Вы находитесь на странице: 1из 4

HINTS

& TIPS
Guidance for users


A suggested cleaning procedure for ACQUITY systems being used for high
sensitivity MS based quantitation experiments.

 
Ultimate MS sensitivity of an ACQUITY ‐ MS system can be limited by background signals produced as a result of 
using contaminated solvents. The information in this document is intended to provide a means of recovering from 
a situation where an ACQUITY UPLC system has been contaminated, e.g. through the inadvertent use of 
contaminated solvents or high concentrations of target compounds. 
The procedure suggested in this document is specifically for situations where the ACQUITY UPLC is being used in 
conjunction with a highly sensitive MS system (XEVO TQ‐S, XEVO TQD, XEVO TQ‐MS, SYNAPT G2‐Si, XEVO G2‐S 
QTOF etc) 
 

1. Overview.
 

2. Solvents Required
 
Acid wash – 250mL Isopropanol, 250mL acetone, 250mL methanol, 250mL 25% aqueous formic acid 
Basic wash – 1000mL of 10% aqueous ammonia 
Isopropanol – 1000mL 
[A] Floats road, Wythenshawe, Manchester, M23 9LZ, U.K. [T] +44 (0) 161 946 2400 [F] +44 (0) 161 946 2480 [W]
www.waters.com 

Document number 720004849

Page 1 of 4
 
3. Prepare
 
Disconnect LC from MS system 
Remove column and connect column pig‐tail to active preheater using a peek union 
Insert pig‐tail into waste a bottle 
If using fixed loop Sample Manager ensure loop you wish to use for analysis is installed. 

4. Wash Procedure
 
4.1 Step 1 ‐ Acid wash
Prime all solvent lines (I‐Class ‐ A1, A2, B1, B2; H‐Class – A, B, C, D) with the Acid wash for 5min 
Prime Wash solvent (90sec) and Purge solvent (15 cycles) with the Acid wash.  
Prime the seal wash with the Acid wash for a minimum of 5 minutes. 

4.2 Step 2 ‐ Basic wash


Prime all solvent lines (I‐Class ‐ A1, A2, B1, B2; H‐Class – A, B, C, D) with the Basic wash for 5min 
Prime Wash solvent (90sec) and Purge solvent (15 cycles) with the Basic wash.  
Prime the seal wash with the Basic wash for a minimum of 5 minutes. 

4.3 Step 3 – Prime two solvent lines with Acid wash


Prime the two primary solvent lines with Acid wash for 3min (I‐Class – A1, B1; H‐Class – A, B), leave other lines (I‐
Class – A2, B2; H‐Class – C, D), in Basic wash 
Prime Wash solvent (90sec) and Purge solvent (10 cycles) with the Acid wash. 

4.4 Step 4 – Gradient washes (both acid and basic)


 
Place a vial of the Acid wash in the ACQUITY sample manager, position 1:1 
Place a vial of the Basic wash in the ACQUITY sample manager, position 1:2 
Place a vial of the Isopropanol in the ACQUITY sample manager, position 1:3 
 
Set up a sample list to perform 25 injections from vial 1:1 (inject the maximum volume the system will allow) using 
Method A below followed by 25 injections from vial 1:2 (inject the maximum volume the system will allow) using 
Method B below. 
Method A       
Time (min)  %A or A1  %B or B1 
0.00  95  5 
0.50  95  5 
2.00  5  95 
2.50  5  95 
3.00  95  5 
Flow Rate  0.3 mL/min    
 
[A] Waters Corporation, Stamford Ave, Wilmslow, SK9 4AX, U.K. [T] +44 (0) 161 946 2400 [F] +44 (0) 161 946 2480
www.waters.com 

Document number 720004989

Page 2 of 4
 
Method B       
Time (min)  %C or A2  %D or B2 
0.00  95  5 
0.50  95  5 
2.00  5  95 
2.50  5  95 
3.00  95  5 
Flow Rate  0.3 mL/min    
 

4.5 Step 5 – Isopropanol washes


Prime all solvent lines (I‐Class ‐ A1, A2, B1, B2; H‐Class – A, B, C, D) with the Isopropanol for 5min 
Prime Wash solvent (90sec) and Purge solvent (15 cycles) with the Isopropanol.  
Prime the seal wash with the Isopropanol for a minimum of 5 minutes. 
 
Perform 15 injections from vial 1:3 (inject the maximum volume the system will allow) using Method A followed by 
10 injections from vial 1:3 (inject the maximum volume the system will allow) using Method B. 
 

4.6 Step 6 – Equilibration


Prime required solvent lines with the mobile phases required for analysis for 5 min. 
Prime Wash solvent (90sec) and Purge solvent (15 cycles) with the solvents required for analysis.  
Prime the seal wash with the 10% methanol for a minimum of 5 minutes. 
 
Place a vial of the Mobile phase A in the ACQUITY sample manager, position 1:4 and perform 10 injections from 
vial 1:4 (inject the maximum volume the system will allow) using Method A. 
 
Install the column to be used and connect to the MS source. Perform 10 injections from vial 1:4 (inject the 
maximum volume the system will allow) using Method A. 
 
N.B – Further equilibration maybe required to remove the IPA, if this is the case leave system at method A starting 
conditions overnight flowing to waste. 
 
The system is now ready to use. 
 
 
 
 
 

[A] Waters Corporation, Stamford Ave, Wilmslow, SK9 4AX, U.K. [T] +44 (0) 161 946 2400 [F] +44 (0) 161 946 2480
www.waters.com 

Document number 720004989

Page 3 of 4
 

[A] Waters Corporation, Stamford Ave, Wilmslow, SK9 4AX, U.K. [T] +44 (0) 161 946 2400 [F] +44 (0) 161 946 2480
www.waters.com 

Document number 720004989

Page 4 of 4