Objetivo

Introducción
EL FRACCIONAMIENTO CELULAR es usado para investigar la bioquímica y fisiología de
orgánulos fuera del ambiente complejo de la célula intacta. El objetivo principal de este
experimento es aislar los cloroplastos, núcleo y mitocondria del tejido de plantas por el
método de fraccionamiento celular. Los otros objetivos son examinar esas fracciones
microscópicamente y estimar el coeficiente de sedimentación de los cloroplastos. El
fraccionamiento celular es una técnica bioquímica utilizada para separar los distintos
orgánulos y componentes celulares para su estudio. La técnica se inicia con la
homogeneización. El tejido se tritura en un homogeneizador de manera que las células se
comprimen y se libera su contenido. Lo que luego se hace con ese extracto es someterlo a
diferentes centrifugaciones a diferentes velocidades y tiempos, de manera que obtenemos
fracciones enriquecidas de los distintos orgánulos.
HOMOGENEIZACIÓN: Para preparar los tejidos para el fraccionamiento celular, primero se
debe suspender en un medio apropiado (una solución amortiguadora, salina ó azúcar
isotónica).
CENTRIFUGACIÓN: Debido a las diferencias en tamaño y densidad, cada componente
celular está sujeto a una fuerza centrífuga.
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL: En la centrifugación diferencial, el homogéneo es
centrifugado repetidas veces a altas velocidades, sedimentándolo progresivamente en
pequeñas partículas.

Resultados

Imagen tomada por el alumno Observaciones

AUMENTO: 40X

dentro de la burbuja que se formo, se

MUESTRA DEL TUBO AU encuentran los cloroplastos, se necesita
un enfoque mayor para observarlos
mejor.

EN ESTA MUESTRA SE NOTAN LOS

MUESTRA DEL TUBO A NUCLEOS EN UNA FRANJA.

MUESTRA DEL TUBO B AL OBSERVAR EN EL MICROSCOPIO

NOTAMOS UNA CAPA DE TEJIDO CON
CLOROPLASTOS DENTRO DEL MISMO

MUESTRA DEL TUBO BU TIENEN FORMA CIRCULAR DE COLOR

VERDE, CON CARACTERISTICAS DE
CLOROPLASTOS

MUESTRA DEL TUBO A+ COMO EN LA MUESTRA DEL TUBO A,

ACETOCARMIN ENCONTRAMOS AL OBSERVAR EN EL
MICROSCOPIO NUCLEOS, AL
 AGREGARLE LA GOTA DE
ACETOCARMIN SE TIÑERON DE
COLOR ROJO-NARANJA.

Análisis de resultados

En primer lugar se llevó a cabo una homogeneización de las hojas de espinaca, ya que esta
rompe la pared celular de las células vegetales para dejar libres los orgánulos expuestos,
así como romper el tejido y por último la membrana plasmática para poder observarlos y
realizar correctamente el fraccionamiento celular.
Para la homogeneización se utilizó un buffer (PBS) a baja temperatura el cual cumplía con
la función de regular el pH manteniendo la integridad de los organelos y enzimas de la
célula en el proceso de homogeneización.

Procedimos a filtrar el homogenado para eliminar células intactas e inservibles para nuestra
experimentación.
Para realizar la lisis celular y separar los componentes subcelulares se realizaron una serie
de centrifugaciones las cuales fueron aumentando de velocidad; después de cada
centrifugación los organelos quedaban en el pellet sedimentados al fondo del tubo.

la primera centrifugación fue de 10 minutos a 1500 rpm para obtener una fracción
enriquecida de núcleos celulares que de acuerdo a su masa y densidad que es mayor que
los demás organelos se sedimentan con mayor rapidez y conteniendo tambien otra fracción
de células sin disgregar. Posteriormente se tomó el sobrenadante de ese tubo y se volvió a
centrifugar a una mayor velocidad para poder obtener organelos menos densos que el
núcleo, sedimentados en el pellet, en este caso se obtuvo otra fracción en la que se
esperaba observar mitocondrias como se reporta en la literatura, sin embargo solo fueron
visibles algunos cloroplastos.

Por otro lado se tomó un ml de los tunos A y B en los cuales se colocó urea, la cual actua
como una solución hipotónica y como es de baja polaridad puede atravesar fácilmente la
membrana, La urea difunde al interior de la celula vegetal, y ya que el ingreso de esta no
puede compensarse con una salida equivalente de solutos intracelulares, se produce
entonces un aumento en la osmolaridad intracelular que provoca el influjo de agua. Por lo
tanto, dado que la concentración de urea dentro del la celula vegetal normalmente es muy
baja, las células no podrán compensar el gradiente osmótico resultante, lo que finalmente
producirá turgencia en la celula, ​con todo esto únicamente se mantenieron visibles los
cloroplastos, no había ningún otro orgánulo completo o sin disgregar.

Finalmente se utilizo acetocarmin como colorante en el sedimento nuclear resultante de la

primera centrifugación, el cual es U​N COLORANTE DE ORIGEN ANIMAL QUE SE UTILIZA
PARA COLOREAR CELULAS MITOTICAS Y ASI PODER OBSERVAR A TRAVES DEL
MICROSCOPIO LOS CROMOSOMAS DE DICHAS CELULAS DE UN COLOR ROJIZO
 
CONCLUSIONES 
oncluir en primer lugar que la utilización de métodos como el fraccionamiento celular
permite determinar la presencia de organelos específicos, en conjunto con el uso
demarcadores moleculares los cuales determinan tal presencia mediante tinciones o la
acción enzimática que caracteriza a estas moléculas debido a su especificidad, siendo así,
que enconsecuencia se puede determinar no solo la presencia sino que también la función
de losya determinados organelos. Finalmente podemos decir que la interrogante planteada
esrespondida de manera positiva, ya que, aunque no se puede ser altamente especifico si
sepueden diferenciar organelos mediante los métodos utilizados.

Bibliografía
● Homogeneización de tejidos y células. Técnicas instrumentales en bioquímica y
biología. Francisca Barceló Mairata. Servicio de Publicaciones e Intercambio
Científico. Universidad de las Islas Baleares, 2003. ISBN: 8476328087. Pág.138