias Grados Sexto a Noveno
Me aproximo al conocimiento como científico natural:
 Identifico y verifico condiciones que influyen en los resultados de un experimento y que pueden
permanecer constantes o cambiar (variables) (MEN, 2004).
 magnitudes de los objetos de estudio y las expreso en las unidades correspondientes (MEN,
2004).
 Registro mis observaciones y resultados utilizando esquemas, gráficos y tablas (MEN, 2004).
 Registro mis resultados en forma organizada y sin alteración alguna (MEN, 2004).
 Saco conclusiones de los experimentos que realizo, aunque no obtenga los resultados esperados
(MEN, 2004).
Derechos Básicos de Aprendizaje Grado Noveno.
 Analiza las relaciones cuantitativas entre solutos y solventes, así como los factores que
afectan la formación de soluciones (MEN, 2016).
Evidencias de aprendizaje
 Explica qué factores afectan la formación de soluciones a partir de resultados obtenidos en
procedimientos de preparación de soluciones de distinto tipo (insaturadas, saturadas y
sobresaturadas) en los que modifica variables (temperatura, presión, cantidad de soluto y
disolvente) (MEN, 2016).
 Predice qué ocurrirá con una solución si se modifica una variable como la temperatura, la
presión o las cantidades de soluto y solvente (MEN, 2016).
RESUMEN
En esta experiencia se propone preparar un medio de cultivo sólido empleando el residuo
agroindustrial pulpa de Café como material de enriquecimiento o fuente de hidratos de carbono. Este
medio se empleará posteriormente para aislar y replicar el hongo Aspergillus sp, que crece de manera
silvestre sobre a pulpa de Café.

PALABRAS CLAVE: Medio de cultivo, pulpa de Café, Aspergillus sp

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que
crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica
de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de
cultivo universal adecuado para todos los microorganismos. La mayoría de los microorganismos
requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.
Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con
mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de los microorganismos y no es atacado
por aquellos que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante, pero se emplea mucho menos
ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como

hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos
Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
 motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

La pulpa de Café es esencialmente rica en hidratos de Carbono, proteínas y minerales

(especialmente potasio) y también contiene cantidades apreciables de taninos, sustancias pécticas,
azúcares reductores, azúcares no reductores, cafeína, ácido clorogénico, y el ácido cafeico como se
observa en la Tabla 1 (Murthy & Madhava, 2012).

Tabla 1. Composición química de la pulpa de café

Parámetros (%) Pulpa de café
Celulosa 63.0 ± 2.5
Hemicelulosa 2.3 ± 1.0
Proteínas 11.5 ± 2.0
Grasas 2.0 ± 2.6
Fibra total 60.5 ± 2.9
Polifenoles totales 1.5 ± 1.5
Azúcares totales 14.4 ± 0.9
Sustancias pécticas 6.5 ± 1.0
Lignina 17.5 ± 2.2
Taninos 3.0 ± 5.0
Ácido clorogénico 2.4 ± 1.0
Cafeína 1.5 ± 1.0
Fuente: Adaptada de (Murthy & Madhava, 2012).

MATERIALES:  Olla a presión

 Pulpa de Café  Pedazo de malla metálica
 Matraz  Algodón o gasa
 Agar o gelatina sin sabor  Estufa o mechero con trípode
 Cajas Petri o botellas transparentes planas  Alcohol
de vidrio  Limpión o servilletas
PROCEDIMIENTOS. 2. PREPARACIÓN DE LAS CAJAS PETRI.
1. PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO.  Lavar las cajas Petri
 Colocar en un matraz agua y pulpa de  Secarlas
Café.  Envolverlas en papel reciclado.
 Calentar.  Esterilizar
 Adicionar gelatina sin sabor o Agar, agitar.
 Colocar un tapón de algodón o gasa.
 Esterilizar.
 Anotar las cantidades empleadas para 3. ESTERILIZACIÓN
estandarizar la técnica. Tabla 1.  Colocar dentro de una olla a presión agua y una
malla metálica sobre el agua.
Tabla 1. Cantidades empleadas.  Colocar en el interior el material a esterilizar
Solución Cantidad empleada (cajas Petri y medio de cultivo)
Gelatina  Tapar
 Poner al fuego.
Agua  Esperar que la olla pite.
 Apagar y dejar en reposo.
Pulpa de Café  Sacar el material y dejar secar.

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
 4. SERVIR EL MEDIO 5. CONSERVACIÓN
 Limpiar el mesón con agua y luego con  Guardar el medio de cultivo hasta su uso en
alcohol. una nevera a 4 grados.
 Usar tapabocas y guantes.  Otra forma es envolver forrar las cajas con
 Encender dos o tres mecheros sobre el papel plástico de alimentos, para mantenerlas
mesón limpio. aisladas de la contaminación y conservarlas en
 En medio de los mecheros colocar una un lugar fresco y seco por no más de tres a
caja Petri esterilizada. cinco días.
 Servir rápidamente el medio de cultivo
previamente preparado y esterilizado.
 Dejar solidificando.
 Dejar 24 horas para comprobar que no
existe contaminación
ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA.
1. Teniendo como referencia la Tabla 1, cuales de los componentes de la Pulpa de Café crees
que enrriqueceran el medio de cultivo preparado?
2. Para que crees que se esteriliza el medio de cultivo y los mateiales.
3. Escribe una formulación para elaborar este medio de cultivo teniendo en cuenta las
cantidades empleadas por ti en esta experincia.
BIBLIOGRAFIA
 MEN. (2004). Estandares básicos de competencias en cienicas Naturales. Formar en
Cienicas el Desafio , 18-21.
 MEN. (Noviembre de 2016). Derechos Básicos de Aprendizaje de Ciencias Naturales.
Obtenido de www.santillana.com.co: http://www.santillana.com.co/www/pdf/dba_cie.pdf.
 http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
ANEXO 4
Código 008 Versión 1 Página 1 de 3
GUIA PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
TEMÁTICA: ELABORACIÓN DE BIORREACTORES PARA FERMENTACIÓN EN ESTADO SÓLIDO
Estándares Básicos de Competencias Grados Sexto a Noveno.
Me aproximo al conocimiento como científico natural:
 (MEN, 2004).
 Identifico y verifico condiciones que influyen en los resultados de un experimento y que pueden
permanecer constantes o cambiar (variables) (MEN, 2004).
 Propongo modelos para predecir los resultados de mis experimentos (MEN, 2004)..
 Realizo mediciones con instrumentos adecuados a las características y magnitudes de los objetos
(MEN, 2004).
 Utilizo las matemáticas como herramienta para modelar, analizar y presentar datos (MEN, 2004).
RESUMEN

En esta experiencia se propone elaborar biorreactores con materiales económicos y/o reciclados para
posteriormente emplearlos en el desarrollo de prácticas relacionadas con procesos fermentativos,
especialmente los relacionados con la Fermentación en Estado Sólido.

Palabras Clave: Fermentador, Fermentación.

Biorreactor o Fermentador. Elemento central para la realización de fermentaciones, recipiente

equipado con sistemas de medida (temperatura, pH, volumen), de entrada y de salida (para el cultivo
fermentado, para la evacuación del aire, para la evacuación del Dióxido de Carbono y evacuación del
microorganismo en exceso) algunos con un motor que permite agitar el sustrato evitando así la
formación de gradientes de concentración y temperatura. (Make your own fuel, 2006) en (Vázquez &
Dacosta,2007).

Existen diversas opciones para disponer de esta tecnología; por ejemplo, construir una instalación
simple (Make your own fuel, 2006) en (Vázquez & Dacosta,2007), hasta la adquisición de una instalación
completa con especificaciones técnicas adecuadas a las características concretas del proceso. Entre
estas dos opciones existen múltiples posibilidades caracterizadas por diferentes precios, volúmenes,
tecnologías, modos de funcionamiento (discontinuo, fed batch, continuo, cascada, entre otros) (Monte
et al., 2003) y (Bailey, 1986) en (Vázquez & Dacosta, 2007). La elección depende de los recursos
económicos disponibles y del interés por desarrollar una tecnología propia (Vázquez & Dacosta, 2007).

PROCEDIMIENTOS:

Elaborar un biorreactor de geometría cilíndrica, con un tubo de PVC con dimensiones de 10 cm de

diámetro, 12 cm de alto (Fig. 1A). El biorreactor a los 6 cm de altura contiene ocho perforaciones, con
tornillos para sostener unas mallas metálicas que son el soporte o cama para el sustrato sólido (Fig. 1B)
en la base biorreactor hay un orifico para la aireación. El diseño del biorreactor cilíndrico se le reconoce
al equipo de trabajo del CIBIOT, en la Universidad Pontificia Bolivariana.

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
 Figura 1. Diseño del biorreactor cilíndrico

Fuente: Zurich Franco Senior

Como sistema experimental para realizar los ensayos preliminares a mayor escala elaborar un
biorreactor de geometría rectangular, con bandejas plásticas recicladas (Fig. 2A). El biorreactor a los 5
cm de altura contiene seis perforaciones, con tornillos para sostener unas mallas metálicas que son el
soporte o cama para el sustrato sólido (Fig. 2B) en la base biorreactor hay un orifico para la aireación.
El diseño del biorreactor rectangular es de la autora de la guía.

Figura 2. Diseño del biorreactor en bandeja

Fuente: Zurich Franco Senior

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
 BIBLIOGRAFIA
 MEN. (2004). Estandares básicos de competencias en cienicas Naturales. Formar en
Cienicas el Desafio , 18-21.
 MEN. (Noviembre de 2016). Derechos Básicos de Aprendizaje de Ciencias Naturales.
Obtenido de www.santillana.com.co: http://www.santillana.com.co/www/pdf/dba_cie.pdf
 Vázquez , H. J., & Dacosta , O. (2007). Fermentación alcohólica: Una opción para la
producción de energía renovable a partir de desechos agrícolas. Ingeniería,
investigación y tecnología.

Diseñada y elaborada por Zurich Vilayne Franco Senior. Licenciada en Ciencias Naturales 1, Magister en
Biotecnología2. Docente de Ciencias Naturales y educación ambiental 3.
1. Universidad del Magdalena, 2.Universidad Pontificia Bolivariana, 3.Secretaria de educación de Antioquia.
ANEXO 5

Equipo de trabajo- 10 de Julio de 2019

Fuente: Anel Xiomara Rojo Hernández

ANEXO 6

Recolección de muestra- 27 de marzo de 2019

Fuente: Estefania Paternina Gómez

ANEXO 7

Preparación de medio de cultivo- 27 de marzo de 2019

Fuente: Anel Xiomara Rojo Hernández

ANEXO 8

Preparación de disoluciones– 05 de abril de 2019

Fuente: Anel Xiomara Rojo Hernández

ANEXO 9

Cultivación de Aspergillus sp- 05 de abril de 2019

Fuente: Anel Xiomara Rojo Hernández

ANEXO 10

Crecimiento de Aspergillus sp- 17 de julio de 2019

Fuente: Estefania Paternina Gómez