Estrés microbiano

En el laboratorio las células se encuentran en el paraíso microbiano, ya que hay los

medios óptimos parael crecimiento celular. Por lo tanto, el crecimiento es óptimo
siempre que haya nutrientes, para eso está el investigador que se lo suministra.
Esta situación no tiene nada que ver con lo que ocurre en la naturaleza, ya que
escasean los nutrientes y la célula está en un constante estrés. NO HAY VIDA SIN
ESTRÉS.
Se debe adaptar a las condiciones de estrés para que no tenga lugar la muerte celular,
hay dos vías distintas para salvar ese estrés:
- Mecanismos de defensa que contrarresten ese estrés. Mecanismos de defensa
general o específico.
- Proceso de diferenciación celular.

En cualquier caso lo que no mata, puede hacerlos más fuertes, también conocido
como el proceso de adaptación.

El estrés es cualquier elemento o factor físico químico que tenga un efecto negativo
sobre el crecimiento celular.
Algunos agentes estresantes conocidos serían: temperatura, pH, osmolaridad,
compuestos tóxicos (MPs), estrés oxidativo, hambre (inanición: falta de nutrientes),
presencia de patógenos.

Las dianas más importantes que sufren daño son:

- Genoma (DNA) originando una genotoxicidad.
- Proteínas: principales vías que van a ser afectadas por los diferentes tipos de
agentes estresantes.
- Lípidos de la membrana citoplasmática.

Una vez que los agentes estresantes atacan a estas dianas se produce una alteración
del funcionamiento celular, si se altera el DNA también se alterará la expresión génica,
se puede alterar el metabolismo, la síntesis proteica, el crecimiento y por lo tanto el
ciclo celular.

En cualquier caso hay una serie de elementos que se encuentran en la pared celular o
en la membrana citoplasmática que van a percibir las distintas señales de ese agente
estresante. Cuando se recibe la señal de ese agente estresante, la célula genera una
respuesta que puede ser de dos tipos:
- Especifica: ante un agente estresante especifico como la temperatura o un
metal pesado.
- General: Responde a cualquier tipo de agente estresante.

Puede haber elementos comunes entre ambas respuestas. Los elementos

comunes entre ambas respuestas se conocen como protección cruzada y pueden
proteger a la célula ante cualquier tipo de estrés.
Puede ser un reajuste metabólico o también la inducción de expresión génica que
se encargan de defender a la célula del estrés y habitualmente son genes que se
encuentran silenciados; provocando la síntesis de nuevas proteínas o la
diferenciación celular, para finalmente conseguir sobrevivir a ese estrés.
Genes de respuesta general a estrés en Saccharomyces cerevisae
• HSP104: es un gen que codifica para una proteasa que se encarga de
disgregar proteínas
• UBI4: se encarga de la poliubiquitinación
• CTT1: Induce la síntesis de una catalasa que se encarga de reducir el
estrés oxidativo.
• DDR2: Reparación de DNA.
• TPS2: Induce la síntesis de una fosfatasa Trehalosa fosfato
• CYC7: Codifican para la Iso-2-citocromo C. Implicada en disminuir el estrés
oxidativo

Genes de respuesta general a estrés en bacterias.

En bacterias encontramos los factores sigmas que son específicos de estrés. Se

encarga de llevar la polimerasa para que reconozca el Promotor y transcriba.

Núcleo enzimático + Factor Sigma -> Holoenzima ARN polimerasa.

Hay numerosas holoenzimas, sin embargo se diferencian unas de otras por los
distintos factores Sigmas que contienen.
Así, podemos encontrar holoenzimas principales que presenta el sigma70; y
holoenzimas secundarios como aquellos que presentan el sigma32 (choque térmico) y
sigma 54 (estrés por falta de nitrógeno por lo que se encarga del metabolismo del
nitrógeno fijándolo).

Los factores sigmas se clasifican en diferentes familias, Sigma70 sería una y

encontramos dos grupos dependiendo de si la bacteria es:
- Gram(+): Sigma B.
- Gram (-): Sigma S.
Pueden abrir más de 35 genes de estrés general a hambre, a osmolaridad, a diauxia
de glucosa a lactosa, alta y baja temperatura y a la fase estacionaria.

Ejemplo E. Coli.
En esta especie bacteriana se produce choque térmico a 42ºC generando asó la
síntesis de factores sigma para genes de estrés general; pero también hay genes de
estrés específicos y ambos conllevan a que la célula pueda sobrevivir en ese choque
térmico.

Dentro del estrés general también encontramos las proteínas de estrés general.
La función de estas es proteger a otras proteínas de la agregación de las mismas y de
su desnaturalización.
Parte de estas proteínas tienden a proteger a otras proteínas que se verán afectadas
por ese agente estresante (calor, frío, Metales, etanol UV…).
Inicialmente se conocieron como proteínas de choque térmico (HSP), pero
actualmente se sabe que actúan contra todos los agentes estresantes mencionados
anteriormente y no solo contra el choque térmico. Un ejemplo sería la HSP70 o
Estrés70.

Cuando el estrés genera proteotoxicidad y produce la desnaturalización de las

proteínas una vía sería eliminar esa proteína, para ello se marca con la ubiquitina y
será degradada por el proteosoma.
La otra posible vía sería la de renaturalizar de nuevo las proteínas gracias a las
proteínas HSP70 y HSP90.
 Activación genes HSP

La unión con HSP70 facilita también la translocación: en la región reguladora

podemos encontrarnos a veces dominios reguladores, incrementadores de la
expresión: HS proximal y HS distal.
Esto puede encontrarse de forma monomérica o trimérica que es la que va a
unirse a la región promotora y se va a plegar. Cuando existe estrés la HSP70
siempre va a existir, se unirá a la proteína y va a favorecer a la trimerización de
la misma es decir a la formación de la forma activa. Y eso va a favorecer el
plegamiento de otras proteínas…
Gránulos de estrés

Hace unos años ligado al estrés se ha descubierto lo que se conoce como

gránulos de estrés. Solo se conocen en eucariotas.
Los gránulos de estrés son complejos de ARN mensajero no traducido y proteínas
(mRNP) que se acumulan en el citoplasma.
Hay tres tipos de proteínas que se pueden unir al ARNm:
- Polisomas: Traducción del ARNm
- Cuerpos-P: Cuando hay un exceso de ARNm se encarga de la degradación
del mismo.
- Gránulos de estrés: Descubiertos recientemente, y aglutinan moléculas de
ARNm conservándolos intactos y silenciándolos durante ese periodo de estrés.
Esto se ha visto cuando el estrés afecta a la multiplicación celular.

Respuesta adaptativa al estrés oxidativo. Ejemplo con E.Coli.

Si añadimos a un cultivo de E. Coli agua oxigenada a una concentración elevada (mM)

tiene un efecto letal, destruyendo la totalidad de la población.
Sin embargo si usamos una concentración µM de agua oxigenada (concentración
mucho menor) no tendrá lugar un efecto letal total. Se puede cargar a parte de la
población pero no a toda.

Defensa antioxidante es producida por enzimas antioxidantes que son codificadas por
unos genes que se inducen e incrementan en el orden de 40 veces.
Algunas de estas enzimas serían la catalasa (rompe el peróxido de hidrogeno);
superoxido dimutasa; hidroperoxido reductasa, glutatión reductasa: molécula universal
y presenta grupos -SH debido a un residuo de cisteína.

Esas 30 proteínas están reguladas dentro de un operón llamado Regulon oxiR: aquí
encontramos distintos genes que codifican para diferentes enzimas de estrés
oxidativo.
Mas allá tenemos un gen que codifica para una proteína regulador OxiR, cuando se
transcribe codifica para una proteína OxiR que se encuentra reducida (inactiva).
Cuando aparece un estrés oxidativo esta proteína se oxida y pasa a ser la forma
oxidada y se activa. La forma activa de esta proteína es la que se unirá al promotor
para que tenga lugar la transcripción de los genes Regulon oxyR.
Ejemplo adaptación a un estrés por metales tóxicos: Cadmio o Plomo.
Estrategias genómicas de adaptación a estrés extremo en un
microorganismo eucariota: Tetrahymena thermophila.

Se pueden establecer tres niveles de respuesta celular al estrés: bajo, medio y alto.
• El bajo produce una reorganización del metabolismo con bajo coste energético.
• El medio conlleva cambios en la expresión génica y epigenética.
• El alto conlleva toda una reorganización genómica, algunos autores lo han definido
como el caos genómico o inestabilidad genómica. Provocando una evolución
adaptativa del microorganismo frente a ese estrés. El microorganismo se va
adaptando y puede durar desde días hasta años; sin embargo hay una
concentración máxima que el microorganismo puede tolerar y una vez que se
sobrepasa se produce la muerte celular.

Los niveles altos de estrés siempre conllevan diversos cambios en el genoma que
pueden ser de varios tipos:
- Mutaciones en el promotor o en la ORF
- Incrementen los niveles constitutivos, se expresa más. Esto normalmente
reside en cambios a nivel del promotor
- Elevados niveles de expresión de genes involucrados en el estrés, como en el
caso de metales pesados.
- Incremento del número de copias de un gen determinado, es decir
amplificación diferencial de genes implicados en esa respuesta de estrés.

Adaptamos distintas cepas a tres metales distintos: Cadmio, plomo y

cobre (de más toxicidad a menos).

En el caso del cadmio tras dos años de adaptación se multiplico por 2.5 la DL50
(concentración tóxica en la que sobrevive el 50% de la población) y se detectó en
las cepas el incremento del número de copias de un gen determinado, es decir la
amplificación diferencial de genes implicados en esa respuesta de estrés.

CILIADOS: los ciliados tienen dos núcleos: El macronúcleo que es el que se

expresa y el micronucleo que es el que se encarga del aspecto sexual. Se divide
por amitosis, se reparten al azar los cromosomas: segregación fenotípica, después
de x generaciones podemos encontrar líneas celulares en que se ha perdido
determinados genes debido a esta segregación al azar. El ADN cuando lo
pasamos a una electroforesis de campo pulsante lo disgregamos y vemos los
fragmentos en los que está constituido ese ADN, el macronucleo está constituido
por tanto de fragmentos subcromosómicos, es decir del ADN que han perdido los
cromosomas al segregarse. Queremos ver cómo se comportan los genes que
codifican para metalotioneinas que son proteínas con muchos grupos cisteína que
protegen al resto de las proteínas celulares del metal en cuestión, esa es la función
de las metalotioneinas. Están en multicopia, 5 copias para ser exactos.
Preferentemente quelan cadmio y otras quelan cobre.
La localización en el cromosoma de estas metaloproteinas quelantes de cadmio
están en el brazo izquierdo del cromosoma 5, que es telocéntrico y se encuentran
una a continuación de la otra.
Las metaloproteinas del cobre están en el cromosoma 2.
En el experimento de esta gente los resultados fueron que el número de copias
estimado todas las cepas tenían unos niveles basales excepto la cepa adaptada al
cadmio que subía su número de copias, eso quiere decir que todo el fragmento
del macronúcleo se está amplificando.
Si después de 10 meses aumento el cadmio la célula tiene memoria de que puede
resistir a esa concentración y vuelve a incrementarse el número de copias más en
concreto de 5 copias extra. Entonces esto es un experimento de adaptación.
Entonces si partimos del fenotipo silvestre mientras que esté sometida al cadmio la
adaptación consiste en el incremento de un total de 5 número de copias.
Pero también descubrieron algo más: se vio que usando ADNc había dos bandas
más pequeñas que eran dos transcritos pero distintos al MTT1. La interpretación
es que el MTT1 tiene a lo largo de la secuencia dos regiones que se repiten y que
pueden recombinar entre sí, esta recombinación intragénica va a dar lugar a un
nuevo gen. La célula como mecanismo de adaptación va creando nueves genes.
Conclusión: la célula ha creado nuevos genes frente a la disminución del
número de copias de mtt1 como repuesta al estrés entonces la célula induce
a la formación de nuevas formas génicas o nuevos genes y que se pueden
expresar, y ayuda a soportar el estrés debido al cadmio.